CN101262884B

CN101262884B - 抗Aβ抗体制剂

Info

Publication number: CN101262884B
Application number: CN2006800035305A
Authority: CN
Inventors: 多纳·路易斯; 尼古拉斯·W·韦尔纳; 安哥拉·坎特
Original assignee: Janssen Alzheimer Immunotherapy; Wyeth LLC
Current assignee: Kelima melon Co.,Ltd.; Janssen Sciences Ireland ULC; Wyeth LLC
Priority date: 2005-01-28
Filing date: 2006-01-27
Publication date: 2012-10-31
Anticipated expiration: 2026-01-27
Also published as: AU2006211184B2; KR101188060B1; EP1853310A2; PT1853310E; AU2006211184A1; WO2006083689A3; CN103768009B; WO2006083689A2; CN103768009A; PE20060879A1; GT200600031A; HK1108132A1; EA200701596A1; HK1196570A1; AU2006211184B8; ES2391407T3; TWI398263B; MX2007009050A; UA87549C2; US8318164B2

Abstract

本发明提供了用于维持Aβ结合多肽，例如Aβ抗体稳定性的制剂。示例性的制剂包括紧张剂，例如甘露醇和缓冲剂或氨基酸，例如组氨酸。其他的示例性制剂包括存在量足以抑制副产物，例如高分子量多肽聚集物，低分子量多肽降解片段，及其混合物的形成的抗氧化剂。本发明的制剂还可任选含有紧张剂，例如甘露醇，以及缓冲剂或氨基酸，例如组氨酸。所述制剂适用于若干不同的给药途径。

Description

抗Aβ抗体制剂

相关申请

本申请要求题为“抗Aβ抗体制剂”的美国临时专利申请60/648,631号(递交日为2005年1月28日)的优先权。在此将以上所引用申请的全部内容包括在内以作参考。

发明背景

阿尔茨海默氏病(″AD″)是一种以出现淀粉状蛋白斑、神经纤维结节和明显神经元损失为特征的神经退行性病症。已有文献认为β-淀粉状蛋白质(也称为Aβ肽)，即老年斑的主要成分，与阿尔茨海默氏病的发病机理有关(Selkoe(1989)Cell 58：611-612；Hardy(1997)TrendsNeurosci.20：154-159)。已经显示β淀粉状蛋白对培养的神经元具有直接毒性(Lorenzo和Yankner(1996)Ann.NY Acad.Sci.777：89-95)并通过多种介导物具有间接毒性(Koh等(1990)Brain Research 533：315-320；Mattson et al.(1992)J.Neurosciences 12：376-389)。此外，在包括PDAPP小鼠和大鼠模型的体内模型中，都将β淀粉状蛋白与学习缺陷、认知功能的改变，以及长期海马趾增强作用相关联(Chen等，(2000)Nature408：975-985；Walsh等，(2002)Nature 416：535-539)。因此，已有众多兴趣致力于通过改变β淀粉状蛋白水平来有效地降低疾病严重程度或甚至消除疾病本身的治疗。

随着在PDAPP小鼠和大鼠试验模型中的成功研究，近来出现了一种AD治疗策略，该策略是通过对个体进行免疫从而提供免疫球蛋白例如抗体(在被动免疫的情况下，对患者进行治疗性免疫球蛋白给药)或产生对β淀粉状蛋白具有特异性的免疫球蛋白(主动免疫，其中患者的免疫系统被活化从而产生了针对于给药抗原的免疫球蛋白)而实现的。这些抗体可通过防止β淀粉状蛋白聚集(Solomon等，(1997)Neurobiology94：4109-4112)或刺激小神经胶质细胞进行吞噬作用和去除斑(Bard et al.(2000)Nature Medicine 6：916-919)而来减轻斑负担。还例如，人源化抗Aβ肽IgG1单克隆抗体(人源化3D6抗体)也通过选择性地结合于人Aβ肽而有效地治疗AD。

对蛋白，特别是抗体而言，要保持其生物学活性，所用制剂就必须能够保持该蛋白氨基酸中至少核心序列的构象完整性不被破坏，并同时保护该蛋白的多个官能团不被降解。蛋白的降解途径可涉及化学不稳定性(即，涉及通过键形成或断裂产生新化学实体的任意过程)或物理不稳定性(即，蛋白高级结构的改变)。化学不稳定性可由脱酰胺作用，外消旋作用，水解，氧化，β消除或二硫键交换引起。物理不稳定性可由变性，聚集，沉淀或者吸附引起，譬如。关于蛋白质药物稳定性的一般性综述，请参见，例如，Manning，et al.(1989)PharmaceuticalResearch 6：903-918。此外，还希望在所述制剂不含有载体多肽时依然保持其稳定性。

虽然，可能出现的蛋白质不稳定性是被广泛接受的，但是，对特定的蛋白质而言，仍然不可能对其特定的不稳定性进行预测。任意的这种不稳定性都可能潜在地导致多肽副产物的产生或具有活性降低、毒性升高、和/或免疫原性升高的衍生物的形成。事实上，多肽沉淀可导致血栓形成，剂型的非均匀性以及免疫反应。所以，任意多肽药物制剂的安全性和有效性都与其稳定性直接相关。

因此，对那些在储存和运输过程中既能够保持生物多肽，例如，Aβ结合多肽的稳定性和生物学活性，又能够适合于多种治疗给药方式制剂的需要与日俱增。

发明概述

本发明提供了旨在为所含的具有生物学活性的蛋白质，特别是Aβ结合蛋白或多肽，例如，Aβ抗体或其片段或部分提供稳定性以及保持其生物学活性的制剂。本发明还提供了多肽制剂，例如，能够防止不希望多肽副产物形成的稳定液体多肽制剂。

抗原结合多肽的完整性对治疗用途而言是极其重要的，因为如果该多肽形成了副产物，例如在保存过程中出现了聚集体或降解片段，其生物学活性就可能丧失，从而危及每单位剂量分子的治疗活性。此外，也亟需对旨在用于特定功能，用于运输和在某些生物学适应症中使用，例如，治疗神经退行性疾病，其中多肽必须穿过血脑屏障(BBB)并与靶抗原结合的治疗性多肽进行稳定。

在一方面，本发明提供了稳定制剂，其包括至少一种Aβ结合多肽，至少一种紧张剂(tonicity agent)，其中所述紧张剂的存在量足以使得该制剂适用于给药，以及存在量足以维持生理学适合pH的至少一种缓冲剂。所述制剂可以是冻干的或者是液体制剂。某些制剂包括至少一种抗氧化剂，例如氨基酸抗氧化剂，例如，甲硫氨酸。在一些制剂中，所述紧张剂是甘露醇或NaCl。在一些制剂中，至少一种缓冲剂是琥珀酸盐，磷酸钠，或者氨基酸，例如组氨酸。优选制剂还包括至少一种稳定剂，例如聚山梨醇酯80。在一些制剂中，所述稳定剂是聚山梨醇酯80，所述抗氧化剂是甲硫氨酸，所述紧张剂是甘露醇，山梨醇或NaCl，而所述缓冲剂则是组氨酸。在一些制剂中，至少有一种Aβ结合多肽选自抗Aβ抗体，抗Aβ抗体Fv片段，抗Aβ抗体Fab片段，抗Aβ抗体Fab′(2)片段，抗Aβ抗体Fd片段，单链抗Aβ抗体(scFv)，单结构域抗Aβ抗体片段(Dab)，包括来自于抗Aβ抗体的至少一种抗体互补决定区(CDR)的β-折叠片多肽，以及包括来自抗Aβ抗体的至少一种抗体CDR的非球状多肽。在一些制剂中，至少一种Aβ结合多肽是抗Aβ抗体，例如，其可特异性地结合于Aβ的1-7，1-5，3-7，3-6，13-28，15-24，16-24，16-21，19-22，33-40，33-42残基内的表位，或其Fab，Fab′(2)或Fv片段。示例性的抗Aβ抗体特异性地结合于Aβ的残基1-10内的表位，例如，Aβ的残基1-7，1-5，3-7或3-6内的表位。其他示例性的抗Aβ抗体特异性的结合于Aβ的残基13-28内的表位上，例如，Aβ的残基16-21或19-22内的表位。而其他的示例性Aβ抗体还可特异性地结合于Aβ的C末端表位，例如，Aβ的残基33-40或33-42。优选的Aβ抗体包括人源化抗Aβ抗体，例如，人源化3D6抗体，人源化10D5抗体，人源化12B4抗体，人源化266抗体，人源化12A11抗体，或人源化15C11抗体。

在一些制剂中，所述抗Aβ抗体结合于包括在Aβ的1-7和13-28残基内的不连续表位。在一些这样的制剂中，所述抗体是双特异性抗体或根据国际专利公开第WO03/070760号所述方法制备的抗体。在一些这样的制剂中，所述表位是不连续的表位。在优选制剂中，所述抗Aβ抗体是人源化3D6抗体，人源化10D5抗体，人源化12B4抗体，人源化266抗体，人源化12A11抗体，或人源化15C11抗体。

抗体的同种型可以是IgM，IgG1，IgG2，IgG3，IgG4或任意其他药物可接受的同种型。在优选制剂中，所述同种型是人IgG1或人IgG4。在一些液体制剂中，抗Aβ抗体的浓度为约0.1mg/ml至约60mg/ml，约40mg/ml至约60mg/ml，约50mg/ml，约30mg/ml，约17mg/ml至约23mg/ml，约20mg/ml，约17mg/ml，，约10mg/ml，约5mg/ml，约2mg/ml，或约1mg/ml。优选为约17mg/ml至约23mg/ml。

在一些制剂中，至少一种紧张剂是D-甘露醇且浓度为约1％w/v至约10％w/v，约2％w/v至约6％w/v，或优选为约4％w/v。在一些制剂中，至少一种缓冲剂是组氨酸且浓度为约0.1mM至约25mM，约5mM至约15mM，优选为约5mM或约10mM。在其他制剂中，至少一种缓冲剂是琥珀酸盐且浓度为约0.1mM至约25mM，例如，为约10mM。在一些制剂中，所述抗氧化剂是甲硫氨酸且浓度为约0.1mM至约25mM，约5mM至约15mM，或优选为约10mM。在优选制剂中，所述稳定剂是聚山梨醇酯80且浓度为约0.001％w/v至约0.01％w/v，约0.005％w/v至约0.01％w/v，或约0.005％w/v。所述制剂的pH为约5至7，约5.5至约6.5，约6.0至约6.5，约6.2，约6.0，或约5.5，优选为约6.0。

优选制剂的pH为约6.0至约6.5且包括特异性结合于选自Aβ的1-7，1-5，3-7，3-6，13-28，15-24，16-24，16-21，19-22，33-40和33-42残基内表位的抗Aβ抗体，例如，浓度为约2％w/v至约6％的D-甘露醇，例如，浓度为约0.1mM至约25mM的组氨酸，浓度为约0.1mM至约25mM甲硫氨酸，以及稳定剂。优选地，所述稳定剂是浓度为约0.001％至约0.01％w/v的聚山梨醇酯80。

所述制剂可以是为整合多肽提供稳定性和维持其生物学活性而设计的稳定液体多肽制剂。该制剂包括具有治疗活性的Aβ-结合多肽和存在量足以降低在制剂保存过程中多肽的副产物形成的抗氧化剂。

一些液体多肽制剂对于不希望的副产物，例如高分子量多肽聚集体，低分子量多肽降解产物或其混合物的形成而言是稳定的。

在治疗性抗原结合多肽是抗体的制剂中，需要被最小化的常见高分子量聚集体是，例如，抗体：抗体复合物，抗体：抗体片段复合物，抗体片段：抗体片段复合物，或其混合物。一般地，高分子量复合物或副产物的分子量都大于所述抗原结合多肽单体的分子量，例如，在IgG抗体的情况下，大于约150kD。在这样的抗体制剂中，需要被最小化的常见低分子量多肽分解产物是，例如由抗体轻链，抗体重链，抗体轻链和重链复合物或其混合物组成的复合物。一般地，低分子量复合物或副产物的分子量都低于所述抗原结合多肽单体的分子量，例如，在IgG抗体的情况下，小于约150kD。

优选的抗-Aβ抗体稳定制剂包括含量足以抑制不希望副产物形成的抗氧化剂甲硫氨酸，含量足以使得所述制剂适用于给药的例如紧张剂，以及含量足以维持生理性适合pH的例如氨基酸或其衍生物。

一些制剂在冷冻时是稳定的。这样的制剂可适用于肠胃外，静脉内，肌肉，皮下，颅内，或硬膜外给药，优选为静脉内或皮下给药。一些制剂可适用于对受试者的脑或脊髓液进行靶向输送。所述制剂可基本上不含有防腐剂。一些制剂可稳定至少约12个月，至少约18个月，至少约24个月，或至少约30个月。一些制剂可在约-80℃至约40℃，在约0℃至约25℃，在约0℃至约10℃，优选为在约-80℃至约-50℃或在约2℃至约8℃稳定。

一些制剂可在冷冻温度以上至约10℃的条件下稳定至少12个月，且pH为约5.5至约6.5。这样的制剂包括浓度为约1mg/ml至约30mg/ml的至少一种Aβ抗体，浓度为约4％w/v的甘露醇或浓度为约150mM的NaCl，浓度为约5mM至约10mM的组氨酸或琥珀酸盐；以及10mM的甲硫氨酸。某种此类制剂的pH为约6.0，约1mg/ml的Aβ抗体，约10mM的组氨酸和约4％w/v的甘露醇。其他的制剂可在约2℃至8℃稳定至少约24个月，且含有浓度为约0.001％w/v至约0.01％w/v聚山梨醇酯80。某些此类制剂的pH为约6.0至约6.5且含有约10mM的组氨酸，约4％w/v的甘露醇以及约1mg/ml，约2mg/ml或约5mg/ml的Aβ抗体。其他的此类制剂包括约10mM的组氨酸，约4％w/v的甘露醇，约0.005％w/v的聚山梨醇酯80以及约10mg/ml，约20mg/ml或30mg/ml的Aβ抗体，优选的pH为约6.0至约6.2。

在这类制剂中，抗Aβ抗体优选为人源化3D6抗体，人源化10D5抗体，人源化12B4抗体，人源化266抗体，人源化12A11抗体，或人源化15C11抗体。某种此类制剂的pH为约6.0至6.5并含有约10mM的组氨酸，约4％w/v的甘露醇以及约2mg/ml至约20mg/ml的选自人源化3D6抗体，人源化10D5抗体，人源化12B4抗体和人源化12A11抗体的Aβ抗体。另一种这类制剂的pH为约6.0至6.5并含有约10mM的组氨酸，约150mM的NaCl以及约2mg/ml至约20mg/ml的选自人源化12B4抗体和人源化12A11抗体的Aβ抗体。而其他此类制剂的pH为约6.0至6.5并含有约10mM的组氨酸，约4％w/v的甘露醇以及约2mg/ml至约20mg/ml的选自人源化266抗体和人源化15C11抗体的Aβ抗体。

优选制剂可在温度约2℃至约8℃且pH为约5.5至约6.5的条件下稳定至少约24个月，且其含有约2mg/ml至约23mg/ml，优选为约17mg/ml至约23mg/ml的人源化3D6抗体，约10mM的组氨酸以及约10mM的甲硫氨酸。优选地，该制剂还含有约4％w/v的甘露醇。该制剂优选地包括浓度为约0.001％w/v至约0.01％w/v，更优选为约0.005％w/v的聚山梨醇酯80。在该类制剂中，所述人源化3D6抗体的浓度为约20mg/ml至约23mg/ml。

其他的制剂可在温度约2℃至约8℃且pH为约5.5至约6.5的条件下稳定至少约24个月，并含有约2mg/ml至约23mg/ml的人源化3D6抗体，约10mM的琥珀酸盐，约10mM的甲硫氨酸，约4％w/v的甘露醇以及约0.005％w/v的聚山梨醇酯80。在某些此类制剂中，所述人源化3D6抗体的浓度为约17mg/ml至约23mg/ml。

