CN103038345A - 转甲状腺素蛋白表达的调节 - Google Patents

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Abstract

本发明提供的是用于减少动物中转甲状腺素蛋白mRNA和蛋白的表达的方法、化合物和组合物。此类方法、化合物和组合物可用于治疗、预防、延缓或减轻转甲状腺素蛋白淀粉样变性或其症状。

Description

转甲状腺素蛋白表达的调节
序列表 
本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以于2011年4月28日创建的标题为BIOL0123WOSEQ.txt的文件形式提供，该文件大小为55KB。序列表的电子格式的信息通过引用整体并入本文。 
发明领域
本文提供的是用于减少动物中转甲状腺素蛋白mRNA和蛋白的表达的方法、化合物和组合物。此类方法、化合物和组合物可用于例如治疗、预防或减轻转甲状腺素蛋白淀粉样变性。 
发明背景 
转甲状腺素蛋白(TTR)(也称为前白蛋白、高甲状腺血症、白蛋白异常性甲状腺素；老年全身性淀粉样变性、淀粉样多神经病、淀粉样变性I、PALB；白蛋白异常性HST2651；TBPA；白蛋白异常性、机能正常的高甲状腺血症)是对甲状腺素和视黄醇的转运负责的血清/血浆和脑脊液蛋白(Sakaki等人，Mol Biol Med.1989，6：161-8)。结构上，TTR是同源四聚体；蛋白的点突变和错折叠导致淀粉样原纤维的沉积，并且与例如老年全身性淀粉样变性(SSA)、家族性淀粉样多神经病(FAP)和家族性淀粉样心肌病(FAC)相关。 
TTR主要由脑的脉络丛和肝，以及在较小程度上由人的视网膜合成(Palha，Clin Chem Lab Medd，2002，40，1292-1300)。在肝中合成的转甲状腺素蛋白分泌至血液，而源于脉络丛的转甲状腺素蛋白注定分泌至CSF。在脉络丛中，转甲状腺素蛋白合成表示约20％的总局部 蛋白合成以及高达25％的总CSF蛋白(Dickson等人，J Biol Chem，1986，261，3475-3478)。 
利用基因和免疫组织化学的诊断试验的可用性，已在全世界很多国家中发现患有TTR淀粉样变性。最近研究表明TTR淀粉样变性不是先前所认为的罕见的地方病，并且可影响高达25％的老年人群(Tanskanen等人，Ann Med.2008；40(3)：232-9)。 
在生物化学水平下，TTR被鉴定为FAP患者的淀粉样沉积物中的主要蛋白组分(Costa等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1978，75：4499-4503)并且之后，在该蛋白的30位用蛋氨酸取代缬氨酸被发现是引起疾病的最常用的分子效应(Saraiva等人，J. Clin.Invest.1984，74：104-119)。在FAP中，TTR聚集物和淀粉样原纤维的广泛分布的全身性胞外沉积遍及结缔组织发生，特别是外周神经系统(Sousa和Saraiva，Prog.Neurobiol.2003，71：385-400)。TTR沉积后，轴突退化发生，在低直径的无髓鞘和有髓鞘纤维中起始，并且最终导致神经节位点的神经元丧失。 
本文所述的化合物和治疗方法提供了相比于目前对于TTR相关病症可用的治疗选择的显著优势。TTR淀粉样变性通常在十年内导致死亡，并且直至最近，被认为是不可治愈的。肝移植是在家族性案例中被野生型(WT)等位基因替代疾病相关的等位基因的有效方式，因为肝通常是促淀粉样TTR的来源。尽管肝移植作为基因疗法的形式是有效的，但是其不是没有问题的。移植由于以下因素变得复杂：受者和供者的侵入性外科手术的需要、长期移植术后免疫抑制疗法、供者缺乏、其高成本和大量由于其疾病进展而非良好候选者的TR淀粉样变性患者。不幸的是，心脏性淀粉样变性甚至在肝移植后在一些家庭性患者中进展，因为WT TTR经常持续沉积。TTR的中枢神经系统(CNS)沉积也未被移植所缓解，归因于通过脉络丛的合成。移植不是最流行TTR疾病老年全身性淀粉样变性(SSA)的可行选择，影响约25％的由于WT TTR的沉积而引起的超过80的那些。 
反义技术作为用于减少某些基因产物的表达的有效方法出现并且由此可证明其可独特地用于多种调节TTR的治疗、诊断和研究应用(参见U.S.专利申请No.2008/0039418和2007/0299027)。 
本发明提供了用于调节转甲状腺素蛋白表达的组合物和方法。用于调节转甲状腺素蛋白表达的反义化合物于前述公布的专利申请中公开。然而，仍保持对另外此类化合物的需要。 
发明概述 
本文提供的是用于调节转甲状腺素蛋白(TTR)mRNA和蛋白的表达的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中，可用于调节TTRmRNA和蛋白的表达的化合物是反义化合物。在某些实施方案中，反义化合物是反义寡核苷酸。 
在某些实施方案中，调节可在细胞或组织中发生。在某些实施方案中，细胞或组织是在动物中。在某些实施方案中，动物是人。在某些实施方案中，TTR mRNA水平被减少。在某些实施方案中，TTR蛋白水平被减少。此类减少可以时间依赖性方式或以剂量依赖性方式发生。 
本文提供的是用于调节转甲状腺素蛋白表达和治疗、预防、延缓或减轻转甲状腺素蛋白淀粉样变性和或其症状的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中的是用于调节表达转甲状腺素蛋白和治疗、预防、延缓或减轻转甲状腺素蛋白淀粉样病或转甲状腺素蛋白淀粉样变性或转甲状腺素蛋白相关淀粉样变性(例如，遗传性TTR淀粉样变性、软脑膜淀粉样变性、转甲状腺素蛋白淀粉样多神经病、家族性淀粉样多神经病、家族性淀粉样心肌病或老年全身性淀粉样变性)的方法、化合物和组合物。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由8至80个 连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由8至80个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由12至50个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由12至50个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由12至30个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由15至25个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核 苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由15至25个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由18至21个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由18至21个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由20至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由20至30个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由8至80个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互 补；或治疗有效量的包含由8至80个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ IDNO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由12至50个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由12至50个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ IDNO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由12至30个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ IDNO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由15至25个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由15至25个连接核苷组成且具有核碱基序 列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ IDNO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由18至21个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由18至21个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ IDNO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由8至80个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由8至80个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：25、80、86或87中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由12至50个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由12至50个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化 合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：25、80、86或87中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由12至30个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：25、80、86或87中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由15至25个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由15至25个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：25、80、86或87中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由18至21个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由18至21个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：25、80、86或87中所 述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由20至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由20至30个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：25、80、86或87中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由8至80个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由8至80个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：80中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由12至50个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由12至50个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：80中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由12至30个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：80中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由15至25个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由15至25个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：80中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由18至21个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由18至21个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：80中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由20至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由20至30个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：80中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，处于转甲状腺素蛋白淀粉样变性危险或患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸互补；或治疗有效量的包含由20个连接核苷组成且具有核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述核碱基序列包含选自SEQ ID NO：80中所述的任何一个核碱基序列的核碱基序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基。 
在某些实施方案中，患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用以下化合物来治疗：治疗有效量的包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中所示的转甲状腺素蛋白核酸100％互补；或治疗有效量的包含由20个连接核苷组成且具有SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
在某些实施方案中，患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用治疗有效量的包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物来治疗，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1中所示的转甲状腺素蛋白核酸100％互补；并且其中所述化合物包含 由20个连接核苷组成且具有SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的经修饰的寡核苷酸。 
在某些实施方案中，患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的动物通过向动物施用治疗有效量的包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物来治疗，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1中所示的转甲状腺素蛋白核酸100％互补；其中所述化合物包含由20个连接核苷组成且具有SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的经修饰的寡核苷酸；并且其中所述经修饰的寡核苷酸在两个独立地具有5个连接的经修饰的核苷的翼区段之间具有10个连接脱氧核苷的缺口区段。在某些实施方案中，翼区段中的一个或多个经修饰的核苷具有经修饰的糖。在某些实施方案中，经修饰的核苷是2’-取代的核苷。在某些实施方案中，经修饰的核苷是2’-MOE核苷。 
在某些实施方案中，调节可在细胞、组织、器官或生物体中发生。在某些实施方案中，细胞、组织或器官是在动物中。在某些实施方案中，动物是人。在某些实施方案中，转甲状腺素蛋白mRNA水平被减少。在某些实施方案中，转甲状腺素蛋白蛋白水平被减少。此类减少可以时间依赖性方式或以剂量依赖性方式发生。 
还提供的是用于预防、治疗和减轻与转甲状腺素蛋白淀粉样变性相关的疾病、病症和疾患的方法、化合物和组合物。在某些实施方案中，此类疾病、病症和疾患是转甲状腺素蛋白淀粉样变性相关的疾病、病症或疾患。 
在某些实施方案中，治疗方法包括向需要其的个体施用TTR反义化合物。在某些实施方案中，治疗方法包括向需要其的个体施用TTR反义寡核苷酸。 
在某些实施方案中，治疗方法包括向需要其的个体施用转甲状腺素蛋白反义寡核苷酸和额外疗法。 
发明详述 
应理解，前述一般描述和以下详细描述仅仅是示例性的且说明性的，并不限制如要求保护的本发明。在本文，使用的单数包括复数，除非另有明确指出。如本文所用的，使用的“或”意指“和/或”，除非另有指出。而且，使用的术语“包括”以及其它形式例如“包括”和“被包括”并不是限制性的。同时，术语例如“要素”或“组分”包含要素和组分两者，包含一个单元和要素以及包含一个以上亚单元的组分，除非另有明确指出。 
本文所述的部分标题仅仅是为了组织的目的并不应理解为限制所述的主题。本申请引用的所有文件、或文件的一部分(包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍和书籍)据此通过引用清楚(针对本文所述的文件以及其整体)并入。 
定义 
除非提供了明确定义，否则结合本文所述的分析化学、合成有机化学、以及医药和制药化学所用的命名法、以及它们的方法和技术是本领熟知且常用的。标准技术可用于化学合成以及化学分析。当允许时，所有专利、申请、公布的申请和其它公布、GENBANK登记号及可通过数据库例如National Center for BiotechnologyInformation(NCBI)和其它在本整个公开中提及的数据获得的相关序列信息通过引用(针对本文所论述的文件的部分以及其整体)并入本文。 
除非另有指出，下列术语具有以下含义： 
“2’-O-甲氧基乙基”(也称为2’-MOE和2’-O(CH2)2-OCH3)是指呋喃糖基环的2’位的O-甲氧基-乙基修饰。2’-O-甲氧基乙基修饰的糖是经修饰的糖。 
“2’-O-甲氧基乙基核苷酸”意指包含2’-O-甲氧基乙基修饰的糖部 分的核苷酸。 
“5-甲基胞嘧啶”意指用与5’位连接的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是经修饰的核碱基。 
“活性药用剂(Active pharmaceutical agent)”意指当施用于个体时提供了治疗益处的药物组合物中的物质。例如，在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸是活性药用剂。 
“活性靶区域”或“靶区域”意指靶向一个或多个活性反义化合物的区域。“活性反义化合物”意指减少靶核酸水平或蛋白水平的反义化合物。 
“伴随施用(Administered concomitantly)”是指以两种活性剂的药理学作用在患者中同时出现的任何方式共施用两种活性剂。伴随施用不需要两种活性剂以单一药物组合物、以相同剂量形式或通过相同施用途径施用。两种活性剂的效应不需要同时显示它们自身。效应仅需要在一定时段内重叠并且不需要共存。 
“施用”意指给个体提供药用剂，并且包括但不限于通过医学专业人员施用和自身施用。 
“减轻”是指减轻相关疾病、病症或疾患的至少一个指标、症状或症候。指标的严重度可通过本领域技术人员已知的主观或客观量度来确定。 
“淀粉样变性”是由各种体组织中的异常蛋白(淀粉样蛋白或淀粉样原纤维)沉积物引起的一组疾病或病症。淀粉样蛋白可沉积在身体的一个特定区域(局限性淀粉样变性)或它们可遍及身体沉积(全身性淀粉样变性)。有三种类型的全身性淀粉样变性：原发性(AL)、继发性(AA)和家族性(ATTR)。原发性淀粉样变性与任何其它疾病无关并且被认为其自身的疾病实体。继发性淀粉样变性作为另一种疾病的结果而发生。家族性地中海热是家族性(遗传性)淀粉样变性。 
“动物”是指人或非-人动物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、猫、猪和非-人灵长类，包括但不限于猴和猩猩。 
“反义活性”意指归因于反义化合物与其靶核酸的杂交的任何可检测或可测量的活性。在某些实施方案中，反义活性是由此类靶核酸编码的把核酸或蛋白的量或表达的减少。 
“反义化合物”意指能够通过氢键合经受与靶核酸杂交的寡聚化合物。 
“反义抑制”意指在与靶核酸互补的反义化合物的存在下靶核酸水平或靶蛋白水平相比于在反义化合物存在下的靶核酸水平或靶蛋白水平的减少。 
“反义寡核苷酸”意指具有允许与相应的靶核酸区域或区段杂交的核碱基序列的单链寡核苷酸。如本文所用的，术语“反义寡核苷酸”包括本文所述的化合物的药学上可接受的衍生物。 
“双环糖”意指通过两个非孪位环原子的桥接修饰的呋喃糖基环。双环糖是经修饰的糖。 
“双环核酸”或“BNA”是指核苷或核苷酸，其中该核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括连接呋喃糖环上的两个碳原子的桥，由此形成双环系统。 
“帽结构”或“端帽部分”意指已在反义化合物的任一末端并入的化学修饰。 
“中枢神经系统(CNS)”是指包封在脑膜中的脊椎动物神经系统。其包含大多数神经系统，并且由脑(在具有脑的脊椎动物中)和脊髓组成。CNS包含在背侧腔内，脑在颅腔内，并且脊髓在脊腔内。脑还受颅骨保护，并且脊髓在脊椎动物中还受椎骨保护。 
“化学上不同的区域”是指以某种方式化学上不同于同一反义化合物的另一区域的反义化合物的区域。例如，具有2’-O-甲氧基乙基核苷酸的区域化学上不同于具有无2’-O-甲氧基乙基修饰的核苷酸的区域。 
“嵌合反义化合物”意指具有至少两个化学上不同的区域的反义化合物。 
“脉络丛”是产生脑脊髓液(CSF)的脑室上的区域。 
“共施用”意指给个体施用两种或更多种药用剂。两种或更多种药用剂可以在单一药物组合物中，或可以在分开的药物组合物中。两种或更多种药用剂中的每一种可通过相同或不同的施用路径施用。共施用包括平行或相继施用。 
“互补性”意指第一核酸与第二核酸的核碱基之间配对的能力。 
“连续核碱基”意指彼此直接相邻的核碱基。 
“稀释剂”意指组合物中缺少药理学活性但是药学上必需或期望的成分。例如，注射型组合物中的稀释剂可以是液体，例如盐水溶液。 
“剂量”意指在单个施用中或在指定时间内提供的指定量的药用剂。在某些实施方案中，剂量可在一个、两个或多个大丸剂(bolus)、片剂或注射剂中施用。例如，在某些实施方案中，当期望皮下施用时，所需剂量需要不易由单次注射调节的体积，因此，两个或更多个注射可用于实现所需剂量。在某些实施方案中，药用剂通过在延长的时段内或连续地输注来施用。剂量可被陈述为每小时、每天、每周或每月药用剂的量。 
“有效量”意指足以在需要活性剂的个体中实现所需生理学结果的活性药用剂的量。有效量可在个体间变化，取决于待治疗个体的健康和身体条件、待治疗个体的分类群、组合物的制剂、个体的医疗条 件的评价、以及其它相关因素。 
“家族性淀粉样变性”或“遗传性淀粉样变性”是继承性淀粉样变性的形式。 
“家族性淀粉样多神经病”或“FAP”是基因遗传的神经退行性病症，其特征在于转甲状腺素蛋白的淀粉样变体的全身性沉积，引起进行性感觉性和运动性多发性神经病变。 
“完全互补”或“100％互补”意指第一核酸的核碱基序列的每个核碱基在第二核酸的第二核碱基序列中具有互补核碱基。在某些实施方案中，第一核酸是反义化合物且靶核酸是第二核酸。 
“缺口基体(Gapmer)”意指其中具有多个支持RNA酶H切割的核苷的内部区域位于具有一个或多个核苷的外部区域的嵌合反义化合物，其中包含内部区域的核苷化学上不同于包含外部区域的核苷。内部区域可被称为“缺口区段”且外部区域可被称为“翼区段”。 
“缺口加宽的”意指具有12或更多个连续2’-脱氧核糖核苷的缺口区段的嵌合反义化合物的位置在具有1至6个核苷的5’和3’翼区段之间和与所述5’和3’翼区段直接相邻。 
“遗传性转甲状腺素蛋白(TTR)淀粉样变性”是由转甲状腺素蛋白、甲状腺素和维生素A的血浆运输蛋白的突变引起的全身性疾病。其最通常与外周神经病变和限制性心肌病相关，但是遍及身体的血管壁和结缔组织结构中的淀粉样沉积物通常引起其它器官系统的功能障碍。胃肠蠕动异常在具有便秘、腹泻和由延迟胃排空引起的早期饱满感的疾病中是常见的。淀粉样蛋白在腕中的结缔组织沉积物引起腕管综合症。脊血管及周围结构中的淀粉样沉积物引起具有跛行症状的脊柱狭窄。 
“杂交”意指互补核酸分子的退火。在某些实施方案中，互补核酸分子包括反义化合物和靶核酸。 
“直接相邻”意指在直接相邻的要素之间没有插入要素。 
“个体”意指对于治疗或疗法所选定的人或非-人动物。 
“脑室内施用”或“脑的室内施用”或“脑室施用”意指通过注射或输注到脑的脑室系统中的施用。 
“腹膜内施用”意指至腹膜腔的施用。 
“鞘内施用”意指通过注射或输注到沐浴脊髓和脑的脑脊液中的施用。 
“静脉内施用”意指进入静脉中的施用。 
“室内施用”意指进入脑室或心室中的施用。 
“核苷间键合”是指核苷之间的化学键。 
“软脑膜”意指与柔脑膜无关，两个覆盖脑和脊髓的组织的最内层。“软脑膜淀粉样变性”是指由柔脑膜内的转甲状腺素蛋白淀粉样沉积引起的柔脑膜的淀粉样变性。 
“连接核苷”意指键合在一起的相邻核苷。 
“错配”或“非-互补核碱基”是指当第一核酸的核碱基不能与第二靶核酸相应核碱基配对的情况。 
“经修饰的核苷间键合”是指来自天然存在核苷间键(即磷酸二酯核苷间键)的取代或任何变化。 
“经修饰的核碱基”是指不是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸苷或尿嘧啶的任何核碱基。“未经修饰的核碱基”意指嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U)。 
“经修饰的核苷酸”意指不独立地具有一个或多个经修饰的糖部 分、经修饰的核苷间键合或经修饰的核碱基的核苷酸。“经修饰的核苷”意指独立地具有经修饰的糖部分或经修饰的核碱基的核苷。 
“经修饰的寡核苷酸”意指包含至少一个经修饰的核苷酸的寡核苷酸。 
“经修饰的糖”是指天然糖的取代或变化。 
“基序”意指反义化合物中化学上不同区域的模型。 
“天然存在核苷间键合”意指3′至5′磷酸二酯键合。 
“天然糖部分”意指发现于DNA(2’-H)或RNA(2’-OH)中的糖。 
“核酸”是指由单体核苷酸组成的分子。核酸包括核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)、单链核酸、双链核酸、小干扰核糖核酸(siRNA)和微RNA(miRNA)。核酸还可以包含这些要素在单个分子中的组合。 
“核碱基”意指能够与另一个核酸的碱基配对的杂环部分。 
“核碱基序列”意指不依赖于任何糖、键合或核碱基修饰的连续核碱基的次序。 
“核苷”意指与糖连接的核碱基。 
“核苷模拟物”包括用于替换糖或糖和碱基并且不一定在寡聚化合物的一个或多个位置连接的那些结构；例如具有吗啉代、环己烯基、环己基、四氢呋喃基、二环或三环糖模拟物例如非呋喃糖单元的核苷模拟物。 
“核苷酸”意指具有共价连接于核苷的糖部分的磷酸基的核苷。 
“寡聚化合物″或“寡聚物”是指能够与至少核酸分子区域杂交的连接单体亚单位的聚合物。 
“寡核苷酸”意指连接核苷的聚合物，每个连接核苷可经修饰或未经修饰，彼此无关。 
“胃肠外施用”意指通过注射或输注的施用。胃肠外施用包括皮下施用、静脉内施用、肌内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用，例如脑内施用、鞘内施用、室内施用、室施用、脑室内施用、脑的室内施用或脑室施用。施用可以是连续的、或慢性的、或短期或间歇的。 
“肽”意指通过连接至少两个氨基酸经由酰胺键形成的分子。肽是指多肽和蛋白质。 
“药物组合物”意指适用于给个体施用的物质的混合物。例如，药物组合物可包含一种或多种药用剂和无菌水溶液。 
“药学上可接受的盐”意指反义化合物的生理学和药学上可接受的盐，即保留母体寡核苷酸的所需生物活性并且不赋予其不想要的毒理学效应的盐。 
“硫代磷酸酯键合”意指核苷之间的键合，其中磷酸二酯键通过用硫原子替代非桥接氧原子之一来修饰。硫代磷酸酯键合是经修饰的核苷间键合。 
“部分”意指核酸的确定数量的连续(即连接)核碱基。在某些实施方案中，部分是靶核酸的确定数量的连续核碱基。在某些实施方案中，部分是反义化合物的确定数量的连续核碱基。 
“预防”是指延缓或阻止疾病、病症或疾患的发作或发展达到从数分钟至无限期的时段。预防还意指减少疾病、病症或疾患发展的风险。 
“前药”意指以无活性形式制备的治疗剂，其在体内或其细胞内通过内源性酶或其它化学品或条件的作用被转化为活性形式。 
“副作用”意指可归因于治疗而不是所需效应的生理学反应。在某 些实施方案中，副作用包括注射部位反应、肝功能试验异常、肾功能异常、肝毒性、肾毒性、中枢神经系统异常、肌病和不适。例如，增加的血清氨基转移酶水平可指示肝毒性或肝功能异常。例如，增加的胆红素可包括肝毒性或肝功能异常。 
“单链寡核苷酸”意指不与互补链杂交的寡核苷酸。 
“特异性杂交”是指在反义靶核酸和靶核酸之间具有足够的互补性程度以诱导所需效应同时在体内测定和治疗性处理的情况下在需要特异性结合的条件即在生理学条件下对非-靶核酸表现出最低效应或无效应的反义化合物 
“皮下施用”意指在皮肤正下方的施用。 
“靶向”或“被靶向”意指设计和选择与靶核酸特异性杂交并且诱导所需效应的反义化合物的方法。 
“靶核酸”、“靶RNA”和“靶RNA转录物”均是指能够通过反义化合物靶向的核酸。 
“靶区段”意指反义化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列。“5’靶位点”是指靶区段的5’最末端核苷酸。“3’靶位点”是指靶区段的3’最末端核苷酸。 
“治疗有效量”意指给个体提供了治疗益处的药用剂的量。 
“转甲状腺素蛋白-特异性抑制剂”或“转甲状腺素蛋白抑制剂”意指能够降低转甲状腺素蛋白mRNA或蛋白表达的任何化合物。此类化合物的实例包括核酸、肽、抗体或组蛋白脱乙酰基酶抑制剂。 
“转甲状腺素蛋白特异性调节剂”或“转甲状腺素蛋白调节剂”意指能够增加或降低转甲状腺素蛋白mRNA或蛋白表达的任何化合物。 
如本文所用的“转甲状腺素蛋白相关的淀粉样变性”或“转甲状腺 素蛋白淀粉样变性”或“转甲状腺素蛋白淀粉样病”是与导致含转甲状腺素蛋白的淀粉样原纤维的形成的转甲状腺素蛋白的功能障碍或失调相关的任何病理学或疾病。转甲状腺素蛋白淀粉样变性包括但不限于遗传性TTR淀粉样变性、软脑膜淀粉样变性、家族性淀粉样多神经病(FAP)、家族性淀粉样心肌病、家族性眼睛软脑膜淀粉样变性、老年性心脏淀粉样变性或老年全身性淀粉样变性。 
“治疗”是指施用药物组合物以实现疾病、病症或疾患的改变或提高。 
“未经修饰的核苷酸”意指由天然存在核碱基、糖部分和核苷间键合组成的核苷酸。在某些实施方案中，未经修饰的核苷酸是RNA核苷酸(即β-D-核糖核苷)或DNA核苷酸(即β-D-脱氧核糖核苷)。 
某些实施方案 
某些实施方案提供了用于抑制转甲状腺素蛋白表达的方法、化合物和组合物。 
某些实施方案提供了靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物。在某些实施方案中，转甲状腺素蛋白核酸是GENBANK登记号NM_000371.2(以SEQ ID NO：1并入本文)、从核苷酸2009236至2017289截短的GENBANK登记号NT_010966.10(以SEQ ID NO：2并入本文)；基于与人外显子的类似性从恒河猴基因组序列GENBANK登记号NW_001105671.1提取的外显子1-4；和从核苷酸628000至638000截短的GENBANK登记号NW_001105671.1(以SEQID NO：4并入本文)中所述的任何序列。 
某些实施方案提供了包含由8至80个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由12至50个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的序列的至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由15至25个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的序列的至少8个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由18至21个连接核苷组成的经修饰的 寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由8至80个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由12至50个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由15至25个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由18至21个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：25、80、86和87中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由8至80个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由12至50个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由15至25个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由18至21个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含选自SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基。 
某些实施方案提供了包含由20至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少8个连续核碱基。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个或至少19个连续核碱基。 
在某些实施方案中，所述化合物包含由SEQ ID NO：80中所述的20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸。 
某些实施方案提供了包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸120-139、212-236、226-245、293-468、293-326、347-381、425-468、425-467、452-478、452-474、459-478、461-519、462-500、500-519、501-535、502-531、505-524、507-526、508-527、514-540、514-539、515-534、516-535、523-542、544-606、544-564、564-583、578-601、580-608、580-599、584-606、585-604、587-606或597-617的区域内的等长核碱基部分互补的至少8个连续核碱基部分。在某些实施方案中，所述区域选自SEQ ID NO：1的507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608。在某些实施方案中，所述区域选自SEQ ID NO：1的501-535或580-608。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有在本文所述的区域内互补的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基部分。 
某些实施方案提供了包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸501-535或580-608的区域内的等长核碱基部分互补的至少8个连续核碱基部分。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有在本文所述的区域内互补的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基部分。 
某些实施方案提供了包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸508-527的区域内的等长核碱基部分互补的至少8个连续核碱基部分。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有在本文所述的 区域内互补的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基部分。 
某些实施方案提供了包含由15至25个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内的等长核碱基部分互补的至少8个连续核碱基部分。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有在本文所述的区域内互补的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基部分。 
某些实施方案提供了包含由18至21个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内的等长核碱基部分互补的至少8个连续核碱基部分。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有在本文所述的区域内互补的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基部分。 
某些实施方案提供了包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内的等长核碱基部分互补的至少8个连续核碱基部分。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有在本文所述的区域内互补的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基部分。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸与编码人转甲状腺素蛋白(TTR)例如SEQ ID No：1的核酸 90％、95％、99％或100％互补。 
某些实施方案提供了包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸508-527的区域内的等长核碱基部分互补的至少8个连续核碱基部分。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸具有与在选自SEQ IDNO：1的核苷酸508-527的区域内的等长部分互补的至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个或至少20个连续核碱基部分。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸与编码人转甲状腺素蛋白(TTR)例如SEQ ID No：1的核酸90％、95％、99％或100％互补。 
某些实施方案提供了包含20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述连接核苷在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内60％互补。 
某些实施方案提供了包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述连接核苷在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内70％互补。 
某些实施方案提供了包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述连接核苷在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内80％互补。 
某些实施方案提供了包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述连接核苷在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内90％互补。 
某些实施方案提供了包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述连接核苷在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内95％互补。 
某些实施方案提供了包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述连接核苷在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内99％互补。 
某些实施方案提供了包含由20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，所述连接核苷与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸507-526、508-527、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606和589-608的区域内100％互补。 
某些实施方案提供了包含由在SEQ ID NO：1的核苷酸508-527内60％互补的20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
某些实施方案提供了包含由在SEQ ID NO：1的核苷酸508-527内70％互补的20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
某些实施方案提供了包含由在SEQ ID NO：1的核苷酸508-527内80％互补的20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物. 
某些实施方案提供了包含由在SEQ ID NO：1的核苷酸508-527内90％互补的20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
某些实施方案提供了包含由在SEQ ID NO：1的核苷酸508-527内95％互补的20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
某些实施方案提供了包含由在SEQ ID NO：1的核苷酸508-527内99％互补的20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
某些实施方案提供了包含由在SEQ ID NO：1的核苷酸508-527内100％互补的20个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物或经修饰的寡核苷酸靶向SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域：120-139、212-236、226-245、293-468、293-326、347-381、425-468、425-467、452-478、452-474、459-478、461-519、462-500、500-519、502-531、507-526、505-524、508-527、514-540、514-539、515-534、516-535、523-542、544-606、544-564、564-583、578-601、580-599、584-606、585-604、587-606或597-617。 
在某些实施方案中，反义化合物或经修饰的寡核苷酸靶向转甲状腺素蛋白核酸的区域。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的区域的此类化合物或寡核苷酸具有与该区域的等长核碱基部分互补的连续核碱基部分。例如，所述部分可以是与本文所述的区域的等长部分互补的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核碱基部分。在某些实施方案中，此类化合物或寡核苷酸靶向SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域：120-139、212-236、226-245、293-381、293-366、353-381、293-468、425-468、425-467、452-476、461-481、461-500、500-519、461-519、502-531、502-539、504-536、505-525、506-530、507-527、508-527、508-536、514-540、523-542、544-606、544-564、544-583或597-617。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的区域的此类化合物或寡核苷酸具有与SEQ ID NO：1的501-535或580-608的区域的等长核碱基部分互补的连续核碱基部分。 
在某些实施方案中，SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域当经反义化合物或寡核苷酸靶向时展示至少60％抑制：226-245、293-366、357-467、452-474、457-476、459-478、462-500、500-519、502-531、504-536、505-525、506-530、507-527、508-527、508-536、514-539、 544-564、564-583、578-601、584-606或597-617。 
在某些实施方案中，SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域当经反义化合物或寡核苷酸靶向时展示至少65％抑制：293-366、357-376、425-449、432-467、452-474、459-478、462-500、500-519、502-531、504-536、505-525、506-530、507-527、508-527、508-536、514-539、544-563、564-583、578-601、585-606或597-617。 
在某些实施方案中，SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域当经反义化合物或寡核苷酸靶向时展示至少70％抑制：293-366、425-449、432-467、452-474、459-478、462-500、500-519、502-531、504-536、505-525、506-530、507-527、508-527、508-536、514-539、564-583、578-598、581-600或597-617。 
在某些实施方案中，SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域当经反义化合物或寡核苷酸靶向时展示至少75％抑制：293-322、347-366、425-449、432-467、452-474、459-478、462-500、500-519、503-531、504-536、505-525、506-530、507-527、508-527、508-536、514-539、578-598、581-600或597-616。 
在某些实施方案中，SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域当经反义化合物或寡核苷酸靶向时展示至少80％抑制：303-322、425-449、432-460、443-467、452-473、481-500、500-519、503-531、504-536、505-525、506-530、507-527、508-527、508-536、514-536、519-539、579-598、581-600或597-616。 
在某些实施方案中，SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域当经反义化合物或寡核苷酸靶向时展示至少85％抑制：427-449、432-458、441-460、443-467、452-473、504-531、504-536、505-525、506-530、507-527、508-527、508-536、514-536、519-539或581-600。 
在某些实施方案中，SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域当经反义 化合物或寡核苷酸靶向时展示至少90％抑制：428-449、432-456、439-458、441-460、445-466、452-473、504-525、508-527或515-536。 
在某些实施方案中，SEQ ID NO：1的以下核苷酸区域当经反义化合物或寡核苷酸靶向时展示至少95％抑制：434-453、436-456、441-460、445-465、505-524或516-535。 
在某些实施方案中，下列反义化合物靶向SEQ ID NO：1的区域(编码人转甲状腺素蛋白的核酸)，并且表明转甲状腺素蛋白mRNA的至少60％抑制：ISIS NO：420954、420904、304286、420874、420948、420883、420955、420952、420956、420957、420882、420947、420950、304312、304307、420879、420910、420902、420908、420924、420877、420880、304309、304289、420906、304311、420878、420911、304284、304288、420909、304296、420949、304290、304299、420898、420920、420925、420951、304287、420894、420916、420918、420926、304285、420919、420923、420886、420900、420912、420915、420917、420921、420884、420885、420887、420889、420892、420901、420914、420897、420899、420888、420895、420896、420913、420922、420893、420890或420891。 
在某些实施方案中，以下反义化合物靶向SEQ ID NO：1的区域(编码人转甲状腺素蛋白的核酸)并且表明转甲状腺素蛋白mRNA的至少65％抑制：ISIS NO：420955、420952、420956、420957、420882、420947、420950、304312、304307、420879、420910、420902、420908、420924、420877、420880、304309、304289、420906、304311、420878、420911、304284、304288、420909、304296、420949、304290、304299、420898、420920、420925、420951、304287、420894、420916、420918、420926、304285、420919、420923、420886、420900、420912、420915、420917、420921、420884、420885、420887、420889、420892、420901、420914、420897、420899、420888、420895、420896、420913、420922、420893、420890或420891。 
在某些实施方案中，以下反义化合物靶向SEQ ID NO：1的区域(编码人转甲状腺素蛋白的核酸)并且表明转甲状腺素蛋白mRNA的至少70％抑制：ISIS NO：304312、304307、420879、420910、420902、420908、420924、420877、420880、304309、304289、420906、304311、420878、420911、304284、304288、420909、304296、420949、304290、304299、420898、420920、420925、420951、304287、420894、420916、420918、420926、304285、420919、420923、420886、420900、420912、420915、420917、420921、420884、420885、420887、420889、420892、420901、420914、420897、420899、420888、420895、420896、420913、420922、420893、420890或420891。 
在某些实施方案中，以下反义化合物靶向SEQ ID NO：1的区域(编码人转甲状腺素蛋白的核酸)并且表明转甲状腺素蛋白mRNA的至少75％抑制：ISIS NO：420877、420878、420880、304284、304285、420884、420885、420886、420887、420888、420889、420890、420891、304287、420892、304288、420893、304289、304290、420894、420895、420896、420897、420898、420899、420900、420901、420902、420906、420908、304296、420909、420911、420912、420913、420914、304299、420915、420916、420917、420918、420919、420920、420921、420922、420923、420924、420925、420926、304309、420949、420951或304311。 
在某些实施方案中，以下反义化合物靶向SEQ ID NO：1的区域(编码人转甲状腺素蛋白的核酸)并且表明转甲状腺素蛋白mRNA的至少80％抑制：ISIS NO：304311、420878、420911、304284、304288、420909、304296、420949、304290、304299、420898、420920、420925、420951、304287、420894、420916、420918、420926、304285、420919、420923、420886、420900、420912、420915、420917、420921、420884、420885、420887、420889、420892、420901、420914、420897、420899、420888、420895、420896、420913、420922、420893、420890或420891。 
在某些实施方案中，以下反义化合物靶向SEQ ID NO：1的区域 (编码人转甲状腺素蛋白的核酸)并且表明转甲状腺素蛋白mRNA的至少85％抑制：ISIS NO：304290、304299、420898、420920、420925、420951、304287、420894、420916、420918、420926、304285、420919、420923、420886、420900、420912、420915、420917、420921、420884、420885、420887、420889、420892、420901、420914、420897、420899、420888、420895、420896、420913、420922、420893、420890或420891。 
在某些实施方案中，以下反义化合物靶向SEQ ID NO：1的区域(编码人转甲状腺素蛋白的核酸)并且表明转甲状腺素蛋白mRNA的至少90％抑制：ISIS NO：420923、420886、420900、420912、420915、420917、420921、420884、420885、420887、420889、420892、420901、420914、420897、420899、420888、420895、420896、420913、420922、420893、420890或420891。 
在某些实施方案中，以下反义化合物靶向SEQ ID NO：1的区域(编码人转甲状腺素蛋白的核酸)并且表明转甲状腺素蛋白mRNA的至少95％抑制：ISIS NO：420888、420895、420896、420913、420922、420893、420890或420891。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸120-139。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸120-139。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：37的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸120-139的反义化合物选自ISISNO：420872。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸212-236。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸212-236。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：8和38的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸212-236的反义化合物选自 ISIS NO：420873或304267。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸226-245。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸226-245。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：39的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸226-245的反义化合物选自ISISNO：420874。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸293-381。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸293-381。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：10、42-48的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸293-381的反义化合物选自ISIS NO：420877、420878、420879、420880、304280、420881、420882或420883。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸293-366。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸293-366。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：42-45的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸293-366的反义化合物选自ISISNO：420877、420878、420879或420880。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸353-381。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸353-381。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：10、46-48的核碱基序列。在某些此类实施方案中，SEQ ID NO：1的核苷酸353-381的反义化合物选自ISISNO：304280、420881、420882或420883。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸293-468。 在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸293-468。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：10-18、42-63的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸293-468的反义化合物选自ISIS NO：420877、420878、420879、420880、304280、420881、420882、420883、304284、304285、420884、420885、304286、420886、420887、420888、420889、420890、420891、304287、420892、304288、420893、304289、304290、420894、420895、420896、420897、420898或304291。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸425-468。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸425-468。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：11-18、49-63的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向SEQ ID NO：1的核苷酸425-468的反义化合物选自ISIS NO：304284、304285、420884、420885、304286、420886、420887、420888、420889、420890、420891、304287、420892、304288、420893、304289、304290、420894、420895、420896、420897、420898或304291。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸425-467。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸425-468。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：11-17、49-63的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸425-468的反义化合物选自ISIS NO：304284、304285、420884、420885、304286、420886、420887、420888、420889、420890、420891、304287、420892、304288、420893、304289、304290、420894、420895、420896、420897或420898。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸452-476。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸 452-476。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：64-69的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸452-476的反义化合物选自ISISNO：420889、420890、420891、304287、420892、304288、420893、304289、304290、420894、420895、420896、420897、420898、304291、304292、304293、420899、420900、420901、420902、420903或420904。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸461-481。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸461-481。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：72-73的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸461-481的反义化合物选自ISISNO：420907或420908。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸461-500。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸461-500。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：22、72和73的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸461-500的反义化合物选自ISIS NO：420907、420908或304296。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸500-519。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸500-519。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：74的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸500-519的反义化合物选自ISISNO：420909。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸461-519。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸461-519。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化 合物包含选自SEQ ID NO：22、23、72-74的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸461-519的反义化合物选自ISIS NO：420907、420908、304296或420909。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸502-531。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸502-531。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：25、75-84的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸502-531的反义化合物选自ISIS NO：420910、420911、420912、420913、420914、304299、420915、420916、420917、420918或420919。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸502-539。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸502-539。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：25、26、75-91的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸502-539的反义化合物选自ISIS NO：420910、420911、420912、420913、420914、304299、420915、420916、420917、420918、420919、304300、420920、420921、420922、420923、420924、420925或420926。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸504-536。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸504-536。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：25、26、77-88的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸504-536的反义化合物选自ISIS NO：420912、420913、420914、304299、420915、420916、420917、420918、420919、304300、420920、420921、420922或420923。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸505-535。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸 505-535。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：25、26、78-87的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸505-535的反义化合物选自ISIS NO：420913、420914、304299、420915、420916、420917、420918、420919、304300、420920、420921或420922。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸506-530。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸506-530。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：25、79-83的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸506-530的反义化合物选自ISIS NO：420913、420914、304299、420915、420916、420917、420918或420919。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸507-527。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸507-527。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：25或80的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸507-527的反义化合物选自ISIS NO：304299或420915。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸508-527。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸508-527。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：80的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸508-527的反义化合物选自ISISNO：420915。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸514-540。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸514-540。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化 合物包含选自SEQ ID NO：85-92的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸514-540的反义化合物选自ISISNO：420920、420921、420922、420923、420924、420925、420926或420927。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸523-542。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸523-542。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：94的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸523-542的反义化合物选自ISISNO：420929。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸544-606。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸544-606。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：30-33、112-122的核碱基序列。在某些此类实施方案中，SEQ ID NO：1的核苷酸544-606的反义化合物选自ISIS NO：420947、420948、304304、304307、304308、304309、420949、420950、420951、420952、420953、420954、420955、420956或420957。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸544-564。在某些实施方案中，反义化合物靶向于核苷酸544-564 of SEQ ID NO：1。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：112-113的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸544-564的反义化合物选自ISIS NO：420947或420948。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸544-583。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸544-583。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：30、31、112和113的核碱基序列。在某 些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸544-583的反义化合物选自ISIS NO：420947、420948、304304或304307。 
在某些实施方案中，靶区域是SEQ ID NO：1的核苷酸597-617。在某些实施方案中，反义化合物靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸597-617。在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含选自SEQ ID NO：34-35的核碱基序列。在某些此类实施方案中，靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸597-617的反义化合物选自ISISNO：304311或304312。 
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由单链经修饰的寡核苷酸组成。 
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成。 
在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核碱基序列在其整个长度上与SEQ ID NO：1、2或4的核碱基序列至少90％互补。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核碱基序列与SEQ ID NO：1、2或4的核碱基序列至少95％互补。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸在其整个长度上与SEQ ID NO：1、2或4至少99％互补。在某些实施方案中，经修饰的寡核苷酸的核碱基序列在其整个长度上与SEQ ID NO：1、2或4的核碱基序列100％互补。 
在某些实施方案中，所述化合物具有至少一个经修饰的核苷间键合。在某些实施方案中，核苷间键合是硫代磷酸酯核苷间键合。 
在某些实施方案中，所述化合物具有至少一个包含经修饰的糖的核苷。在某些实施方案中，至少一种经修饰的糖是双环糖。在某些实施方案中，至少一个双环糖包含4’-CH(CH3)-O-2’桥。在某些实施方案中，至少一种经修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。 