其他优选制剂可在温度约2℃至约8℃且pH为约6.0至约6.5的条件下稳定至少约24个月，并含有约2mg/ml至约30mg/ml的人源化266抗体，约10mM的组氨酸以及约10mM的甲硫氨酸。在某些此类制剂中，还含有约4％w/v的甘露醇。在某些此类制剂中，还含有浓度为约0.001％w/v至约0.01％w/v，例如约0.005％w/v的聚山梨醇酯80。在某些此类制剂中，所述人源化266抗体的浓度为约17mg/ml至约23mg/ml，或约20mg/ml至约23mg/ml。

其他制剂可在温度约2℃至约8℃稳定至少约24个月，pH为约6.0至约6.5，并含有约2mg/ml至约20mg/ml的人源化266抗体，约10mM的琥珀酸盐，约10mM的甲硫氨酸，约4％w/v的甘露醇和约0.005％w/v的聚山梨醇酯。

其他优选制剂可在温度约2℃至约8℃下稳定至少约24个月，pH为约6.0至约6.5，并含有约2mg/ml至约30mg/ml的人源化12A11抗体，约10mM的组氨酸以及约10mM的甲硫氨酸。一些此类制剂含有约150mM的NaCl。这类制剂还含有浓度为约0.001％w/v至约0.01％w/v，例如，约0.005％的聚山梨醇酯80。在一些制剂中，人源化12A11抗体的浓度为约17mg/m1至约23mg/ml，或约20mg/ml至约23mg/ml。

另一些制剂可在温度约2℃至约8℃下稳定至少约24个月，pH为约6.0至约6.5，并含有约2mg/ml至约20mg/ml的人源化12A11抗体，约5mM的组氨酸，约10mM的甲硫氨酸，约4％w/v的甘露醇和约0.005％w/v的聚山梨醇酯80。

本发明还提供了当从约-50℃至约-80℃融化时保持稳定的制剂，其pH为约6.0，含有约40至约60mg/ml的抗Aβ抗体，约1.0mg/ml至约2.0mg/ml的组氨酸，约1.0mg/ml至2.0mg/ml的甲硫氨酸以及约0.05mg/ml的聚山梨醇酯80。优选地，不含有甘露醇。优选地，所述Aβ抗体是人源化3D6抗体或人源化266抗体。

本发明还提供了含有抗Aβ抗体，甘露醇和组氨酸的液体制剂。在一些此类制剂中，所述抗Aβ抗体的浓度为约1mg/ml至约30mg/ml。优选地，甘露醇的存在量足以维持该制剂的等渗性。优选地，所述组氨酸的含量足以维持生理性的适合pH。一种此类制剂含有约20mg/ml的抗Aβ抗体，约10mM L-组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％甘露醇且pH为约6。另一种此类制剂含有约30mg/mL抗Aβ抗体，约10mM琥珀酸盐，约10mM甲硫氨酸，约6％甘露醇且pH为约6.2。而另一种此类制剂含有约20mg/mL抗Aβ抗体，约10mM L-组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％甘露醇，约0.005％聚山梨醇酯80且pH为约6。还有其他的此类制剂含有约10mg/mL抗Aβ抗体，约10mM琥珀酸盐，约10mM甲硫氨酸，约10％甘露醇，约0.005％聚山梨醇酯80且pH为约6.5。

还有其他的此类制剂含有约5mg/mL至约20mg/mL抗Aβ抗体，约5mM至约10mM L-组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％甘露醇，约0.005％聚山梨醇酯80且pH为约6.0至约6.5。还有其他的此类制剂含有约5mg/mL至约20mg/mL抗Aβ抗体，约5mM至约10mM L-组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约150mM NaCl，约0.005％聚山梨醇酯80且pH为约6.0至约6.5。

本发明还提供了适用于静脉给药的制剂，其含有约20mg/mL抗Aβ抗体，约10mM L-组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％甘露醇且pH为约6。优选地，这类制剂含有约0.005％的聚山梨醇酯80。

本发明提供了在液体药物制剂中增强抗原结合多肽，例如抗体稳定性的方法，其中所述多肽可在液体制剂中储藏过程中表现出副产物的形成。因此，该方法包括向所述制剂中掺入含量足以降低副产物形成的抗氧化剂，例如甲硫氨酸或其类似物。

本发明还提供了在温度为约-50℃至约-80℃条件下保存然后再在约2℃至约8℃条件下保存来维持人源化抗Aβ抗体稳定性的方法，该方法包括(i)组合约40mg/ml至约60mg/ml的人源化抗Aβ抗体，约1mg/ml至约2mg/ml的L-组氨酸，约1mg/ml至约2mg/ml的甲硫氨酸和约0.05mg/ml的聚山梨醇酯80；(ii)调节所述pH至约6.0；(iii)过滤进入冷冻容器并冷冻；(iv)融化；(v)加入足量甘露醇或NaCl和稀释剂从而获得甘露醇为约4％或约150mM NaCl，约2mg/ml至约20mg/ml人源化抗Aβ抗体；约5mM至约10mM组氨酸；约10mM甲硫氨酸和约0.005％聚山梨醇酯80的终浓度；(vi)过滤；(vii)转移入玻璃小瓶并封口；以及(viii)保存于约2℃至约8℃的温度下。

本发明还提供了试剂盒，其包括含有本文所述制剂的容器和使用说明。

本发明还提供了药物单位剂型，包括约10mg至约250mg的人源化抗Aβ抗体，约4％的甘露醇或约150mM的NaCl，约5mM至约10mM的组氨酸或琥珀酸盐，以及约10mM的甲硫氨酸。一些此类药物单位剂型包括约0.001％至约0.1％的聚山梨醇酯80。一些此类药物单位剂型包括约40mg至约60mg，约60mg至约80mg，约80mg至约120mg，约120mg至约160mg，或约160mg至约240mg的抗Aβ抗体。一些此类制剂可在对患者给药之前在约2℃至约8℃的温度下保持于玻璃小瓶中。

此外，本发明提供了在玻璃小瓶中包括含有约10mg至约250mg人源化抗Aβ抗体，约4％甘露醇或约150mM NaCl，约5mM至约10mM的组氨酸，以及约10mM的甲硫氨酸的制剂的治疗性产品。一些此类治疗性产品还包括用途标签，该标签包括使用适当的在患者中达到0.15mg/kg至约5mg/kg的剂量所需体积的指示。通常，所述小瓶为1mL，2mL，5mL，10mL，25mL或50mL的小瓶。一些此类治疗性产品的剂量为约0.5mg/kg至约3mg/kg，优选为约1mg/kg至约2mg/kg。在某些此类治疗性产品中，所述抗Aβ抗体浓度为约10mg/ml至约60mg/ml，优选为约20mg/ml。所述治疗性产品优选地包括约0.005％的聚山梨醇酯80。某些此类治疗性产物的制剂可用于皮下给药或静脉给药。

本发明还提供了预防性或治疗性治疗以Aβ沉淀为特征的疾病的方法，该方法包括静脉内或皮下给药本说明书所述的药物单位剂量。

本发明的其他特征和优势可根据下文中的详细描述和权利要求而变得更加清楚。

附图说明

图1所示为IgG抗体及链间和链内二硫键大概位置，糖基化位点(六边形符号)，互补决定区(CDRs)，构架区(阴影)，以及恒定区预测结构的示意图。

图2所示为人源化3D6版本2(hu3D6.v2)抗Aβ抗体轻链和重链的完整氨基酸序列，分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2。轻链互补决定区(CDR)，即，CDR1，CDR2，CDR3分别位于残基位点24-39，55-61，和94-102(上图)。重链互补决定区(CDR)，即CDR1，CDR2和CDR3分别位于残基位点40-44，50-65，和99-108(下图)。所预测的分子间二硫键通过所涉及的半胱氨酸残基的连接示出。预测形成分子内二硫键的半胱氨酸由下划线表示并表示出其连接性。抗体重链的N-连接的糖基化一致性位点在残基位点299-301以斜体表示(下图)。所预测的重链C-末端赖氨酸在括号中表示。

图3所示为按照本发明所述制备的抗体制剂(具有以及不具有聚山梨醇酯80(PS80))在保存于5℃条件下的货架期预测示意图。

图4所示为按照本发明所述制备的抗体制剂(具有以及不具有PS80)在保存于25℃条件下的货架期预测示意图。

图5所示为按照本发明所述制备的抗体制剂(具有以及不具有PS80)在保存于40℃条件下的货架期预测示意图。

图6所示为按照本发明所述制备的具有PS80的抗体制剂在保存于5℃条件下的降解预测示意图。

图7所示为对保存于5℃条件下，按照本发明所述制备的具有PS80的抗体制剂进行的分子排阻色谱(SEC)分析的示意图，还进行了重复操作以降低分析差异性。

图8所示为按照本发明所述制备的不具有PS80的抗体制剂在保存于5℃条件下的降解预测示意图。

图9所示为色谱图，该色谱图说明了PS80的存在使得可在不改变单体抗体图谱的条件下将在稳定多肽制剂内形成的副产物从高分子量类型转变成了低分子量类型。

图10所示为在加入抗氧化剂，例如游离甲硫氨酸之后，在含有IgG4，特别是高分子量多肽聚集体的多肽制剂中对不希望副产物形成造成抑制的示意图。

图11所示为在加入抗氧化剂，例如游离甲硫氨酸之后，在含有IgG2，特别是高分子量多肽聚集体的多肽制剂中对不希望副产物的形成抑制的示意图。

发明详述

为了更清楚地理解说明书和权利要求，下文中适宜地提供了以下定义。

在本说明书中，术语“淀粉样蛋白性疾病(amyloidogenic disease)”包括与不可溶淀粉样蛋白纤维形成或沉淀有关(或由不可溶淀粉样蛋白纤维形成或沉淀引起)的任意疾病。示例性的淀粉样蛋白性疾病包括，但不限于，系统性淀粉样变性，阿耳茨海默氏病，成熟的糖尿病发作，帕金森氏症，亨延顿氏舞蹈病，额颞性痴呆，以及朊病毒相关的可传播的海绵状脑病(在人类中为库鲁病和克-雅二氏病，在羊和牛中分别为搔痒病和BSE)。根据所沉淀纤维多肽成分的本性质定义或表征了不同的淀粉样蛋白性疾病。例如，对患有阿耳茨海默氏病的受试者或患者而言，β-淀粉样蛋白(例如，野生型，变异体，或截断的β-淀粉样蛋白)是所述淀粉样蛋白沉淀的特征性多肽成分。因此，阿耳茨海默氏病是“由Aβ沉淀表征的疾病”或“与Aβ沉淀相关的疾病”的示例，例如，在受试者或患者的大脑中。

术语“β-淀粉状蛋白质”，“β-淀粉状肽”，“β-淀粉状蛋白”，“Aβ”和“Aβ肽”可在本说明书中交替使用。

术语“Aβ结合多肽”包括能够特异性结合于Aβ肽或结合于所述Aβ肽内部表位的多肽。一般地，Aβ结合多肽含有免疫球蛋白或免疫球蛋白-类似结构域的至少一个功能性部分，例如，含有一个或多个可变区的受体或赋予所述多肽具有特异性结合特征的互补决定区(CDRs)。优选的抗原结合多肽包括抗体，例如，IgM，IgG1，IgG2，IgG3，或IgG4。

术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子(含有特异性结合于抗原的抗原结合位点的分子)的免疫活性部分，包括单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)，多克隆抗体，多特异性抗体(例如，双特异性抗体)，嵌合抗体，CDR-接枝抗体，人源化抗体，人抗体，和单链抗体(scFvs)。在本说明书中，术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”，是指仅含有一种能够识别和结合靶抗原特定表位，例如，Aβ表位的一种抗原结合位点的抗体分子群。单克隆抗体组合物由此通常表现出对于与其发生免疫反应的特定靶抗原具有单独的结合特异性和亲和性。术语“单链抗体”是指具有由一条重链和一条轻链组成的具有两条多肽链结构的蛋白，所述链是稳定的，例如，通过链内多肽连接物，其具有特异性结合抗原的能力。制备特异于靶抗原的单链抗体的技术已有描述，例如，参见美国专利第4,946,778号。术语“抗体片段”包括F(ab’)2片段，Fab片段，Fab’片段，Fd片段，Fv片段，和单结构域抗体片段(DAbs)。免疫球蛋白的免疫活性部分包括，例如，F(ab)和F(ab’)2片段。Fab片段的构建方法已有描述，例如，参见Huse，et al.(1989)Science 246：12751281)。可通过本领域中公知的技术来制备其他的抗体片段，包括，但不限于(i)由胃蛋白酶消化抗体分子产生的F(ab’)2片段；(ii)通过还原F(ab’)2片段的二硫键产生的Fab片段；(iii)使用木瓜蛋白酶和还原剂处理抗体分子产生的Fab’片段；和(iv)Fv片段。还可以使用本领域所认可的重组工程技术制备多种片段。可通过例如美国专利第5,225,539号中所述的方法，对非人类的抗体进行“人源化”。在一种方法中，可将非人类的CDR插入人类抗体或共有抗体构架序列中。然后可向抗体构架中引入其他改变从而调整其亲和性或免疫原性。

术语“结构域”是指含有免疫球蛋白折叠的重链或轻链多肽的球状区域。免疫球蛋白折叠包括β-折叠片二级结构并含有单独的二硫键。根据在“恒定”结构域情况下在各种类型结构域内相对缺乏的序列变化，或在“可变”结构域情况下在各种类型结构域内的明显变化，在本说明书中结构域还可被进一步称为“恒定的”或“可变的”。抗体或多肽“结构域”通常可在本领域中与抗体或多肽“区”替换使用。抗体轻链的“恒定”结构域可与“轻链恒定区”，“轻链恒定结构域”，“CL”区或“CL”结构域交替使用。抗体重链“恒定”结构域可与“重链恒定区”，“重链恒定结构域”，“CH”区或“CH”结构域交替使用。抗体轻链的“可变”结构域可与“轻链可变区”，“轻链可变结构域”，“VL”区或“VL”结构域交替使用。抗体重链的“可变”结构域可与“重链可变区”，“重链可变结构域”，“VH”区或“VH”结构域交替使用。

术语“区”还可指抗体链或抗体链结构域的部分(例如，重链或轻链的部分或恒定或可变结构域的部分，如本文所定义的那样)，以及所述链或结构域的更分散的部分。例如，轻链和重链或轻链和重链可变结构域包括在“构架区”或“FRs”中间隔存在的“互补决定区”或“CDR”，如本文所定义的那样。

术语“抗Aβ抗体”包括能够结合Aβ肽表位的抗体(及其片段)。抗Aβ抗体包括，例如，在美国专利公开第20030165496A1号，美国专利公开第20040087777A1号，国际专利公开第WO02/46237A3号，和国际专利公开第WO04/080419A2号中所述的抗体。其他抗Aβ抗体可参见，例如国际专利公开第WO03/077858A2号和第WO04/108895A2号，标题均为“识别β淀粉状肽的人源化抗体”，国际专利公开第WO03/016466A2号，题为“抗Aβ抗体”，国际专利公开第WO0162801A2号，题为“能够螯合淀粉状β肽的人源化抗体”，以及国际专利申请第WO02/088306A2号，题为“人源化抗体”以及国际专利申请第WO03/070760A2号，题为“抗Aβ抗体及其用途”中的描述。

术语“片段”是指含有的氨基酸残基少于完整或完全抗体或抗体链的抗体或抗体链的部分。可以通过对完整或完全抗体或抗体链进行化学或酶学处理获得所述片段。还可以通过重组的方法获得片段。示例性的片段包括Fab，Fab’，F(ab’)2，Fabc和/或Fv片段。术语“抗原结合片段”是指结合抗原或与获得所述片段的完整抗体竞争特异性抗原结合的免疫球蛋白或抗体的多肽片段。

术语“构象”是指蛋白或多肽，例如，抗体，抗体链，其结构域或区的三级结构。例如，短语“轻(或)重链构象”是指轻(或重)链可变区的三级结构，而短语“抗体构象”或“抗体片段构象”是指抗体或其片段的三级结构。