在某些实施方案中，所述化合物包含至少一个经四氢吡喃修饰的核苷，其中四氢吡喃环代替呋喃糖环。在某些实施方案中，至少一个 经四氢吡喃修饰的核苷具有以下结构： 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900431
其中Bx是任选保护的杂环碱基部分。 
在某些实施方案中，所述化合物具有至少一个包含经修饰的核碱基的核苷。在某些实施方案中，经修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。 
在某些实施方案中，所述化合物的经修饰的寡核苷酸包含： 
(i)由连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
(ii)由连接核苷组成的的5′翼区段； 
(iii)由连接核苷组成的3′翼区段，其中缺口区段位于5′翼区段与3′翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含经修饰的糖。 
在某些实施方案中，所述化合物的经修饰的寡核苷酸包含： 
(i)由10个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
(ii)由5个连接核苷组成的的5′翼区段； 
(iii)由5个连接核苷组成的的3′翼区段，其中缺口区段位于紧邻5′翼区段与3′翼区段以及位于5′翼区段与3′翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；并且其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合。 
在某些实施方案中，所述化合物的经修饰的寡核苷酸包含： 
(i)由8个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
(ii)由6个连接核苷组成的的5′翼区段； 
(iii)由6个连接核苷组成的的3′翼区段，其中缺口区段位于紧邻5′翼区段与3′翼区段以及位于5′翼区段与3′翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；并且其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合。 
在某些实施方案中，所述化合物的经修饰的寡核苷酸包含： 
(i)由8个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
(ii)由5个连接核苷组成的的5′翼区段； 
(iii)由5个连接核苷组成的的3′翼区段，其中缺口区段位于紧邻5′翼区段与3′翼区段以及位于5′翼区段与3′翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；并且其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合。 
在某些实施方案中，所述化合物的经修饰的寡核苷酸包含： 
(i)由10个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
(ii)由5个连接核苷组成的的5′翼区段； 
(iii)由5个连接核苷组成的的3′翼区段，其中缺口区段位于紧邻5′翼区段与3′翼区段以及位于5′翼区段与3′翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；并且其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合；并且其中所述核碱基序列包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的的至少8个连续核碱基。 
在某些实施方案中，所述化合物的经修饰的寡核苷酸包含： 
(i)由10个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
(ii)由5个连接核苷组成的的5′翼区段； 
(iii)由5个连接核苷组成的的3′翼区段，其中缺口区段位于紧邻5′翼区段与3′翼区段以及位于5′翼区段与3′翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；并且其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合；并且其中所述核碱基序列述于SEQ ID NO：80中。 
某些实施方案提供了包含本文描述的化合物或其盐、和药学上可接受的载体或稀释剂的组合物。在某些实施方案中，组合物包含由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列(包含选自SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的核碱基序列的至少12个连续核碱基)的经修饰的寡核苷酸或其盐和药学上可接受的载体或稀释剂。 
某些实施方案提供了包含本文描述的化合物或其盐和药学上可接受的载体或稀释剂的组合物。在某些实施方案中，组合物包含由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列(包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少12个连续核碱基)的经修饰的寡核苷酸或其盐和药学上可接受的载体或稀释剂。 
某些实施方案提供了包含本文描述的化合物的组合物，其中粘度水平少于40cP。在某些实施方案中，组合物的粘度水平少于15cP。在某些实施方案中，组合物的粘度水平少于12cP。在某些实施方案中，组合物的粘度水平少于10cP。 
某些实施方案提供了治疗、预防或减轻转甲状腺素蛋白淀粉样变性的方法。 
某些实施方案提供了包括向动物施用本文描述的化合物的方法。在某些实施方案中，该方法包括向动物施用由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列(包含选自SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的核碱基序列的至少8个连续核碱基)的经修饰的寡核苷酸。 
某些实施方案提供了包括向动物施用本文描述的化合物的方法。在某些实施方案中，该方法包括向动物施用由12至30个连接核苷组成的化合物或经修饰的寡核苷酸，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸501-535或580-608的区域内的等长部分的至少8个连续核碱基部分互补。 
某些实施方案提供了包括向动物施用本文描述的化合物的方法。在某些实施方案中，该方法包括向动物施用由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列(包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少8个连续核碱基)的经修饰的寡核苷酸。 
某些实施方案提供了包括向动物施用本文描述的化合物的方法。在某些实施方案中，该方法包括向动物施用由12至30个连接核苷组成的化合物或经修饰的寡核苷酸，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸508-527的区域内的等长部分的至少8个连续核碱基部分互补。 
在某些实施方案中，动物是人。 
在某些实施方案中，所述施用预防、治疗、减轻或延缓本文所述的转甲状腺素蛋白淀粉样变性的进展。 
在某些实施方案中，共施用所述化合物与第二活性剂。 
在某些实施方案中，伴随施用所述化合物和第二活性剂。 
在某些实施方案中，所述施用是胃肠外施用。在某些实施方案中，胃肠外施用是皮下施用。在某些实施方案中，用于施用的制剂是盐水中的化合物。在某些实施方案中，所述化合物包含由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列(包含选自SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的核碱基序列的核碱基序列的至少12个连续核碱基)的经修饰的寡核苷酸或其盐和盐水。在某些实施方案中，制剂不包括任何稳定剂或额外的稳定剂(包括脂质剂)。 
在某些实施方案中，所述施用是胃肠外施用。在某些实施方案中，胃肠外施用是颅内施用。在某些实施方案中，颅内施用是脑内、鞘内、室内、室、脑室内、脑的室内或脑室施用。 
某些实施方案进一步提供了减少动物中的转甲状腺素蛋白mRNA或蛋白表达的方法，包括向动物施用本文所述的化合物或组合物以减少动物中的转甲状腺素蛋白mRNA或蛋白表达。在某些实施方案中，动物是人。在某些实施方案中，减少转甲状腺素蛋白mRNA或蛋白表达预防、治疗、减轻或延缓转甲状腺素蛋白淀粉样变性的进展。 
某些实施方案提供了用于治疗患有转甲状腺素蛋白相关疾病的人的方法，包括鉴定患有疾病的人和向所述人施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物。在某些实施方案中，治疗减少选自由以下组成的组的症状：坐立不安、缺乏协调、眼球震颤、痉挛性下肢轻瘫、缺乏肌肉协调、视觉受损、失眠症、罕见感觉、肌阵挛、失明、失语症、腕管综合征、癫痫发作、蛛网膜下腔出血、脑的中风和出血、脑水肿、共济失调、和痉挛性麻痹、昏迷、感觉性神经病变、感觉异常、感觉减退、运动神经病变、自身性神经病变、直立性神经病变、直立性低血压、循环便秘、循环腹泻、恶心、呕吐、减少出汗、阳痿、胃排空延迟、尿潴留、尿失禁、进展性心脏病、疲劳、呼吸急促、体重减轻、食欲缺乏、麻木、发麻、虚弱、舌肿大、肾病变综合征、充血性心力衰竭、运动性呼吸困难、外周性水肿、心律不齐、心悸、头晕、晕厥、直立性低血压、外周神经问题、感觉运动受损、下肢神经病变、痛觉过敏、改变的温度感觉、下肢衰弱、恶病质、外周性水肿、肝肿大、紫癜、舒张期功能障碍、早产儿心室收缩、颅神经病变、深部肌腱反射减少、玻璃体中的淀粉样沉积、玻璃体混浊、干眼、青光眼、斜瞳孔中的齿状外观、由水分保持引起的足肿胀。在某些实施方案中，症状是选自由以下组成的组的认知症状：记忆力受损、判断受损和思考、计划受损、灵活性受损、抽象思维受损、规则获取受损、适当行动起始受损、不适当行动受损、短时记忆受损、长期记忆受损、偏执 狂、定向障碍、混乱、幻觉和痴呆。在某些实施方案中，症状是由以下组成的组的精神症状：痴呆；焦虑症、抑郁症、感情迟钝、自我中心症(egocentrism)、攻击性、强迫行为、易怒、人格改变(包括记忆力受损、判断和思考)以及自杀观念。 
进一步的实施方案提供了治疗患有引发心脏淀粉样变性的转甲状腺素蛋白淀粉样变性的人并且向人施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物的方法。在某些实施方案中，治疗减少选自由以下组成的组的症状：充血性心力衰竭、心脏肥大、运动性呼吸困难、外周性水肿、心律不齐、心悸、头晕、晕厥、外周脉管系统的内皮下膜的沉积可导致重度体位性低血压、舒张期功能障碍、心传导阻滞、早产儿心室收缩和各种快速型心律不齐。 
进一步的实施方案提供了治疗患有引发外周神经病性病症的转甲状腺素蛋白淀粉样变性的人并且向人施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物的方法。在某些实施方案中，治疗减少由以下组成的组的症状：外周神经问题、感觉运动受损、下肢神经病变、上肢神经病变、痛觉过敏、温度感觉改变、下肢衰弱、疼痛、自律功能障碍(常表现为性或泌尿功能障碍)、全身性感觉受损和虚弱、直立性低血压、腹泻和/或阳痿。 
进一步的实施方案提供了治疗患有引发胃肠病症的转甲状腺素蛋白淀粉样变性的人并且向人施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物的方法。在某些实施方案中，治疗减少由以下组成的组的症状：腹泻、便秘、恶心、呕吐和相关肾脏和肝脏病症。 
进一步提供的是用于减少或预防转甲状腺素蛋白淀粉样变性的方法，包括向人施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物，由此减少或预防转甲状腺素蛋白淀粉样变性。 
进一步提供的是用于减少或预防心脏疾病的方法，包括向人施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物，由此减少或预防心脏疾 病。进一步提供的是用于减少或预防神经病性疾病的方法，包括向人施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物，由此减少或预防神经病性疾病。进一步提供的是用于减少或预防胃肠疾病的方法，包括向人施用治疗有效量的本文所述的化合物或组合物，由此减少或预防胃肠疾病。 
进一步提供的是用于减转甲状腺素蛋白淀粉样变性的症状的方法，包括向需要其的人施用包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1、2或4特异性杂交，由此减轻人中转甲状腺素蛋白淀粉样变性的症状。 
进一步提供的是用于减少与转甲状腺素蛋白淀粉样变性相关的症状的进展的速率的方法，包括向需要其的人施用包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1、2或4特异性杂交，由此减少人中转甲状腺素蛋白淀粉样变性的症状的进展的速率。 
进一步提供的是用于逆转由与转甲状腺素蛋白淀粉样变性相关的症状指示的退化的方法，向需要其的人施用包含由12至30个连接核苷的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1、2或4特异性杂交，由此逆转人中由转甲状腺素蛋白淀粉样变性的症状指示的退化。 
进一步提供的是用于减轻转甲状腺素蛋白淀粉样变性的症状的方法，包括向需要其的人施用包含由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列(包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少8个连续核碱基)的经修饰的寡核苷酸的化合物，由此减轻人中转甲状腺素蛋白淀粉样变性的症状。 
进一步的实施方案提供了治疗患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的人的方法，向需要其的人施用包含由12至30个连接核苷组成并且具有核碱基序列(包含SEQ ID NO：80中所述的核碱基序列的至少8 个连续核碱基)的经修饰的寡核苷酸的化合物，由此治疗人中的转甲状腺素蛋白淀粉样变性。 
在某些实施方案中，症状是身体的、认知的、精神病的或外周症状。在某些实施方案中，症状是选自由以下组成的组的身体症状：坐立不安、缺乏协调、眼球震颤、痉挛性下肢轻瘫、缺乏肌肉协调、视觉受损、失眠症、罕见感觉、肌阵挛、失明、失语症、腕管综合征、癫痫发作、蛛网膜下腔出血、脑的中风和出血、脑水肿、共济失调、和痉挛性麻痹、昏迷、感觉性神经病变、感觉异常、感觉减退、运动神经病变、自身性神经病变、直立性神经病变、直立性低血压、循环便秘、循环腹泻、恶心、呕吐、减少出汗、阳痿、胃排空延迟、尿潴留、尿失禁、进展性心脏病、疲劳、呼吸急促、体重减轻、食欲缺乏、麻木、发麻、虚弱、舌肿大、肾病变综合征、充血性心力衰竭、运动性呼吸困难、外周性水肿、心律不齐、心悸、头晕、晕厥、直立性低血压、外周神经问题、感觉运动受损、下肢神经病变、痛觉过敏、改变的温度感觉、下肢衰弱、恶病质、外周性水肿、肝肿大、紫癜、舒张期功能障碍、早产儿心室收缩、颅神经病变、深部肌腱反射减少、玻璃体中的淀粉样沉积、玻璃体混浊、干眼、青光眼、斜瞳孔中的齿状外观、由水分保持引起的足肿胀。 
在某些实施方案中，症状是选自由以下组成的组的认知症状：记忆力受损、判断受损和思考、计划受损、灵活性受损、抽象思维受损、规则获取受损、适当行动起始受损、不适当行动受损、短时记忆受损、长期记忆受损、偏执狂、定向障碍、混乱、幻觉和痴呆。在某些实施方案中，症状是由以下组成的组的精神症状：痴呆；焦虑症、抑郁症、感情迟钝、自我中心症、攻击性、强迫行为、易怒、人格改变(包括记忆力受损、判断和思考)以及自杀观念。 
在某些实施方案中，症状是至少一种身体症状、至少一种认知症状、至少一种精神症状和至少一种外周症状中的至少一种。 
在某些实施方案中，身体症状选自由以下组成的组：坐立不安、缺乏协调、无意引发的运动、无意未完成的运动、不稳定步态、舞蹈病、僵硬、扭体运动、异常姿势、不稳定性、异常面部表达、咀嚼困难、吞咽困难讲话困难、癫痫发作和睡眠紊乱。 
在某些实施方案中，认知症状选自由以下组成的组：记忆受损、判断受损和思考、计划受损、灵活性受损、抽象思维受损、规则获取受损、适当行动起始受损、不适当行动受损、短时记忆受损、长期记忆受损、偏执狂、定向障碍、混乱、幻觉和痴呆。 
在某些实施方案中，精神症状选由以下组成的组：痴呆；焦虑症、抑郁症、感情迟钝、自我中心症、攻击性、强迫行为、易怒、人格改变(包括记忆力受损、判断和思考)以及自杀观念。 
在某些实施方案中，外周症状选自由以下组成的组：脑质量减少、肌肉萎缩、心力衰竭、葡萄糖耐量受损、体重减轻、骨质疏松症和睾丸萎缩。 
还提供的是用于制备用于治疗、预防或减轻中枢神经系统相关疾病的药物的方法和化合物。 
某些实施方案提供了本文描述的化合物在制备治疗、减轻或预防转甲状腺素蛋白淀粉样变性的药物中的用途。 
某些实施方案提供了用于通过与本文描述的其它活性剂或治疗的组合治疗来治疗、预防或减轻本文所述的转甲状腺素蛋白淀粉样变性的本文描述的化合物。可以共施用或伴随施用活性剂或治疗。 
某些实施方案提供了本文描述的化合物在制备通过与本文描述的其它活性剂或治疗的组合治疗来治疗、预防或减轻本文所述的转甲状腺素蛋白淀粉样变性的药物中的用途。可以共施用或伴随施用活性剂或治疗。 
某些实施方案提供了本文描述的化合物在制备用于治疗、预防或减轻随后被施用本文描述的其它活性剂或治疗的患者中本文所述的转甲状腺素蛋白淀粉样变性的药物中的用途。 
某些实施方案提供了用于治疗、预防或减轻本文所述的转甲状腺素蛋白淀粉样变性的试剂盒，其中所述试剂盒包含： 
(i)本文描述的化合物；和可选地 
(ii)本文描述的其它活性剂或治疗。 
本文所述的试剂盒还可包括用于使用该试剂盒通过本文所述的组合治疗来治疗、预防或减轻本文所述的转甲状腺素蛋白淀粉样变性。 
反义化合物 
寡聚化合物包括但不限于，寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸类似物、寡核苷酸模拟物、反义化合物、反义寡核苷酸和siRNA。寡聚化合物可以与靶核酸“反义”，意指能够通过氢键合与靶核酸经受杂交。 
在某些实施方案中，反义化合物具有这样的核碱基序列，当其以5′至3′方向书写时包含其所靶向的靶核酸的靶区段的反向补体序列。在某些此类实施方案中，反义寡核苷酸具有这样的核碱基序列，当其以5′至3′方向书写时包含其所靶向的靶核酸的靶区段的反向补体序列。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物的长度为12至30个核苷酸。换句话说，反义化合物为12至30个连接核碱基。在其它实施方案中，反义化合物包含由8至80、12至50、12至30、15至30、18至24、18至21、19至22个或20个连接核碱基组成的经修饰的寡核苷酸。在某些此类实施方案中，反义化合物包含经修饰的寡核苷酸，所述经修饰的寡核苷酸由长度为8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80个连接核碱基、或由上述值中的任何两个所定义的范围组成。 
在某些实施方案中，反义化合物包含缩短的或截短的经修饰的寡核苷酸。缩短的或截短的经修饰的寡核苷酸可具有从5′端(5’截短)、或可选地从3′端(3’截短)缺失的单一核苷。缩短的或截短的寡核苷酸可具有两个从5′端缺失的核苷、或可选地可具有两个亚单元从3′端缺失的核苷。可选地，缺失的核苷可遍及经修饰的寡核苷酸分散，例如在具有一个从5′端缺失的核苷和一个从3′端缺失的核苷的反义化合物中。 
当单个额外的核苷存在于延长的寡核苷酸中时，额外的核苷可位于寡核苷酸的5’或3′端。当存在两个或或更多个额外的核苷时，添加的核苷可彼此相邻，例如在具有两个添加至寡核苷酸的5′端(5’添加)或可选地至3′端(3’添加)或中央部分的核苷的寡核苷酸中。可选地，所添加的核苷可遍及反义化合物分散，例如在具有一个添加至5′端的核苷和一个添加至3′端的亚单元的寡核苷酸中。 
可能增加或减少反义化合物例如反义寡核苷酸的长度，和/或可能引入错配碱基而消除活性。例如，在Woolf等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA89：7305-7309，1992)中，测试长度为13-25个核碱基的一系列反义寡核苷酸诱导靶RNA在卵母细胞注射模型中的切割的能力。在邻近反义寡核苷酸的末端处具有8或11个错配碱基的长度为25个核碱基的反义寡核苷酸能够指导靶mRNA的特异性切割，尽管达到比不含错配的反义寡核苷酸小的程度。同样地，使用13个核碱基反义寡核苷酸(包括具有1或3个错配的那些)实现靶特异性切割。 
Gautschi等人(J.Natl.Cancer Inst.93：463-471，2001年3月)证明了与bcl-2mRNA具有100％互补性并且具有与bcl-xL mRNA的3个错配的寡核苷酸减少在体外和体内表达bcl-2和bcl-xL两者的能力。而且，该寡核苷酸在体内证明了有效的抗-肿瘤活性。 
Maher和Dolnick(Nuc.Acid.Res.16：3341-3358，1988)分别测试了一系列串联14个核碱基反义寡核苷酸以及由2个或3个串联反义寡核苷酸的序列组成的28和42核碱基反义寡核苷酸阻止人DHFR在兔网状细胞测定中的翻译的能力。三个14核碱基反义寡核苷酸中的每一个单独地能够抑制翻译，尽管以比28或42核碱基反义寡核苷酸更适度的水平抑制翻译。 
反义化合物基序 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物具有排列在模型或基序中的经化学修饰的亚单位以赋予反义化合物性质例如增强的抑制活性、增加的对靶核酸的结合亲和力或体内核酸酶对降解的抵抗。 
嵌合反义化合物通常包含至少一个经修饰的区域以赋予增加的对核酸酶降解的抵抗、增加在细胞摄取、增加的对靶核酸的结合亲和力和/或增加的抑制活性。嵌合反义化合物的第二区域可任选地用作细胞内切核酸酶RNA酶H的底物，其切割RNA：DNA双链体的RNA链。 
具有缺口基体基序的反义化合物被认为是嵌合反义化合物。在缺口基体中，具有多个支持RNAeH切割的核苷酸或连接核苷的内部区域位于具有在化学上不同于内部区域的核苷酸或连接核苷的多个核苷酸或连接核苷的外部区域之间。在具有缺口基体基序的反义寡核苷酸的情况下，缺口区段通常用作内切核酸酶切割的底物，尽管翼区段包含经修饰的核苷。在某些实施方案中，缺口基体的区域通过包含每个不同区域的糖部分类型来区分。用于区分缺口基体的区域的糖部分 类型可在一些实施方案中包括β-D-核糖核苷、β-D-脱氧核糖核苷、2′-修饰的核苷(此类2’-修饰的核苷此外还可包括2’-MOE和2’-O-CH3)和经双环糖修饰的核苷(此类经双环糖修饰的核苷可包括具有4’-(CH2)n-O-2’桥的那些，其中n＝1或n＝2)。优选地，每个不同区域包含一致的糖部分。翼-缺口-翼基序常被称为“X-Y-Z”，其中“X”表示5’翼区域的长度，“Y”表示缺口区域的长度，以及“Z”表示3’翼区域的长度。如本文所用的，称为“X-Y-Z”的缺口基体具有这样的构型以使缺口区段的位置与5’翼区段与3′翼区段中的每个直接相邻。因此，没有插入核苷酸存在于5’翼区段与缺口区段、或缺口区段与3’翼区段之间。本文描述的任何反义化合物可具有缺口基体基序。在一些实施方案中，X和Z相同，在其它实施方案中，它们是不同的。在优选的实施方案中，Y为8至15个核苷酸。X、Y或Z可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30个或更多个核苷酸中的任一个。因此，缺口基体包括但不限于，例如5-10-5、4-8-4、4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、6-8-6或5-8-5。 
在某些实施方案中，作为“翼基体(wingmer)”基序的反义化合物具有翼-缺口或缺口-翼构型，即本文对于缺口基体构型所述的X-Y或Y-Z构型。因此，翼基体构型包括但不限于，例如5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13或5-13。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物具有5-10-5缺口基体基序。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物具有6-8-6缺口基体基序。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物具有5-8-5缺口基体基序。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物具 有缺口加宽的基序。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的缺口加宽的反义寡核苷酸具有位于紧邻5个经化学修饰的核苷的翼区段和位于5个经化学修饰的核苷的翼区段之间的10个2’-脱氧核糖核苷酸的缺口区段。在某些实施方案中，化学修饰包含2’-糖修饰。在另一个实施方案中，化学修饰包含2’-MOE糖修饰。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的缺口加宽的反义寡核苷酸具有位于紧邻5个经化学修饰的核苷的翼区段和位于5个经化学修饰的核苷的翼区段之间的8个2’-脱氧核糖核苷酸的缺口区段。在某些实施方案中，化学修饰包含2’-糖修饰。在另一个实施方案中，化学修饰包含2’-MOE糖修饰。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的缺口加宽的反义寡核苷酸具有位于紧邻6个经化学修饰的核苷的翼区段和位于6个经化学修饰的核苷的翼区段之间的8个2’-脱氧核糖核苷酸的缺口区段。在某些实施方案中，化学修饰包含2’-糖修饰。在另一个实施方案中，化学修饰包含2’-MOE糖修饰。 
靶核酸、靶区域和核苷酸序列 
在某些实施方案中，转甲状腺素蛋白核酸是于2008年2月13日首次保藏于
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900561
的GENBANK登记号NM_000371.2(以SEQID NO：1并入本文)、于2002年8月1日首次保藏于
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900562
的从核苷酸2009236至2017289截短的GENBANK登记号NT_010966.10(以SEQ ID NO：2并入本文)；基于与人外显子的类似性从恒河猴基因组序列GENBANK登记号NW_001105671.1提取的外显子1-4；和于2006年3月28日首次保藏于的从核苷酸628000至638000截短的GENBANK登记号NW_001105671.1(以SEQ ID NO：4并入本文)中列出的任何序列。 
应理解，本文所含的实施例中每个SEQ ID NO所列的序列与糖部分、核苷间键合或核碱基的任何修饰无关。照这样，由SEQ ID NO定义的反义化合物可独立地包含糖部分、核苷间键合或核碱基的一或多个修饰。由Isis号(Isis No)或ISIS NO所述的反义化合物指示核碱基序列和基序的组合。 
在某些实施方案中，靶区域是靶核酸的结构上限定的区域。例如，靶区域可包含3’UTR、5’UTR、外显子、内含子、外显子/内含子接头、编码区、翻译起始区、翻译终止区或其它定义的核酸区域。转甲状腺素蛋白的结构上定义的区域可通过序列数据库例如NCBI的登记号获得并且此类信息通过引用并入本文。在某些实施方案中，靶区域可包含靶区域内的一个靶区段的5’靶位点的序列至靶区域内的另一靶区段的3’靶位点。 
靶向包括确定反义化合物与其杂交以使所需效应发生的至少一个靶区段。在某些实施方案中，所需效应是mRN靶核酸水平减少。在某些实施方案中，所需效应是通过靶核酸或与靶核酸相关的表型改变编码的蛋白的水平的降低。 
靶区域可包含一个或多个靶区段。靶区域内的多个靶区段可以重叠。可选地，它们可以是非重叠的。在某些实施方案中，靶区域内的靶区段被最多约300个核苷酸间隔。在某些实施方案中，靶区域内的靶区段被多个核苷酸(为、约为、最多、最多为靶核酸上的250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10个核苷酸)间隔，或为由任何两个前述值定义的范围。在某些实施方案中，靶区域内的靶区段被靶核酸上的最多或最多约5个核苷酸间隔。在某些实施方案中，靶区段是连续的。考虑的是通过具有起始核酸(为本文所列的5’靶位点或3’靶位点的任一个)的范围定义的靶区域。 
可在5’UTR、编码区、3’UTR、内含子、外显子或外显子/内含子接头内发现适合的靶区段。包含起始密码子或终止密码子的靶区段 也是适合的靶区段。适合的靶区段可明确地排除某种结构上定义的区域例如起始密码子或终止密码子。 
适合的靶区段的确定可包括靶核酸序列与其它序列通过基因组的比较。例如，BLAST算法可用于在不同核酸中鉴定相似性区域。这种比较可防止可以与序列而不是所选靶核酸(即，非-靶或脱-靶序列)以非特异性方式杂交的反义化合物序列的选择。 
可存在反义化合物在活性靶区域内的活性(例如，由靶核酸水平减少百分比所定义的)的变化。在某些实施方案中，转甲状腺素蛋白mRNA水平的减少指示转甲状腺素蛋白表达的抑制。转甲状腺素蛋白水平的减少也指示靶mRNA表达的抑制。此外，表型改变指示转甲状腺素蛋白表达的抑制。例如，在其它表型改变中，脑尺寸相比于正常的增加、运动协调的提高、连续肌肉痉挛(张力障碍)的减少、应激性和/或焦虑症的下降、记忆改善或能量增加可以被测定。其它表型指征例如与转甲状腺素蛋白淀粉样变性相关的症状也可如下文所述被评价。 
杂交 
在一些实施方案中，杂交在本文公开的反义化合物与转甲状腺素蛋白核酸之间发生。最为常见的杂交机理包括核酸分子的互补核碱基之间的氢键合(例如，Watson-Crick、Hoogsteen或反向Hoogsteen氢键合)。 
杂交可在不同条件下发生。严格条件是序列依赖性的并且由待杂交的核酸分子的性质和组分决定。 
确定序列是否可特异性与靶核酸杂交的方法是本领域所熟知的。在某些实施方案中，本文提供的反义化合物可与转甲状腺素蛋白核酸特异性杂交。 
互补性 
当反义化合物的足够量的核碱基可与靶核酸的相应核碱基发生氢键合，反义化合物和靶核酸彼此互补以使所需效应发生(例如，靶核酸例如转甲状腺素蛋白核酸的反义抑制)。 
反义化合物可在转甲状腺素蛋白核酸的一个或多个区段上杂交以使插入或相邻区段不参与杂交事件(例如，环结构、错配或发夹结构)。 
在某些实施方案中，本文提供的反义化合物或其特定部分与转甲状腺素蛋白核酸、靶区域、靶区段或其特定部分具有或至少具有70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。具有靶核酸的反义化合物的互补性百分比可使用常规方法来测定。 
例如，反义化合物的18至20个核碱基与靶区域互补并且将由此特异性杂交的反义化合物代表90％互补性。在此实例中，剩余的非-互补核碱基可与互补核碱基簇生或散开并且不需彼此连续或与互补核碱基连续。照这样，长度为18个核碱基的具有4(4)个非-互补核碱基(其通过完全互补性的两个区域与靶核酸侧翼连接)的反义化合物将与靶核酸具有77.8％全互补性并且因此在本发明的范围内。反义化合物与靶核酸区域的互补性百分比可常规地使用本领域已知的BLAST程序(基础定点校准研究工具)和PowerBLAST程序(Altschul等人，J.Mol.Biol.，1990，215，403 410；Zhang和Madden，Genome Res.，1997，7，649 656)来测定。同源性、序列同一性或互补性的百分比可通过例如，Gap程序(Wisconsin序列分析包，Version 8 for Unix，Genetics Computer Group，University Research Park，Madison Wis.)、利用使用Smith和Waterman的算法(Adv.Appl.Math.，1981，2，482489)的缺省设定来测定。 
在某些实施方案中，本文提供的反义化合物或或其特定部分与靶 核酸、或其特定部分完全互补(即100％互补)。例如，反义化合物可与转甲状腺素蛋白核酸、或靶区域、或靶区段或其靶序列完全互补。如本文所用的，“完全互补”意指反义化合物的每个核碱基能够与靶核酸的相应核碱基精确碱基配对。例如，20核碱基反义化合物与400核碱基长的靶序列完全(100％)互补，只要存在与反义化合物完全互补的靶核酸的相应20核碱基部分。提及第一和/或第二核酸的特定部分时，还可使用完全互补。例如，30核碱基反义化合物的20核碱基部分可与400核碱基长的靶序列“完全互补”。30核碱基寡核苷酸的20核碱基部分与靶序列“完全互补”，如果靶序列具有相应的20核碱基部分，其中每个核碱基与反义化合物的20核碱基部分互补。同时，整个30核碱基反义化合物可能或可能不与靶序列完全互补，取决于反义化合物的剩余10核碱基是否也与靶序列互补。 
非-互补核碱基的位置可在反义化合物的5′端或3′端。可选地，非-互补核碱基或核碱基可以在反义化合物的内部位置。当存在两个或更多个非-互补核碱基时，它们可以是连续(即连接)或非连续的。在一个实施方案中，非-互补核碱基位于缺口基体反义寡核苷酸的翼区段。 
在某些实施方案中，长度为或至多为12、13、14、15、16、17、18、19或20个核碱基的反义化合物包含相对于与靶核酸例如转甲状腺素蛋白核酸或其特定部分的最多4个、最多3个、最多2个或最多1个非-互补核碱基。 
在某些实施方案中，长度为或至多为12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核碱基的反义化合物包含相对于靶核酸例如转甲状腺素蛋白核酸或其特定部分的最多6个、最多5个、最多4个、最多3个、最多2个或最多1个非-互补核碱基。 
本文提供的反义化合物还包括与靶核酸的一部分互补的那些。如 本文所用的，“部分”是指在靶核酸的区域或区段内的确定数量的连续(即连接)核碱基。“部分”还可以是指反义化合物中确定数量的连续核碱基。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段的至少8个核碱基部分互补。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段的至少120个核碱基部分互补。在某些实施方案中，与靶区段的至少15个核碱基部分互补。还考虑的是与靶区段的至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个核碱基部分、或由这些值中的任何两个所定义的范围互补的反义化合物。 
同一性 
本文提供的反义化合物还可与特定核苷酸序列、SEQ ID NO或由特定Isis号所示的化合物或其部分具有确定的同一性百分比。如本文所用的，反义化合物与本文公开的序列具有同一性，如果其具有相同的核碱基配对能力。例如，公开的DNA序列中包含替代胸苷的尿嘧啶的RNA将被认为与DNA序列具有同一性，因为尿嘧啶和胸苷两者与腺嘌呤配对。还考虑本文所述的反义化合物以及具有与本文提供的反义化合物相关的非-相同碱基的化合物的缩短的和延长的形式。非-相同碱基可彼此相邻或遍及反义化合物分散。根据具有与其所相比较的序列相关的相同碱基配对的碱基数计算反义化合物的同一性百分比。 