术语抗体的“特异性结合”是指抗体对特定的抗原或表位表现出来的明显亲和性，而且，一般情况下，并不会表现出明显的交叉反应性。在示例性的实施方案中，抗体并未表现出交叉反应性(例如，并未与非Aβ肽或与Aβ上的远端或远隔表位交叉反应)。“明显的”或优选的结合包括以至少10^-6，10^-7，10^-8，10^-9M，或10^-10M的亲和力进行结合。亲和力大于10^-7M，优选为大于10^-8M是更优选地。在本说明书中设定的这些数值区间都包括在本发明的范围之内，且优选地，结合亲和力可以亲和力的范围表示，例如，10^-6至10^-10M，优选为10^-7至10^-10M，更优选为10^-8至10^-10M。“未表现出明显交叉反应性”的抗体是不能明显结合于不希望实体(例如，不希望的蛋白，多肽或肽)的抗体。例如，特异性结合于Aβ的抗体能够明显地结合于Aβ但却不能明显地与非Aβ蛋白或肽(例如，包含于斑中的非Aβ蛋白或肽)反应。对特定表位具有特异性的抗体可以，例如，不显著地与相同蛋白或肽上的远端或不同表位交叉反应。可以根据本领域内任意确定此类结合的方法对特异性结合进行确定。优选地，可根据Scatchard分析和/或竞争性结合分析测定特异性结合。

可通过重组DNA技术，或通过对完整的免疫球蛋白进行酶学或化学切割制备结合片段。结合片段包括Fab，Fab’，F(ab’)2，Fabc，Fv，单链，和单链抗体。除了“双特异性”或“双官能”免疫球蛋白或抗体，一般认为免疫球蛋白或抗体的结合位点都一致。“双特异性”或“双官能抗体”是具有两种不同重链/轻链对和两种不同结合位点的人工杂合抗体。可通过多种方法，包括杂交瘤融合或Fab’片段连接的技术制备双特异性抗体。可参见，例如，Songsivilai & Lachmann，Clin.Exp.Immunol.79：315-321(1990)；Kostelny et al.，J.Immunol.148，1547-1553(1992)。

“抗原”是含有抗体能够特异性结合的抗原决定簇的分子(例如，蛋白，多肽，肽，碳水化合物，或小分子)。

术语“表位”或“抗原决定簇”是指在抗原上免疫球蛋白或抗体(或其抗原结合片段)能够特异性结合的位点。表位可由连续的氨基酸或通过蛋白质的三级折叠而毗邻的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位在暴露于变性溶剂时通常可以保留下来，而由三级折叠形成的表位则在用变性溶剂处理之后通常会丧失。表位通常包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个以独特空间构象存在的氨基酸。测定表位空间构象的方法包括，例如，x-射线晶体成像和2-维核磁共振。可参见，例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in MolecularBiology，Vol.66，G.E.Morris，Ed.(1996)。

术语“稳定制剂”或“稳定液体多肽制剂”包括这样的制剂，在进行保存时，其中的多肽基本上保持了其物理和化学的一致性和完整性。测定蛋白稳定性的各种分析技术可在本领域公知技术中获得并在此进行了描述(综述于Peptide and Protein Drug Delivery，247-301，Vincent Lee Ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.(1991)和Jones，A.Adv.Drug Delivery Rev.10：29-90(1993))。可在选定的温度在选定的时间阶段来测定稳定性。对快速测定而言，可将制剂保存于更高或“加速的”温度，例如在40℃保持2周至1个月或更长时间，在此过程中测定时间稳定性。在示例性的实施方案中，所述制剂难以形成所述成分多肽的副产物，例如高分子量的聚集体产物，低分子量的降解或片段化产物，或其混合物。术语“稳定性”是指诸如抗体的分子类型保持其原有化学一致性，例如，一级结构，二级结构，和/或三级结构的时间长度。

术语“副产物”包括不希望的产物，其损害或减少给定制剂中的治疗性多肽的比例。常见的副产物包括治疗性多肽的聚集体，治疗性多肽的片段(例如，由于多肽脱酰胺化或水解而降解产生的)，或其混合物。

术语“高分子量多肽聚集体”包括治疗性多肽的聚集体，治疗性多肽的片段(例如，由于多肽经例如水解而降解产生的)，或其混合物，其随后发生聚集。一般地，高分子量聚集体是分子量高于治疗性单体多肽分子量的复合物。在抗体的情况下，例如，IgG抗体，此类聚集体通常大于约150kD。然而，在其他治疗性多肽的情况下，例如，分子量通常为25kD的单链抗体，此类聚集体的分子量通常大于约25kD。

术语“低分子量多肽降解产物”包括，例如，治疗性多肽的片段，例如，由脱酰胺化或水解产生的片段。一般地，低分子量降解产物是分子量小于治疗性单体多肽分子量的复合物。在抗体的情况下，例如，IgG抗体，此类降解产物低于约150kD。然而，在其他治疗性多肽的情况下，例如，分子量通常为25kD的单链抗体，此类聚集体的分子量通常小于约25kD。

术语“给药途径”包括本领域所认可的用于递送治疗性多肽的给药途径，例如，肠胃外，静脉内，肌内，皮下，颅内或硬膜外给药。对治疗神经退行性疾病的治疗性多肽给药而言，静脉内，硬膜外或颅内给药是所希望的。

在本说明书中，术语“治疗”被定义为对患者施用或给药治疗剂，或向来自患者的分离组织或细胞系施用或给药治疗剂，该患者患有疾病，表现出了疾病的症状或对疾病具有易感性，其目的在于治愈，治疗，缓解，延缓，减轻，改变，校正，改善，改进或影响疾病，该疾病的症状或对于疾病的易感性。

术语“有效剂量”或“有效用量”定义为足以实现或至少部分实现所希望效果的量。术语“治疗有效剂量”定义为在已经罹患疾病的患者体内足以治愈或至少部分抑制该疾病及其并发症的量。对于这一用途的有效量依赖于感染的严重程度以及患者自身免疫系统的一般性状态。

术语“患者”包括接受了预防性或治疗性治疗的人类和其他哺乳动物受试体。

在本说明书中，术语“剂量单位形式”(或“单位剂型”)是指适用于待治疗患者单次剂量的物理性分隔单位，每一单位都含有经计算能够与所需药物载体，稀释剂或赋形剂一起产生所希望治疗性效果的预定量活性化合物。对本发明中单位剂型的说明是通过所述活性化合物和拟达到的特定治疗效果，以及用于治疗患者的此类活性化合物在本领域中进行化合的固有不足进行说明的并直接依赖于此。

可对本发明制剂中活性成分(例如Aβ多肽)的实际剂量水平进行改变从而获得一定量的活性成分，以有效地实现针对于特定患者的预期治疗反应，一定量的组合物，以及给药方式，而不会对患者具有毒性。所选定的剂量水平依赖于多种药动力学因素，包括本发明所采用的特定组合物的活性，给药途径，给药时间，所施用特定化合物的排泄率，治疗的持续时间，与所施用特定组合物一同使用的其他药物，化合物和/或材料，患者年龄，性别，体重，健康状态，受试患者的一般性健康状况和之前的病史，以及在医药领域中公知的类似因素。

在本说明书中，术语“稀释剂”是指适于改变或实现如本文所述的示例性或适当浓度的溶液。

概述

本发明提供了适用于Aβ结合多肽的制剂，特别的，抗Aβ抗体，及其部分和/或片段。在某些方面，本发明提供了适用于治疗用途的稳定液体多肽制剂。特别地，本发明提供了Aβ结合多肽，例如，抗体，及其抗原结合片段的稳定化，以用来治疗淀粉样蛋白性疾病和/或病症。特别地，本发明提供了稳定制剂，从而使得活性治疗多肽能够在延长的时间阶段保持稳定，并可通过多种给药途径进行给药。这对旨在用于治疗淀粉样蛋白性疾病和/或病症的那些Aβ结合多肽(例如，抗体)而言是至关重要的。在其他方面，本发明提供了独特的稳定抗体制剂，例如，其能够在各种逆境，诸如冷冻，冻干，加热和/或还原的条件下保持稳定。此外，本发明的示例性制剂能够保持抗体稳定性，生物学活性，纯度和质量超过延长的时间段(例如，在制剂保存过程中的一年甚至更长)，甚至是在不适宜的温度条件下。此外，本发明的示例性制剂能够适于对受试者或患者例如，患有或预测会罹患淀粉样蛋白性疾病和/或病症的人类进行给药(例如，对受试者或患者静脉内给药)。

制剂

在一方面，本发明提供了稳定制剂，其包括Aβ结合多肽。紧张剂，其中所述紧张剂的存在量足以使得该稳定制剂适用于静脉内灌注，以及氨基酸或其衍生物，其中所述氨基酸或其衍生物的存在量足以维持生理适合的pH。在示例性的实施方案中，本发明提供了含有抗Aβ抗体，甘露醇和组氨酸的稳定制剂。

在一个实施方案中，本发明提供了本发明提供了稳定制剂，其包括Aβ结合多肽。紧张剂，其中所述紧张剂的存在量足以使得该制剂适用于静脉内灌注，以及氨基酸或其衍生物，其中所述氨基酸或其衍生物的存在量足以维持生理适合的pH。在示例性的实施方案中，所述紧张剂是甘露醇。在其他示例性实施方案中，所述氨基酸是组氨酸。

在另一方面，本发明提供了含有Aβ结合多肽的稳定制剂。在本发明制剂中适用于稳定的Aβ结合多肽包括有抗体及其片段，以及特别地，能够结合于参与淀粉样蛋白性疾病或病症的治疗靶的抗体。因此，通过加入足以抑制此类副产物形成量的抗氧化剂，按照本发明对治疗性多肽进行稳定化作用，避免了副产物，通常是高分子量的聚集体，低分子量降解片段，或其混合物的形成。抗氧化剂包括甲硫氨酸及其类似物，其浓度足以获得对不希望副产物的预期抑制，如下所述。任选地，本发明的稳定多肽制剂还可含有紧张剂，其中所述紧张剂的存在量足以使得该稳定制剂适用于若干给药途径，例如，静脉内灌注，以及氨基酸或其衍生物，其中所述氨基酸或其衍生物的存在量足以维持生理适合的pH。在示例性的实施方案中，本发明提供了含有抗Aβ抗体，甲硫氨酸，甘露醇和组氨酸的稳定制剂。

在一个实施方案中，本发明提供了稳定液体制剂，其含有治疗活性的Aβ结合多肽，其中所述多肽能在保存过程中形成副产物，还含有抗氧化剂，其中所述抗氧化剂的存在量能够足以降低在制剂保存过程中副产物的形成。在示例性的实施方案中，抗氧化剂是甲硫氨酸或其类似物。

在本发明的一些实施方案中，Aβ结合多肽选自抗体，抗体Fv片段，抗体Fab片段，抗体Fab′(2)片段，抗体Fd片段，单链抗体(scFv)，单结构域抗体片段(Dab)，包括至少一种抗体互补决定区(CDR)的β-折叠片多肽，以及包括至少一种抗体互补决定区的非球状多肽。在本发明的示例性实施方案中，Aβ结合多肽可为约0.1mg/ml至约60mg/ml。在其他示例性的实施方案中，本发明制剂包括约30mg/ml的Aβ结合多肽。在其他示例性实施方案中，本发明制剂包括约20mg/ml的Aβ结合多肽。在又一个示例性实施方案中，本发明制剂包括约17mg/ml的Aβ结合多肽。

在本发明的示例性实施方案中，Aβ结合多肽是抗Aβ抗体。在本发明的一些实施方案中，抗Aβ抗体选自人源化3D6抗体，人源化10D5抗体，人源化12B4抗体，人源化266抗体，人源化12A11抗体，或人源化15C11抗体。在本发明的示例性实施方案中，抗Aβ抗体结合的表位包括选自Aβ氨基酸1-7，1-5，3-7，3-6，13-28，16-21，19-22，33-40和33-42的残基。在本发明的一些实施方案中，抗Aβ抗体是选自人IgG1，IgG2，IgG3和IgG4的亚型。在本发明的特定实施方案中，抗Aβ抗体是人IgG1亚型。

Aβ多肽能够形成选自高分子量多肽聚集体，低分子量多肽降解产物，及其组合的副产物。高分子量聚集体可包括抗体：抗体复合物，抗体：抗体片段复合物，抗体片段：抗体片段复合物，或其组合。低分子量多肽降解产物可包括抗体轻链，抗体重链，抗体轻链和重链复合物，抗体片段，及其组合。

在本发明的一个实施方案中，如本发明所述的液体制剂包括Aβ结合多肽，甘露醇和组氨酸。在本发明的一个示例性实施方案中，Aβ结合多肽是抗Aβ抗体。在本发明的一些示例性实施方案中，抗Aβ抗体选自人源化3D6抗体，人源化10D5抗体，人源化12B4抗体，人源化266抗体，人源化12A11抗体和人源化15C11抗体。在本发明的其他实施方案中，抗Aβ抗体结合的表位包括选自Aβ氨基酸1-7，1-5，3-7，3-6，13-28，16-21，19-22，33-40和33-42的残基。在本发明的一些实施方案中，该抗体是选自IgG1，IgG2，IgG3和IgG4的亚型。在本发明的特定实施方案中，该抗体是IgG1亚型。

在本发明的示例性实施方案中，抗Aβ抗体可为约0.1mg/ml至约200mg/ml。在其他示例性的实施方案中，抗Aβ抗体可为约20mg/ml。

在本发明的一些实施方案中，本发明的制剂包括足以维持所述制剂等张度量的甘露醇。在本发明的示例性实施方案中，甘露醇为约2％w/v至约10％w/v。在本发明其他示例性的实施方案中，甘露醇为约4％。在其他示例性的实施方案中，甘露醇为约6％。在其他示例性的实施方案中，甘露醇为约10％。

在本发明的一些实施方案中，本发明的制剂包括能够维持生理适合pH的足量组氨酸。在本发明的示例性实施方案中，组氨酸为约0.1mM至约25mM。在其他示例性实施方案中，组氨酸为约10mM。

在本发明的一些实施方案中，本发明的制剂包括约0.1mM至约25mM的琥珀酸盐。在示例性的实施方案中，琥珀酸盐为约10mM。

在本发明的一些实施方案中，本发明的制剂还包括抗氧化剂。在示例性的实施方案中，抗氧化剂是甲硫氨酸或其类似物。在本发明的一个实施方案中，甲硫氨酸或类似物为约0.1mM至约25mM。在其他实施方案中，甲硫氨酸或类似物为约10mM。

在本发明的一些实施方案中，本发明的制剂还包括稳定剂。在本发明的示例性实施方案中，稳定剂是聚山梨醇酯80。在一些实施方案中，聚山梨醇酯80为约0.001％w/v至约0.01％w/v。在其他实施方案中，聚山梨醇酯80为约0.005％w/v。在本发明的其他实施方案中，聚山梨醇酯80为约0.01％w/v。

在本发明的一些实施方案中，制剂的pH为约5至约7。在本发明的示例性实施方案中，制剂的pH为约5.5。在其他示例性实施方案中，制剂的pH为约6.0。在其他示例性实施方案中，制剂的pH为约6.2。在其他示例性实施方案中，制剂的pH为约6.5。

在一些实施方案中，制剂对冷冻条件稳定。在本发明的其他实施方案中，制剂适于静脉给药。在本发明的示例性实施方案中，制剂可适用于肌内或皮下给药。在示例性的实施方案中，制剂可适用于对受试者的大脑进行递送。

在一些实施方案中，制剂可适用于向受试者的脊髓液进行递送。在其他实施方案中，制剂基本上不含有防腐剂。

在本发明的一些实施方案中，制剂可稳定至少约12个月。在一些实施方案中，制剂可稳定至少约18个月。在本发明的一些实施方案中，制剂可稳定至少约24个月。本发明的一些实施方案中，制剂可稳定至少约30个月。

在本发明的示例性实施方案中，制剂可在约-80℃至约-40℃保持稳定。在示例性的实施方案中，制剂可在约0℃至约25℃保持稳定。优选地，制剂可在2℃至约8℃保持稳定。

在本发明的特定实施方案中，适于静脉给药的制剂包括约20mg/ml抗Aβ抗体，约10mM L-组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％甘露醇且pH为约6。在其他特定实施方案中，适用于静脉内给药的制剂包括约30mg/ml抗Aβ抗体，约10mM L-组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约6％甘露醇且pH为约6.2。适用于静脉内给药的优选制剂包括约20mg/ml抗Aβ抗体，约10mM L-组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％甘露醇，约0.005％聚山梨醇酯80，且pH为约6。在本发明的又一个示例性实施方案中，适用于静脉内给药的制剂包括约10mg/ml抗Aβ抗体，约10mM L-组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约10％甘露醇，约0.005％聚山梨醇酯80，且pH为约6.5。

在如本发明前述制剂的一些实施方案中，抗Aβ抗体选自人源化3D6抗体，人源化10D5抗体，人源化12B4抗体，人源化266抗体，人源化12A11抗体，或人源化15C11抗体。在示例性的实施方案中，抗Aβ抗体结合于选自Aβ1-7，1-5，3-7，3-6，13-28，16-21，19-22，33-40和33-42氨基酸残基内的表位。在一些制剂中，抗Aβ抗体结合于Aβ13-28内的1-7内残基的不连续表位上。在一些此类制剂中，抗体是双特异性抗体或是由按照国际专利公开第WO03/070760号所述方法制备的抗体。在一些此类制剂中，所述表位是不连续表位。

在本发明的又一方面，药物单位剂型包括通过对患者给药所述剂型来治疗疾病的任意前述实施方案中的有效量的制剂。在示例性实施方案中，所述药物单位剂型是含有如本发明所述制剂的容器。在示例性实施方案中，所述容器是含有约1mg至约2000mg Aβ结合多肽的小瓶。在其他示例性实施方案中，所述小瓶含有约50mg至约1500mg Aβ结合多肽。在又一示例性实施方案中，所述小瓶含有约5mg至约50mg的Aβ结合多肽。

在示例性实施方案中，所述小瓶的体积为约2至约100ml。在其他实施方案中，所述小瓶的体积为约2至约10ml。

在一些实施方案中，如本发明所述的药物单位剂型适于对患者进行静脉内灌注。

同样，在本说明书中还描述了包含如本发明所述的药物单位剂型的试剂盒，及其使用说明。在本发明的一个实施方案中，含有所述药物单位剂型的容器是具有使用标签的容器。在示例性实施方案中，所述容器被标记为预防性用途。在其他示例性实施方案中，所述容器被标记为治疗性用途。

本发明提供了增强在液体药物制剂中Aβ结合多肽的稳定性的方法，其中所述多肽在液体制剂中的保存过程中表现出了副产物的形成，该方法包括向所述制剂中掺入能够降低所述多肽副产物形成的足量抗氧化剂。在示例性实施方案中，所述Aβ结合多肽成分选自抗体，抗体Fv片段，抗体Fab片段，抗体Fab′(2)片段，抗体Fd片段，单链抗体(scFv)，单结构域抗体片段(Dab)，包括至少一个抗体互补决定区(CDR)的β-折叠片多肽，以及包括至少一个抗体互补决定区的非球状多肽。在一个实施方案中，所述副产物选自高分子量多肽聚集体，低分子量多肽降解产物，及其组合。在另一实施方案中，所述抗氧化剂选自甲硫氨酸及其类似物。

在一些实施方案中，制备本发明任意前述实施方案中所述制剂的方法包括结合所述制剂的赋形剂。在示例性的实施方案中，制备任意前述实施方案中所述制剂的方法包括将Aβ结合多肽与一种或多种稀释剂结合，其中所述的一种或多种稀释剂中包括该制剂的赋形剂。

在示例性的实施方案中，制备药物单位剂型的方法包括在适当的容器中将任意前述实施方案中的制剂组合。在另一示例性的实施方案中，制备将任意前述实施方案中的的制剂的方法包括将含有Aβ结合多肽和至少一部分所述制剂的赋形剂的溶液与含有残留赋形剂的稀释剂进行组合。

用于本发明稳定制剂的多肽

利用可适用本领域中已建立的技术并包括，例如，合成技术(例如重组技术以及多肽合成或这些技术的组合)来制备如本说明书所述的用于本发明制剂的多肽，或者也可以从所述多肽的内源来源中进行分离。在本发明的某些实施方案中，所选择的多肽是抗原结合多肽，更优选地，是抗体，且特别地，是抗Aβ抗体。抗原结合多肽，尤其是抗体的制备技术如下文所述。

多克隆抗体

可通过用免疫原免疫适当的受试者制备多克隆抗体。在免疫受试者体内的抗体滴度可通过标准技术，例如使用固定化靶抗原的酶联免疫吸附分析(ELISA)随时间进行监控。如果需要的话，可从哺乳动物(例如，从血液中)分离出针对靶抗原的抗体分子，并进一步通过公知的技术进行纯化，例如蛋白A Sepharose层析来获得所述抗体，例如，IgG级分。在免疫之后的适当时间，例如，当抗-抗原抗体滴度最高时，从受试者中获得产生抗体的细胞，并通过标准技术，例如最初由Kohlerand Milstein(1975)Nature 256：495-497)(还可参见，Brown et al.(1981)J.Immunol.127：539-46；Brown et al.(1980)J.Biol.Chem.255：4980-83；Yeh et al.(1976)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76：2927-31；和Yeh et al.(1982)Int.J.Cancer 29：269-75)所述的杂交瘤技术，来制备单克隆抗体。至于嵌合多克隆抗体的制备，请参见Buechler的美国专利第6,420,113号。

单克隆抗体

可使用众多公知方法中的任意一种将淋巴细胞和永生细胞系融合来实现产生单克隆抗体的目的(请参见，例如，G.Galfre et al.(1977)Nature 266：55052；Gefter et al.Somatic Cell Genet.，同上；Lerner，YaleJ.Biol.Med.，同上；Kenneth，Monoclonal Antibodies，同上)。此外，本领域所属普通技术人员应该理解，对此类方法进行诸多改变亦能获得成功。一般地，所述永生细胞系(例如，骨髓瘤细胞系)也来自于与淋巴细胞相同的哺乳动物种类。例如，可通过将使用本发明的免疫原性制剂免疫小鼠的淋巴细胞与永生的小鼠细胞系融合制备鼠杂交瘤。优选的永生细胞系是鼠骨髓瘤细胞系，其对含有次黄嘌呤，氨基蝶呤和胸腺嘧啶的培养基(“HAT培养基”)敏感。根据标准技术，可将多种骨髓瘤细胞系中的任意一种用作融合伴侣，例如，P3-NS1/1-Ag4-1，P3-x63-Ag8.653或Sp2/O-Ag14骨髓瘤细胞系。这些骨髓瘤细胞系可从ATCC获得。一般地，可使用聚乙二醇(“PEG”)将HAT敏感的小鼠骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞融合。从所述融合产生的杂交瘤细胞随后可通过杀死未融合以及不具有增殖融合成骨髓瘤细胞(因为不能转化，未融合的脾细胞在若干天之后死亡)的HAT培养基进行筛选。可使用标准ELISA分析，通过对结合于靶抗原，例如，Aβ的来源于杂交瘤培养上清液中的抗体进行筛选，来测定产生本发明单克隆抗体的杂交瘤细胞。

重组抗体

除了制备分泌单克隆抗体的杂交瘤，还可以通过对具有靶抗原的重组组合免疫球蛋白文库(例如，抗体噬菌体显示文库)进行筛选以分离出结合于所述靶抗原的免疫球蛋白文库成员，从而对单克隆抗体进行鉴定和分离。产生和筛选噬菌体显示文库的试剂盒是商业可获得的(例如，Pharmacia Recombinant Phage antibody System，Catalog No.27-9400-01；和Stratagene SurfZAP^TM Phage Display Kit，Catalog No.240612)。此外，特别适用于产生和筛选抗体显示文库的方法和试剂的示例可以在以下文献中找到，例如，Ladner等人的美国专利第5,223,409号；Kang等人的PCT国际公开第WO 92/18619号；Dower等人的PCT国际公开第WO 91/17271号；Winter等人的PCT国际公开第WO92/20791号；Markland等人的PCT国际公开第WO 92/15679号；Breitling等人的PCT国际公开第WO 93/01288号；McCafferty等人的PCT国际公开第WO 92/01047号；Garrard等人的PCT国际公开第WO92/09690号；Ladner等人的PCT国际公开第WO 90/02809号；Fuchs etal.(1991)Bio/Technology 9：1370-1372；Hay et al.(1992)Hum.Antibod.Hybridomas 3：81-85；Huse et al.(1989)Science 246：1275-1281；Griffithset al.(1993)EMBO J 12：725-734；Hawkins et al.(1992)J.Mol.Biol.226：889-896；Clarkson et al.(1991)Nature 352：624-628；Gram et al.(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：3576-3580；Garrad et al.(1991)Bio/Technology 9：1373-1377；Hoogenboom et al.(1991)Nuc.Acid Res.19：4133-4137；Barbas et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA88：7978-7982；以及McCafferty et al.Nature(1990)348：552-554。

嵌合抗体和人源化抗体

此外，重组抗体，例如含有人和非人部分，可使用标准重组DNA技术制备的，嵌合的和人源化单克隆抗体，也在本发明的范围之内。

术语“人源化免疫球蛋白”或“人源化抗体”是指含有至少一种人源化免疫球蛋白或抗体链(即，至少一种人源化轻链或重链)的免疫球蛋白或抗体。术语“人源化免疫球蛋白链”或“人源化抗体链”(即“人源化免疫球蛋白轻链”或“人源化免疫球蛋白重链”)是指具有可变区，该可变区包括基本上来自人免疫球蛋白或抗体的可变构架区和基本上来自非人免疫球蛋白或抗体的互补决定区(CDRs)(例如，至少一个CDR，优选为两个CDR，更优选为三个CDR)，还含有恒定区(例如，在轻链情况下，至少一个恒定区或其部分，而在重链情况下有三个恒定区)的免疫球蛋白或抗体链(即，分别为轻链或重链)。术语“人源化可变区”(例如“人源化轻链可变区”或“人源化重链可变区”)是指包括基本上来自人免疫球蛋白或抗体的可变构架区和基本上来自非人免疫球蛋白或抗体的互补决定区(CDRs)的可变区。

短语“基本来自人免疫球蛋白或抗体”或“基本为人的”是指，当出于比较目的与人免疫球蛋白或抗体氨基酸序列进行比较时，该区域与人构架区或恒定区序列具有至少80-90％，90-95％或95-99％同一性(即，局部序列同一性)，从而能够允许，例如，保守性取代，共有序列取代，种系取代，回复突变，等等。保守性取代，共有序列取代，种系取代，回复突变等的引入，通常被称为人源化抗体或链的“优化”。短语“基本来自非人免疫球蛋白和抗体”或“基本非人的”是指与非人有机体，例如非人哺乳动物的免疫球蛋白或抗体序列具有至少80-95％，优选为至少90-95％，更优选为96％，97％，98％或99％的同一性。

因此，人源化免疫球蛋白或抗体，或人源化免疫球蛋白或抗体链的全部区域或残基，除了CDR，都基本上与一种或多种天然人免疫球蛋白序列的对应区域或残基相同一。术语“对应区”或“对应残基”是指，当出于比较目的将第一序列和第二序列进行优化比对时，占据第一条氨基酸或核苷酸序列上相同(即，相等)位置区域或残基的第二条氨基酸或核苷酸序列上的区域或残基。

术语“显著同一”是指两条多肽序列，当进行优化比对，例如通过GAP或BESTFIT程序使用默认的间隙(gap)权重时，具有至少50-60％的序列同一性，优选为至少60-70％的序列同一性，更优选为至少70-80％的序列同一性，更优选为至少80-90％的序列同一性，甚至更优选为至少90-95％的序列同一性，甚至更优选为至少95％甚至更高(例如，99％的序列同一性或更高)的序列同一性。术语“基本同一”是指两条多肽序列，当进行优化比对，例如通过GAP或BESTFIT程序使用默认的间隙权重时，具有为至少80-90％的序列同一性，优选为至少90-95％的序列同一性，更优选为至少95％甚至更高(例如，99％的序列同一性或更高)的序列同一性。对序列比对而言，通常将一条序列作为参考序列，将检测序列与其进行比对。当使用序列比对算法时，将检测和参考序列输入计算机，指定后续的坐标，如果需要的话，可对序列算法程序参数进行指定。该序列比对算法随后可根据指定的程序参数计算出检测序列相对于参考序列的序列同一性百分比。

可通过，例如Smith & Waterman，Adv.Appl.Math.2：482(1981)的本地同源算法，Needleman & Wunsch，J.Mol.Biol.48：443(1970)的同源比对算法，对Pearson & Lipman，Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA85：2444(1988)的类似方法进行搜索，对这些算法(GAP，BESTFIT，FASTA和TFASTA，Wisconsin Genetics Software Package中的，GeneticsComputer Group，575 Science Dr.，Madison，WI))的计算机化应用，或通过可视化检测(通常请参见Ausubel et al.，Current Protocols inMolecular Biology)进行序列比较的最佳比对。在这些算法中，可适用于测定序列同一性百分数和序列相似性的一个示例是BLAST算法，其描述可参见Altschul等，J.Mol.Biol.215：403(1990)。实施BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(National Center forBiotechnology Information)(可通过国立卫生院NCBI互联网服务器(National Institutes of Health NCBI intemet server))公开地获得。通常，可使用默认的程序参数进行序列比较，虽然同样也可以使用定制的参数。对氨基酸序列而言，BLASTP程序使用字长(W)为3，期望值(E)为10，以及BLOSUM62记分矩阵作为默认参数(请参见Henikoff &Henikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915(1989))。

优选地，不一致的残基位置的区别在于保守性氨基酸取代。出于分类的目的，氨基酸取代可分成保守性的非保守性的，氨基酸被分成：组I(疏水侧链)：leu，met，ala，val，leu，ile；组II(中性亲水性侧链)：cys，ser，thr；组III(酸性侧链)：asp，glu；组IV(碱性侧链)：asn，gln，his，lys，arg；组V(影响链方向的残基)：gly，pro；和组VI(芳香侧链)：trp，ryr，phe。保守性取代涉及在同组氨基酸之间进行取代。非保守性取代涉及将这些组中的一组的成员与另一组中的成员进行交换。

优选地，人源化免疫球蛋白或抗体以亲和性为对应非人源化抗体亲和力的三，四或五的因数结合抗原。例如，如果非人源化抗体的结合亲和力为10^-9M，则人源化抗体的结合亲和力为至少3x10^-8M，4x10^-8M，5x10^-8M，或10^-9M。当对免疫球蛋白或抗体链的结合性质进行描述时，可根据其“直接抗原(例如，Aβ)结合”的能力对所述链进行描述。当其能够赋予完整免疫球蛋白或抗体(或其抗原结合片段)特异性的结合性质或结合亲和力时，则将该链称为“直接抗原结合”。与含有缺乏突变的相同链的抗体(或其抗原结合片段)相比，如果该突变影响(例如，降低)完整的免疫球蛋白或含有所述链的抗体(或其抗原结合片段)的结合亲和性至少一个数量级，则该突变(例如，回复突变)被认为在很大程度上影响重链或轻链直接抗原结合的能力。与含有缺乏所述突变的相同链的抗体(或其抗原结合片断)相比，如果突变能够影响(例如，降低)完整的免疫球蛋白或含有所述链的抗体(或其抗原结合片段)的结合亲和性仅为2，3和或4的因数，则该突变“不能够在很大程度上影响(例如，降低)链直接的抗原结合能力。”

术语“嵌合免疫球蛋白”或抗体是指其可变区源自一个物种而其恒定区源自另一物种的免疫球蛋白或抗体。可通过，例如遗传工程的方式，从属于不同物种的免疫球蛋白基因片段，构建嵌合免疫球蛋白或抗体。术语“人源化免疫球蛋白”或“人源化抗体”并未旨在包括嵌合免疫球蛋白或抗体，如下文所述。尽管人源化免疫球蛋白或抗体在其结构中是嵌合的(即，含有来自超过一种蛋白的区域)，但它们还包括了在嵌合免疫球蛋白或抗体中未发现的其他特征(即，含有供体CDR残基和受体构架残基的可变区)，如本说明书所述。