在某些实施方案中，反义化合物或其部分与一个或多个反义化合物或SEQ ID NO或其本文公开的部分具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。 
修饰 
核苷是碱基-糖组合。核苷的核碱基(也称为碱基)部分通常为杂环碱基部分。核苷酸是还包括共价连接于核苷的糖部分的磷酸基的核苷。对于那些包括戊呋喃糖基糖的核苷，磷酸基可连接于糖的2′、3′或5′羟基部分。寡核苷酸通过相邻核苷彼此的共价键合而形成，以形 成线性聚合寡核苷酸。在寡核苷酸结构内，磷酸基通常被称为形成寡核苷酸的核苷间键合。 
对反义化合物的修饰包括对核苷间键合、糖部分或核碱基的取代或改变。因为所需性质例如，例如增加的细胞摄取、增强的对核酸靶的亲和力以及增加的在核酸酶存在下的稳定性、或增加的抑制活性，与天然形式相比，通常优选经修饰的反义化合物。 
还可以比较经化学修饰的核苷以增加缩短的或截短的反义寡核苷酸对于其靶核酸的结合亲和力。因此，通常可用具有此类经化学修饰的核苷的较短的反义化合物获得类似的结果。 
经修饰的核苷间键合 
RNA和DNA的天然存在核苷间键合是3′至5′磷酸二酯键合。因为所需的性质例如，增加的细胞摄取、增强的对靶核酸的亲和力以及增加的在核酸酶存在下的稳定性，与具有天然存在核苷间键合的反义化合物相比，通常选择具有一个或多个修饰的即非-天然存在的核苷间键合的反义化合物。 
寡核苷酸具有经修饰的核苷间键合，包括保留磷原子的核苷间键合以及不具有磷原子的的核苷间键合。代表性含磷核苷间键合包括但不限于，磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯、和硫代磷酸酯。制备含磷和非-含磷键合的方法是熟知的。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含一个或多个经修饰的核苷间键合。在某些实施方案中，经修饰的核苷间键合是硫代磷酸酯键合。在某些实施方案中，反义化合物的每个核苷间键合是硫代磷酸酯核苷间键合。 
经修饰的糖部分 
本发明的反义化合物可任选地包含一个或多个核苷，其中糖基团 已被修饰。此类经糖修饰的核苷可赋予反义化合物增强的核酸酶稳定性、增加的结合亲和力或一些其它有益的生物学性质。在某些实施方案中，核苷包含经化学修饰的呋喃核糖环部分。经化学修饰的呋喃核糖环的实例包括但不限于添加取代基基团(包括5′和2′取代基基团)、桥接非孪位环原子以形成双环核酸(BNA)、用S、N(R)或C(R1)(R2)(R、R1和R2各自独立地是H、C1-C12烷基或保护基团)替代核糖基环氧原子及其组合。经化学修饰的糖的实例包括2′-F-5′-甲基取代核苷(参见，于2008年8月21日公布的PCT国际申请WO2008/101157，对于其它公开的5′，2′-双取代的核苷)或用S替代核糖基环氧原子并且在2′-位进一步取代(参见，公布的U.S.专利申请US20050130923，于2005年6月16日公布)或可选地5′-取代BNA(参见，于2007年11月22日公布的PCT国际申请WO2007/134181，其中LNA被例如5′-甲基或5′-乙烯基基团取代)。 
具有经修饰的糖部分的核苷的实例包括不但不限于，包含5′-乙烯基、5′-甲基(R或S)、4′-S、2′-F、2′-OCH3、2’-OCH2CH3、2’-OCH2CH2F和2′-O(CH2)2OCH3取代基基团的核苷。2’位的取代基还可以选自烷基、氨基、叠氮基、硫代、O-烷基、O-C1-C10烷基、OCF3、OCH2F、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)、O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)和O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个R1、Rm和Rn独立地是H或取代的或未取代的C1-C10烷基。 
如本文所用的，“双环核苷”是指包含双环糖部分的经修饰的核苷。双环核苷的实例包括不但不限于，包含4′和2′核糖基环原子之间的桥的核苷。在某些实施方案中，本文提供了包括一个或多个包含4′至2′桥的双环核苷的反义化合物。此类4′至2′桥接双环核苷的实例包括但不限于下式之一：4′-(CH2)-O-2′(LNA)；4′-(CH2)-S-2′；4′-(CH2)2-O-2′(ENA)；4′-CH(CH3)-O-2′和4′-CH(CH2OCH3)-O-2′(及其类似物，参见，U.S.专利7,399,845，于2008年6月15日授权)；4′-C(CH3)(CH3)-O-2′(及其类似物，参见，公布的国际申请WO2009/006478，于2009年1月8日公布)；4′-CH2-N(OCH3)-2′及其 类似物(参见，公布的国际申请WO2008/150729，于2008年12月11日公布)；4′-CH2-O-N(CH3)-2′(参见公布的U.S.专利申请US20040171570，于2004年9月4日公布)；4′-CH2-N(R)-O-2′，其中R是H、C1-C12烷基或保护基团(参见，U.S.专利7,427,672，于2008年9月23日授权)；4′-CH2-C(H)(CH3)-2′(参见Chattopadhyaya等人，J.Org.Chem.，2009，74，118-134)；和4′-CH2-C(＝CH2)-2′(及其类似物，参见，公布的国际申请WO2008/154401，于2008年12月8日公布)。 
更多的涉及双环核苷的报道也可存在于公布的文献中(参见例如：Singh等人，Chem.Commun.，1998，4，455-456；Koshkin等人，Tetrahedron，1998，54，3607-3630；Wahlestedt等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U. S.A.，2000，97，5633-5638；Kumar等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1998，8，2219-2222；Singh等人，J.Org.Chem.，1998，63，10035-10039；Srivastava等人，J.Am.Chem.Soc.，2007，129(26)8362-8379；Elayadi等人，Curr.Opinion Invenst.Drugs，2001，2，558-561；Braasch等人，Chem.Biol.，2001，8，1-7；和Orum等人，Curr.Opinion Mol.Ther.，2001，3，239-243；U.S.专利No.6,268,490；6,525,191；6,670,461；6,770,748；6,794,499；7,034,133；7,053,207；7,399,845；7,547,684；和7,696,345；U.S.专利申请No.US2008-0039618；US2009-0012281；U.S.专利序列No.60/989,574；61/026,995；61/026,998；61/056,564；61/086,231；61/097,787；和61/099,844；公布的PCT国际申请WO1994/014226；WO2004/106356；WO2005/021570；WO2007/134181；WO2008/150729；WO2008/154401；和WO2009/006478。可以制备前述双环核苷中的每一个，其具有一个或多个立体化学糖构型，包括例如α-L-呋喃核糖和β-D-呋喃核糖(参见PCT国际申请PCT/DK98/00393，于1999年3月25日以WO99/14226公布)。 
在某些实施方案中，BNA核苷的双环糖部分包括但不限于，在戊呋喃糖基糖部分的4′位与2’位之间具有至少一个桥的化合物，其中此类桥独立地包含1或2至4个独立地选自以下的连接基团： -[C(Ra)(Rb)]n-、-C(Ra)＝C(Rb)-、-C(Ra)＝N-、-C(＝O)-、-C(＝NRa)-、-C(＝S)-、-O-、-Si(Ra)2-、-S(＝O)x-和-N(Ra)-； 
其中： 
x是0、1或2； 
n是1、2、3或4； 
Ra和Rb各自独立地是H、保护基团、羟基、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、杂环自由基、取代的杂环自由基、杂芳基、取代的杂芳基、C5-C7脂环族自由基、取代的C5-C7脂环族自由基、卤素、OJ1、NJ1J2、SJ1、N3、COOJ1、酰基(C(＝O)-H)、取代的酰基、CN、磺酰基(S(＝O)2-J1)或磺酰氧基(S(＝O)-J1)；并且 
J1和J2各自独立地是H、C１-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、酰基(C(＝O)-H)、取代的酰基、杂环自由基、取代的杂环自由基、C1-C12氨基烷基、取代的C1-C12氨基烷基或保护基团。 
在某些实施方案中，双环糖部分的桥是-[C(Ra)(Rb)]n-、-[C(Ra)(Rb)]n-O-、-C(RaRb)-N(R)-O-或-C(RaRb)-O-N(R)-。在某些实施方案中，桥是4′-CH2-2′、4′-(CH2)2-2′、4′-(CH2)3-2′、4′-CH2-O-2′、4′-(CH2)2-O-2′、4′-CH2-O-N(R)-2′和4′-CH2-N(R)-O-2′-，其中每一个R独立地是H、保护基团或C1-C12烷基。 
在某些实施方案中，双环核苷进一步由异构构型定义。例如，包含4’-2’亚甲基-氧基桥的核苷可以呈α-L构型或β-D构型。先前，α-L-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA′s已被并入到显示反义活性的反义寡核苷酸中(Frieden等人，Nucleic acids Research，2003，21，6365-6372)。 
在某些实施方案中，双环核苷包括但不限于，(A)α-L-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、(B)β-D-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、(C)亚乙基氧基(4’-(CH2)2-O-2’)BNA、(D)氨基氧基(4’-CH2-O-N(R)-2’)BNA、(E)氧基氨基(4’-CH2-N(R)-O-2’)BNA和(F)甲基(亚甲基氧基)(4’-CH(CH3)-O-2’)BNA、(G)亚甲基-硫基(4’-CH2-S-2’)BNA、(H)亚甲基-氨基(4’-CH2-N(R)-2’)BNA、(I)甲基碳环(4’-CH2-CH(CH3)-2’)BNA和(J)亚丙基碳环(4’-(CH2)3-2’)BNA，如下所述。 
其中Bx是碱基部分且R独立地是H、保护基团或C1-C12烷基。 
在某些实施方案中，提供了具有式I的双环核苷： 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900671
其中： 
Bx是杂环碱基部分； 
-Qa-Qb-Qc-是-CH2-N(Rc)-CH2-、-C(＝O)-N(Rc)-CH2-、-CH2-O-N(Rc)-、-CH2-N(Rc)-O-或-N(Rc)-O-CH2； 
Rc是C1-C12烷基或氨基保护基团；并且 
Ta和Tb各自独立地是H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基团、磷部分、或支持介质的共价连接。 
在某些实施方案中，提供了具有式II的双环核苷： 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900672
其中： 
Bx是杂环碱基部分； 
Ta和Tb各自独立地是H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基团、磷部分、或支持介质的共价连接； 
Za是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基、或取代的硫基。 
在一个实施方案中，取代的基团中的每一个独立地被选自以下的取代基基团单取代或多取代：卤素、氧代、羟基、OJc、NJcJd、SJc、N3、OC(＝X)Jc和NJeC(＝X)NJcJd，其中每一个Jc、Jd和Je独立地是H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基且X是O或NJc。 
在某些实施方案中，提供了具有式III的双环核苷： 
其中： 
Bx是杂环碱基部分； 
Ta和Tb各自独立地是H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基团、磷部分、或支持介质的共价连接； 
Zb是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、或取代的酰基(C(＝O)-)。 
在某些实施方案中，提供了具有式IV的双环核苷： 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900682
其中： 
Bx是杂环碱基部分； 
Ta和Tb各自独立地是H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基团、磷部分、或支持介质的共价连接； 
Rd是C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、或取代的C2-C6炔基； 
qa、qb、qc和qd各自独立地是H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基、或取代的C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、酰基、取代的酰基、C1-C6氨基烷基、或取代的C1-C6氨基烷基； 
在某些实施方案中，提供了具有式V的双环核苷： 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900691
其中： 
Bx是杂环碱基部分； 
Ta和Tb各自独立地是H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基团、磷部分、或支持介质的共价连接； 
qa、qb、qe和qf各自独立地是氢、卤素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk； 
或qe和qf一起＝C(qg)(qh)； 
qg和qh各自独立地是H、卤素、C1-C12烷基、或取代的C1-C12 烷基。 
亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA单体腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、5-甲基-胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的合成和制备与其寡聚化，以及核酸识别性质已被描述(Koshkin等人，Tetrahedron，1998，54，3607-3630)。BNA及其制备也描述于WO98/39352和WO99/14226中。 
亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA和2′-硫代-BNA的类似物已被制备(Kumar等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1998，8，2219-2222)。包含作为核酸聚合酶的底物的寡脱氧核糖核苷酸双链体的锁定核苷类似物的制备还已被描述(Wengel等人，WO99/14226)。而且，2′-氨基-BNA(一种新型的构象上受限的高亲和力寡核苷酸类似物)的合成已在本领域中被描述(Singh等人，J. Org.Chem.，1998，63，10035-10039)。此外，2′-氨基-和2′-甲基氨基-BNA′s已被制备并且其具有互补RNA和DNA链的双链体的热稳定性已被先前报道。 
在某些实施方案中，提供了具有式VI的双环核苷： 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900701
其中： 
Bx是杂环碱基部分； 
Ta和Tb各自独立地是H、羟基保护基团、缀合物基团、反应性磷基团、磷部分、或支持介质的共价连接； 
qi、qjqk和ql各自独立地是H、卤素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、 NJjJk，N3、CN、C(＝O)OJj、C(＝O)NJjJk、C(＝O)Jj、O-C(＝O)NJjJk、N(H)C(＝NH)NJjJk、N(H)C(＝O)NJjJk或N(H)C(＝S)NJjJk；并且 
qi和qj或ql和qk一起＝C(qg)(qh)，其中qg和qh各自独立地是H、卤素、C1-C12烷基、或取代的C1-C12烷基。 
一种具有4′-(CH2)3-2′桥和烯基类似物、桥4′-CH＝CH-CH2-2′的碳环双环核苷已被描述(Freier等人，Nucleic acids Research，1997，25(22)，4429-4443和Albaek等人，J. Org.Chem.，2006，71，7731-7740)。碳环双环核苷的合成和制备及其寡聚化以及生化研究已被描述(Srivastava等人，J. Am.Chem.Soc.2007，129(26)，8362-8379)。 
如本文所用的，“4’-2’双环核苷”或“4′至2′双环核苷”是指包含呋喃糖环的双环核苷，该呋喃糖环包含连接呋喃糖环的两个碳原子的桥，该桥连接糖环的2′碳原子和4′碳原子。 
如本文所用的，“单环核苷”是指包含经修饰的糖部分(不是双环糖部分)的核苷。在某些实施方案中，核苷的糖部分、或糖部分类似物可在任何位置被修饰或取代。 
如本文所用的，“2’-修饰的糖”意指在2’位修饰的呋喃酰基糖。在某些实施方案中，此类修饰包括选自以下的取代基：卤化物，包括但不限于取代的和未取代的烷氧基、取代的和未取代的硫烷基、取代的和未取代的氨基烷基、取代的和未取代的烷基、取代的和未取代的烷基、和取代的和未取代的炔基。在某些实施方案中，2’修饰选自取代基，包括但不限于：O[(CH2)nO]mCH3、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nF、O(CH2)nONH2、OCH2C(＝O)N(H)CH3和O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2，其中n和m是1至约10。其它2′-取代基基团还可以选自：C1-C12烷基、取代的烷基、烯基、炔基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、杂环烷基、杂环烷芳基、氨基烷基氨基、聚烷基氨基、取代的甲硅烷基、RNA离去 基团、报道基因、插入剂、提高反义化合物的药动学性质的基团、或用于提高反义化合物的药效学性质的基团，以及其它具有类似性质的取代基。在某些实施方案中，经修饰的核苷包含2’-MOE侧链(Baker等人，J.Biol.Chem.，1997，272，11944-12000)。此类2′-MOE取代已被描述为与未经修饰的核苷和其它经修饰的核苷(例如2’-O-甲基、O-丙基和O-氨基丙基)相比具有提高的结合亲和力。也已显示具有2′-MOE取代基的寡核苷酸是基因表达的反义抑制剂，其具有用于体内应用的有希望特征(Martin，Helv.Chim.Acta，1995，78，486-504；Altmann等人，Chimia，1996，50，168-176；Altmann等人，Biochem.Soc.Trans.，1996，24，630-637；和Altmann等人，NucleosideNucleotides，1997，16，917-926)。 
如本文所用的，“经修饰的四氢吡喃核苷”或“经修饰的THP核苷”意指具有在正常核苷(糖替代品)中用于取代戊呋喃糖基残基的六元四氢吡喃“糖”的核苷。经修饰的THP核苷包括但不限于，在本领域被称为己糖醇核酸(HNA)、anitol核酸(ANA)、manitol核酸(MNA)(参见Leumann，Bioorg.Med.Chem.，2002，10，841-854)、氟HNA(F-HNA)或具有式VII的那些化合物： 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900721
其中对于式VII的所述至少一个四氢吡喃核苷类似物中的每一个独立地： 
Bx是杂环碱基部分； 
Ta和Tb各自独立地是连接四氢吡喃核苷类似物与反义化合物的核苷间连接基团或Ta和Tb之一是连接四氢吡喃核苷类似物与反义化 合物的核苷间连接基团并且Ta和Tb中的另一个是H、羟基保护基团、连接的缀合物基团、或5′或3′-末端基团； 
q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自独立地是H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；并且R1和R2中的每一个选自氢、羟基、卤素、取代的或未取代的烷氧基、NJ1J2、SJ1，N3、OC(＝X)J1、OC(＝X)NJ1J2、NJ3C(＝X)NJ1J2和CN，其中X是O、S或NJ1，并且J1、J2和J3中每一个独立地是H或C1-C6烷基。 
在某些实施方案中，提供了式VII的经修饰的THP核苷，其中q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自是H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一个不是H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一个是甲基。在某些实施方案中，提供了式VII的THP核苷，其中R1和R2之一是氟。在某些实施方案中，R1是氟且R2是H；R1是甲氧基且R2是H，且R1是H且R2是甲氧基乙氧基。 
如本文所用的，“2’-修饰的”或“2’-取代的”是指包含糖的核苷，该糖包含在2’位的不是H或OH的取代基。2’-修饰的核苷包括但不限于，其中连接糖环的两个碳原子的桥连接糖环的2’碳和另一个碳的双环核苷以及具有非桥接2’取代基、例如烷基、氨基、叠氮基、硫代、O-烷基、O-C1-C10烷基、-OCF3、O-(CH2)2-O-CH3、2′-O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)的核苷，其中每个Rm和Rn独立地是H或取代的或未取代的C1-C10烷基。2’-修饰的核苷还可包含例如在糖的其它位置和/或在核碱基的其它修饰。 
如本文所用的，“2’-F”是指包含糖的核苷，该糖包含在2’位的氟基。 
如本文所用的，“2’-OMe”或“2’-OCH3”或“2’-O-甲基”各自是指包含糖的核苷，其在糖环的2’位包含-OCH3基团。 
如本文所用的，“MOE”或“2’-MOE”或“2’-OCH2CH2OCH3”或“2’-O-甲氧基乙基”各自是指包含糖的核苷，其在糖环的2’位包含-OCH2CH2OCH3基团。 
如本文所用的，″寡核苷酸″是指包含多个连接核苷的化合物。在某些实施方案中，多个核苷中的一个或多个被修饰。在某些实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个核糖核苷(RNA)和/或脱氧核糖核苷(DNA)。 
很多其它二环和三环糖替代环系统也是本领域已知的，其可用于修饰核苷以并入反义化合物中(参见，例如，综述文章：Leumann，Bioorg.Med.Chem.，2002，10，841-854)。 
此类环系统可经历各种其它取代以增强活性。 
用于制备经修饰的糖的方法是对于本领域技术人员而言是熟知的。 
在具有经修饰的糖部分的核苷酸中，维持核碱基部分(天然的、经修饰的或其组合)以与适当的核酸靶杂交。 
在某些实施方案中，反义化合物包含一个或多个具有经修饰的糖部分的核苷。在某些实施方案中，经修饰的糖部分是2’-MOE。在某些实施方案中，布置2’-MOE修饰的核苷酸在缺口基体基序中。在某些实施方案中，经修饰的糖部分是具有(4’-CH(CH3)-O-2’)桥接基团的双环核苷。在某些实施方案中，布置经(4’-CH(CH3)-O-2’)修饰的核苷遍及缺口基体基序的翼。 
经修饰的核碱基 
核碱基(或碱基)修饰或取代结构上可区别于天然存在的或合成的未经修饰的核碱基，但功能上可与其互换。天然的和经修饰的核碱基均能够参与氢键合。此类核碱基修饰可赋予反义化合物核酸酶稳定 性、结合亲和力或一些其它有益的生物学性质。经修饰的核碱基包括合成的和天然的核碱基如，例如，5-甲基胞嘧啶(5-me-C)。某些核碱基取代，包括5-甲基胞嘧啶取代，特别可用于增加反义化合物对靶核酸的结合亲和力。例如，已显示5-甲基胞嘧啶取代增加核酸双链体稳定性0.6-1.2℃(Sanghvi，Y.S.，Crooke，S.T.和Lebleu，B.编，AntisenseResearch and Applications，CRC Press，Boca Raton，1993，pp.276-278)。 
其它未经修饰的核碱基包括5-羟基甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶碱基的其它炔基衍生物、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-卤代、8-氨基、8-巯基、8-硫代烷基、8-羟基和其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤代(特别是5-溴)、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-去氮鸟嘌呤和7-去氮腺嘌呤和3-去氮鸟嘌呤和3-去氮腺嘌呤。 
杂环碱基部分还可以包括其它嘌呤或嘧啶碱基被其它杂环例如7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鸟苷、2-氨基吡啶和2-吡啶酮代替的那些。特别可用于增加反义化合物的结合亲和力的核碱基包括5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和O-6取代的嘌呤，包括2氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。 
在某些实施方案中，靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物包含一个或多个经修饰的核碱基。在某些实施方案中，缩短的或缺口加宽的靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义寡核苷酸包含一个或多个经修饰的核碱基。在某些实施方案中，经修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中，每个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。 
组合物和用于配制药物组合物的方法 
反义寡核苷酸可与药学上可接受的活性或惰性物质混合以用于制备药物组合物或制剂。组合物和用于配制药物组合物的方法取决于多种标准，包括但不限于施用途径、疾病程度或所施用的剂量。 
靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物可通过将反义化合物与适合的药学上可接受的稀释剂或载体组合来用于药物组合物。 
药学上可接受的稀释剂包括磷酸盐缓冲盐水(PBS)。PBS是适用于组合物进行胃肠外递送的稀释剂。因此，在一个实施方案中，本文所述的方法所用的是包含靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物和药学上可接受的稀释剂的药物组合物。在某些实施方案中，药学上可接受的稀释剂是PBS。在某些实施方案中，反义化合物是反义寡核苷酸。 
包含反义化合物的药物组合物包含任何药学上可接受的盐、酯或此类酯的盐、或任何其它寡核苷酸，其在施用于动物(包括人)时，能够提供(直接或间接)生物学活性的代谢物或其残基。因此，例如，本公开涉及反义化合物的药学上可接受的盐、前药、此类前药的药学上可接受的盐、及其它生物等效形式。适合的药学上可接受的盐包括但不限于，钠盐和钾盐。 
前药可包括在反义化合物的一端或两端并入另外的核苷，其在体内通过内源核酸酶被切割，以形成活性反义化合物。 
缀合的反义化合物 
反义化合物可共价连接于一个或多个部分或缀合物，其增强所得反义寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞摄取。典型缀合物基团包括胆固醇部分和脂质部分。另外的缀合物基团包括碳水化合物、磷脂、生物素、吩嗪、叶酸盐、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素和染料。 
反义化合物还可被修饰以具有一个或多个通常连接于反义化合物的一端或两端的稳定基团，从而增强性质例如，例如核酸酶稳定性。稳定基团中包括帽结构。这些末端修饰防止具有末端核酸的反义化合物从外切核酸酶降解，并且可有助于在细胞内递送和/或定域。帽可存在于5′-末端(5′-帽)或3′-末端(3′-帽)或可存在于两端。帽结构是本领域所熟知的并且包括例如倒置的脱氧脱碱基帽。更多的3′和5′-稳定基团(其用于覆盖反义化合物的一端或两端的顶部以赋予核酸酶稳定性)包括在于2003年1月16日公布的WO03/004602公开的那些。 
细胞培养物和反义化合物处理 
可在多种细胞类型中体外测试反义化合物对转甲状腺素蛋白核酸的水平、活性或表达的效应。用于此类分析的细胞类型可从商业贩售商(例如American Type Culture Collection，Manassus，VA；Zen-Bio，Inc.，Research Triangle Park，NC；Clonetics Corporation，Walkersville，MD)得到并且细胞根据贩售商的技术说明使用市售可得的试剂(例如Invitrogen Life Technologies，Carlsbad，CA)来培养。示例性细胞类型包括但不限于，HepG2细胞、Hep3B细胞、原代肝细胞、A549细胞、GM04281成纤维细胞和LLC-MK2细胞。 
反义寡核苷酸的体外试验 
本文所述的是用反义寡核苷酸处理细胞的方法，该反义寡核苷酸可经适当地修饰以用其它反义化合物处理。 
一般而言，当细胞在培养中达到约60-80％汇合时用反义寡核苷酸处理细胞。 
一种通常用于将反义寡核苷酸引入所培养的细胞中的试剂包括阳离子转染试剂
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900771
(Invitrogen，Carlsbad，CA)。将反义寡核苷酸与
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900772
在
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900773
1(Invitrogen，Carlsbad，CA)中混合以实现反义寡核苷酸的所需最终浓度和浓 度，其通常为2至12μg/mL每100nM反义寡核苷酸。 
另一种通常用于将反义寡核苷酸引入所培养的细胞中的试剂包括LIPOFECTAMINE
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900781
(Invitrogen，Carlsbad，CA)。将反义寡核苷酸与LIPOFECTAMINE
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900782
在
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900783
1低血清培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中混合以实现反义寡核苷酸的所需最终浓度和浓度，其通常为2至12μg/mL每100nM反义寡核苷酸。 
另一种通常用于将反义寡核苷酸引入所培养的细胞中的试剂包括
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900785
(Invitrogen，Carlsbad，CA)。将反义寡核苷酸与 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900786
在
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900787
1低血清培养基(Invitrogen，Carlsbad，CA)中混合以实现反义寡核苷酸的所需浓度和
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900788
浓度，其通常为2至12μg/mL每100nM反义寡核苷酸。 
另一种通常用于将反义寡核苷酸引入所培养的细胞中的技术包括电穿孔。 
通过常规方法用反义寡核苷酸处理细胞。通常在反义寡核苷酸处理24小时收获细胞，此时靶核酸的RNA或蛋白水平通过本领域已知的和本文所述的方法来测量。一般而言，当以多个复制进行处理时，该数据以复制处理的平均值呈示。 
所用的反义寡核苷酸浓度随细胞系而变化。测定特定细胞系的最佳反义寡核苷酸浓度的方法是本领域所熟知的。当用 Lipofecti或Cytofectin转染时，通常以1nM至300nM范围的浓度使用反义寡核苷酸。当利用电穿孔转染时，以625至20,000nM范围的较高浓度使用反义寡核苷酸。 
RNA分离 
可在总细胞RNA或poly(A)+mRNA上进行RNA分析。RNA分离的方法是本领域所熟知的。RNA根据生产厂商的推荐方案，使用本领域所熟知的方法例如使用
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900791
试剂(Invitrogen，Carlsbad，CA)来制备。 
抑制靶水平或表达的分析 
转甲状腺素蛋白核酸的水平或表达的抑制可用多种本领域已知的方法来测定。例如，靶核酸水平可通过例如Northern印迹分析、竞争聚合酶链反应(PCR)或定量实时PCR来定量。RNA分析可在总细胞RNA或poly(A)+mRNA上进行。RNA分离的方法是本领域所熟知的。Northern印迹分析也在本领域中是常规的。定量实时PCR可使用市售可得的ABI
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900792
7600、7700或7900序列DetectionSystem(可由PE-Applied Biosystems，Foster City，CA得到)方便地实现并且根据生产厂商的技术说明来使用。 
靶RNA水平的定量实时PCR分析 
靶RNA水平的定量可根据生产厂商的技术说明通过定量实时PCR使用ABI
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900793
7600、7700或7900序列检测系统(PE-AppliedBiosystems，Foster City，CA)来实现。定量实时PCR的方法是本领域所熟知的。 