此类嵌合和人源化单克隆抗体可通过本领域公知的重组DNA技术进行制备，例如，使用Robinson等人，国际专利申请第PCT/US86/02269号；Akira等人，欧洲专利申请第184，187号；Taniguchi，M欧洲专利申请第171，496号；Morrison等人，欧洲专利申请第173，494号；Neuberger等人，国际专利申请公开第WO 86/01533号；Cabilly等人，美国专利第4,816,567号；Cabilly等人，欧洲专利申请第125，023号；Better et al.(1988)Science 240：1041-1043；Liu et al.(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：3439-3443；Liu et al.(1987)J.Immunol.139：3521-3526；Sun et al.(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：214-218；Nishimura et al.(1987)Canc.Res.47：999-1005；Wood et al.(1985)Nature 314：446-449；和Shaw et al.(1988)J.Natl.Cancer Inst.80：1553-1559)；Morrison，S.L.(1985)Science 229：1202-1207；Oi et al.(1986)BioTechniques 4：214；Winter U.S.Patent 5,225,539；Jones et al.(1986)Nature 321：552-525；Verhoeyan et al.(1988)Science 239：1534；以及Beidler et al.(1988)J.Immunol.141：4053-4060中所述的方法。

得自转基因动物和噬菌体展示的人抗体

或者，有可能在缺乏内源免疫球蛋白产生的情况下，制备能够在受到免疫时产生具有完整成分人抗体的转基因动物(例如，小鼠)。例如，有报道认为在嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(J_H)基因的纯合子缺失导致了内源抗体产生的完全抑制。在上述种系突变小鼠中人种系免疫球蛋白基因排列的转移导致了在受到抗原攻击后人抗体的产生。请参见，例如，美国专利第6,150,584号；第6,114,598号和第5,770,429号。

还可以从噬菌体展示文库中得到全部人抗体(Hoogenboom et al.，J.Mol.Biol.，227：381(1991)；Marks et al.，J.Mol.Biol.，222：581-597(1991))。也可从噬菌体展示文库中获得嵌合的多克隆抗体(Buechler等人，美国专利第6,420,113号)。

双特异性抗体，抗体融合多肽，以及单链抗体

双特异性抗体(BsAbs)是具有至少2种不同表位结合特异性的抗体。可从全长抗体或抗体片段中获得这样的抗体(例如，F(ab)’2双特异性抗体)。制备双特异性抗体的方法是本领域所公知的。全长双特异性抗体的常规制备是基于两种免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，而这两种链具有不同的特异性(Millstein et al.，Nature，305：537-539(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机排列，这些杂交瘤(细胞杂交瘤)就产生了不同抗体分子的潜在混合(请参见WO93/08829以及Traunecker etal.，EMBO J.，10：3655-3659(1991))。

双特异性抗体还包括交联或“异源轭合”的抗体。例如，异源轭合中的一种抗体可以轭合于抗生物素蛋白，而其他部分则轭合于生物素或其他有效负载。可以使用任意方便的交联方法制备异源轭合抗体。适合的交联剂是本领域所公知的，并在美国专利第4,676,980号中与多种交联技术一共公开。

在又一实施方案中，抗体可化学地或遗传学地，融合于有效负载，例如具有反应活性，可检测的，或具有官能性的部分，例如，免疫毒素，从而制备抗体融合多肽。所述有效负载包括，例如，免疫毒素，化学治疗剂，和放射性同位素，所有这些都是本领域所公知的。

如本发明所述，单链抗体也可用于稳定。所述片段含有通过连接物连接于轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)，其能够允许每种可变区之间进行相互作用并重新构建亲本抗体的抗原结合袋，从中可获得VL和VH。请参见Gruber et al.，J.Immunol.，152：5368(1994)。

可以理解，任意的上述多肽分子，单独或组合地，都可适用于制备本发明所述的稳定制剂。

抗Aβ抗体

一般地，本发明的制剂包括多种用于治疗淀粉样蛋白性疾病的抗体，尤其是通过靶向Aβ肽治疗阿耳茨海默氏病。

在本说明书中可交替使用的术语“Aβ抗体”，“抗Aβ抗体”和“抗Aβ”是指能够结合于人淀粉状前体蛋白(APP)，Aβ蛋白或二者的一种或多种表位或抗原决定簇的抗体。示例性的表位或抗原决定簇可在APP内找到，但优选地，可在APP的Aβ肽内找到。有多种APP的异构体存在，例如APP⁶⁹⁵，APP⁷⁵¹和APP⁷⁷⁰。APP内的氨基酸是根据APP⁷⁷⁰异构体的序列(参见，例如，GenBank Accession No.P05067)获得指定号码的。目前公知的存在于人体中的APP特异性同种型的示例是Kang et.al.(1987)Nature 325：733-736所述的695氨基酸多肽，其被指定为“正常的”APP；Ponte et al.(1988)Nature 331：525-527(1988)和Tanzi et al.(1988)Nature 331：528-530所述的751氨基酸多肽；以及Kitaguchi et.al.(1988)Nature 331：530-532所述的770氨基酸多肽。作为由不同分泌酶在体内或原位对APP进行的蛋白消化处理的结果，Aβ可同时在“短形式”，40氨基酸长度，以及“长形式”，42-43氨基酸长度的形式发现。所述短形式，Aβ₄₀，由APP的672-711残基组成。所述长形式，例如，Aβ₄₂或Aβ₄₃，分别由672-713和672-714残基组成。可在Aβ的羧基端找到部分的APP疏水区，其负责Aβ聚集的能力，尤其是在长形式的情况下。可从包括正常个体和罹患淀粉样蛋白性疾病个体的人类和其他哺乳动物的体液，例如脑脊液中发现Aβ肽，或从中对Aβ肽进行纯化。

在本文中，术语“β-淀粉状蛋白”，“β-淀粉状肽”，“β-淀粉体”，“Aβ”和“Aβ肽”可以交替使用。Aβ肽(例如，Aβ39，Aβ40，Aβ41，Aβ42和Aβ43)是APP 39-43氨基酸残基的～4kD内部片段。Aβ40，例如，由APP的残基672-711构成而Aβ42则由APP的残基672-713构成。Aβ肽包括从APP分泌酶剪切产生的肽以及具有与剪切产物相同或基本相同序列合成肽的肽。可从多种来源获得Aβ肽，例如，从组织，细胞系，或体液(例如，血清或脑脊液)中。例如，可从APP-表达细胞，例如稳定转染了APP_717V→F的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中获得Aβ，如，例如，Walsh et al.，(2002)，Nature，416，pp 535-539的报道。还可以使用先有技术的方法(参见，例如，Johnson-Wood et al.，(1997)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：1550)从组织来源获得Aβ制剂。或者，可使用本领域公知的方法合成Aβ肽。请参见，例如，Fields et al.，Synthetic Peptides：A User’s Guide，ed.Grant，W.H.Freeman & Co.，New York，NY，1992，p77。因此，可使用固相合成的自动化Merrifield技术，通过t-Boc或F-moc化学方法使用侧链保护氨基酸对α-氨基基团进行保护，在例如，Applied Biosystem Peptide Synthesizer 430A或431型上合成肽。可使用公知的重组DNA技术合成较长的肽抗原。例如，可以合成或分子克隆得到编码所述肽或融合肽的多核苷酸，并将其插入适当的表达载体从而在适当的宿主细胞中进行转染和异源表达。Aβ肽也指从正常基因Aβ区突变所产生的相关Aβ序列。

可在人淀粉样前体蛋白(APP)中发现但优选地可在APP的Aβ肽中发现的Aβ抗体结合的示例性表位或抗原决定簇。Aβ内的示例性表位或抗原决定簇位于Aβ的N-末端，中间区域，或C-末端。“N-末端表位”是位于或包括Aβ肽N-末端的表位或抗原决定簇。示例性的N-末端表位包括Aβ氨基酸1-10或1-12范围内的残基，优选为来自Aβ42的1-3，1-4，1-5，1-6，1-7，2-6，2-7，3-6或3-7。其他示例性的N-末端表位起始于Aβ的残基1-3并终止于残基7-11。其他的示例性N-末端表位包括Aβ的残基2-4，5，6，7或8，Aβ的残基3-5，6，7，8或9，或Aβ42的残基4-7，8，9或10。“中间表位”是含有位于Aβ肽中间或中部内残基的表位或抗原决定簇。示例性的中间表位包括Aβ氨基酸13-28内的残基，优选为来自Aβ的14-27，15-26，16-25，17-24，18-23或19-22。其他示例性的中间表位包括Aβ氨基酸16-24，16-23，16-22，16-21，18-21，19-21，19-22，19-23或19-24内的残基。“C-末端”表位或抗原决定簇位于或包括Aβ肽的C-末端，并包括Aβ的氨基酸33-40，33-41或33-42内的残基。“C-末端表位”是含有位于Aβ肽C-末端(例如，在Aβ的氨基酸约30-40或30-42内)残基的表位或抗原决定簇。其他示例性的C-末端表位或抗原决定簇包括Aβ的残基33-40或33-42。

当抗体被描述为结合于特定残基，例如Aβ3-7内的表位时，其意思是指该抗体特异性的结合于含有特定残基(即，在这个例子中是指Aβ3-7)的多肽。这样的抗体并不必须与Aβ3-7内的每一个残基接触。同样，在Aβ3-7内每个氨基酸的取代或缺失也并非必然显著地影响其结合亲和力。在多个实施方案中，Aβ抗体是末端特异性的。在本说明书中，术语“末端特异性”是指抗体能够特异性地结合于Aβ肽的N-末端或C-末端残基，但当存在于含有所述残基的较长Aβ类型或在APP中时，却不能识别相同的残基。在多种实施方案中，Aβ抗体具有“C-末端特异性”。在本说明书中，术语“C-末端特异性”是指抗体特异性地识别Aβ肽的游离C-末端。C-末端特异性Aβ抗体的示例包括：能够识别在残基40终止的Aβ肽却不能识别在残基41，42，和/或43终止的Aβ肽；能够识别在残基42终止的Aβ肽却不能识别在残基40，41，和/或43终止的Aβ肽；等等

在一个实施方案中，Aβ抗体可以是3D6抗体或其变异体，或者是10D5抗体或其变异体，二者都公开于美国专利公开第20030165496A1号，美国专利公开第20040087777A1号，国际专利公开第WO02/46237A3号和国际专利公开第WO04/080419A2号。3D6和10D5的描述也可在例如，国际专利公开第WO02/088306A2号和国际专利公开第WO02/088307A2号中找到。其他的3D6抗体描述可见于美国专利申请第11/303,478号以及国际专利申请第PCT/US05/45614号。3D6是单克隆抗体(mAb)，其能够特异性地结合于位于人β-淀粉样肽的N-末端表位，特别是，残基1-5的表位。相比之下，10D5则是能够特异性结合于人β-淀粉样肽N-末端表位，特别是，残基3-6的单克隆抗体。根据布达佩斯条约的规定，于2003年4月8日将产生3D6单克隆抗体(RB96 3D6.32.2.4)的细胞系保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)，Manassas，VA 20108，美国，保藏号为PTA-5130。根据布达佩斯条约的规定，于2003年4月8日将产生10D5单克隆抗体(RB44 10D5.19.21)的细胞系保藏在ATCC，保藏号为PTA-5129。

示例性的变异3D6抗体是那些，例如，含有如SEQ ID NO：3或SEQID NO：5所示可变区氨基酸序列的人源化轻链，以及含有如SEQ IDNO：4或SEQ ID NO：6所示可变区氨基酸序列的人源化重链抗体。其他示例性的变异3D6抗体则是那些，例如，具有如SEQ ID NO：7所示人源化轻链氨基酸序列以及如SEQ ID NO：8所示人源化重链氨基酸序列的抗体。

示例性的变异10D5抗体是那些，例如，含有如SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：11所示可变区氨基酸序列的人源化轻链，以及含有如SEQID NO：10或SEQ ID NO：12所示可变区氨基酸序列的人源化重链的抗体。其他示例性的变异10D5抗体则是那些，例如，具有如SEQ ID NO：13所示人源化轻链氨基酸序列以及如SEQ ID NO：14所示人源化重链氨基酸序列的抗体。此类变异抗体还可见于WO02/088306A2。

在又一实施方案中，抗体可以是12B4抗体或其变异体，如美国专利公开第20040082762A1号和国际专利公开第WO03/077858A2号所述。12B4是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽N-末端表位，特别是，残基3-7的表位。

示例性的变异12B4抗体是那些，例如，含有如SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：17所示可变区氨基酸序列的人源化轻链(或轻链)，以及含有如SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：19所示可变区氨基酸序列的人源化重链的抗体。

在又一实施方案中，抗体可以是12A11抗体或其变异体，可参见美国专利公开第20050118651A1号和美国专利申请第11/303,478号，国际专利公开第WO04/108895A2号，以及国际专利申请第PCT/US05/45614号。12A11是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽N-末端，特别是，残基3-7的表位。根据布达佩斯条约的规定，于2005年12月12日将产生12A11单克隆抗体的细胞系保藏在ATCC，保藏号为________。

示例性的变异12A11抗体是那些，例如，含有如SEQ ID NO：20所示可变区氨基酸序列的人源化轻链，以及含有如SEQ ID NO：21，SEQID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ ID NO：24，SEQ ID NO：25，SEQ IDNO：26，SEQ ID NO：27，SEQ ID NO：28，SEQ ID NO：29，SEQ ID NO：30，SEQ ID NO：31，SEQ ID NO：32，SEQ ID NO：33，SEQ ID NO：34，SEQID NO：35，SEQ ID NO：36，SEQ ID NO：37，SEQ ID NO：38，SEQ IDNO：39，SEQ ID NO：40或SEQ ID NO：41所示可变区氨基酸序列的人源化重链的抗体。

在又一实施方案中，抗体可以是6C6抗体或其变异体，如美国专利申请第11/304,986号和题为“识别β淀粉样肽的人源化抗体”的国际专利申请第PCT/US05/45515号所述。6C6是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽N-末端，特别是，残基3-7的表位。根据布达佩斯条约的规定，于2005年11月1日将产生6C6抗体的细胞系保藏在ATCC，保藏号为PTA-7200。

在又一实施方案中，抗体可以是2H3抗体，如美国专利申请第11/304,986号和题为“识别β淀粉样肽的人源化抗体”的国际专利申请第PCT/US05/45515号所述。2H3是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽N-末端，特别是，残基2-7的表位。

在又一实施方案中，抗体可以是3A3抗体，如美国专利申请第___________号所述。3A3是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽N-末端，特别是，残基3-7的表位。

根据布达佩斯条约的规定，于2005年12月12日将产生2H3和3A3单克隆抗体的细胞系保藏在ATCC，保藏号分别为_______和_________。

在又一实施方案中，抗体可以是15C11抗体或其变异体，如美国专利申请第11/304,986号和题为“识别β淀粉样肽的人源化抗体”的国际专利申请第PCT/US05/45515号所述。15C11是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽中部，特别是，残基19-22的表位。根据布达佩斯条约的规定，于2005年12月12日将产生15C11单克隆抗体的细胞系保藏在ATCC，保藏号为__________。

在又一实施方案中，抗体可以是266抗体，如美国专利公开第20050249725A1号和国际专利公开第WO01/62801A2号所述。266是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽中部，特别是，残基16-24的表位。根据布达佩斯条约的规定，于2004年7月20日将产生266单克隆抗体的细胞系保藏在ATCC，保藏号为PTA-6123。

示例性的变异266抗体是那些，例如，具有含有如SEQ ID NO：42或SEQ ID NO：44所示可变区氨基酸序列的人源化轻链，以及含有如SEQ ID NO：43或SEQ ID NO：45所示可变区氨基酸序列的人源化重链的抗体。其他示例性的变异266抗体则是那些，例如，具有如SEQ IDNO：46所示人源化轻链氨基酸序列以及如SEQ ID NO：47所示人源化重链氨基酸序列的抗体。此类变异抗体还可见于美国专利公开第20050249725A1号和国际专利公开第WO01/62801A2号。

在又一实施方案中，抗体可以是2B 1抗体或其变异体，如美国专利申请第11/304,986号和题为“识别β淀粉样肽的人源化抗体”的国际专利申请第PCT/US05/45515号所述。2B1是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽中间，特别是，残基19-23的表位。

在又一实施方案中，抗体可以是1C2抗体或其变异体，如美国专利申请第11/304,986号和题为“识别β淀粉样肽的人源化抗体”的国际专利申请第PCT/US05/45515号所述。1C2是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽中间，特别是，残基16-23的表位。

在又一实施方案中，抗体可以是9G8抗体或其变异体，如美国专利申请第11/304,986号和题为“识别β淀粉样肽的人源化抗体”的国际专利申请第PCT/US05/45515号所述。9G8是单克隆抗体，其能够特异性地结合位于人β-淀粉样肽中间，特别是，残基16-21的表位。

根据布达佩斯条约的规定，于2005年11月1日将产生2B1，1C2和9G8抗体的细胞系保藏在ATCC，保藏号分别为PTA-7202，PTA-7199和PTA-7201。

可适用于本发明，特异性结合位于人β-淀粉状肽C-末端表位的抗体包括，但不限于369.2B，如题为“特异于βA4肽的单克隆抗体369.2B”的美国专利第5,786,180号所述。对适用于本发明抗体的其他描述可参见，例如，Bussiere et al.，(Am.J.Pathol.165(3)：987-95(2004))Bard et al.(PNAS 100(4)：2023-8(2003))，Kajkowski et al.(J.Biol.Chem.276(22)：18748-56(2001))，Games et al.(Ann.NY Acad.Sci.920：274-84(2000))，Bard et al.(Nat.Med.6(8)：916-9(2000))，以及题为“在患有阿耳茨海默氏病，唐氏综合征，大脑淀粉样血管病，或轻度认知缺损患者中的认知有效快速改善，包括给药抗Aβ抗体”的国际专利申请第WO03015691A2号。对适用于本发明抗体片段的其他描述可参见，例如，Bales et al.(Abstract P4-396，page S587，presented at Poster SessionP4：Therapeutics and Therapeutic Strategies-Therapeutic Strategies，Amyloid-Based)以及Zameer et al.(Abstract P4-420，page S593，presentedat Poster Session P4：Therapeutics and Therapeutic Strategies-TherapeuticStrategies，Amyloid-Based)。

适用于本发明的抗体可以是重组或合成制备的。例如，可通过重组细胞培养方法，采用，例如，CHO细胞，NIH 3T3细胞，PER.C6细胞，NS0细胞，VERO细胞，鸡胚成纤维细胞，或BHK细胞制备抗体。此外，本发明还包括了保留了结合Aβ肽主要官能性质，具有微小修饰的抗体。在特定的实施方案中，所述抗体是选择性结合Aβ肽的人源化抗Aβ肽3D6抗体。更特比地，人源化抗Aβ肽3D6抗体旨在特异性结合于NH₂-末端表位，例如，在大脑(例如，在罹患阿耳茨海默氏病患者)斑沉淀中的人β-淀粉状1-40或1-42肽的氨基酸残基1-5。

图1提供了示例性人源化抗Aβ肽抗体的预测结构的示意图。从对应表达载体的DNA序列预测的h3D6v2轻链和重链的全部氨基酸序列在图2(其中，所述残基以轻链和重链的NH2-末端开始编号位残基编号1)中分别以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2表示。由重链DNA序列编码的最后一个氨基酸残基，Lys⁴⁴⁹，并未在成熟的，分泌形式的h3D6v2中观察到，并不想受到任何理论的限制，可以推测所述最后一个氨基酸是由CHO细胞蛋白酶在细胞内加工过程中去除的。因此，h3D6v2重链的COOH-末端可任选为Gky⁴⁴⁸。COOH-末端赖氨酸加工可在重组抗体和质膜来源的抗体中观察到，并且并未表现出能够影响其功能(Harris(1995)J.Chromatogr.A.705：129-134)。可通过向重链的Fc部分加上N-连接的聚糖对纯化的h3D6v2进行翻译后修饰，公知所述Fc部分含有单个N-糖基化共有位点。所述N-糖基化位点表现出三个主要的复合双触角中性寡糖结构，该结构通常可在哺乳动物IgG蛋白的类似N-糖基酸位点观察到。

其他示例性的人源化抗Aβ肽抗体是具有图2所示序列的人源化3D6版本1(hu3D6v1)，但在其轻链中在1位上的D取代了Y。

在本发明的多个实施方案中，抗Aβ抗体(例如，人源化抗Aβ肽3D6抗体)可为约0.1mg/ml至约100mg/ml，约0.1mg/ml至约75mg/ml，约0.1mg/ml至约50mg/ml，约0.1mg/ml至约40mg/ml，约0.1mg/ml至约30mg/ml，约10mg/ml至约20mg/ml，约20mg/ml至30mg/ml，或更高，例如直至约100mg/ml，约200mg/ml，约500mg/ml，或约1000mg/ml或更多。优选地，所述抗Aβ抗体的浓度为约17mg/ml至约23mg/ml。在多种实施方案中，所述抗Aβ抗体可为约1，2，5，10，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25或30mg/ml。在特定的实施方案中，所述抗体(例如，人源化抗Aβ肽3D6抗体)为约17mg/ml。在其他实施方案中，所述抗体(例如，人源化抗Aβ肽3D6抗体)为约20mg/ml。在又一实施方案中，所述抗体(例如，人源化抗Aβ肽3D6抗体)为约30mg/ml。上述浓度中间的浓度，例如约12mg/ml至约17mg/ml，也是本发明的一部分。例如，使用上述值作为上限和/或下限组合的浓度值范围也包括在本发明范围之内。

赋形剂

在多种实施方案中，本发明提供了含有多种赋形剂，包括，但不限于缓冲剂，抗氧化剂，紧张剂以及稳定剂的制剂。此外，所述制剂还含有用于pH调节(例如，HCl)和稀释剂(例如，水)的其他药剂。在其他实施方案中，不同形式的组氨酸可用于pH调节。部分地，所述赋形剂可维持所述抗体的稳定性和生物学活性(例如，通过维持所述蛋白的适当构象)，和/或维持pH值。

缓冲剂

在本发明的多个方面，所述制剂包括缓冲剂(缓冲液)。缓冲液可维持生理适合的pH。此外，所述缓冲液可增强所述制剂的等渗性和化学稳定性。一般地，所述制剂应具有生理适合的pH。在本发明的多个实施方案中，所述制剂的pH为约5至约7，约5.5至约6.5，优选为约6.0至约6.5。在特定的实施方案中，所述制剂的pH为约6。上述pH水平中间的范围，例如，约pH5.2至约pH6.3，优选为6.0或pH6.2，也是本发明的一部分。例如，使用上述值作为上限和/或下限组合的值范围也包括在本发明范围之内。可使用本领域公知的技术如需调节pH。例如，可如需加入HCl调节pH至所需要的水平或者可使用不同形式的组氨酸调节pH至所需要的水平。

所述缓冲液可包括，但不限于，琥珀酸盐(钠或磷酸盐)，组氨酸，磷酸盐(钠或钾)，Tris(三(羟甲基)氨甲烷)，二乙醇胺，柠檬酸盐，其他有机酸及其混合物。在优选实施方案中，所述缓冲液是组氨酸(例如，L-组氨酸)。在其他特定的实施方案中，所述缓冲液是琥珀酸盐。在其他实施方案中，所述制剂包括存在量足以将所述制剂维持在生理适合pH的氨基酸，例如组氨酸。组氨酸是在生理pH范围具有缓冲能力的示例性氨基酸。组氨酸的缓冲能力范围来源于其咪唑基团。在一个示例性的实施方案中，所述缓冲液是L-组氨酸(碱)(例如，C₆H₉N₃O₂，FW：155.15)。在其他实施方案中，所述缓冲液是L-组氨酸单盐酸单水合物(例如，C₆H₉N₃O₂.HCl.H₂O，FW：209.63)。在又一其他实施方案中，所述缓冲液是L-组氨酸(碱)和L-组氨酸单盐酸单水合物的混合物。

在一个实施方案中，所述缓冲液(例如，L-组氨酸或琥珀酸盐)的浓度可为约0.1mM至约50mM，约0.1mM至约40mM，约0.1mM至约30mM，约0.1mM至约25mM，约0.1mM至约20mM，或约5mM至约15mM，优选为5mM或10mM。在多个实施方案中，所述缓冲液可为约6mM，7mM，8mM，9mM，11mM，12mM，13mM，14mM或15mM。在特定的实施方案中，所述缓冲液为约10mM。上述浓度中间的范围，例如，约12mM至约17mM，也是本发明的一部分。例如，使用上述值作为上限和/或下限组合的值范围也包括在本发明范围之内。在某些实施方案中，所述缓冲液的存在量足以维持生理适合的pH。

紧张剂

在本发明的多个方面，所述制剂包括紧张剂。部分地，所述紧张剂有助于维持所述制剂的等渗性，以及维持蛋白水平。部分地，所述紧张剂有助于保存所述制剂中治疗活性多肽的水平，比率或比例。在本说明书中，术语“紧张”是指在液体环境或溶液中生物活性成分的行为。等渗溶液具有与血浆相同的渗透压，并由此能够静脉灌注至受试者体内而无需改变所述受试者血浆的渗透压。事实上，在如本发明所述的一个实施方案中，紧张剂的存在量足以使得所述制剂适于静脉内灌注。通常，紧张剂也可作为填充剂。同样，所述制剂可允许蛋白克服多种逆境，例如冷冻和剪切。

所述紧张剂可包括，但不限于，CaCl₂，NaCl，MgCl₂，乳糖，山梨醇，蔗糖，甘露醇，海藻糖，棉子糖，聚乙二醇，羟乙基淀粉，甘氨酸及其混合物。在优选实施方案中，所述紧张剂是甘露醇(例如，D-甘露醇，例如，C₆H₁₄O₆，FW：182.17)。

在一个实施方案中，所述紧张剂可为约2％至约6％w/v，或约3％至约5％w/v。在其他实施方案中，所述紧张剂可为约3.5％至约4.5％w/v。在其他实施方案中，所述紧张剂可为约20mg/ml至约60mg/ml，约30mg/ml至约50mg/ml，或约35mg/ml至约45mg/ml。优选地，所述紧张剂可为约4％w/v或为约40mg/ml。在其他特定实施方案中，所述紧张剂可为约6％w/v。在又一特定实施方案中，所述紧张剂可为约10％w/v。

上述浓度中间的范围，例如，约3.2％至约4.3％w/v或约32至约43mg/ml，也是本发明的一部分。例如，使用上述值作为上限和/或下限组合的值范围也包括在本发明范围之内。所述紧张剂的存在量应足以维持所述制剂的等渗性。

抗氧化剂

在本发明的多个方面，所述制剂包括抗氧化剂从而，部分地，保藏所述制剂(例如，通过防止氧化)。

所述抗氧化剂包括，但不限于，GLA(γ-亚麻酸)-硫辛酸，DHA(二十二碳六烯酸)-硫辛酸，GLA-生育酚，二-GLA-3，3’-硫代二丙酸以及通常可化学连接的任意的，例如，GLA，DGLA(二同型-γ-亚麻酸)，AA(花生四烯酸)，SA(水杨酸)，EPA(二十碳双烯酸)或DHA(二十二碳六烯酸)以及任意天然的或合成抗氧化剂。这些包括了酚抗氧化剂(例如，丁子香酚，鼠尾草酸，咖啡酸，BHT(丁基化羟基苯甲醚)，没食子酸，生育酚，生育三烯酚类以及类黄酮(flavenoid)抗氧化剂(例如杨梅酮和漆树黄酮))，多烯(例如，视黄酸)，不饱和甾醇(例如，Δ⁵-avenosterol)，有机硫化合物(例如，蒜素)，萜(例如，香叶醇，松香酸)以及氨基酸抗氧化剂(例如，甲硫氨酸，半胱氨酸，肌肽)。在一个实施方案中，所述抗氧化剂是抗坏血酸。优选地，所述抗氧化剂是甲硫氨酸，或其类似物，例如，硒甲硫氨酸，羟甲基丁酸，乙硫氨酸或三氟甲硫氨酸。

在一个实施方案中，所述抗氧化剂(例如，甲硫氨酸，例如L-甲硫氨酸，例如CH₃SCH₂CH₂CH(NH₂)CO₂H，FW＝149.21)可为约0.1mM至约50mM，约0.1mM至约40mM，约0.1mM至约30mM，约0.1mM至约20mM，或约5mM至约15mM。在多种实施方案中，所述抗氧化剂可为约5mM，6mM，7mM，8mM，9mM，10mM，11mM，12mM，13mM，14mM或15mM。优选地，所述抗氧化剂可为约10mM。在其他特定的实施方案中，所述抗氧化剂可为约15mM。上述浓度中间的范围，例如，约12mM至约17mM，也是本发明的一部分。例如，使用上述值作为上限和/或下限组合的值范围也包括在本发明范围之内。在某些实施方案中，所述抗氧化剂的存在量应足以保存所述制剂，部分地，通过防止氧化。

稳定剂

在本发明的多个方面，所述制剂包括稳定剂，也可称为表面活性剂。稳定剂是特定的化学化合物，其能够与制剂中的生物分子和/或普通药物赋形剂相互作用并对其起到稳定的作用。在某些实施方案中，稳定剂可与较低温度的保存条件共同使用。稳定剂通常可保护蛋白不受到空气/溶液界面诱导的张力以及溶液/表面诱导的张力，其通常会导致蛋白聚集。

所述稳定剂可包括，但不限于，甘油，聚山梨醇酯，例如，聚山梨醇酯80，二羧酸，草酸，琥珀酸，己二酸，延胡索酸，苯二酸及其组合。在优选实施方案中，所述稳定剂是聚山梨醇酯80。

在一个实施方案中，所述稳定剂(例如，聚山梨醇酯80)浓度为约0.001％w/v至约0.01％w/v，约0.001％w/v至约0.009％w/v，或约0.003％w/v至约0.007％w/v。优选地，所述稳定剂浓度为约0.005％w/v。在其他特定实施方案中，所述稳定剂浓度为约0.01％w/v。上述浓度中间的范围，例如，约0.002％w/v至约0.006％w/v，也是本发明的一部分。例如，使用上述值作为上限和/或下限组合的值范围也包括在本发明范围之内。所述稳定剂的存在量应足以稳定所述Aβ结合多肽(例如，抗Aβ抗体)。

其他药物可接受的载体，赋形剂或稳定剂，例如那些在雷明顿制药科学第16版，Osol，A.Ed.(1980)中所述的成分也可包括在所述制剂中，只要它们不会对所述制剂的预期性质造成不利的影响。在特定的实施方案中，所述制剂基本不含有防腐剂，尽管，在其他实施方案中，可按需添加防腐剂。例如，防冻剂或防冻干剂(lyoprotectants)亦可包括在内，例如，如果对所述制剂进行冷冻干燥的话。

在本发明的多个方面，所述制剂任选包括一些或全部上述的赋形剂类型。在一方面，本发明的制剂包括Aβ结合多肽(例如，抗Aβ抗体)，甘露醇和组氨酸。在特定的实施方案中，所述制剂可包括抗氧化剂，例如甲硫氨酸，和/或稳定剂，例如聚山梨醇酯80。在某些实施方案中，所述制剂的pH为约6。在其他方面，所述制剂包括Aβ结合多肽(例如，抗Aβ抗体)，甘露醇，组氨酸和甲硫氨酸。在又一方面，所述制剂包括Aβ结合多肽(例如，抗Aβ抗体)，甘露醇，组氨酸，甲硫氨酸和聚山梨醇酯80。在本发明的特定方面，所述制剂包括约20mg/ml Aβ结合多肽(例如，抗Aβ抗体)，约10mM组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％甘露醇且pH为约6。在本发明的其他方面，所述制剂包括约20mg/mlAβ结合多肽(例如，抗Aβ抗体)，约10mM组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％w/v甘露醇，0.005％w/v聚山梨醇酯80且pH为约6。优选的制剂包括约17mg/ml至约23mg/ml的人源化3D6抗体，约10mM组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％w/v甘露醇，约0.005％聚山梨醇酯80且pH为约5.5至约6.5。其他优选制剂包括约10mg/ml至约30mg/ml的人源化266抗体，约10mM组氨酸或琥珀酸盐，约10mM甲硫氨酸，约4％w/v甘露醇或山梨醇，其pH为约5.5至约6.5。又一优选制剂包括约10mg/ml至约30mg/ml的人源化12A11抗体，约5mM组氨酸，约10mM甲硫氨酸，约4％甘露醇或150mM NaCl，且pH为约5.5至约6.5。其他制剂可在高于冷冻至约10℃的温度，pH为约5.5至约6.5，且包括浓度为约1mg/ml至约30mg/ml的至少一种抗Aβ抗体，浓度为约4％w/v的甘露醇或浓度为约150mM的NaCl，约5mM至约10mM的组氨酸或琥珀酸盐，以及10mM甲硫氨酸的条件下稳定至少12个月。优选地，所述制剂还可包括浓度为约0.001％w/v至约0.01％w/v的聚山梨醇酯。