在实时PCR前，将分离的RNA经受逆转录酶(RT)反应，其产生互补DNA(cDNA)，然后cDNA用作实时PCR扩增的底物。在相同的样品孔中相继进行RT和实时PCR反应。RT和实时PCR试剂由Invitrogen(Carlsbad，CA)获得。RT和实时-PCR反应通过本领域技术人员所熟知的方法来进行。 
通过实时PCR获得的基因(或RNA)靶数量使用表达恒定的基因(例如亲环蛋白A)的表达水平，或通过使用
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900794
(Invitrogen， Inc.Carlsbad，CA)定量总RNA来进行标准化。亲环蛋白A表达通过实时PCR，通过与靶、多路技术同时运行或单独地来定量。总RNA使用RNA定量试剂(Invitrogen，Inc.Eugene，OR)来定量。通过
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900802
进行RNA定量的方法教导于Jones，L.J.等人(Analytical Biochemistry，1998，265，368-374)中。4000仪器(PE Applied Biosystems)用于测量
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900804
荧光。 
设计探针和引物以与转甲状腺素蛋白核酸杂交。用设计实时PCR探针和引物的方法是本领域所熟知的，并且可包括使用软件例如PRIMER
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900805
软件(Applied Biosystems，Foster City，CA)。 
蛋白水平的分析 
转甲状腺素蛋白核酸的反义抑制可通过测量转甲状腺素蛋白蛋白水平来评估。转甲状腺素蛋白的蛋白水平可用多种本领域熟知的方法，例如免疫沉淀、Western印迹分析(免疫印迹)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、定量蛋白质测定法、蛋白质活性测定法(例如，半胱天冬酶活性测定法)、免疫组织化学、免疫细胞化学或荧光激活细胞分选法(FACS)来评价或定量。针对靶的抗体可被鉴定且由多种来源例如抗体的MSRS目录(Aerie Corporation，Birmingham，MI)获得，或可经由本领域熟知的常规单克隆或多克隆抗体产生方法来制备。可用于人和大鼠转甲状腺素蛋白的检测的抗体是市售可得的。 
反义化合物的体内试验 
在动物中测试反义化合物例如反义寡核苷酸以评估其抑制转甲状腺素蛋白表达并且产生表型改变的能力。试验可在正常动物中或在实验疾病模型中进行。对于给动物施用，在药学上可接受的稀释剂例如磷酸盐缓冲溶液中配制反义寡核苷酸。施用包括胃肠外施用途径。在用反义寡核苷酸处理的时段后，从组织中分离RNA并且测量转甲状腺素蛋白核酸表达的变化。转甲状腺素蛋白蛋白水平的变化也被测量。 
某些化合物 
在数种细胞类型中，体外测试了约246个新设计的各种长度、基序和骨架组成的反义化合物对人转甲状腺素蛋白mRNA的效应。将新化合物与79个先前设计的化合物(包括ISIS No.304267、304268、304280、304284、304285、304286、304287、304288、304289、304290、304291、304292、304293、304294、304296、304297、304298、304299、304300、304301、304302、304303、304304、304307、304308、304309、304311和304312，其先前已被测定为是体外最有效的反义化合物中的一些(参见例如，U.S.专利申请No.US2005/0244869和US2009/0082300))进行比较。在约325个新设计的且先前设计的反义化合物中，基于体内效力选择约50个化合物以用于进一步研究。在转基因小鼠模型中测试所选化合物的体内效力和耐受性(参见实施例10)。在所测试的15个化合物中，选择11个化合物并且测试其在CD1小鼠中的全身耐受性(参见实施例11)和肝中半衰期测量(参见实施例12)，并且也测试其在Sprague-Dawley大鼠中的全身耐受性(参见实施例13)和肝中的寡核苷酸浓度的药动学研究(参见实施例14)。根据这些研究，测试7个化合物在转基因小鼠中的剂量依赖性抑制和耐受性(参见实施例15)。而且，选择表1的15个额外化合物并且设计6个具有各种基序的额外化合物具有ISIS420951的重叠序列，其在上文提及的测定中展示高的效力和耐受性。比较这些额外化合物与ISIS420951在转基因小鼠中的效力和耐受性(参见实施例16)。基于所有这些研究(实施例10-16)，选择22个化合物并且测试其在CD1小鼠中的全身耐受性(参见实施例17)。7个化合物在小鼠模型中被认为是耐受的并且进一步测试其在Sprague-Dawley大鼠中的全身耐受性(参见实施例18)和肝和肾中的寡核苷酸浓度的药动学研究(参见实施例19)。还测试7个化合物在转基因小鼠中的剂量依赖性效力(参见实施例20)。 
这些研究(实施例16-20)的最终评价导致选择9个具有SEQ IDNO：25、78、80、86、87、115、120、122和124中所述的序列的核 碱基序列的化合物。由于其互补序列，这些化合物与SEQ ID NO：1的区域505-524、507-526、508-527、513-532、515-534、516-535、580-599、585-604、587-606或589-608互补。在某些实施方案中，如本文进一步描述靶向所列区域的化合物包含具有SEQ ID NO中所述的序列的一些核碱基部分的经修饰的寡核苷酸，如本文进一步描述，在某些实施方案中，靶向所列区域或具有SEQ ID NO中所述的序列的核碱基部分的化合物可具有各种长度，如本文进一步描述，并且可具有各种基序之一，如本文进一步描述。在某些实施方案中，靶向所列区域或具有SEQ ID NO中所述的序列的核碱基部分的化合物具有特定长度和基序，如由ISIS NO：ISIS304299、ISIS420913、ISIS420915、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420950、ISIS420955、ISIS420957或ISIS420959所示的。 
进一步测试9个具有SEQ ID NO：25、78、80、86、87、115、120、122和124中所述的序列的核碱基序列的化合物在短尾猴的原代肝细胞中的剂量依赖性抑制(参见实施例21)。还测试这些化合物的最佳粘度(实施例22)。还评价了7个具有SEQ ID NO：78、86、87、115、120和124中所述的序列的核碱基序列的化合物在CD1小鼠的肝中的半衰期(实施例23)。 
这些研究(实施例1-23)的最终评价导致选择8个具有SEQ IDNO：25、80、86、87、115、120、122和124中所述的序列的核碱基序列的化合物。由于其互补序列，这些化合物与SEQ ID NO：1的区域504-523、505-524、512-531、513-532、577-596、582-601、584-603和586-605互补。在某些实施方案中，如本文进一步描述靶向所列区域的化合物包含具有SEQ ID NO中所述的序列的一些核碱基部分的经修饰的寡核苷酸，如本文进一步描述，在某些实施方案中，靶向所列区域或具有SEQ ID NO中所述的序列的核碱基部分的化合物可具有各种长度，如本文进一步描述，并且可具有各种基序之一，如本文进一步描述。在某些实施方案中，靶向区域或具有SEQ ID NO中所述的序列的核碱基部分的化合物具有特定长度和基序，如由ISIS NO： ISIS304299、ISIS420915、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420950、ISIS420955、ISIS420957或ISIS420959所示的。 
测试了8个化合物在短尾猴中的功效、药动学特征和耐受性(实施例24)。这些猴中的抑制研究显示，这些化合物中的一些在肝中产生高的TTR mRNA的抑制。尤其是，用ISIS420950、ISIS420955和ISIS420915的治疗相对于PBS对照分别引起91％、79％和78％抑制。应认识到，ISIS420915相比于ISIS304299(59％)引起更高的TTR(78％)mRNA的抑制，即使两个寡核苷酸彼此的不同之处在于其靶区域在SEQ ID NO：1上的单一碱基对转移。蛋白分析也补充RNA分析数据，用ISIS420915的治疗相比于对照引起TTR蛋白的76％抑制并且用ISIS304299的治疗引起47％抑制。还期望RBP4蛋白水平(作为与转甲状腺素蛋白相关的蛋白)在用反义化合物治疗后下降。RBP4蛋白水平在用ISIS420915治疗后降低63％。用ISIS304299的治疗使RBP4蛋白水平下降19％。此外，ISIS420915比ISIS304299更具耐受性，如猴研究(实施例24)中所示的，用ISIS304299(ALT81IU/L和AST101IU/L)治疗的猴的转氨酶水平比用ISIS420915(ALT68IU/L和AST62IU/L)治疗的猴高。用ISIS304299治疗的猴的补体C3水平(96mg/dL)比用ISIS420915(104mg/dL)治疗的猴低。 
因此，本文提供的是具有任何一个或多个改善的特征的反义化合物。在某些实施方案中，本文提供的是包含如本文进一步描述的靶向于SEQ ID NO：1的核苷酸的区域或可与其特异性杂交的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
因此，本文提供的是具有任何一个或多个改善的特征的反义化合物。在某些实施方案中，本文提供的是包含如本文进一步描述的靶向于SEQ ID NO：2的核苷酸的区域或可与其特异性杂交的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
因此，本文提供的是具有任何一个或多个改善的特征的反义化合 物。在某些实施方案中，本文提供的是包含如本文进一步描述的靶向于SEQ ID NO：4的核苷酸的区域或可与其特异性杂交的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
在某些实施方案中，本文所述的化合物当使用如实施例67中所述的电穿孔递送至短尾猴肝细胞系时，由于具有低于2.9μM、低于2.2μM、低于2.0μM、低于1.5μM、低于1.4μM、低于1.3μM、低于1.0μM、低于0.7μM、低于0.6μM的体外IC50中的至少一者，因此是有效的。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有高耐受性，如通过具有ALT或AST值增加比盐水处理的动物不超过4倍、3倍或2倍；或肝重、脾重或肾重增加不超过30％、20％、15％、12％、10％、5％或2％中的至少一者所表明的。 
某些适应症 
在某些实施方案中，本文提供的是治疗个体的方法，包括施用一种或多种本文所述的药物组合物。在某些实施方案中，个体具有中枢神经系统相关疾病。 
如下文实施例中所示，靶向于本文所述的转甲状腺素蛋白的化合物已显示减少中枢神经系统相关的疾病的生理学症状的严重度。在某些实验中，所述化合物减少淀粉样蛋白斑块形成的速率，例如，动物继续经理症状，但是该症状相比于未治疗的动物不太严重。然而，在其它实验中，所述化合物看似导致功能随时间流逝而再产生；例如，治疗较长时间的动物比施用该化合物较短时间的动物经历较低的重度症状。如下示例的化合物恢复功能的能力因此表明疾病的症状可通过用本文描述的化合物的治疗来逆转。 
因此，本文提供的是用于在需要其的受试者中减轻中枢神经系统相关的症状、心脏疾病、神经病理性疾病或胃肠疾病的方法。在某些实施方案中，提供的是用于减少中枢神经系统相关的症状、心脏疾病、神经病理性疾病或胃肠疾病的发作的速率的方法。在某些实施方案 中，提供的是用于减少中枢神经系统相关的症状、心脏疾病、神经病理性疾病或胃肠疾病的严重度的方法。在此类实施方案中，该方法包括给需要其的个体施用治疗有效量的靶向于转甲状腺素蛋白核酸的化合物。 
转甲状腺素蛋白淀粉样变性的特征在于许多身体的、神经学的、精神病的和/或外周的症状。本领域技术人员已知的与转甲状腺素蛋白淀粉样变性相关的任何症状可如上文所述的方法中所示被减轻或以其它方式被调节。在某些实施方案中，症状是身体的、神经学的、精神病的或外周的症状。在某些实施方案中，症状是选自由以下组成的组的身体症状：坐立不安、缺乏协调、眼球震颤、痉挛性下肢轻瘫、缺乏肌肉协调、视觉受损、失眠症、罕见感觉、肌阵挛、失明、失语症、腕管综合征、癫痫发作、蛛网膜下腔出血、中风和脑出血、脑水肿、共济失调、和痉挛性麻痹、昏迷、感觉性神经病变、感觉异常、感觉减退、运动神经病变、自身性神经病变、直立性神经病变、直立性低血压、循环便秘、循环腹泻、恶心、呕吐、减少出汗、阳痿、胃排空延迟、尿潴留、尿失禁、进展性心脏病、疲劳、呼吸急促、体重减轻、食欲缺乏、麻木、发麻、虚弱、舌肿大、肾病变综合征、充血性心力衰竭、运动性呼吸困难、外周性水肿、心律不齐、心悸、头晕、晕厥、直立性低血压、外周神经问题、感觉运动受损、下肢神经病变、痛觉过敏、改变的温度感觉、下肢衰弱、恶病质、外周性水肿、肝肿大、紫癜、舒张期功能障碍、早产儿心室收缩、颅神经病变、深部肌腱反射减少、玻璃体中的淀粉样沉积、玻璃体混浊、干眼、青光眼、斜瞳孔中的齿状外观、由水分保持引起的足肿胀。在某些实施方案中，症状是选自由以下组成的组的认知症状：记忆力受损、判断受损和思考、计划受损、灵活性受损、抽象思维受损、规则获取受损、适当行动起始受损、不适当行动受损、短时记忆受损、长期记忆受损、偏执狂、定向障碍、混乱、幻觉和痴呆。在某些实施方案中，症状是由以下组成的组的精神症状：痴呆；焦虑症、抑郁症、感情迟钝、自我中心症、攻击性、强迫行为、易怒、人格改变(包括记忆力受损、判断 和思考)以及自杀观念。 
在某些实施方案中，所述症状是坐立不安。在某些实施方案中，所述症状是缺乏协调。在某些实施方案中，所述症状是眼球震颤。在某些实施方案中，所述症状是痉挛性下肢轻瘫。在某些实施方案中，所述症状是缺乏肌肉协调。在某些实施方案中，所述症状是视觉受损。在某些实施方案中，所述症状是失眠症。在某些实施方案中，所述症状是罕见感觉。在某些实施方案中，所述症状是肌阵挛。在某些实施方案中，所述症状是失明。在某些实施方案中，所述症状是失语症。在某些实施方案中，所述症状是腕管综合征。在某些实施方案中，所述症状是癫痫发作。在某些实施方案中，所述症状是蛛网膜下腔出血。在某些实施方案中，所述症状是中风。在某些实施方案中，所述症状是脑出血。在某些实施方案中，所述症状是脑水肿。在某些实施方案中，所述症状是共济失调。在某些实施方案中，所述症状是痉挛性麻痹。在某些实施方案中，所述症状是昏迷。在某些实施方案中，所述症状是感觉性神经病变。在某些实施方案中，所述症状是感觉异常。在某些实施方案中，所述症状是感觉减退。在某些实施方案中，所述症状是运动神经病变。在某些实施方案中，所述症状是自身性神经病变。在某些实施方案中，所述症状是直立性神经病变。在某些实施方案中，所述症状是循环便秘。在某些实施方案中，所述症状是循环腹泻。在某些实施方案中，所述症状是恶心。在某些实施方案中，所述症状是呕吐。在某些实施方案中，所述症状是减少出汗。在某些实施方案中，所述症状是阳痿。在某些实施方案中，所述症状是胃排空延迟。在某些实施方案中，所述症状是尿潴留。在某些实施方案中，所述症状是尿失禁。在某些实施方案中，所述症状是进展性心脏病。在某些实施方案中，所述症状是疲劳。在某些实施方案中，所述症状是呼吸急促。在某些实施方案中，所述症状是体重减轻。在某些实施方案中，所述症状是麻木。在某些实施方案中，所述症状是发麻。在某些实施方案中，所述症状是虚弱。在某些实施方案中，所述症状是舌肿大。在某些实施方案中，所述症状是肾病变综合征。在某些实施方 案中，所述症状是充血性心力衰竭。在某些实施方案中，所述症状是运动性呼吸困难。在某些实施方案中，所述症状是外周性水肿。在某些实施方案中，所述症状是心律不齐。在某些实施方案中，所述症状是心悸。在某些实施方案中，所述症状是头晕。在某些实施方案中，所述症状是晕厥。在某些实施方案中，所述症状是直立性低血压。在某些实施方案中，所述症状是外周神经问题。在某些实施方案中，所述症状是感觉运动受损。在某些实施方案中，所述症状是下肢神经病变。在某些实施方案中，所述症状是下肢神经病变。在某些实施方案中，所述症状是痛觉过敏。在某些实施方案中，所述症状是改变的温度感觉。在某些实施方案中，所述症状是下肢衰弱。在某些实施方案中，所述症状是恶病质。在某些实施方案中，所述症状是水肿。在某些实施方案中，所述症状是肝肿大。在某些实施方案中，所述症状是紫癜。在某些实施方案中，所述症状是舒张期功能障碍。在某些实施方案中，所述症状是早产儿心室收缩。在某些实施方案中，所述症状是颅神经病变。在某些实施方案中，所述症状是深部肌腱反射减少。在某些实施方案中，所述症状是玻璃体中的淀粉样沉积。在某些实施方案中，所述症状是玻璃体混浊。在某些实施方案中，所述症状是干眼。在某些实施方案中，所述症状是青光眼。在某些实施方案中，所述症状是斜瞳孔中的齿状外观。在某些实施方案中，所述症状是由水分保持引起的足肿胀。 
在某些实施方案中，所述症状是记忆力受损。在某些实施方案中，所述症状是判断受损和思考。在某些实施方案中，所述症状是计划受损。在某些实施方案中，所述症状是灵活性受损。在某些实施方案中，所述症状是抽象思维受损。在某些实施方案中，所述症状是规则获取受损。在某些实施方案中，所述症状是适当行动起始受损。在某些实施方案中，所述症状是不适当行动受损。在某些实施方案中，所述症状是短时记忆受损。在某些实施方案中，所述症状是长期记忆受损。在某些实施方案中，所述症状是偏执狂。在某些实施方案中，所述症状是定向障碍。在某些实施方案中，所述症状是混乱。在某些实施方 案中，所述症状是幻觉。在某些实施方案中，所述症状是痴呆。 
在某些实施方案中，所述症状是痴呆。在某些实施方案中，所述症状是焦虑症。在某些实施方案中，所述症状是抑郁症。在某些实施方案中，所述症状是感情迟钝。在某些实施方案中，所述症状是自我中心症。在某些实施方案中，所述症状是攻击性。在某些实施方案中，所述症状是强迫行为。在某些实施方案中，所述症状是易怒。在某些实施方案中，所述症状是人格改变。在某些实施方案中，所述症状是自杀观念。 
在某些实施方案中，提供的是治疗个体的方法，包括施用一种或多种本文所述的药物组合物。在某些实施方案中，个体具有中枢神经系统相关疾病。 
在某些实施方案中，施用靶向于转甲状腺素蛋白核酸的反义化合物导致转甲状腺素蛋白表达减少至少约15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99％或由这些值中的任两个限定的范围。 
在某些实施方案中，包含靶向于转甲状腺素蛋白的反义化合物的药物组合物可用于制备用于治疗患有或易患中枢神经系统相关疾病的患者的药物。 
在某些实施方案中，本文所述的方法包括施用包含具有本文所述的在SEQ ID NO：25、78、80、86、87、115、120、122和124中所述的序列的连续核碱基部分的经修饰的寡核苷酸的化合物。 
施用 
在某些实施方案中，本文所述的化合物和组合物可用多种方法施用，取决于局部性或全身性治疗是否是所需的以及待治疗的区域。施用可以是局部的、肺的，例如通过吸入或吹入粉末或气溶胶，包括通过喷雾器；气管内、鼻内、表皮和经皮、口服或胃肠外。本文所述的 化合物和组合物可以靶向特定组织例如肝或脑的方式递送。 
在某些实施方案中，胃肠外施用本文所述的化合物和组合物。“胃肠外施用”意指通过注射或输注的施用。胃肠外施用包括皮下施用、静脉内施用、肌内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用，例如脑内施用、鞘内施用、室内施用、室施用、脑室内施用、脑的室内施用或脑室施用。施用可以是连续的或长期的或短期的或间歇的。 
在某些实施方案中，胃肠外施用是通过输注。输注可以是长期的或连续的或短期的或间歇的。在某些实施方案中，用泵递送所输注的药用剂。在某些实施方案中，胃肠外施用是通过注射。 
在某些实施方案中，胃肠外施用是皮下。 
在进一步的实施方案中，用于施用的制剂是本文所述的化合物和盐水。 
在某些实施方案中，向CNS递送化合物和组合物。在某些实施方案中，将化合物和组合物递送至脑脊液。在某些实施方案中，将化合物和组合物施用至脑实质。在某些实施方案中，通过鞘内施用或脑室内施用将化合物和组合物递送至动物的中枢神经系统的多个区域(例如，进入脑的多个区域和/或进入脊髓)。本文所述的化合物和组合物在中枢神经系统内的宽分布可用实质内施用、鞘内施用或脑室内施用实现。 
在某些实施方案中，本发明包括可通过注射直接递送至脑中的药物组合物。注射可以是通过立体定位注射到脑的特定区域(例如，黑质、脉络丛、皮质、海马、纹状体、脉络丛或苍白球)。化合物还可递送至脑的发散区域(例如，发散递送至脑的皮质)。 
在某些实施方案中，胃肠外施用是通过注射。注射可以用注射器或泵递送。在某些实施方案中，注射是弹丸注射。在某些实施方案中，向组织例如纹状体、尾状体、皮质、海马和小脑直接施用注射。 
在某些实施方案中，递送本文所述的化合物或组合物可影响化合物或组合物的药动学特征。在某些实施方案中，向靶向组织注射本文描述的化合物或组合物相比于化合物或组合物的输注提高化合物或组合物的药动学特征。在某些实施方案中，化合物或组合物的注射相比于宽扩散提高效力，需要较少的化合物或组合物以实现类似的药理学。在某些实施方案中，类似的药理学是指靶mRNA和/或靶蛋白被下调(例如作用的持续时间)的时间的量。在某些实施方案中，特异性局部化药用剂例如通过弹丸注射的方法使中位有效浓度(EC50)降低约50倍(例如需要减少50倍的组织中的浓度来实现相同或类似的药效学效应)。在某些实施方案中，特异性局域化药用剂的方法例如通过弹丸注射使中位有效浓度(EC50)降低至20、25、30、35、40、45或50。在某些实施方案中，药用剂是如本文进一步描述的反义化合物。在某些实施方案中，靶向组织是脑组织。在某些实施方案中，靶向组织是纹状体组织。在某些实施方案中，降低EC50是所需的，因为其降低在需要其的患者中实现药理学结果的剂量。 
CD1小鼠肝组织中的MOE缺口基体寡核苷酸的半衰期是约21天(参见实施例12)。 
在某些实施方案中，通过注射或输注每月、每两月、每90天、每3个月、每6个月一次、每年两次或每年一次递送反义寡核苷酸。 
某些联合疗法 
在某些实施方案中，与一种或多种其它药用剂共施用本发明的一种或多种药物组合物。在某些实施方案中，设计此类一种或多种其它药用剂来治疗与一种或多种本文所述的药物组合物相同的疾病、病症或疾患。在某些实施方案中，设计此类一种或多种其它药用剂来治疗与一种或多种本文所述的药物组合物不同的疾病、病症或疾患。在某些实施方案中，设计此类一种或多种其它药用剂来治疗一种或多种本文所述的药物组合物的不希望的副作用。在某些实施方案中，与另一 种药用剂共施用一种或多种药物组合物来治疗其它药用剂的不希望的副作用。在某些实施方案中，与另一种药用剂共施用一种或多种药物组合物来产生组合效应。在某些实施方案中，与另一种药用剂共施用一种或多种药物组合物来产生协同效应。 
在某些实施方案中，在相同时间施用一种或多种药物组合物和一种或多种其它药用剂。在某些实施方案中，在不同时间施用一种或多种药物组合物和一种或多种其它药用剂。在某些实施方案中，将一种或多种药物组合物和一种或多种其它药用剂一起制备于单一制剂中。在某些实施方案中，分开地制备一种或多种药物组合物和一种或多种其它药用剂。 
在某些实施方案中，在施用本发明的药物组合物前施用第二化合物。在某些实施方案中，在施用本发明的药物组合物后施用第二化合物。在某些实施方案中，在与施用本发明的药物组合物相同的时间施用第二化合物。在某些实施方案中，共施用的第二化合物的剂量与单独施用第二化合物时被施用的剂量相同。在某些实施方案中，共施用的第二化合物的剂量低于单独施用第二化合物时被施用的剂量。在某些实施方案中，共施用的第二化合物的剂量高于单独施用第二化合物时被施用的剂量。 
在某些实施方案中，共施用第二化合物增强第一化合物的效应，以使共施用化合物导致大于单独施用第一化合物的效应的效应。在某些实施方案中，共施用导致单独施用时化合物的效应的累加的效应。在某些实施方案中，共施用导致超过单独施用时化合物的效应的累加的效应。在某些实施方案中，第一化合物是反义化合物。在某些实施方案中，第二化合物是反义化合物. 
在某些实施方案中，可与本发明药物组合物共施用的药用剂包括抗精神病药，例如氟哌啶醇、氯丙嗪、氯氮平、喹硫平和奥氮平；抗抑郁药，例如氟西汀、盐酸舍曲林、文法拉辛和去甲替林；安定剂例 如苯并二氮卓类、氯硝西泮、帕罗西汀、文法拉辛和β-阻滞剂；情绪稳定剂，例如锂、丙戊酸盐、拉莫三嗪和卡马西平；麻痹药例如肉毒杆菌毒素；和/或其它试验剂包括但不限于丁苯那嗪(Xenazine)、肌酸、辅酶Q10、海藻糖、二十二碳六烯酸、ACR16、乙基-EPA、阿托西汀、西酞普兰、dimebon、美金刚、苯基丁酸钠、ramelteon、熊去氧胆酸、再普乐、丁苯那嗪(xenasine)、泰必利、利鲁唑、金刚烷胺、[123I]MNI-420、阿托西汀、丁苯那嗪、地高辛、右美沙芬、华法林、阿普唑仑、酮康唑、奥美拉唑和米诺环素。 
在某些实施方案中，可与本发明的药物组合物共施用的药用剂包括镇痛药，例如扑热息痛(对乙酰氨基酚)；非甾体抗炎药(NSAID)，例如水杨酸盐；麻醉药物，例如吗啡、和具有麻醉性质的合成药物例如曲马多。 
在某些实施方案中，可与本发明的药物组合物共施用的药用剂包括肌肉松弛剂，例如苯并二氮卓类和美索巴莫。 
制剂 
本发明化合物也可与其它分子、分子结构或化合物的混合物掺合、缀合或以其他方式缔合，作为例如，脂质体、受体靶向的分子或其它制剂，以有助于摄取、分布和/或吸收。教导制备此类摄取、分布和/或吸收辅助制剂的代表性美国专利包括但不限于，U.S.：5,108,921；5,354,844；5,416,016；5,459,127；5,521,291；5,543,158；5,547,932；5,583,020；5,591,721；4,426,330；4,534,899；5,013,556；5,108,921；5,213,804；5,227,170；5,264,221；5,356,633；5,395,619；5,416,016；5,417,978；5,462,854；5,469,854；5,512,295；5,527,528；5,534,259；5,543,152；5,556,948；5,580,575；和5,595,756，所述每一篇通过引用并入本文。 
本发明的反义化合物包含任何药学上可接受的盐、酯或此类酯的盐、或任何其它化合物，其在施用于动物(包括人)时，能够提供(直接 或间接)生物学活性的代谢物或其残基。 
术语″药学上可接受的盐″是指本发明化合物的生理上和药学上可接受的盐：即保留母体化合物的所需生物活性并且不赋予其不希望的毒理学效应的盐。对于寡核苷酸，药学上可接受的盐及其用途的优选实例进一步描述于U.S.专利6,287,860，其整体并入本文。已显示钠盐是寡核苷酸药物的适合形式。 
本发明还包括包括本发明反义化合物的药物组合物和制剂。本发明的药物组合物可以多种方法施用，取决于局部性或全身性治疗是否是所需的以及待治疗的区域。施用可以是胃肠外施用。胃肠外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注；或颅内，例如脑内施用、鞘内施用、室内施用、室施用、脑室内施用、脑的室内施用或脑室施用。 
室内施用对靶向脉络丛中的转甲状腺素蛋白表达是优选的。据信具有至少一个2′-O-甲氧基乙基修饰的寡核苷酸特别可用于口服施用。用于局部施用的药物组合物和制剂可包括透皮贴剂、软膏剂、洗剂、霜剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和粉剂。常规药用载体、水性、粉状或油性基质、增稠剂等可以是必需的或期望的。涂敷的避孕套、手套等也可以是有用的。 
可方便地呈示在单位剂量形式中的本发明的药物制剂可根据制药工业所熟知的常规技术来制备。此类技术包括将活性成分与药用载体或赋形剂组合在一起的步骤。一般而言，制剂通过均匀且紧密地将活性成分与液态载体或细粉状固态载体或两者组合在一起并且然后如有必要使产物成型来制备。 
本发明的组合物可被配制成很多可能的剂量形式中的任一种，例如但不限于片剂、胶囊、凝胶胶囊、液态糖浆、软凝胶剂、栓剂和灌肠剂。本发明的组合物也可被配制成在水性、非水性或混合型介质中的栓剂。水性栓剂还可包含增加悬液粘度的物质(包括例如，羧甲基 纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。栓剂也可包含稳定剂。 
本发明的药物组合物包括但不限于，溶液、乳液、泡沫状物和含脂质体制剂。本发明的药物组合物和制剂可包含一种或多种穿透促进剂、载体、赋形剂或其它活性成分或无活性成分。 
乳液通常是一种以通常超过0.1μm直径的的液滴形式分散于另一种液体中的液体的多相系统。乳液除包含分散相之外，还可包含额外的组分，和活性药物，其可以在水相、油相或自身作为单独相中的溶液存在。微乳作为本发明的实施方案被包括。乳液及其用途是本领域所熟知的并且进一步描述于U.S.专利6,287,860，其整体并入本文。 
本发明的制剂包括脂质体制剂。如本发明所用的，术语″脂质体″意指由排列在球形双层中的两亲性脂质组成的小囊泡。脂质体是单室或多室小囊泡，其具有由亲脂性材料和包含待递送的组合物的水性内部形成的膜。阳离子型脂质体是带正电的，据信其与带负电的DNA分子相互作用以形成稳定的复合物。据信为pH敏感性或带负电荷的脂质体捕获DNA而不是与其复合。阳离子型和非阳离子型脂质体两者已用于递送DNA至细胞。 
脂质体还包括″空间上稳定的″脂质体，该术语，如本文所用的，是指包含一种或多种专用脂质的脂质体，所述脂质当掺合到脂质体中时导致循环寿命相对于缺少此类专用脂质的脂质体而增加。脂质体及其用途进一步描述于U.S.专利6,287,860，其整体并入本文。 
在本发明的另一个实施方案中，本发明的制剂包括盐水制剂。在本发明的某些实施方案中，制剂由本文所述的化合物和盐水组成。在某些实施方案中，制剂主要由本文所述的化合物和盐水组成。在某些实施方案中，盐水是可药用级盐水。在某些实施方案中，盐水是缓冲盐水。在某些实施方案中，盐水是磷酸盐缓冲盐水(PBS)。 
在某些实施方案中，制剂不包括脂质体。在某些实施方案中，制 剂不包括空间上稳定的脂质体。在某些实施方案中，制剂不包括磷脂。在某些实施方案中，制剂主要由本文所述的化合物和盐水组成并且不包括脂质体。 
本发明的药物制剂和组合物还可包括表面活性剂。表面活性剂及其用途进一步描述于U.S.专利6,287,860，其整体并入本文。 
在一个实施方案中，本发明使用各种穿透促进剂以影响核酸、特别是寡核苷酸的有效递送。穿透促进剂及其用途进一步描述于U.S.专利6,287,860，其整体并入本文。 
本领域技术人员应认识到，根据其预期用途即施用途径来常规设计制剂。 
用于局部施用的优选制剂包括其中本发明的寡核苷酸与局部递送剂掺合的制剂，所述局部递送剂例如脂质、脂质体、脂肪酸、脂肪酸酯、类固醇、螯合剂和表面活性剂。优选脂质和脂质体包括中性(例如二油酰基磷脂酰基DOPE乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰基胆碱DMPC、二硬脂酰基磷脂酰基胆碱)阴性(例如二肉豆蔻酰基磷脂酰基甘油DMPG)和阳离子型(例如二油酰基四甲基氨基丙基DOTAP和二油酰基磷脂酰基乙醇胺DOTMA)。 
用于胃肠外施用(包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内注射或输注或颅内)的组合物和制剂可包括无菌水溶液，其也可包含缓冲剂、稀释剂和其它适合的添加剂(例如但不限于穿透促进剂、载体化合物和其它药学上可接受的载体或赋形剂)。 
本发明的某些实施方案提供了药物组合物，其含有一个或多个寡聚化合物和一个或多个通过非-反义机理起作用的其它化疗剂。此类化疗剂的实例包括但不限于癌症化疗药物例如柔红霉素、道诺霉素、更生霉素、阿霉素、表柔比星、伊达比星、伊索比星、争光霉素、马磷酰胺、异磷酰胺、胞嘧啶、阿糖胞苷、二-氯乙基亚硝基脲、白消 安、丝裂霉素C、放线菌素D、光辉霉素、泼尼松、羟基黄体酮、睾酮、他莫昔芬、达卡巴嗪、丙卡巴肼、六甲蜜胺、五甲蜜胺、米托蒽醌、安吖啶、苯丁酸氮芥、甲基环己基亚硝基脲、氮芥、美法仑、环磷酰胺、6-巯嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氮杂胞苷、羟基脲、脱氧柯福霉素、4-羟基过氧环磷酰胺、5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-氟脱氧尿苷(5-FUdR)、甲氨蝶呤(MTX)、秋水仙碱、泰素、长春新碱、长春碱、依托泊苷(VP-16)、三甲曲沙、伊立替康、托泊替康、吉西他滨、替尼泊苷、顺铂和己烯雌酚(DES)。当用于本发明的化合物时，此类化疗剂可单独使用(例如，5-FU和寡核苷酸)、相继使用(例如如，5-FU和寡核苷酸使用一段时间后，使用MTX和寡核苷酸)或与一个或多个其它此类化疗剂组合使用(例如，5-FU、MTX和寡核苷酸或5-FU、放射疗法和寡核苷酸)。抗炎药物(包括但不限于非甾体抗炎药物和皮质甾类)和抗病毒药(包括但不限于利巴韦林、阿糖腺苷、阿昔洛韦和更昔洛韦)也可组合于本发明的组合物中。反义化合物和其它非-反义药物的组合也在本发明的范围之内。可一起或相继使用两种或更多种组合的化合物。 
在另一种相关的实施方案中，本发明的组合物可包含一个或多个靶向于第一核酸的反义化合物(特别是寡核苷酸)，和一个或多个靶向于第二核酸靶的额外反义化合物。可选地，本发明的组合物可包含两个或更多个靶向于同一核酸靶的不同区域的反义化合物。反义化合物的许多实例在本领域是已知的。可一起或相继使用两个或更多个组合的化合物。 
给药 
据信治疗组合物的制剂及其随后施用(给药)在本领域技术人员的技能之内。给药取决于待治疗的疾病状态的严重度和响应性，治疗过程持续数天至数月或直至完成治愈或实现疾病状态的减少。最佳给药时间表可从药物在患者体内的蓄积的测量来计算。最佳剂量可取决于个体寡核苷酸的相对效力而变化，并且可以通常根据发现在体外和体 内动物模型中有效的EC50s来估算。一般而言，剂量为0.01μg至100g/kg体重，并且可每天、每周、每月或每年或在期望的间隔给予一次或多次。在成功的治疗后，让患者经受维持治疗以预防疾病状态复发是可取的，其中寡核苷酸每天一次或多次以维持剂量施用，范围为0.01μg至100g/kg体重。 
尽管已经根据其优选实施方案中的某些实施方案特异性地描述了本发明，但是下述实施例仅用于举例说明本发明并且并不旨在限制本发明。本申请中所引用的参考文献、GenBank登录号等中的每一个通过引用整体并入本文。 
实施例
非限定性公开且通过引用并入 
尽管根据某些实施方案已选择性描述本文所述的某些化合物、组合物和方法，但是下列实施例仅用于举例说明本文所述的化合物并且不旨在限制于此。本申请引用的每篇参考文献通过引用整体并入本文。 
实施例1：HepG2细胞中人转甲状腺素蛋白的反义抑制 
设计靶向转甲状腺素蛋白核酸的反义寡核苷酸并且体外测试其对转甲状腺素蛋白mRNA的效应。使用lipofectin试剂，用50nM反义寡核苷酸转染以10,000个细胞每孔的密度培养的HepG2细胞。约24小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人引物探针组RTS1396(前向序列CCCTGCTGAGCCCCTACTC，在本文被称为SEQ ID NO：5；反向序列TCCCTCATTCCTTGGGATTG，在本文被称为SEQ ID NO：6；探针序列ATTCCACCACGGCTGTCGTCAX，在本文被称为SEQ IDNO：7)。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通 过
Figure DEST_PATH_GDA00002775606900981