本发明的示例性实施方案还提供了Aβ结合多肽(例如，抗Aβ抗体)的浓缩制剂，其通常可用作散装制剂产品。此外，本发明的示例性实施方案可对冷冻，冻干和/或复溶保持稳定。此外，本发明的示例性实施方案可在延长的时间阶段保持稳定。例如，本发明的所述制剂可稳定至少约6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29或30个月。在特定的实施方案中，本发明的所述制剂可稳定至少约12个月，至少约18个月，至少约24个月或至少约30个月。

如本发明所述，所述制剂可保存于约-80℃至约40℃，约0℃至约25℃，约0℃至约15℃，或约0℃至约10℃，优选为约2℃至约8℃。在多个实施方案中，所述制剂可保存于约0℃，1℃，2℃，3℃，4℃，5℃，6℃，7℃，8℃，9℃或10℃。在特定实施方案中，所述制剂可保存于约5℃。一般地，所述制剂可在这些范围稳定并保持生物学活性。上述温度中间的范围，例如，约2℃至约17℃，也是本发明的一部分。例如，使用上述值作为上限和/或下限组合的值范围也包括在本发明范围之内。

本发明的制剂可适于通过多种技术进行释放。在某些实施方案中，所述制剂可经肠胃外给药，例如通过静脉内或肌内。此外，本领域所属技术人员可将所述制剂的释放靶递送大脑(例如，由此所述抗体可跨越血脑屏障)或脊髓液。在特定实施方案中，所述制剂可静脉内给药。

本发明制剂的有效剂量依赖于多种不同的因素，包括给药方式，靶点，患者的生理状态，患者是人类或动物，其他施用的药物，以及该治疗是预防性或治疗性的。通常，所述患者是人类，但包括转基因哺乳动物的非人类哺乳动物也可进行治疗。需要对治疗剂量进行滴定从而优化其安全性和功效。

对采用抗体进行被动免疫而言，示例性的剂量可为约0.0001mg/kg至约100mg/kg，约0.01mg/kg至约5mg/kg，约0.15mg/kg至约3mg/kg，0.5mg/kg至约2mg/kg，优选为约1mg/kg至约2mg/kg宿主体重。在一些示例性实施方案中，剂量可为约0.5，0.6，0.7，0.75，0.8，0.9，1.0，1.2，1.25，1.3，1.4，1.5，1.6，1.7，1.75，1.8，1.9或2.0mg/kg。其他示例性的被动免疫剂量为约1mg/kg至约20mg/kg。在一些示例性实施方案中，剂量可为约5，10，15或20mg/kg。可以每天，隔天，每周或根于经验分析确定的任意其他时间表对受试者给药这样的剂量。示例性的治疗包括在较长时间段，例如，至少6个月给药多次剂量。其他示例性的治疗方案包括每两周给药一次或每月给药一次或每3-6个月给药一次。示例性的剂量时间表包括在连续天给药1-10mg/kg或15mg/kg，隔天给药30mg/kg，或每周给药60mg/kg。在一些方法中，可将具有不同结合特异性的两种或更多种单克隆抗体同时给药，在这种情况下，每种抗体的给药剂量都处于上述的范围之内。

抗体通常进行多次给药。单次剂量之间的间隔可以是周，月或年。根据测定患者体内对应于Aβ的抗体血液水平，所述间隔可以是不规则的。在一些方法中，可对剂量进行调节从而达到1-1000μg/ml的血浆抗体浓度而在一些方法中则为25-300μg/ml。或者，可以持续释放制剂给药抗体，在这种情况下，需要更低的给药频率。剂量和频率都随患者体内抗体的半衰期的不同而不同。一般地，人抗体具有最长的半衰期，接下来是人源化抗体，嵌合抗体和非人类抗体。

给药剂量和频率可随所述治疗是预防性的或治疗性的不同而不同。在预防性应用的条件下，含有本发明抗体或其混合物的制剂被给药至尚未进入疾病状态的患者从而增强该患者的抵抗力。这样的量被定义为“预防有效剂量”。在这种使用情况下，所述精确量再次依赖于患者的健康状态和正常免疫力，通常为0.1至25mg/剂，尤其为0.5-2.5mg/剂。可以相对较低频率的间隔在长时间内给药相对较低的剂量。一些患者可终生持续接受治疗。

在一些治疗性应用中，有时需要在相对较短间隔内相对较高的剂量(例如，约0.5或1至约200mg/kg抗体每剂(例如0.5，1，1.5，2，5，10，20，25，50或100mg/kg)，而5-25kg/mg的剂量更常用)直到疾病的进程受到降低或停止，优选的直到所述患者表现出疾病症状的部分或完全改善。此后，可对患者进行预防性治疗给药。

特别有益的是以单位剂型提供了本发明的制剂从而方便给药和剂量的均一性。本发明的制剂可以胶囊，安瓿，冻干形式，或以多剂量容器形式存在。术语“容器”是指用于储存的物件，例如，固定器，容器或器皿，其中可以放置或容纳物体或液体。所述单位剂型可包括本说明书中描述过的任意制剂，包括活性成分的悬液、溶液或乳液以及配方剂，例如悬剂、稳定剂和/或分散剂。在示例性的实施方案中，可在向患者给药，例如静脉内灌注之前，将所述药物剂型与适当的稀释剂，例如无菌的无热原水或盐水溶液一起添加至静脉内滴袋中(例如，50ml，100ml，或250ml，或500ml滴袋)。一些药物单位剂型需要在向静脉内滴袋加入之前用适当的稀释剂进行复溶，尤其是冻干形式。在示例性的实施方案中，所述药物单位剂型是含有上述制剂的容器。例如，所述容器可以使10mL玻璃，I型，管状小瓶。通常，所述容器都需保持所述制剂的无菌性和稳定性。例如，所述小瓶可以使用血清塞子进行封闭。此外，在多种实施方案中，可将所述容器设计成能够允许取出100mg制剂或活性成分(例如，进行单次使用)。或者，所述容器可适于较大量的制剂获活性成分，例如，约10mg至约5000mg，约100mg至约1000mg，以及从约100mg至约500mg，约40mg至约250mg，约60mg至约80mg，约80mg至约120mg，约120mg至约160mg，或其范围或间隔，例如，约100mg至约200mg。上述量中间的范围，例如，约25mg至约195mg，也是本发明的一部分。例如，使用上述值作为上限和/或下限组合的值范围也包括在本发明范围之内。在特定实施方案中，所述制剂通常以液体单位剂型进行供应。

在其他方面，本发明提供了包括有药物单位剂型(例如，具有本说明书所公开制剂的容器)，以及使用说明的试剂盒。因此，可对所述容器和试剂盒进行设计从而为多次使用提供足够的制剂。在多种实施方案中，所述试剂盒还包括稀释剂。所述稀释剂可包括单独或组合的赋形剂。例如，所述稀释剂可包括紧张度改性剂，例如甘露醇，缓冲剂，例如组氨酸，稳定剂，例如聚山梨醇酯80，抗氧化剂，例如甲硫氨酸，和/或其组合。所述稀释剂可含有其他赋形剂，例如，Lyoprotectant，如果本领域所属技术人员认为需要的话。

本发明的其他有用实施方案在本申请题为“发明概述”的部分中已有描述。

本发明还通过下述实施例进行深入说明，且并未旨在对本发明进行限制。在本申请中引用的全部参考文献，专利和公开专利申请的内容，以及附图，都被全部引用作为参考。

实施例

一般地，除非特别指明，本发明的实施涉及化学技术，分子生物学技术，重组DNA技术，免疫技术(特别，例如，抗体技术)以及多肽制备的标准技术。请参见，例如，Sambrook，Fritsch and Maniatis，Molecular Cloning：Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)；Antibody Engineering Protocols(Methods in Molecular Biology)，510，Paul，S.，Humana Pr(1996)；Antibody Engineering：A Practical Approach(Practical Approach Series，169)，McCafferty，Ed.，Irl Pr(1996)；Antibodies：A Laboratory Manual，Harlow et al.，C.S.H.L.Press，Pub.(1999)；和Current Protocols in Molecular Biology，eds.Ausubel et al.，John Wiley & Sons(1992)。

实施例I 人源化抗Aβ抗体的克隆与表达

用于本发明所述方法制剂的示例性抗体是3D6。3D6单克隆抗体对Aβ的N-末端具有特异性，且已证明能够介导淀粉样斑的吞噬作用(例如，诱导吞噬作用)。3D6并不能识别分泌的APP或全长APP，但却能检测氨基末端具有天冬氨酸的Aβ类型。因此，3D6是末端特异性抗体。指定为RB96 3D6.32.2.4产生抗体3D6的细胞系的ATCC保藏号为PTA-5130，在2003年4月8日保藏。3D6抗体的克隆，表征和人源化可参见美国专利申请公开第20030165496 A1号。简言之，可通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分离m3D6轻链和重链可变区(V_L和V_H)的DNA序列来对抗Aβ肽鼠单克隆抗体(指定为m3D6)进行人源化。根据已确定的m3D6 V_L和V_H DNA序列，对同源人构架区进行了鉴定。为了确保人源化抗体保持了与Aβ肽抗原相互作用的能力，人源化3D6序列中的关键性鼠V_L和V_H构架区残基得以保留，从而保持了人κ轻链和IgG1重链序列中恒定结构域区(CDRs)的总体结构。通过对合成的重叠DNA寡核苷酸进行退火，然后通过DNA聚合酶填空反应，生成了通过这一过程鉴定的编码人源化3D6V_L和V_H序列的DNA序列(包括5’信号肽序列和3’内含子剪接供体序列)。每种人源化可变区序列的完整性都通过DNA测序来进行验证。图1描述了称为h3D6v2的示例性人源化抗Aβ肽3D6抗体的预测结构的示意图。图2鉴定了h3D6v2轻链和重链的全部氨基酸序列。

可使用编码抗Aβ抗体轻链和重链基因的表达质粒通过转染中国仓鼠卵巢(CHO)宿主细胞系来表达人源化3D6抗体。可使用标准的基于氨甲蝶呤的药物选择/基因扩增方法分离表达所述抗体的CHO细胞。可对表现出所希望产量和生长表型的克隆CHO细胞系进行选择，并使用不含有动物或人类来源成分的化学限定培养基来构建抗体表达细胞系。

实施例II 制备人源化抗Aβ抗体药物物质

多肽制备方法是从融化稳定表达抗-Aβ抗体的克隆细胞的起始培养物开始的。可使用不含有动物或人类来源蛋白的化学限制培养基来培养细胞。随后对培养物进行扩增并用来接种种子生物反应器，然后在依次用来接种多种制备反应器循环。制备反应器是以批次投料方式进行运转的。在制备周期结束时，可通过微过滤对制备产物中的条件培养基产物进行澄清以进行进一步的下游处理。

纯化过程由标准色谱步骤以及随后的过滤组成。可通过超滤对纯化的抗体进行浓缩并渗滤进入不含有聚山梨醇酯80的制剂缓冲液中。任选地，可向超滤/渗滤滞留物库中加入聚山梨醇酯80(植物来源)，然后加入细菌滞留物滤液。可将所述药物物质冷冻储存于-80℃，并保持以进行深入加工成药品，包括本说明书中描述的稳定液体制剂。

实施例III 抗体制剂和安慰剂的制备

制备两批抗体药物。第一批是通过将药物物质化合到含有20mg抗Aβ抗体活性物质/ml，10mM组氨酸，10mM甲硫氨酸，4％甘露醇，0.005％聚山梨醇酯80，pH6.0的不含有动物和人蛋白制剂中制备的。将所述药物，以100mg抗Aβ抗体活性物质/小瓶，无菌地填充入小瓶中。药物小瓶成品不含有防腐剂并可旨在仅用于单次使用。

可使用不含有聚山梨醇酯80的制剂缓冲液通过类似的方法制备第二批药物。

实施例IV 含有和不含有聚山梨醇酯-80制剂的稳定性分析

所述制剂的稳定性，尤其是，物理化学完整性(例如，聚集，脱酰胺，水解，和/或二硫键重排)可通过以下本领域公知的方法进行评价：外观；pH；蛋白浓度(A280)；ELISA，部分地，作为生物活性的测试；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，部分地，作为聚集的测试；分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)，部分地，作为聚集和稳定性一般性的测试：阳离子交换高效液相色谱(CEX-HPLC)，部分地，作为脱酰胺和稳定性的一般性测试；以及多肽作图。这些方法可在多种温度的检测条件下对所述蛋白的回收和完整性进行评估。

可对所述制剂进行外观分析从而确定在不同时间点该制剂的质量。所述分析是根据对微粒的澄清程度，颜色和存在情况进行肉眼检查进行的。例如，透明度的程度是根据参考悬液进行分析的。对如本发明所述具有和不具有聚山梨醇酯80制剂的外观分析表明，当保存于-80℃，5℃，25℃和40℃在以下时间点：开始，1个月，2个月，3个月，6个月，9个月，和12个月的条件下，两种制剂都是可接受的。

进行pH分析是为了确定所述制剂的pH维持在约5.5至约6.5的可接受范围。对如本发明所述具有和不具有聚山梨醇酯80的制剂的pH分析表明，当保存于-80℃，5℃，25℃和40℃在以下时间点：开始，1个月，2个月，3个月，6个月，9个月，和12个月的条件下，两种制剂都是可接受的。一般地，所述pH决不能低于5.8或高于6.2。

进行A280检验的蛋白浓度分析是为了确定所述制剂的蛋白浓度保持在约17mg/ml至约23mg/ml的可接受范围。对如本发明所述具有和不具有聚山梨醇酯80制剂的蛋白浓度分析表明，当保存于-80℃，5℃，25℃和40℃在以下时间点：开始，1个月，2个月，3个月，6个月，9个月，和12个月的条件下，两种制剂都是可接受的。除了保藏于5℃，25℃和40℃在三个月的时间点上不具有聚山梨醇酯80制剂的蛋白浓度略微高于约23mg/ml，其他的蛋白浓度都保持在可接受的范围之内。因此，蛋白浓度分析表明了，即使在恶劣的条件下，尤其是对具有聚山梨醇酯80的制剂而言，并未发生可检测的蛋白损失。除此之外，蛋白浓度的普遍降低表明了在起始时间点后显著的时间或温度依赖性变化。

生物学活性的维持，部分地，是通过ELISA技术进行分析的。生物学活性是通过可接受活性结合单位(BU)/mg≥2500BU/mg或50％(即，5000BU/mg相当于100％)进行分析的。对如本发明所述具有和不具有聚山梨醇酯80制剂的ELISA分析表明，当保存于-80℃，5℃，25℃和40℃在以下时间点：开始，1个月，2个月，3个月，6个月，9个月，和12个月的条件下，两种制剂都是可接受的。除了保藏于40℃在12个月的时间点上两种制剂的生物学活性范围略微低于50％，其他的生物学活性都保持在可接受的范围之内。

SEC-HPLC分析是作为聚集，纯度和稳定性的一般性检测进行的。与高分子量产物和低分子量产物的百分数相比，如果SEC-HPLC分析鉴定出≥90％的IgG单体，则在使用具有磷酸钠二元缓冲液的流动相色谱条件下进行的SEC-HPLC表明所述制剂是可接受的。对如本发明所述具有和不具有聚山梨醇酯80制剂的SEC-HPLC分析表明，当保存于-80℃，5℃，25℃和40℃在以下时间点：开始，1个月，2个月，3个月，6个月，9个月，和12个月的条件下，两种制剂都是可接受的。除了保藏于40℃在每个时间点以及在6个月之后(其中，所述分析在每个时间点上对两种制剂都鉴定出了高于至少10％低分子量的产物)上两种制剂的百分数单体范围低于90％，其他的百分数单体都保持在可接受的范围之内。SEC-HPLC分析可证明，尽管在具有和不具有聚山梨醇酯的样本中高分子量和低分子量产物的分布随时间而不同，但所述抗体的单体形式一般都能保持恒定，例如，在12个月的时间点，当所述制剂保存于5℃时。

CEX-HPLC分析是作为氨基化和稳定性的一般性检测进行的。在使用流动相色谱，NaCl缓冲液条件下进行的CEX-HPLC操作产生了可与参考标准图谱具有可比性或不可比性分析的主峰的洗脱谱和保留时间。对如本发明所述具有和不具有聚山梨醇酯80制剂的CEX-HPLC分析表明，当保存于-80℃，5℃，25℃和40℃在以下时间点：开始，1个月，2个月，3个月，6个月，9个月，和12个月的条件下，两种制剂都是可接受的。除了保藏于40℃在每个时间点以及在3个月之后上两种制剂主峰的洗脱谱和保留时间不具有可比性，其他的主峰都与参考峰具有可比性。

一般地，对保存于5℃具有聚山梨醇酯80制剂的分析得出了以下重要结论：1)透明度，pH，ELISA，CEX-HPLC，SEC-HPLC和SDS-PAGE分析都表明在9个月中在所述制剂中仅有微小的改变；2)在5℃保存的制剂在9个月后比恶劣条件下的样本更像参考样本；3)肽作图表明在5℃条件下发生了改变；以及4)5℃条件下的SEC-HPLC趋势数据预测了至少17.2个月的稳定性(参见图6)，然后，在去除了层析柱，仪器和缓冲液的变异之后，所述数据可预测出大于30个月的稳定性(参见图7)。此外，保存于25℃具有聚山梨醇酯80的恶劣条件下的样本在9个月时也通过所有的指标(图4)。

此外，对保存于5℃不具有聚山梨醇酯80制剂的分析得出了以下重要结论：1)透明度，pH和ELISA分析都表明在9个月中在所述制剂中仅有微小的改变；2)CEX-HPLC和SDS-PAGE结果说明与参考样本或在9个月时-80℃的对照相比具有可比的发现；3)SEC-HPLC分析表明在9个月后仅有微小的变化而在温度升高的条件下改变更明显；以及4)SEC-HPLC趋势数据预测出至少18个月的稳定性，与分析可变性的情况一致(参见图8)。

图3-5是对如本发明所述制备的制剂(具有和不具有PS80)分别保存于5℃，25℃和40℃条件下货柜期预测的图形化描述。一般地，图3-5表明在较高温度保存本发明的制剂会降低预期的货架期。图3，尤其，表明当所述制剂保存于5℃时，所述制剂的预期货架期为至少18个月。图4说明，将所述制剂保存于室温(25℃)可将预期的货架期降低至约12个月。图5进一步证明将所述制剂保存于40℃可将预期的货架期降低至约4个月。

实施例V 对使用甲硫氨酸作为抗氧化剂进行的稳定性研究

进行了研究从而确定甲硫氨酸对维持抗体制剂所述抗体稳定性的作用。在不同的温度，在6个月内对四种抗体样本(采用抗-CD22 IgG₄抗体)：pH6.0具有20mM琥珀酸盐的抗体制剂；具有20mM琥珀酸盐和10mM甲硫氨酸的抗体制剂；具有20mM琥珀酸盐和0.01％PS80的抗体制剂；以及具有20mM琥珀酸盐，10mM甲硫氨酸和0.01％PS80的抗体制剂进行了SEC-HPLC分析。所述结果说明甲硫氨酸可按预期降低高分子量(HMV)的形成。而且，甲硫氨酸降低了温度依赖的百分比HMW的升高(参见图10)。

此外，在不同的温度(5℃和40℃)，在6个星期内对以下四种抗体(抗-B7.2IgG2抗体)样本：(1)含有抗体，10mM组氨酸和150mM NaCl的样本；(2)含有抗体，10mM组氨酸，150mM NaCl和0.01％PS80的样本；(3)含有抗体，10mM组氨酸，150mM NaCl和10mM甲硫氨酸的样本；以及(4)含有抗体，10mM组氨酸，150mM NaCl，10mM甲硫氨酸和0.01％PS80的样本进行了pH稳定性研究(在pH5.8，pH6.0和pH6.2)。进行了SEC-HPLC分析。结果表明，在指定的pH范围，例如，从约pH5.8至约pH6.2，甲硫氨酸降低了温度依赖的百分比副产物形成(例如，HMV副产物)的升高(参见图11)。如图11所示，当在40℃保持6周时，含有甲硫氨酸的样本表现出少量的聚集，这一情况与在5℃保持6周的情况相类似。

实施例VI 通过差示扫描热量测定法对IgG1抗体进行的赋形剂分析

蛋白药物制剂的主要目的是将蛋白稳定在其天然的、具有生物学活性的形式。通常，可以通过在基础制剂中对各种赋形剂进行筛选并监测其对于分子的分子量和活性的影响来完成。这些参数可以对稳定性进行说明。其他的稳定性测定是热变性，其能够使用多种生物物理学技术来进行监测。一般地，蛋白稳定性的升高水平归因于高溶解、变性或分解温度。因此，可使用VP-毛细管差示扫描热量测定计在存在有多种赋形剂的条件下对代表性IgG1单克隆抗体的热性质进行监测。特别地，对具有多种赋形剂含有10mM组氨酸(pH6.0)制剂的表面T_ms进行了测定。有若干赋形剂表现出能够增强或降低热稳定性。因为蛋白稳定性的水平升高归因于较高的溶解温度，所以，与对照T_m2/T_m3值(分别为74.9℃和83.4℃)相比，在样本中能具有升高T_m2或T_m3的赋形剂被认为是特别需要的赋形剂(参见下表1)。

因此，可以认为，赋形剂，例如葡萄糖(在4％和10％浓度配制)，蔗糖(在4％和10％浓度配制)，山梨醇(在4％和10％浓度配制)和甘露醇(在4％和10％浓度配制)，对稳定液体多肽制剂，特别是抗体IgG制剂作用特别好。

表1赋形剂分析结果

等同变化

本领域所属技术人员应该意识到，或能够确定仅使用常规的实验方法就可以获得在本说明书所述的本发明特定实施方案的很多等同变化。这些等同变化也包含在以下的权利要求中。

Claims

1.稳定制剂，其含有：

(a)浓度为0.1mg/ml至100mg/ml的人源化3D6单克隆抗体，其中人源化3D6抗体包括含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链和含有SEQID NO：2的残基1-448的氨基酸序列的重链；

(b)浓度为0.1mM至25mM的组氨酸；

(c)1％w/v至10％w/v量的甘露醇；

(d)浓度为0.1mM至25mM的甲硫氨酸；和

(e)0.001％w/v至0.01％w/v量的聚山梨醇酯；

其中制剂的pH为5.5至6.5。

2.权利要求1的制剂，其中人源化3D6抗体的存在浓度为17mg/ml至23mg/ml，并且组氨酸的存在浓度为10mM。

3.权利要求2的制剂，其中聚山梨醇酯的存在浓度为0.005％w/v，并且甘露醇的存在浓度为4％w/v。

4.权利要求2的制剂，其中聚山梨醇酯的存在浓度为0.005％w/v，并且甘露醇的存在浓度为10％w/v。

5.权利要求3的制剂，其中甲硫氨酸的存在浓度为10mM。

6.权利要求4的制剂，其中甲硫氨酸的存在浓度为10mM。

7.权利要求1的制剂，其中人源化3D6抗体的存在浓度为15mg/ml至25mg/ml。

8.权利要求7的制剂，其中组氨酸的存在浓度为8mM至12mM。

9.权利要求8的制剂，其中甘露醇的存在量为4％w/v至6％w/v。

10.权利要求9的制剂，其中甲硫氨酸的存在浓度为8mM至12mM。

11.权利要求10的制剂，其中聚山梨醇酯的存在量为0.003％至0.007％。

12.权利要求11的制剂，其中的pH为5.8至6.2。

13.权利要求1的制剂，还含有0.1％w/v至4％w/v的蔗糖。

14.稳定制剂，其含有：

(a)浓度为20mg/ml的人源化3D6单克隆抗体，其中抗体包括含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO：2的残基1-448的氨基酸序列的重链；

(b)浓度为10mM的L-组氨酸；

(c)4％w/v量的D-甘露醇；

(d)浓度为10mM的L-甲硫氨酸；和

(e)0.005％w/v量的聚山梨醇酯80；

其中制剂的pH为6.0。

15.稳定的单位剂型，其含有：

(a)10mg至250mg量的人源化3D6单克隆抗体，其中人源化3D6抗体包括含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO：2的残基1-448的氨基酸序列的重链；

(b)浓度为0.1mM至25mM的组氨酸；

(c)1％w/v至10％w/v量的甘露醇；

(d)浓度为0.1mM至25mM的甲硫氨酸；和

(e)0.001％w/v至0.01％w/v量的聚山梨醇酯；

其中单位剂型的pH为5.5至6.5。

16.权利要求15的单位剂型，其中所述人源化3D6抗体的存在浓度为17mg/ml至23mg/ml，并且组氨酸的存在浓度为10mM。

17.权利要求16的单位剂型，其中聚山梨醇酯的存在浓度为0.005％w/v，并且甘露醇的存在浓度为4％w/v。

18.权利要求16的单位剂型，其中聚山梨醇酯的存在浓度为0.005％w/v，并且甘露醇的存在浓度为10％w/v。

19.权利要求17的单位剂型，其中甲硫氨酸的存在浓度为10mM。

20.权利要求18的单位剂型，其中甲硫氨酸的存在浓度为10mM。

21.权利要求15的单位剂型，其中人源化3D6抗体的存在量为40mg至60mg。

22.权利要求15的单位剂型，其中人源化3D6抗体的存在量为60mg至80mg。

23.权利要求15的单位剂型，其中人源化3D6抗体的存在量为80mg至120mg。

24.权利要求15的单位剂型，其中人源化3D6抗体的存在量为120mg至160mg。

25.权利要求15的单位剂型，其中人源化3D6抗体的存在量为160mg至240mg。

26.权利要求15的单位剂型，其中人源化3D6抗体的存在浓度为15mg/ml至25mg/ml。

27.权利要求26的单位剂型，其中组氨酸的存在浓度为8mM至12mM。

28.权利要求27的单位剂型，其中甘露醇的存在量为4％w/v至6％w/v。

29.权利要求28的单位剂型，其中甲硫氨酸的存在浓度为8mM至12mM。

30.权利要求29的单位剂型，其中聚山梨醇酯的存在量为0.003％w/v至0.007％。

31.权利要求30的单位剂型，其中的pH为5.8至6.2。

32.权利要求15的单位剂型，还含有0.1％w/v至4％w/v的蔗糖。

33.稳定的单位剂型，其含有：

(a)100mg的人源化3D6单克隆抗体，其中抗体包括含有SEQ IDNO：1的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO：2的残基1-448的氨基酸序列的重链；

(b)浓度为10mM的L-组氨酸；

(c)4％w/v量的D-甘露醇；

(d)浓度为10mM的L-甲硫氨酸；和

(e)0.005％w/v量的聚山梨醇酯80；

其中单位剂型的pH为6.0。

34.药物产品，其含有：

(a)包含稳定抗体制剂的玻璃瓶，所述制剂含有：

(i)10mg至250mg量的人源化3D6单克隆抗体，其中人源化3D6抗体包括含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO：2的残基1-448的氨基酸序列的重链；

(b)浓度为0.1mM至25mM的组氨酸；

(c)1％w/v至10％w/v量的甘露醇；

(d)浓度为0.1mM至25mM的甲硫氨酸；和

(e)0.001％w/v至0.01％w/v量的聚山梨醇酯；

其中制剂的pH为5.5至6.5；以及

(b)用途标签，该标签包括使用适当的达到0.0001mg/kg至100mg/kg的剂量所需体积的指示。

35.权利要求34的产品，其中的剂量为0.15mg/kg至5mg/kg。

36.权利要求35的产品，其中的剂量为0.5mg/kg至3mg/kg。

37.权利要求34的产品，其中的剂量为1mg/kg至2mg/kg。

38.权利要求34的产品，其中的剂量为0.1至25mg/kg。

39.权利要求34的产品，其中的人源化3D6抗体的存在浓度为17mg/ml至23mg/ml，并且组氨酸的存在浓度为10mM。

40.权利要求39的产品，其中聚山梨醇酯的存在浓度为0.005％w/v，并且甘露醇的存在浓度为4％w/v。

41.权利要求39的产品，其中聚山梨醇酯的存在浓度为0.005％w/v，并且甘露醇的存在浓度为10％w/v。

42.权利要求40的产品，其中甲硫氨酸的存在浓度为10mM。

43.权利要求41的产品，其中甲硫氨酸的存在浓度为10mM。

44.权利要求34的产品，其中人源化3D6抗体的存在量为40mg至60mg。

45.权利要求34的产品，其中人源化3D6抗体的存在量为60mg至80mg。

46.权利要求34的产品，其中人源化3D6抗体的存在量为80mg至120mg。

47.权利要求34的产品，其中人源化3D6抗体的存在量为120mg至160mg。

48.权利要求34的产品，其中人源化3D6抗体的存在量为160mg至240mg。

49.权利要求34的产品，其中人源化3D6抗体的存在浓度为15mg/ml至25mg/ml。

50.权利要求49的产品，其中组氨酸的存在浓度为从8mM至12mM。

51.权利要求50的产品，其中甘露醇的存在量为4％w/v至6％w/v。

52.权利要求51的产品，其中甲硫氨酸的存在浓度为从8mM至12mM。

53.权利要求52的产品，其中聚山梨醇酯的存在量为0.003％w/v至0.007％。

54.权利要求53的产品，其中的pH为5.8至6.2。

55.权利要求34的产品，其中的制剂还含有0.1％w/v至4％w/v的蔗糖。

56.权利要求34的产品，其中标签还包括皮下给药剂量的指示。

57.权利要求34的产品，其中标签还包括静脉内给药剂量的指示。

58.药物产品，其含有：

(a)包含稳定抗体制剂的玻璃瓶，所述制剂含有：

(i)100mg的人源化3D6单克隆抗体，其中抗体包括含有SEQ IDNO：1的氨基酸序列的轻链和含有SEQ ID NO：2的残基1-448的氨基酸序列的重链；

(ii)浓度为10mM的L-组氨酸；

(iii)4％w/v量的D-甘露醇；

(iv)浓度为10mM的L-甲硫氨酸；和

(v)0.005％w/v量的聚山梨醇酯80；

其中制剂的pH为6.0，以及

59.权利要求1至14任一项的制剂在制备用于治疗或预防以Aβ肽沉淀为特征的疾病的药物中的应用。

60.权利要求59的应用，其中的疾病为阿尔茨海默氏病。

61.权利要求59的应用，其中的药物用于向患者静脉内施用。

62.权利要求59的应用，其中的药物用于向患者皮下施用。

63.制备药物产品的方法，其包括：

(a)将30mg/ml至100mg/ml的人源化3D6单克隆抗体与1mg/ml至2mg/ml的组氨酸和0.05mg的聚山梨醇酯组合产生制剂，其中人源化3D6抗体包括含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链和含有SEQ IDNO：2的残基1-448的氨基酸序列的重链；

(b)将制剂的pH调整至6.0；

(c)过滤制剂进入冷冻容器；

(d)在-50℃至-80℃的温度下冷冻制剂；

(e)融化制剂；

(f)用足量的甘露醇稀释制剂从而获得抗体终浓度为2mg/ml至20mg/ml，甘露醇终浓度为4％w/v，组氨酸终浓度为10mM，聚山梨醇酯终浓度为0.005％；

(g)过滤稀释后的制剂；

(h)将过滤后的制剂封入玻璃小瓶产生无菌产品；以及

(i)将无菌产品保存于2℃至8℃的温度下。