测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。 
将表1和2中的嵌合反义寡核苷酸设计成5-10-5MOE缺口基体。缺口基体为20个核苷酸长度，其中中央缺口区段包含10个2’-脱氧核苷酸并且通过各自包含5个核苷酸的翼侧翼连接在两侧(以5’和3′方向)。5’翼区段中的每个核苷酸和3’翼区段中的每个核苷酸具有2’-MOE修饰。每个缺口基体中的核苷间键合为硫代磷酸酯(P＝S)键合。每个缺口基体中的所有胞苷残基是5-甲基胞苷。“人靶起始位点”指示人基因序列中缺口基体所靶向的5’最末端核苷酸。“人靶终止位点”指示人基因序列中缺口基体所靶向的3’最末端核苷酸。表1中所列的每个缺口基体靶向于人转甲状腺素蛋白mRNA，在本文被称为SEQ ID NO：1(GENBANK登记号NM_000371.2)。还设计靶向人转甲状腺素蛋白基因组序列(在本文被称为SEQ ID NO：2(从核苷酸2009236至2017289截短的GENBANK登记号NT_010966.10))的内含子序列或内含子-外显子接点的某些缺口基体，并且列于表2中。 
表1和2的的人寡核苷酸也与恒河猴基因序列交叉反应。‘错配’表示人寡核苷酸与恒河猴基因序列错配的核碱基的数目。人寡核苷酸与恒河猴序列之间的互补性越大，人寡核苷酸越有可能与恒河猴序列杂交反应。基于与人外显子的相似性，将表1中人寡核苷酸与从恒河猴基因组序列GENBANK登记号NW_001105671.1提取的外显子1-4相比较。将表2中的人寡核苷酸与恒河猴基因组序列(在本文被称为SEQ ID NO：4(从核苷酸628000至638000截短的GENBANK登记号NW_001105671.1))相比较。“恒河猴靶起始位点”指示恒河猴基因序列中缺口基体所靶向的5’最末端核苷酸。“恒河猴靶终止位点”指示恒河猴基因序列中缺口基体所靶向的3’最末端核苷酸。 
表1 
具有靶向于SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：4的5-10-5MOE翼和脱氧缺口的嵌合反义寡核苷酸对人转甲状腺素蛋白mRNA水平的抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901001
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901021
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901031
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901041
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901051
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901061
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901071
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901081
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901091
表2 
具有靶向于SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4的5-10-5MOE翼和脱氧缺口的嵌合反义寡核苷酸对人转甲状腺素蛋白mRNA水平的抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901111
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901121
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901131
由于人转甲状腺素蛋白mRNA的长度短，设计第二引物探针组远离第一引物探针组RTS1396，以避免扩增子寡核苷酸。使用新的人引物探针组RTS3029(前向序列CTTGCTGGACTGGTATTTGTGTCT，在本文被称为SEQ ID NO：161，反向序列AGAACTTTGACCATCAGAGGACACT，在本文被称为SEQ ID NO：162；探针序列CCCTACGGGCACCGGTGAATCCX，在本文被称为SEQ ID NO：163)，还体外测试反义寡核苷酸对转甲状腺素蛋白mRNA的效应。使用lipofectin试剂，用50nM反义寡核苷酸转染以10,000个细胞每孔的密度培养的HepG2细胞。约24小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901132
测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。结果作为PBS对照细胞组的抑制百分比示于表3中。 
表3 
具有含引物探针组RTS3029的5-10-5MOE翼和脱氧缺口的嵌合反义寡核苷酸对人转甲状腺素蛋白mRNA水平的抑制 
ISISNO 区域 抑制％
304267 编码 13
[0567] 
304268 编码 10
304280 编码 23
304284 编码 10
304285 编码 34
304286 编码 0
304287 编码 34
304288 编码 45
304289 编码 3
304290 编码 16
304291 编码-终止密码子 4
304292 编码-终止密码子 10
304293 编码-终止密码子 14
304294 终止密码子-3’UTR 30
304296 外显子4 78
304297 外显子4 29
304298 外显子4 19
304299 外显子4 85
304300 外显子4 52
304301 外显子4 15
304302 外显子4 45
304303 外显子4 51
304304 外显子4 62
304307 外显子4 76
304308 外显子4 63
304309 外显子4 75
304311 外显子4 81
304312 外显子4 68
420871 编码 0
420872 编码 5
420873 编码 19
420874 编码 0
420875 编码 6
420876 编码 20
420877 编码 28
420878 编码 37
420879 编码 34
420880 编码 36
420881 编码 10
420882 编码 27
[0568] 
420883 编码 13
420884 编码 28
420885 编码 4
420886 编码 21
420887 编码 39
420888 编码 37
420889 编码 9
420890 编码 27
420891 编码 39
420892 编码 43
420893 编码 39
420894 编码 0
420895 编码 0
420896 编码 24
420897 编码 31
420898 编码- 0
420899 终止密码子-3’UTR 41
420900 终止密码子-3’UTR 26
420901 终止密码子-3’UTR 28
420902 终止密码子-3’UTR 20
420903 终止密码子-3’UTR 20
420904 终止密码子-3’UTR 22
420905 终止密码子-3’UTR 32
420906 终止密码子-3’UTR 13
420907 -终止密码子-3’UTR 0
420908 终止密码子-3’UTR 45
420909 3’UTR 41
420910 3’UTR 14
420911 3’UTR 45
420912 3’UTR 62
420913 3’UTR 81
420914 3’UTR 68
420915 3’UTR 71
420916 3’UTR 54
420917 3’UTR 50
420918 3’UTR 43
420919 3’UTR 65
420920 3’UTR 61
420921 3’UTR 65
[0569] 
420922 3’UTR 68
420923 3’UTR 62
420924 3’UTR 9
420925 3’UTR 17
420926 3’UTR 47
420927 3’UTR 57
420928 3’UTR 51
420929 3’UTR 46
420930 3’UTR 39
420931 3’UTR 14
420932 3’UTR 6
420933 3’UTR 1
420934 3’UTR 48
420935 3’UTR 13
420936 3’UTR 62
420937 3’UTR 65
420938 3’UTR 48
420939 3’UTR 7
420940 3’UTR 3
420941 3’UTR 31
420942 3’UTR 0
420943 3’UTR 40
420944 3’UTR 78
420945 3’UTR 58
420946 3’UTR 52
420947 3’UTR 71
420948 3’UTR 73
420949 3’UTR 88
420950 3’UTR 82
420951 3’UTR 90
420952 3’UTR 82
420953 3’UTR 71
420954 3’UTR 67
420955 3’UTR 73
420956 3’UTR 65
420957 3’UTR 74
420958 3’UTR 69
420959 3’UTR 63
420960 外显子1-内含子1 14
[0570] 
420961 内含子1 16
420962 内含子1 0
420963 内含子1 0
420964 内含子1 14
420965 内含子1 23
420966 内含子1 25
420967 内含子1 12
420968 内含子1 0
420969 内含子1 0
420970 内含子2 25
420971 内含子2 0
420972 内含子2 25
420973 内含子2 7
420974 内含子2 28
420975 内含子2 9
420976 内含子2 21
420977 内含子2 14
420978 内含子2 37
420979 内含子2 37
420980 内含子2-外显子3 16
420981 内含子3 0
420982 内含子3 28
420983 内含子3 0
420984 内含子3 0
420985 内含子3 0
420986 内含子3 7
420987 内含子3 0
420988 内含子3 0
420989 内含子3 0
420990 内含子3 6
420991 内含子3 15
420992 内含子3 0
420993 内含子3 0
420994 内含子3 0
420995 内含子3 10
基于使用新引物探针组RTS3029的抑制结果，选择表现出50％或更高的转甲状腺素蛋白mRNA抑制的反义寡核苷酸以用于进一步研究。 
实施例2：通过microwalk设计的寡核苷酸对HepG2细胞中人转甲状腺素蛋白的反义抑制 
基于表3中所示的表明至少50％抑制的缺口基体设计额外的缺口基体。通过产生在来自表3的原始缺口基体的上游和下游(即“microwalk”)轻微转移的缺口基体来设计这些缺口基体。缺口基体也用各种基序例如5-10-5MOE、3-14-3MOE、2-13-5MOE和4-11-5MOE基序产生。体外测试这些缺口基体。使用lipofectin试剂，用50nM反义寡核苷酸转染以10,000个细胞每孔的密度培养的HepG2细胞。约24小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人引物探针组RTS3029用于测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。结果示于表4中。 
将表4中的嵌合反义寡核苷酸设计为5-10-5MOE、3-14-3MOE、2-13-5MOE或4-11-5MOE缺口基体。表4中的星号(*)指定的缺口基体是原始缺口基体，从其通过microwalk设计缺口基体ISIS425650-425763。5-10-5缺口基体是20个核苷酸长度，其中中央缺口区段包含10个2’-脱氧核苷酸并且通过各自包含5个核苷酸的翼侧翼连接在两侧(以5′和3′方向)。3-14-3缺口基体是20个核苷酸长度，其中中央缺口区段包含14个2’-脱氧核苷酸并且通过各自包含3个核苷酸的翼侧翼连接在两侧(以5′和3′方向)。2-13-5缺口基体是20个核苷酸长度，其中中央缺口区段包含13个2’-脱氧核苷酸并且用分别包含2个和5个核苷酸的翼侧翼连接在5’和3′方向上。4-11-5缺口基体是20个核苷酸长度，其中中央缺口区段包含11个2’-脱氧核苷酸并且用分别包含4个和5个核苷酸的翼侧翼连接在5’和3′方向上。对于基序(5-10-5、3-14-3、2-113-5和4-11-5)中的每一个，5′翼区段中的每个核苷酸和3′翼区段中的每个核苷酸具有2’-MOE修饰。每个缺口基体中的核苷间键合为硫代磷酸酯(P＝S)键合。每个缺口基体中的所有胞苷残基是5-甲基胞苷。“靶起始位点”指示缺口基体所靶向的5′最末端核 苷酸。“靶终止位点”指示缺口基体所靶向的3′最末端核苷酸。表4中所列的每个缺口基体靶向于跨越SEQ ID NO：1的核碱基481-619的靶区域(GENBANK登记号NM_000371.2)。 
如表4中所示，数个缺口基体表现出至少50％抑制，包括ISIS号：304296、425655、425695、425735、425649、425656、425696、425736、420912、425657、425697、425737、420913、425658、425698、425738、420914、425659、425699、425739、304299、425660、425700、425740、420915、420916、425662、425702、420919、425703、420920、425664、425704、425742、420921、425665、425705、425743、420922、425666、425706、420923、420937、420944、425669、425709、425746、425710、425711、425747、420948、425712、425748、425673、425713、425749、425651、425675、425715、425751、304309、425676、425716、425752、420949、425677、425717、425753、420950、425678、425718、425754、420951、425679、425719、425755、420952、425680、425720、425756、420953、425681、425721、425757、420954、425722、425758、420955、425759、425724、425760、425762、304310、425729、425764、425653、425690、425730、425765、304311、425691、425731、425766、304312、425692、425732、425767、425654、425693、425733、425768、304313、425734和425769。 
数个缺口基体表现出至少60％抑制，包括ISIS号：304296、425655、425695、425735、425649、425656、425696、425736、420912、425657、425697、425737、420913、425658、425698、425738、420914、425659、425739、304299、425740、420915、425702、420919、420920、425742、420921、425665、425705、425706、420923、425746、425711、425747、420948、425712、425748、425651、425715、425751、304309、425716、425752、425677、425717、425753、420950、425718、425754、420951、425679、425719、425755、420952、425680、425720、420953、425681、425721、425757、420954、425722、425758、420955、425724、425760、425764、425653、425690、425730、425765、304311、425691、 425731、425766、304312、425692、425732、425767、425654、425693、425733、304313和425769。 
数个缺口基体表现出至少70％抑制，包括ISIS号：304296、425655、425695、425735、425649、425656、425696、425736、420912、425657、425737、420913、425738、420914、425659、304299、420915、420920、425742、425712、425748、425716、425754、420951、425679、425719、425755、425680、425721、425757、425760、425653、425690、425730、425765、304311、425691、425731、425766、304312、425767、425693和304313。 
数个缺口基体表现出至少80％抑制，包括ISIS号：304296、425655、425695、425736、420913、425659、304299、420915、425716、425754、425719、425757、425765和425767。 
数个缺口基体表现出至少85％抑制，包括ISIS号：420913、425716、425754和425719。 
一个缺口基体ISIS425719表现出90％抑制。 
表4 
靶向于SEQ ID NO：1(GENBANK登记号NM_000371.2)的嵌合反义寡核苷酸对人转甲状腺素蛋白mRNA水平的抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901201
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901211
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901221
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901231
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901241
实施例3：HepG2细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
来自实施例2的表现出显著体外抑制人转甲状腺素蛋白的缺口基体以各种剂量在HepG2细胞中测试。将细胞以20,000个细胞每孔的密度铺板并且使用电穿孔，用表5中所示的625nM、1250nM、2500nM、5000nM和10000nM浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS3029用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901242
测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。 
每种寡核苷酸的半数最大抑制浓度(IC50)也示于表5中，其通过将所用的寡核苷酸浓度对每种浓度时所实现的转甲状腺素蛋白mRNA表达的抑制百分比作图并且记录相比于对照实现50％的转甲状腺素蛋白mRNA表达抑制的寡核苷酸的浓度来计算。如表5中所 示，反义寡核苷酸处理的细胞中的转甲状腺素蛋白mRNA水平以剂量依赖性方式显著减少。 
表5 
使用电穿孔的HepG2细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
ISISNO 625nM 1250nM 2500nM 5000nM 10000nM IC50(μM)
304296 57 74 83 91 96 ＜０.625
304299 43 76 82 95 94 0.627
420913 59 75 90 88 98 ＜0.625
420915 60 85 91 95 99 ＜0.625
420951 64 77 90 97 99 ＜0.625
425653 70 86 86 88 82 ＜0.625
425655 48 80 85 97 96 ＜0.625
425656 70 89 92 92 96 ＜0.625
425659 46 56 68 82 93 0.8
425679 63 77 72 94 97 ＜0.625
425680 28 79 85 93 98 0.8
425693 2 64 74 76 81 1.7
425695 74 87 91 97 98 ＜0.625
425716 69 84 95 97 98 ＜0.625
425719 58 84 92 96 98 ＜0.625
425721 40 75 89 95 98 0.7
425736 64 71 86 93 93 ＜0.625
425737 78 93 95 97 98 ＜0.625
425738 40 77 88 94 95 0.7
425754 56 75 87 96 99 ＜0.625
425755 58 84 88 94 97 ＜0.625
425757 62 82 94 97 99 ＜0.625
425760 58 42 74 85 93 ＜0.625
425765 81 86 87 83 88 ＜0.625
425766 83 89 81 75 74 ＜0.625
425767 56 75 83 81 80 ＜0.625
来自实施例2的缺口基体还以各种剂量使用转染试剂lipofectin在HepG2细胞中测试。将细胞以10,000个细胞每孔的密度铺板并且使用电穿孔用表6中所指定的6.25nM、12.5nM、25nM、50nM和100nM 浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS3029用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表6中所示，反义寡核苷酸处理的细胞中的转甲状腺素蛋白mRNA水平以剂量依赖性方式显著减少。 
表6 
使用lipofectin试剂的对HepG2细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
ISISNO 6.25nM 12.5nM 25nM 50nM 100nM IC50(nM)
304296 26 41 43 52 65 39
304299 22 70 43 74 83 20
420913 4 60 60 68 82 30
420915 36 31 46 64 67 28
420951 10 37 56 85 84 19
425653 25 38 60 74 77 18
425655 27 15 62 79 81 16
425656 37 62 47 69 82 15
425659 17 35 33 79 73 30
425679 32 6 63 79 77 14
425680 16 48 41 84 84 28
425693 10 19 51 66 61 26
425695 36 23 54 76 84 28
425716 57 52 36 85 81 38
425719 25 39 28 60 76 45
425721 0 22 38 73 75 32
425736 25 60 30 77 80 22
425737 36 52 50 60 76 14
425738 13 15 19 65 70 27
425754 8 18 38 75 71 42
425755 26 46 54 77 86 20
425757 0 37 81 83 71 19
425760 28 46 72 70 80 18
425765 0 52 48 66 69 29
[0598] 
425766 24 19 48 69 71 29
425767 41 49 48 65 75 14
实施例4：HepG2细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
选自实施例3的缺口基体还以各种剂量在HepG2细胞中测试。将细胞以20,000个细胞每孔的密度铺板并且使用电穿孔用表7中所指定的0.0617μM、0.1852μM、0.5556μM、1.6667μM和5μM浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS3029用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901271
测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表7中所示，反义寡核苷酸处理的细胞中的转甲状腺素蛋白mRNA水平以剂量依赖性方式减少。 
表7 
使用电穿孔的HepG2细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
ISISNO 0.0617μM 0.1852μM 0.5556μM 1.6667μM 5μM IC50(μM)
304296 0 6 44 58 83 1.2
304299 38 10 57 83 92 0.6
420913 51 51 54 73 93 0.2
420915 33 35 62 65 93 0.2
420951 40 33 36 82 96 0.4
425653 55 58 74 72 84 ＜0.06
425655 8 35 54 57 90 0.5
425656 12 43 43 78 94 0.4
425659 14 35 19 46 82 0.6
425679 30 13 23 69 91 0.8
425680 0 35 45 74 84 0.7
425693 0 6 14 32 59 3.4
425695 15 47 61 81 91 0.3
[0604] 
425716 20 17 53 77 91 0.6
425719 0 14 45 78 94 0.8
425721 0 0 22 74 84 0.9
425736 42 43 56 76 91 0.3
425737 21 29 61 81 97 0.3
425738 14 39 57 74 93 0.4
425754 29 34 45 78 94 0.4
425755 8 21 57 78 95 0.5
425757 29 28 62 83 95 0.4
425760 3 6 9 56 77 1.4
425765 24 51 75 77 88 0.3
425766 7 41 59 73 77 0.3
425767 1 18 49 66 79 1.0
实施例5：Hep3B细胞中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的剂量响应确认 
来自实施例4的表现出显著体外抑制人转甲状腺素蛋白的缺口基体还以各种剂量在Hep3B细胞中测试。将细胞以20,000个细胞每孔的密度铺板并且使用电穿孔用表8中所指定的0.0206μM、0.062μM、0.185μM、0.556μM、1.667μM和5μM浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS1396用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901281
测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表8中所示，反义寡核苷酸处理的细胞中的转甲状腺素蛋白mRNA水平以剂量依赖性方式减少。每种寡核苷酸的IC50也示于表8中。 
表8 
使用电穿孔的Hep3B细胞中的人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901282
实施例6：人转甲状腺素蛋白-转基因小鼠原代肝细胞中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的剂量响应确认 
来自实施例5的缺口基体还以各种剂量在人转甲状腺素蛋白-转基因小鼠的原代肝细胞中测试。ISIS304309、ISIS304311、ISIS304312和ISIS420951(参见实施例2)也与这些缺口基体一起在相同培养条件下再测试。将细胞以10,000个细胞每孔的密度铺板并且使用cytofectin用表9中所指定的18.75nM、37.5nM、75nM、150nM和300nM浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS1396用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901292
测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表9中所示，反义寡核苷酸处理的细胞中的转甲状腺素蛋白mRNA水平以剂量依赖性方式减少。 
表9 
使用cytofectin的小鼠原代肝细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
ISISNO 18.75nM 37.5nM 75nM 150nM 300nM 基序
304299 54 79 97 98 99 5-10-5
304309 48 77 94 99 99 5-10-5
304311 45 79 92 96 98 5-10-5
[0616] 
304312 33 71 89 96 98 5-10-5
420915 40 70 92 98 99 5-10-5
420951 41 86 96 98 99 5-10-5
425653 44 81 93 96 99 5-10-5
425655 61 88 96 99 99 3-14-3
425656 61 84 94 98 99 3-14-3
425679 74 78 97 98 99 3-14-3
425695 66 84 96 98 99 2-13-5
425736 58 84 95 98 99 4-11-5
425737 57 77 95 98 99 4-11-5
425755 61 82 96 99 99 4-11-5
425757 37 77 93 98 98 4-11-5
实施例7：HepG2细胞中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的剂量响应确认 
来自实施例6的缺口基体还以各种剂量在HepG2细胞中测试。将细胞以10,000个细胞每孔的密度铺板并且使用电穿孔用表10中所指定的0.062μM、0.185μM、0.556μM、1.66μM和5000μM浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS1396用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表10中所示，反义寡核苷酸处理的细胞中的转甲状腺素蛋白mRNA水平以剂量依赖性方式减少。 
表10 
使用电穿孔的HepG2细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901302
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901311
实施例8：人转甲状腺素蛋白-转基因小鼠原代肝细胞中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的剂量响应确认 
来自实施例6的缺口基体还以各种剂量在人转甲状腺素蛋白-转基因小鼠的原代肝细胞中测试。将细胞以10,000个细胞每孔的密度铺板并且使用cytofectin用表11中所指定的5nM、10nM、20nM、40nM和80nM浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS3029用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901312
测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表11中所示，反义寡核苷酸处理的细胞中的转甲状腺素蛋白mRNA水平以剂量依赖性方式减少。 
表11 
使用cytofectin的小鼠原代肝细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901321
还使用电穿孔作为转染剂测试缺口基体。将细胞以35,000个细胞每孔的密度铺板并且使用电穿孔用表12中所指定的148.148nM、444.444nM、1,333.333nM、4,000nM和12,000nM浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS3029用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901322
测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。 
表12 
使用电穿孔的小鼠原代肝细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901323
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901331
实施例9：短尾猴原代肝细胞中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的剂量响应确认 
来自实施例6的缺口基体还以各种剂量在短尾猴的原代肝细胞中测试。将细胞以35,000个细胞每孔的密度铺板并且使用电穿孔用表13中所指定的1,250nM、2,500nM、5,000nM、10,000nM和20,000nM浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS1396用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表13中所示，转甲状腺素蛋白mRNA水平在用ISIS寡核苷酸处理的肝细胞中以剂量依赖性方式减少。 
在NCBI数据库中缺乏完全短尾猴基因序列，测试寡核苷酸对恒河猴基因序列的交叉反应性，由于两个物种来自同一属‘猕猴属(Macaca)’。人寡核苷酸与恒河猴转甲状腺素蛋白基因(在本文被称为SEQ ID NO：4(由GENBANK登记号NW_001105671.1提取的的外显子1-4))具有反应交叉性。‘错配’指示人寡核苷酸与恒河猴转甲状腺素蛋白基因之间的错配的数目。‘n/a’指示人寡核苷酸与恒河猴转甲状腺素蛋白基因具有超过3个错配并且因此不与其杂交反应。 
表13 
使用电穿孔的恒河猴原代肝细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901341
实施例10：人转甲状腺素蛋白-转基因小鼠中人转甲状腺素蛋白的体内抑制 
来自实施例6的表明显著抑制转甲状腺素蛋白mRNA的缺口基体在含有人转甲状腺素蛋白基因的转基因小鼠中测试并且评价缺口基体的功效。 
处理 
五组小鼠(每组四只hTTR转基因雌性小鼠)用25mg/kg的ISIS304299、ISIS304309、ISIS304311、ISIS304312、ISIS420915、ISIS 420951、ISIS425653、ISIS425655、ISI S425656、ISIS425679、ISIS425695、ISIS425736、ISIS425737、ISIS425755或ISIS425757皮下施用四周，每周两次。另一组四只雌性hTTR转基因小鼠用25mg/kg的对照寡核苷酸ISIS141923(CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC，在本文被称为SEQ ID NO：165)注射四周，每周两次。另一组四只hTTR转基因雌性小鼠用PBS皮下注射四周，每周两次。用PBS注射的小鼠用作对照组。在第0、1、2、3和4周收集来自所有组的血样以用于血浆转甲状腺素蛋白水平分析。最后一次给药后两天处死小鼠，收获肝以用于靶mRNA分析。 
RNA分析 
从肝组织提取RNA，以用于使用引物探针组RTS3029对转甲状腺素蛋白进行实时PCR分析。结果以相对于PBS对照的人转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表14中所示，相比于PBS对照，用ISIS反义寡核苷酸的处理导致人转甲状腺素蛋白mRNA的显著减少。用对照寡核苷酸ISIS141923的处理并未导致转甲状腺素蛋白的显著减少，如所期望的。 
表14 
相对于PBS对照的hTTR转基因小鼠肝中人转甲状腺素蛋白mRNA的抑制 
ISISNO 抑制％
304299 79
304309 83
304311 63
304312 64
420915 82
420951 92
425653 66
425655 76
425656 76
425679 93
[0649] 
425695 82
425736 63
425737 76
425755 91
425757 91
141923 28
蛋白质分析 
通过ELISA使用抗-转甲状腺素蛋白多克隆抗体(AbcamAb37774)和羊抗-TTR辣根过氧化酶检测抗体(Abcam cat.no.35217)，在转基因小鼠血浆中测量人转甲状腺素蛋白蛋白水平。通过 TMB Substrate Kit使颜色反应显色，并且使用微量滴定板分光光度计在450nm测量吸光度。在给药前和在第7、14和28天采集血浆样品。结果示于表15中，以相比于给药前水平的抑制百分比表示并且表明用ISIS寡核苷酸处理后蛋白水平的时间依赖性减少。 
表15 
相对于给药前水平的hTTR转基因小鼠血浆中人转甲状腺素蛋白的抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901362
体重和器官重量 
在给药前和处理期结束时测量小鼠的体重。体重示于表16中并且以相比于处理开始前采集的PBS对照重量的增加百分比表示。肝、脾和肾重量在研究结束时测量，并且还以相比于PBS对照的相应器官重量的变化百分比示于表16中。如示于表16中，作为反义寡核苷酸处理的结果不存在体重或器官重量的显著变化。 
表16 
反义寡核苷酸处理后转基因小鼠的体重和器官重量的变化百分比 
  体重 肝 脾 肾
PBS 1.1 1.0 1.0 1.0
ISIS304299 1.1 1.1 1.0 0.8
ISIS304309 1.1 1.1 1.0 1.0
ISIS304311 1.1 1.2 1.0 1.2
ISIS304312 1.1 1.3 1.0 0.8
ISIS420915 1.1 1.1 1.0 1.1
ISIS420951 1.1 1.2 1.0 1.5
ISIS425653 1.1 1.1 0.9 1.0
ISIS425655 1.1 1.3 1.0 1.2
ISIS425656 1.2 1.3 1.0 1.3
ISIS425679 1.2 1.2 1.0 1.6
ISIS425695 1.1 1.3 1.0 1.0
ISIS425736 1.2 1.2 1.0 1.0
ISIS425737 1.1 1.2 1.1 1.2
ISIS425755 1.2 1.3 1.1 1.3
ISIS425757 1.1 1.9 1.0 1.5
ISIS141923 1.1 1.1 1.0 0.8
肝功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肝功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量转氨酶血浆浓度。测量ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度，并且结果示于表17中，以IU/L表示。还使用相同的临床化学分析仪测量胆红素的血浆水平；结果还示于表17中并且以mg/dL表示。 
表17 
转基因小鼠的肝中反义寡核苷酸处理对代谢标记的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901371
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901381
肾功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肾功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量血尿素氮(BUN)的血浆浓度。结果示于表18，以mg/dL表示。数据指示在这些转基因小鼠中转甲状腺素蛋白的反义抑制对BUN水平没有影响。 
表18 
转基因小鼠的肾中反义寡核苷酸处理对BUN(mg/dL)的效应 
  BUN(mg/dL)
PBS 26
ISIS304299 24
ISIS304309 29
ISIS304311 28
ISIS304312 26
ISIS420915 25
ISIS420951 25
ISIS425653 24
ISIS425655 28
ISIS425656 25
ISIS425679 26
[0671] 
ISIS425695 28
ISIS425736 25
ISIS425737 23
ISIS425755 24
ISIS425757 25
ISIS141923 23
实施例11：CD1小鼠中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的耐受性 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901391
小鼠(Charles River，MA)是小鼠的多用途模型，常用于安全性和功效测试。小鼠用选自实施例10中所述的研究的ISIS反义寡核苷酸处理并且评价各种代谢标记的水平的变化。 
处理 
各组(每组8只CD1小鼠)用50mg/kg的ISIS304299、ISIS304309、ISIS420915、ISIS420951、ISIS425655、ISIS425656、ISIS425679、ISIS425695、ISIS425736、ISIS425737和ISIS425755皮下注射，每周两次。在处理期的第2周和第6周评价来自每组的四只小鼠。最后一次给药后三天，于每个时间点测量体重，使小鼠安乐死，收获器官和血浆以用于进一步分析。 
体重和器官重量 
给药前和每个处理期(2周和6周)结束时测量小鼠的体重。体重示于表19和20中，并且以相比于处理开始前采集的PBS对照重量的增加百分比表示。肝、脾和肾重量在研究结束时测量，并且还以相比于PBS对照的相应器官重量的变化百分比示于表19和20中。 
表19 
第2周时反义寡核苷酸处理后CD1小鼠的体重和器官重量的变化(％) 
  体重 肝 脾 肾
PBS 1.1 1.0 1.0 1.0
ISIS304299 1.1 1.1 1.1 1.1
ISIS304309 1.1 1.1 1.1 1.0
ISIS420915 1.1 1.1 1.1 1.0
ISIS420951 1.1 1.3 1.7 1.2
ISIS425655 1.1 1.2 1.2 0.9
ISIS425656 1.1 1.1 1.1 1.0
ISIS425679 1.1 1.1 1.4 1.1
ISIS425695 1.1 1.1 0.9 1.1
ISIS425736 1.1 1.1 1.0 1.1
ISIS425737 1.2 1.1 1.1 1.1
ISIS425755 1.2 1.2 1.3 1.2
表20 
第6周时反义寡核苷酸处理后CD1小鼠的体重和器官重量的变化(％) 
  体重 肝 脾 肾
PBS 1.2 1.0 1.0 1.0
ISIS304299 1.3 1.2 1.4 1.0
ISIS304309 1.3 1.3 2.0 1.0
ISIS420915 1.3 1.1 1.5 0.9
ISIS420951 1.3 1.3 2.0 1.1
ISIS425655 1.4 1.3 1.7 0.9
ISIS425656 1.3 1.3 1.1 1.0
ISIS425679 1.3 1.4 2.3 1.2
ISIS425695 1.3 1.4 1.5 1.0
ISIS425736 1.3 1.1 1.2 0.9
ISIS425737 1.2 1.1 1.3 1.0
ISIS425755 1.3 1.3 2.1 1.0
[0684]  肝功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肝功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量转氨酶血浆浓度。测量ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度并且结果示于表21和22中，以IU/L表示。还使用相同的临床化学分析仪测量胆红素和白蛋白的血浆水平，结果还示于表21和22中。 
表21 
第2周时反义寡核苷酸处理对CD1小鼠的肝中代谢标记的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901411
表22 
第6周时反义寡核苷酸处理对CD1小鼠的肝中代谢标记的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901412
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901421
肾功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肾功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量血尿素氮(BUN)和肌酐的血浆浓度。结果示于表23和24中，以mg/dL表示。 
表23 
第2周时反义寡核苷酸处理对CD1小鼠的肾中代谢标记(mg/dL)的效应 
  BUN 肌酐
PBS 32 0.23
ISIS304299 26 0.21
ISIS304309 30 0.19
ISIS420915 30 0.22
ISIS420951 24 0.17
ISIS425655 29 0.22
ISIS425656 25 0.19
ISIS425679 28 0.19
ISIS425695 29 0.19
ISIS425736 24 0.19
ISIS425737 24 0.16
ISIS425755 27 0.17
表24 
第6周时反义寡核苷酸处理对CD1小鼠的肾中代谢标记(mg/dL)的效应 
  BUN 肌酐
PBS 24 0.15
ISIS304299 19 0.11
[0701] 
ISIS304309 20 0.14
ISIS420915 24 0.18
ISIS420951 19 0.08
ISIS425655 22 0.11
ISIS425656 21 0.10
ISIS425679 20 0.06
ISIS425695 21 0.08
ISIS425736 22 0.07
ISIS425737 18 0.07
ISIS425755 22 0.09
血液学测定 
将获自所有小鼠组的血液送至Antech Diagnostics以用于红细胞比容(HCT)、平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的测量和分析，以及血细胞分类计数的测量例如WBC(嗜中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞)、RBC和血小板以及总血红蛋白含量的测量。结果示于表25-28中。表中给出的百分比指示相比于PBS对照的总血细胞计数的变化百分比。未影响血小板计数减少低于70％的PBS对照或单核细胞计数增加超过两倍的那些反义寡核苷酸被选择用于进一步研究。 
表25 
第2周时CD1小鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对全红细胞计数(％)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901431
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901441
表26 
第6周时CD1小鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对全红细胞计数(％)的效应 
表27 
第2周时CD1小鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对血细胞分类计数(％)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901443
表28 
第6周时CD1小鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对血细胞分类计数(％)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901451
实施例12：CD1小鼠肝中反义寡核苷酸的半衰期的测量 
CD1小鼠用来自在实施例11中所述的研究的ISIS反义寡核苷酸处理，并且评价寡核苷酸半衰期和寡核苷酸从肝中降解和消除的消逝时间。 
处理 
各组(每组12只CD1小鼠)用50mg/kg的ISIS304299、ISIS304309、ISIS420915、ISIS420951、ISIS425655、ISIS425656、ISIS425679、ISIS425695、ISIS425736、ISIS425737和ISIS425755皮下注射2周，每周两次。最后一次给药后3天、28天和56天处死来自每组的四只小鼠。收获肝以用于分析。 
寡核苷酸浓度的测量 
测量全长寡核苷酸浓度以及总寡核苷酸浓度(包括降解形式)。所用方法是对先前公布的方法的改进(Leeds等人，1996；Geary等人， 1999)，其包括苯酚-氯仿(液-液)萃取以及随后的固相萃取。在萃取之前加入内标(ISIS355868，27-mer2’-O-甲氧基乙基修饰的硫代磷酸酯寡核苷酸，GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT，在本文被称为SEQ ID NO：166)。使用校准曲线计算组织样品浓度，定量下限(LLOQ)为约1.14μg/g。然后使用WinNonlin软件(PHARSIGHT)计算半衰期。 
结果示于表29和30，以μg/g肝组织表示。每个寡核苷酸的半衰期示于表31中。选择半衰期在11-34天内的反义寡核苷酸以用于进一步研究。 
表29 
CD1小鼠的肝中全长寡核苷酸浓度(μg/g) 
ISISNO. 3天 28天 56天
304299 180 56 8
304309 317 254 106
420915 248 126 34
420951 173 109 49
425655 191 113 33
425656 256 73 29
425679 201 73 27
425695 315 194 65
425736 219 110 47
425737 190 40 9
425755 211 120 47
表30 
CD1小鼠的肝中总寡核苷酸浓度(μg/g) 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901461
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901471
表31 
CD1小鼠的肝中寡核苷酸的半衰期(天) 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901472
实施例13：Sprague-Dawley大鼠中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的耐受性 
Sprague-Dawley大鼠用选自在实施例11和12中所述的研究的ISIS反义寡核苷酸处理，并且评价各种代谢标记的水平的变化。 
处理 
给药前评价大鼠的体重、全血细胞计数和血细胞分类计数以及尿蛋白/肌酐比率。各组(每组4只Sprague-Dawley大鼠)用50mg/kg的ISIS304299、ISIS304309、ISIS420915、ISIS420951、ISIS425655、ISIS425656、ISIS425679、ISIS425695、ISIS425736、ISIS425737和ISIS425755皮下注射，每周两次。最后一次给药后3天，于每个时间点采集体重，使小鼠安乐死，收获器官和血浆以用于进一步分析。 
体重和器官重量 
给药前和在处理期结束时测量大鼠的体重。体重示于表32，并且以相比于处理开始前采集的PBS对照重量的增加百分比表示。肝、脾和肾重量在研究结束时测量，并且还以相比于PBS对照的相应器官重量的变化百分比示于表32中。 
表32 
反义寡核苷酸处理后Sprague-Dawley大鼠的体重和器官重量的变化(％) 
  体重 肝 脾 肾
PBS 1.6 1.0 1.0 1.0
ISIS304299 1.2 1.7 4.9 1.6
ISIS304309 1.1 1.6 4.3 1.4
ISIS420915 1.4 1.4 3.3 1.3
ISIS420951 1.1 1.4 5.0 1.5
ISIS425655 1.2 1.5 3.4 1.3
ISIS425656 1.2 1.5 2.9 1.2
ISIS425679 1.0 1.9 6.4 1.7
ISIS425695 1.2 1.6 3.3 1.3
ISIS425736 1.3 1.5 2.9 1.2
ISIS425737 1.2 1.7 4.0 1.5
ISIS425755 1.0 1.5 5.4 1.5
如表32中所示，某些化合物显示脾重增加低于4倍。 
肝功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肝功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量转氨酶血浆浓度。测量ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度并且结果示于表33，以IU/L表示。还使用相同的临床化学分析仪测量胆红素和白蛋白的血浆水平，并且结果也示于表33中。 
表33 
反义寡核苷酸处理对Sprague-Dawley大鼠的肝中代谢标记的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901491
肾功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肾功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量血尿素氮(BUN)和肌酐的血浆浓度。结果示于表34，以mg/dL表示。还评价总尿蛋白与肌酐的比率并且示于表35中。 
表34 
反义寡核苷酸处理对Sprague-Dawley大鼠的肾中代谢标记(mg/dL)的效应 
  BUN 肌酐
PBS 20 0.26
ISIS304299 30 0.40
ISIS304309 24 0.33
ISIS420915 20 0.26
ISIS420951 37 0.47
ISIS425655 28 0.40
[0754] 
ISIS425656 25 0.34
ISIS425679 46 0.42
ISIS425695 30 0.37
ISIS425736 26 0.37
ISIS425737 30 0.36
ISIS425755 29 0.36
表35 
反义寡核苷酸处理对Sprague-Dawley大鼠的肾中总尿蛋白/肌酐的效应 
  给药前 第6周
PBS 0.82 0.95
ISIS304299 0.95 7.57
ISIS304309 1.10 5.20
ISIS420915 0.91 5.30
ISIS420951 0.90 5.02
ISIS425655 0.78 6.03
ISIS425656 0.86 9.37
ISIS425679 0.91 7.80
ISIS425695 0.89 5.71
ISIS425736 1.00 5.85
ISIS425737 0.86 43.76
ISIS425755 0.78 3.70
如表34和35所示，某些化合物表明这些大鼠的肾中总尿蛋白/肌酐增加低于7倍。而且，某些化合物表明这些大鼠的肾中总尿蛋白/肌酐增加低于6倍。 
血液学测定 
将获自所有小鼠组的血液送至Antech Diagnostics以用于红细胞比容(HCT)、平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的测量和分析，以及血细胞分类计数的测量例如WBC(嗜中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞)、RBC和血小板以及总血红蛋白含量的测量。结果示于表36和37中。表中给出的百分比指示相比于PBS对照的总血细胞计数的变化百分比。 
表36 
Sprague-Dawley大鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对全红细胞计数(％)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901511
表37 
Sprague-Dawley大鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对全红细胞计数(％)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901512
实施例14：Sprague-Dawley大鼠肝和肾中反义寡核苷酸浓度的药动学研究 
Sprague-Dawley大鼠用选自在实施例13中所述的研究的ISIS反义寡核苷酸处理，并且评价寡核苷酸半衰期和寡核苷酸从肝和肾中降解和消除的消逝时间。 
处理 
各组(每组4只Sprague Dawley大鼠)用20mg/kg的ISIS304299、ISIS304309、ISIS420915、ISIS420951、ISIS425655、ISIS425656、ISIS425679、ISIS425695、ISIS425736、ISIS425737和ISIS425755皮下注射2周，每周两次。最后一次给药后3天，使大鼠安乐死并且收集肝和肾以用于分析。 
寡核苷酸浓度的测量 
测量全长寡核苷酸浓度以及总寡核苷酸浓度(包括降解形式)。所用方法是对先前公布的方法的改进(Leeds等人，1996；Geary等人，1999)，其包括苯酚-氯仿(液-液)萃取以及随后的固相萃取。在萃取之前加入内标(ISIS355868，27-mer2’-O-甲氧基乙基修饰的硫代磷酸酯寡核苷酸，GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT，在本文被称为SEQ ID NO：166)。使用校准曲线计算组织样品浓度，定量下限(LLOQ)为约1.14μg/g。结果示于表38和39，以μg/g肝或肾组织表示。还计算全长寡核苷酸的肾与肝的比率，并且示于表38中。 
表38 
Sprague-Dawley大鼠的肝和肾中全长寡核苷酸浓度(μg/g)的比率 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901521
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901531
表39 
Sprague-Dawley大鼠的肝和肾中的总寡核苷酸浓度(μg/g) 
ISISNO. 肝 肾
304299 208 653
304309 409 803
420915 196 844
420951 348 879
425655 340 764
425656 329 703
425679 461 710
425695 369 843
425736 282 738
425737 195 587
425755 351 886
实施例15：转基因小鼠中人转甲状腺素蛋白的体内剂量依赖性抑制 
以选自在实施例14中所述的研究的ISIS寡核苷酸的渐增剂量对含有人转甲状腺素蛋白基因的转基因小鼠给药以评价这些小鼠中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性抑制的效应。 
处理 
各组(每组四只小鼠，两只雄性，两只雌性)用4mg/kg、10mg/kg或25mg/kg的ISIS304299、ISIS420915、ISIS420951、ISIS425679、ISIS425736、ISIS425737或ISIS425755皮下注射4周，每周两次。一组小鼠(四只小鼠，两只雄性，两只雌性)用25mg/kg的对照寡核苷 酸ISIS141923皮下注射4周，每周两次。一个对照组(四只小鼠，两只雄性，两只雌性)用PBS皮下注射4周，每周两次。在第0、7、14、21和28天采集每组的血浆样品。最后一次给药后2天，使小鼠安乐死，并且收获器官以用于进一步分析。 
RNA分析 
从肝组织提取RNA，以用于使用引物探针组RTS3029对转甲状腺素蛋白实时PCR分析。结果以相对于PBS对照的人转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表40中所示，相比于PBS对照，用ISIS反义寡核苷酸的处理导致人转甲状腺素蛋白mRNA的显著剂量依赖性减少。用对照寡核苷酸ISIS141923的处理并未导致转甲状腺素蛋白的显著减少，如所期望的。 
表40 
相对于PBS对照的hTTR转基因小鼠肝中人转甲状腺素蛋白mRNA的抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901541
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901551
蛋白质分析 
通过ELISA使用抗-转甲状腺素蛋白多克隆抗体(AbcamAb37774)和羊抗-TTR辣根过氧化酶检测抗体(Abcam cat.no.35217)，在转基因小鼠血浆中测量人转甲状腺素蛋白蛋白水平。通过 TMB Substrate Kit使颜色反应显色，并且使用微量滴定板分光光度计在450nm测量吸光度。在给药前和在第7、14、21和28天采集血浆样品。结果示于表41，以相比于给药前水平的抑制百分比表示并且表明用ISIS寡核苷酸处理后蛋白水平的时间依赖性和剂量依赖性减少。 
表41 
相对于给药前水平的转基因小鼠血浆中人转甲状腺素蛋白的抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901553
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901561
体重和器官重量 
在给药前和处理期结束时测量小鼠的体重。体重示于表42中并且以相比于处理开始前采集的PBS对照重量的增加百分比表示。肝、脾和肾重量在研究结束时测量，并且还以相比于PBS对照的相应器官重量的变化百分比示于表42中。 
表42 
反义寡核苷酸处理后转基因小鼠的体重和器官重量的变化(％) 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901562
肝功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肝功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量转氨酶血浆浓度。测量ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度并且结果示于表43中，以IU/L表示。还使用相同的临床化学分析仪测量胆红素的血浆水平；结果还示于表43中并且以mg/dL表示。 
表43 
反义寡核苷酸处理对转基因小鼠的肝中代谢标记的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901572
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901581
肾功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肾功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量血尿素氮(BUN)的血浆浓度。结果示于表44，以mg/dL表示。 
表44 
反义寡核苷酸处理对转基因小鼠的肾中BUN(mg/dL)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901582
实施例16：人转甲状腺素蛋白-转基因小鼠中人转甲状腺素蛋白的体内抑制 
具有来自表4的5-10-5MOE基序、ISIS304313、ISIS420913、ISIS420919、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420937、ISIS420944、ISIS420947、ISIS420949、ISIS420950、ISIS420951、ISIS420952、ISIS420953、ISIS420955、ISIS420957和ISIS420959的反义寡核苷酸。选择表现出65％或更多的转甲状腺素蛋白mRNA抑制的这些反义寡核苷酸并且在含有人转甲状腺素蛋白基因的转基因小鼠中测试。还设计具有与ISIS420951(GTTTTATTGTCTCTGCCTGG(SEQ IDNO：116))重叠的序列并且具有各种基序的额外寡核苷酸以在转基因小鼠中进行测试。这些额外寡核苷酸为ISIS450518(TTTTATTGTCTCTGCCTG(SEQ ID NO：5-8-5MOE(SEQ IDNO：167))、ISIS450519(GTTTTATTGTCTCTGCCTGG，6-8-6MOE(SEQ ID NO：116))、ISIS450520(GTTTTATTGTCTCTGCCTGG，3-10-7MOE(SEQ ID NO：116))、ISIS450521(GTTTTATTGTCTCTGCCTGG，7-10-3MOE(SEQ ID NO：116))、ISIS450522(GTTTTATTGTCTCTGCCTGG，2-10-8MOE(SEQID NO：116))和ISIS450523(GTTTTATTGTCTCTGCCTGG，8-10-2MOE(SEQ ID NO：116))。 
处理 
各组(每组四只hTTR转基因小鼠，两只雄性和两只雌性)用25mg/kg的ISIS304313、ISIS420913、ISIS420919、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420937、ISIS420944、ISIS420947、ISIS420949、ISIS420950、ISIS420951、ISIS420952、ISIS420953、ISIS420955、ISIS420957、ISIS420959、ISIS425518、ISIS425519、ISIS425520、ISIS425521、ISIS425522或ISIS425523皮下注射四周，每周两次。对照组(四只hTTR转基因小鼠，两只雄性和两只雌性)用PBS皮下注射四周，每周两次。在第0、14和28天收集所有组的血样以用于血浆转 甲状腺素蛋白水平分析。最后一次给药后2天处死小鼠，并且收获肝以用于靶mRNA分析。 
RNA分析 
从肝组织提取RNA，以用于使用引物探针组RTS3029对转甲状腺素蛋白实时PCR分析。结果以相对于PBS对照的人转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表45中所示，相比于PBS对照，用ISIS反义寡核苷酸的处理导致人转甲状腺素蛋白mRNA的显著减少。 
表45 
相对于PBS对照的hTTR转基因小鼠肝中人转甲状腺素蛋白mRNA的抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901601
蛋白质分析 
通过ELISA使用抗-转甲状腺素蛋白转甲状腺素蛋白多克隆抗体(Abcam Ab37774)和羊抗-TTR辣根过氧化酶检测抗体(Abcam cat.no.35217)，在转基因小鼠血浆中测量人转甲状腺素蛋白蛋白水平。通过 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901611
TMB Substrate Kit使颜色反应显色，并且使用微量滴定板分光光度计在450nm测量吸光度。在给药前和在第7、14和28天采集血浆样品。结果示于表46中，以相比于给药前水平的抑制百分比表示并且表明用ISIS寡核苷酸处理后蛋白水平的时间依赖性减少。 
表46 
相对于给药前水平的hTTR转基因小鼠血浆中人转甲状腺素蛋白的抑制 
  第0天 第14天 第28天
PBS 0 0 0
ISIS304313 0 62 77
ISIS420913 0 91 97
ISIS420919 0 70 82
ISIS420921 0 83 87
ISIS420922 0 95 97
ISIS420937 0 37 59
ISIS420944 0 57 72
ISIS420947 0 57 65
ISIS420949 0 93 99
ISIS420950 0 97 100
ISIS420952 0 98 100
ISIS420953 0 99 100
ISIS420955 0 89 100
ISIS420957 0 92 94
ISIS420959 0 69 87
ISIS450518 0 80 97
ISIS450519 0 94 100
ISIS450520 0 83 100
ISIS450521 0 100 100
ISIS450522 0 93 97
ISIS450523 0 100 100
ISIS420951 0 99 100
[0827]  肝功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肝功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量转氨酶血浆浓度。测量ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度并且结果示于表47中，以IU/L表示。还使用相同的临床化学分析仪测量胆红素的血浆水平；结果还示于表47中并且以mg/dL表示。 
表47 
反义寡核苷酸处理对转基因小鼠的肝中代谢标记的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901621
肾功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肾功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量血尿素氮(BUN)的血浆浓度。结果示于表48中，以mg/dL表示。 
表48 
反义寡核苷酸处理对转基因小鼠的肾中BUN(mg/dL)的效应 
PBS 35
ISIS304313 29
ISIS420913 30
ISIS420919 29
ISIS420921 29
ISIS420922 27
ISIS420937 29
ISIS420944 27
ISIS420947 26
ISIS420949 25
ISIS420950 34
ISIS420952 23
ISIS420953 34
ISIS420955 24
ISIS420957 23
ISIS420959 29
ISIS450518 28
ISIS450519 25
ISIS450520 29
ISIS450521 24
ISIS450522 29
ISIS450523 27
ISIS420951 25
实施例17：CD1小鼠中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的耐受性 
CD1小鼠用来自实施例16的ISIS反义寡核苷酸处理并且评价各种代谢标记的水平中的变化。 
处理 
各组(每组8只CD1小鼠)用50mg/kg的ISIS304313、ISIS420913、ISIS420919、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420937、ISIS420944、ISIS420947、ISIS420949、ISIS420950、ISIS420951、ISIS420952、ISIS420953、ISIS420955、ISIS420957、ISIS420959、ISIS425518、ISIS425519、ISIS425520、ISIS425521、ISIS425522或ISIS425523皮下注射，每周两次。最后一次给药后三天，于每个时间点测量体重，使小鼠安乐死，收获器官和血浆以用于进一步分析。 
体重和器官重量 
给药前和每个处理期(2周和6周)结束时测量小鼠的体重。体重示于表49中并且以相比于处理开始前采集的PBS对照重量的增加百分比表示。肝、脾和肾重量在研究结束时测量，并且还以相比于PBS对照的相应器官重量的变化百分比示于表49中。 
表49 
第6周时反义寡核苷酸处理后CD1小鼠的体重和器官重量的变化(％) 
  体重 肝 脾 肾
PBS 1.3 1.0 1.0 1.0
ISIS304313 1.2 1.2 1.4 1.2
ISIS420913 1.2 1.2 1.3 1.1
ISIS420919 1.3 1.2 1.9 1.1
ISIS420921 1.1 1.1 2.2 1.1
ISIS420922 1.1 1.0 1.6 0.9
ISIS420937 1.1 1.0 1.2 1.0
ISIS420944 1.1 1.1 2.0 1.0
ISIS420947 1.3 1.2 1.7 1.0
ISIS420949 1.3 1.2 1.8 1.1
ISIS420950 1.3 1.0 1.7 1.0
ISIS420952 1.4 1.3 2.1 0.9
ISIS420953 1.3 1.5 2.2 1.0
ISIS420955 1.2 1.2 2.2 1.0
[0846] 
ISIS420957 1.1 1.1 1.8 1.1
ISIS420959 1.3 1.2 3.2 1.1
ISIS450518 1.4 1.3 1.8 1.1
ISIS450519 1.3 1.5 2.4 1.0
ISIS450520 1.4 1.4 2.2 1.0
ISIS450521 1.2 1.2 1.9 1.1
ISIS450522 1.3 1.5 2.3 1.1
ISIS450523 1.2 1.3 2.4 1.1
ISIS420951 1.3 1.2 1.9 1.0
肝功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肝功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量转氨酶血浆浓度。测量ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度并且结果示于表50中，以IU/L表示。还使用相同的临床化学分析仪测量胆红素和白蛋白的血浆水平并且结果也示于表50中。 
表50 
反义寡核苷酸处理对CD1小鼠的肝中代谢标记的效应 
  ALT AST TBIL
PBS 34 88 0.20
ISIS304313 42 79 0.16
ISIS420913 35 67 0.17
ISIS420919 63 177 0.20
ISIS420921 47 103 0.15
ISIS420922 42 128 0.16
ISIS420937 33 160 0.15
ISIS420944 38 84 0.15
ISIS420947 42 120 0.17
ISIS420949 46 125 0.15
ISIS420950 73 106 0.15
ISIS420952 151 271 0.19
ISIS420953 982 452 0.16
ISIS420955 47 80 0.15
ISIS420957 53 133 0.18
ISIS420959 31 89 0.11
ISIS450518 103 200 0.20
[0852] 
ISIS450519 64 81 0.12
ISIS450520 350 270 0.12
ISIS450521 104 226 0.13
ISIS450522 109 201 0.14
ISIS450523 80 170 0.19
ISIS420951 67 100 0.09
肾功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肾功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量血尿素氮(BUN)和肌酐的血浆浓度。结果示于表51，以mg/dL表示。 
表51 
反义寡核苷酸处理对CD1小鼠肾中BUN(mg/dL)的效应 
  BUN
PBS 35
ISIS304313 29
ISIS420913 30
ISIS420919 29
ISIS420921 29
ISIS420922 27
ISIS420937 29
ISIS420944 27
ISIS420947 26
ISIS420949 25
ISIS420950 34
ISIS420952 23
ISIS420953 34
ISIS420955 24
ISIS420957 23
ISIS420959 29
ISIS450518 28
ISIS450519 25
ISIS450520 29
ISIS450521 24
ISIS450522 29
ISIS450523 27
ISIS420951 25
[0858]  血液学测定 
将获自所有小鼠组的血液送至Antech Diagnostics以用于红细胞比容(HCT)、平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的测量和分析，以及血细胞分类计数的测量例如WBC(嗜中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞)、RBC和血小板以及总血红蛋白含量的测量。结果示于表52和53中。表中给出的百分比指示相比于PBS对照的总血细胞计数的变化百分比。 
表52 
CD1小鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对全红细胞计数(％)的效应 
  WBC RBC 血红蛋白 HCT MCV MCH MCHC
ISIS304313 +80 -5 -7 -9 -4 -2 +4
ISIS420913 -10 -1 -3 -5 -4 -2 +3
ISIS420919 +26 -2 -7 -9 -7 -5 +4
ISIS420921 +60 -9 -12 -15 -6 -3 +5
ISIS420922 +18 -6 -11 -16 -11 -6 +6
ISIS420937 +42 -3 -4 -7 -5 -1 +5
ISIS420944 +49 -5 -9 -13 -8 -4 +6
ISIS420947 +36 -2 -2 -5 -3 0 +4
ISIS420949 +61 -4 -6 -9 -7 -3 +5
ISIS420950 +56 -14 -16 -19 -7 -3 +6
ISIS420952 +36 -20 -24 -25 -7 -5 +4
ISIS420953 +105 -21 -24 -26 -6 -4 +4
ISIS420955 +107 -14 -19 -21 -9 -5 +6
ISIS420957 +79 -5 -10 -13 -9 -6 +5
ISIS420959 +92 -8 -14 -18 -11 -7 +6
ISIS450518 +138 -5 -10 -12 -7 -4 +4
ISIS450519 +118 -17 -21 -24 -9 -5 +6
ISIS450520 +151 -18 -21 -23 -7 -4 +4
ISIS450521 +118 -15 -21 -23 -11 -7 +5
ISIS450522 +63 -22 -28 -31 -12 -8 +6
ISIS450523 +116 -22 -27 -29 -11 -7 +6
ISIS420951 +54 -15 -21 -24 -10 -6 +5
[0863]  表53 
CD1小鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对血细胞分类计数(％)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901681
实施例18：Sprague-Dawley大鼠中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的耐受性 
还在Sprague-Dawley大鼠中测试选自在实施例17中所述的研究的ISIS反义寡核苷酸并且评价各种代谢标记的水平的变化。 
处理 
给药前评价大鼠的体重、全血细胞计数和血细胞分类计数以及尿蛋白/肌酐比率。各组(每组4只Sprague-Dawley大鼠)用50mg/kg的ISIS420913、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420950、ISIS420955、ISIS420957和ISIS420959皮下注射，每周两次。最后一次给药后3天，于每个时间点采集体重，使小鼠安乐死，收获器官和血浆以用于进一步分析。 
体重和器官重量 
给药前和在处理期结束时测量大鼠的体重。体重示于表54中，并且以相比于处理开始前采集的PBS对照重量的增加百分比表示。肝、脾和肾重量在研究结束时测量，并且还以相比于PBS对照的相应器官重量的变化百分比示于表54中。 
表54 
反义寡核苷酸处理后Sprague-Dawley大鼠的体重和器官重量的变化(％) 
  体重 肝 脾 肾
PBS 2.1 1.0 1.0 1.0
ISIS420913 1.5 1.5 4.7 1.1
ISIS420921 1.6 1.5 4.2 1.3
ISIS420922 1.3 1.5 4.4 1.4
ISIS420950 1.4 1.5 6.4 1.7
ISIS420955 1.5 1.6 5.9 1.4
ISIS420957 1.4 1.4 6.8 1.3
ISIS420959 1.5 1.4 5.5 1.4
如示于表54中，这些化合物表明这些大鼠的器官重量增加低于10倍。而且，某些化合物表明这些大鼠的器官重量增加低于7倍。尽管某些化合物表明这些大鼠的器官重量增加低于6倍。某些化合物表明些大鼠的器官重量增加低于5倍。 
肝功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肝功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量转氨酶血浆浓度。测量ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度并且结果示于表55中，以IU/L表示。还使用相同的临床化学分析仪测量胆红素和白蛋白的血浆水平并且结果也示于表55中。 
表55 
反义寡核苷酸处理对Sprague-Dawley大鼠的肝中代谢标记的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901711
肾功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肾功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量血尿素氮(BUN)和肌酐的血浆浓度。结果示于表56中，以mg/dL表示。还评价总尿蛋白与肌酐的比率并且示于表56中。 
表56 
反义寡核苷酸处理对Sprague-Dawley大鼠的肾中代谢标记(mg/dL)的效应 
  BUN 肌酐
PBS 14 0.05
ISIS420913 22 0.09
ISIS420921 23 0.07
ISIS420922 21 0.08
ISIS420950 20 0.11
ISIS420955 22 0.06
ISIS420957 23 0.18
ISIS420959 24 0.17
表57 
反义寡核苷酸处理对Sprague-Dawley大鼠的肾中总尿蛋白/肌酐的效应 
  尿蛋白/肌酐比率
PBS 1.50
ISIS420913 19.51
ISIS420921 5.07
ISIS420922 4.72
[0891] 
ISIS420950 5.61
ISIS420955 5.57
ISIS420957 5.40
ISIS420959 4.39
血液学测定 
将获自所有小鼠组的血液送至Antech Diagnostics以用于红细胞比容(HCT)、平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的测量和分析，以及血细胞分类计数的测量例如WBC(嗜中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞)、RBC和血小板以及总血红蛋白含量的测量。结果示于表58和59中。表中给出的百分比指示相比于PBS对照的总血细胞计数的变化百分比。 
表58 
Sprague-Dawley大鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对全红细胞计数(％)的效应 
  WBC RBC 血红蛋白 HCT MCV MCH MCHC
PBS 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
ISIS420913 1.7 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 1.0
ISIS420921 1.6 0.9 0.9 0.9 1.0 1.0 1.0
ISIS420922 1.6 0.9 0.9 0.8 1.0 1.0 1.0
ISIS420950 2.2 0.7 0.7 0.7 1.0 1.0 1.0
ISIS420955 1.9 0.7 0.8 0.7 1.1 1.2 1.0
ISIS420957 3.1 0.8 0.8 0.8 1.0 1.0 1.0
ISIS420959 2.2 0.8 0.8 0.8 1.0 1.0 1.0
表59 
Sprague-Dawley大鼠中与PBS对照相比反义寡核苷酸处理对血细胞分类计数(％)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901721
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901731
实施例19：Sprague-Dawley大鼠肝和肾中反义寡核苷酸浓度的半衰期的药动学研究 
Sprague Dawley大鼠用来自在实施例18中所述的研究的ISIS反义寡核苷酸处理，并且评价寡核苷酸半衰期和寡核苷酸从肝和肾中降解和消除的消逝时间。 
处理 
各组(每组4只Sprague Dawley大鼠)用20mg/kg的ISIS420913、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420950、ISIS420955、ISIS420957和ISIS420959皮下注射2周，每周两次。最后一次给药后3天，使大鼠安乐死并且收集肝和肾以用于分析。 
寡核苷酸浓度的测量 
测量全长寡核苷酸浓度以及总寡核苷酸浓度(包括降解形式)。所用方法是对先前公布的方法的改进(Leeds等人，1996；Geary等人，1999)，其包括苯酚-氯仿(液-液)萃取以及随后的固相萃取。在萃取之前加入内标(ISIS355868，27-mer2’-O-甲氧基乙基修饰的硫代磷酸酯寡核苷酸，GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT，在本文被称为SEQ ID NO：166)。使用校准曲线计算组织样品浓度，定量下限(LLOQ)为约1.14μg/g。结果示于表60和61中，以μg/g肝或肾组织表示。还计算寡核苷酸浓度的肾与肝的比率，并且示于表60和61中。 
表60 
Sprague-Dawley大鼠的肝和肾中的全长寡核苷酸浓度(μg/g)和比率 
ISISNO. 肝 肾 肾/肝比率
420913 154 285 1.9
420921 147 293 2.0
420922 226 497 2.2
420950 161 411 2.6
420955 152 383 2.5
420957 235 453 1.9
420959 187 513 2.7
表61 
Sprague-Dawley大鼠的肝和肾中的总寡核苷酸浓度(μg/g) 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901741
实施例20：转基因小鼠中人转甲状腺素蛋白的体内剂量依赖性抑制 
选择如实施例16-19中所示表现出良好功效和耐受性的ISIS420913、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420957和ISIS420959用于在含有人转甲状腺素蛋白基因的转基因小鼠中剂量依赖性靶敲除的研究。也选择表明90％或更高的靶敲除的但也表明CD1小鼠中的毒性(实施例16-19)的ISIS420950和ISIS420955用于比较研究。 
处理 
各组(每组四只小鼠，两只雄性，两只雌性)用4mg/kg、10mg/kg或25mg/kg的4mg/kg，10mg/kg或25mg/kg的ISIS420913、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420950、ISIS420955、ISIS420957或ISIS420959皮下注射4周，每周两次。一组小鼠(四只小鼠，两只雄性，两只雌性)用25mg/kg的对照寡核苷酸ISIS141923皮下注射4周，每周两次。一个对照组(四只小鼠，两只雄性，两只雌性)用PBS皮下注射4周，每周两次。在第0、14和28天采集每组的血浆样品。最后一次给药后2天，使小鼠安乐死，并且收获器官以用于进一步分析。 
RNA分析 
从肝组织提取RNA，以用于使用引物探针组RTS3029对转甲状腺素蛋白实时PCR分析。结果以相对于PBS对照的人转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表62中所示，相比于PBS对照，用ISIS反义寡核苷酸的处理导致人转甲状腺素蛋白mRNA的显著剂量依赖性减少。用对照寡核苷酸ISIS141923的处理并未导致转甲状腺素蛋白的显著减少，如所期望的。 
表62 
相对于PBS对照的hTTR转基因小鼠肝中人转甲状腺素蛋白mRNA的抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901761
蛋白质分析 
通过ELISA使用抗-转甲状腺素蛋白转甲状腺素蛋白多克隆抗体(Abcam Ab37774)和羊抗-TTR辣根过氧化酶检测抗体(Abcam cat.no.35217)，在转基因小鼠血浆中测量人转甲状腺素蛋白蛋白水平。通过 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901762
TMB Substrate Kit使颜色反应显色，并且使用微量滴定板分光光度计在450nm测量吸光度。在给药前和在第7、14、21和28天采集血浆样品。结果示于表63，以相比于给药前水平的抑制百分比表示并且表明用ISIS寡核苷酸处理后蛋白水平的时间依赖性和剂量依赖性减少。 
表63 
相对于给药前水平的转基因小鼠血浆中人转甲状腺素蛋白的抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901763
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901771
体重和器官重量 
在给药前和处理期结束时测量小鼠的体重。体重示于表64中并且以相比于处理开始前采集的PBS对照重量的增加百分比表示。肝、脾和肾重量在研究结束时测量，并且还以相比于PBS对照的相应器官重量的变化百分比示于表64中。 
表64 
反义寡核苷酸处理后转基因小鼠的体重和器官重量的变化(％) 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901772
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901781
肝功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肝功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量转氨酶血浆浓度。测量ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度并且结果示于表65中，以IU/L表示。还使用相同的临床化学分析仪测量胆红素的血浆水平；结果还示于表65中并且以mg/dL表示。 
表65 
反义寡核苷酸处理对转基因小鼠的肝中代谢标记的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901782
肾功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肾功能的效应，使用自动临床化学分析仪(Hitachi Olympus AU400e，Melville，NY)测量血尿素氮(BUN)的血浆浓度。结果示于表66，以mg/dL表示。 
表66 
反义寡核苷酸处理对转基因小鼠的肾中BUN(mg/dL)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901801
实施例21：短尾猴原代肝细胞中靶向人转甲状腺素蛋白的反义寡核苷酸的剂量响应确认 
选择在CD1小鼠和Sprague Dawley大鼠中显示耐受性(实施例17-19中所述的研究)以及在转基因小鼠中显示效力(实施例16和20中所述的研究)的缺口基体，并且以各种剂量在短尾猴的原代肝细胞中测试。将细胞以35,000个细胞每孔的密度铺板并且使用电穿孔用表67中所指定156.25nM、312.5nM、625nM、1,250nM2,500nM、5,000nM、10,000nM和20,000nM浓度的反义寡核苷酸转染。在约16小时的处理期后，从细胞分离RNA，通过定量实时PCR测量转甲状腺素蛋白mRNA水平。人转甲状腺素蛋白引物探针组RTS1396用于测量mRNA水平。根据总RNA含量调节转甲状腺素蛋白mRNA水平，如通过
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901802
测量。结果以相对于未处理的对照细胞的转甲状腺素蛋白抑制百分比呈示。如表67中所示，转甲状腺素蛋白mRNA水平在用所有ISIS寡核苷酸处理的肝细胞中以剂量依赖性方式减少，所述ISIS寡核苷酸与恒河猴转甲状腺素蛋白基因(在本文被称为SEQ ID NO：4(从GENBANK登记号NW_001105671.1提取的外显子1-4))具有交叉反应性。 
表67 
使用电穿孔的短尾猴原代肝细胞中人转甲状腺素蛋白的剂量依赖性反义抑制 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901811
实施例22：靶向人转甲状腺素蛋白的ISIS反义寡核苷酸的粘度的测量 
为了测量筛选出粘度大于40cP的反义寡核苷酸，来自在实施例21中所述的研究的反义寡核苷酸的粘度。粘度大于40cP的寡核苷酸将太粘稠以致不能向任何受试者施用。 
将ISIS寡核苷酸(32-35mg)在玻璃小瓶中称重，加入120μL水并且通过在50℃加热小瓶将反义寡核苷酸溶解于溶液中。将预加热的样品的一部分(75μL)移液到微粘度计(Cambridge)。将微粘度计的温度设定为25℃并且测量样品的粘度。将预加热样品的另一部分(20μL)移液至10mL水中以在85℃于260nM下进行UV读数(Cary UVinstrument)。结果示于表68中并且显示所有反义寡核苷酸溶液在上述标准下在其粘度中是最佳的。 
表68 
靶向人转甲状腺素蛋白的ISIS反义寡核苷酸的粘度和浓度 
ISISNo. 粘度(cP) 浓度(mg/mL)
304299 9.9 169
420913 6.5 178
420915 8.4 227
420921 8.2 234
420922 5.3 191
420950 12.5 297
420955 15.7 259
420957 12.9 233
420959 18.7 276
实施例23：CD1小鼠肝中反义寡核苷酸的半衰期的测量 
CD1小鼠用来自在实施例22中所述的研究的ISIS反义寡核苷酸处理，并且评价寡核苷酸半衰期和寡核苷酸从肝中降解和消除的消逝时间。 
处理 
各组(每组12只CD1小鼠)用50mg/kg的ISIS420913、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420950、ISIS420955、ISIS420957和ISIS420959皮下注射2周，每周两次。最后一次给药后3天、28天和56天处死来自每组的四只小鼠。收获肝以用于分析。 
寡核苷酸浓度的测量 
测量全长寡核苷酸浓度以及总寡核苷酸浓度(包括降解形式)。所用方法是对先前公布的方法的改进(Leeds等人，1996；Geary等人，1999)，其包括苯酚-氯仿(液-液)萃取以及随后的固相萃取。在萃取之前加入内标(ISIS355868，27-mer2’-O-甲氧基乙基修饰的硫代磷酸酯寡核苷酸，GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT，在本文被称为SEQ ID NO：166)。使用校准曲线计算组织样品浓度，定量下限(LLOQ) 为约1.14μg/g。然后使用WinNonlin软件(PHARSIGHT)计算半衰期。 
结果示于表69，以μg/g肝组织表示。每个寡核苷酸的半衰期示于表70中。 
表69 
CD1小鼠的肝中全长寡核苷酸浓度(μg/g) 
ISISNo. 3天 28天 56天
420913 243 109 33
420921 225 49 6
420922 310 129 53
420950 254 88 62
420955 308 137 79
420957 325 129 49
420959 258 97 37
表70 
CD1小鼠的肝中寡核苷酸的半衰期(天) 
ISISNo. 半衰期(天)
420913 18.5
420921 10.0
420922 20.7
420950 26.4
420955 27.2
420957 19.5
420959 18.9
实施例24：短尾猴中靶向人转甲状腺素蛋白的ISIS反义寡核苷酸的效应 
短尾猴用来自在实施例21、22和23中所述的研究的ISIS反义寡核苷酸处理，并且评价耐受性、以及其肝和肾中的药动学特征。 
处理 
研究之前，将猴置于检疫所30天，期间进行标准样品的血清化学和血液学、检查粪便样品的卵细胞和寄生虫、以及结核试验以筛选出异常或患病猴。九组(每组四只随机分配的雄性短尾猴)首周用25mg/kg的ISIS304299、ISIS420915、ISIS420921、ISIS420922、ISIS420950、ISIS420955、ISIS420957或ISIS420959以每周三次进行皮下注射，随后接下来的11周每周两次。4只短尾猴的对照组首周用PBS以每周三次进行皮下注射，随后接下来的11周每周两次。在治疗前5天和在研究期的不同天时收集血样并且进行分析。在血液收集之前将动物禁食至少13小时(过夜)。在第86天进行所有组的最终处死，即为最后一次给药后48小时。 
在研究期间，每天观察猴的疾病或痛苦的症状。移除对处理显示不良作用的任何动物并向兽医和实验负责人提及。从研究第31天移除所有用ISIS420955处理的动物，由于该组中的2只猴显示疾病症状。类似地，由于疾病征兆，分别在研究第44和76天移除用ISIS420957和ISIS420950处理的每一组中的一只猴。 
抑制研究
RNA分析 
在第86天，从肝组织提取RNA，以用于使用引物探针组RTS3029对转甲状腺素蛋白实时PCR分析。结果以相对于PBS对照的转甲状腺素蛋白抑制百分比(标准化为亲环蛋白)呈示。用
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901841
标准化获得类似结果。如示于表71中，相比于PBS对照，用ISIS反义寡核苷酸的处理导致转甲状腺素蛋白mRNA的显著减少。特别地，用ISIS420915的处理所产生的对TTR mRNA的抑制比用ISIS304299的处理更大，即使两个寡核苷酸彼此不用之处在于单个碱基对转移。在第31天采集用ISIS420955处理的动物的数据。 
表71 
相对于PBS对照的短尾猴肝中转甲状腺素蛋白mRNA的抑制 
ISISNo 抑制％
304299 59
420915 78
420921 54
420922 61
420950 91
420955* 79
420957 64
420959 55
(*第31天的数据) 
蛋白质分析 
在血液收集之前将猴禁食过夜。收集所有可用动物的约1mL血液并且置于含EDTA钾盐的管中。将管离心(在室温以3000rpm离心10min)以获得血浆。使用临床分析仪测量血浆中的转甲状腺素蛋白蛋白水平。在给药前(第-5天)和在第1、9、16、23、30、44、58、72和86天采集血浆样品。结果示于表72，以相比于给药前水平的抑制百分比表示并且表明用ISIS寡核苷酸处理的蛋白水平的时间依赖性减少。最终血浆TTR水平示于表73中并且表明TTR蛋白水平和TTRmRNA抑制之间的强相关性(表71)。特别地，用ISIS420915的处理所引起的对TTR血浆蛋白的抑制比用ISIS304299的处理高(76％抑制vs.47％抑制)，即使两个寡核苷酸彼此不同之处在于单个碱基对转移。 
表72 
相对于给药前水平的短尾猴血浆中转甲状腺素蛋白水平的时程 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901861
n/a＝对于用ISIS420955处理的动物而言在第31天终止研究； 
因此随后天数的数据是不可用的。 
表73 
第86天短尾猴血浆中转甲状腺素蛋白水平相对于给药前水平的减少 
ISISNo. 减少％
304299 47
420915 76
420921 50
420922 54
420950 87
420957 50
420959 50
还使用ELISA试剂盒测量血浆中的RBP4蛋白水平。在给药前(第-5天)和在第9、16、23、30、44、58、72和86天采集血浆样品。结果示于表74，以相比于给药前水平的抑制百分比表示。一些ISIS寡核苷酸(ISIS420915、ISIS420922、ISIS420950、ISIS420955和ISIS420959)表明蛋白水平的时间依赖性减少，与TTR减少相一致。最终血浆RBP4水平示于表75中并且也表明用上述寡核苷酸处理后RBP4和TTR蛋白水平减少之间的强相关性(表73)。特别地，用ISIS420915的处理所引起的对RBP4血浆蛋白的抑制比用ISIS304299的处理高(63％抑制vs.19％抑制)，即使两个寡核苷酸彼此不同之处在于单个碱基对转移。 
表74 
相对于给药前水平的短尾猴血浆中RBP4蛋白水平减少的时程 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901871
n/a＝对于用ISIS420955处理的动物而言在第31天终止研究；因此随后天数的数据是不可用的。 
表75 
第86天短尾猴血浆中RBP4血浆蛋白水平相对于给药前水平的减少 
ISISNo. 减少％
304299 19
420915 63
420921 24
420922 32
420950 48
420957 27
420959 34
耐受性研究
体重和器官重量测量 
为了评价ISIS寡核苷酸对动物的整体健康的效应，在第86天测量体重和器官重量。第31天采集用ISIS420955处理的动物的数据。测量体重并且将其与给药前水平相比较。测量器官重量并且将处理组 重量与相应PBS对照重量相比较。数据示于表76中。 
表76 
相对于给药前水平的短尾猴中最终体重和器官重量的变化％ 
ISISNo. 体重 肝重 肾重 脾重
304299 +6 +27 +37 +53
420915 +6 +37 +26 +41
420921 +4 +42 +43 +22
420922 +4 +45 +39 +63
420950 0 +204 +166 +297
420955* -3 +36 +81 +70
420957 -6 +55 +184 +109
420959 0 +57 +101 +112
(*第31天的数据) 
肝功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肝功能的效应，收集所有研究组的血液样品。在不含用于血清分离的任何抗凝血剂的管中收集血液样品。将管置于室温90min并且然后离心(在室温下以3000rpm离心10min)以获得血清。使用Toshiba200FR NEO化学分析仪(Toshiba Co.，Japan)测量转氨酶的浓度。第86天测量ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血浆浓度并且结果示于表77中，以IU/L表示。由受损肝细胞以递增量合成的碱性磷酸酯酶也是肝疾病的标记并且被类似地测量。在肝中合成并且用作炎症标记的C-反应蛋白(CRP)在第86天也被类似地测量。碱性磷酸酯酶和CRP数据两者也示于表77中。胆红素也是肝代谢标记并且被类似地测量，且示于表77中，以mg/dL表示。 
表77 
反义寡核苷酸处理对短尾猴血浆中肝代谢标记的效应 
肾功能 
为了评价ISIS寡核苷酸对肾功能的效应，收集所有研究组的血液样品。在不含用于血清分离的任何抗凝血剂的管中收集血液样品。将管置于室温90min并且然后离心(在室温下以3000rpm离心10min)以获得血清。在第86天使用Toshiba 200FR NEO化学分析仪(ToshibaCo.，Japan)测量BUN和肌酐的浓度。结果示于表78，以mg/dL表示。 
在研究前第5天，并且随后在第25和84天通过来自专用不锈钢笼浅盘的引流收集尿样。使用Toshiba 200FR NEO化学分析仪(ToshibaCo.，Japan)测量尿总蛋白与肌酐比率并且结果示于表79中。 
表78 
反义寡核苷酸处理对短尾猴中血浆BUN和肌酐水平(mg/dL)的效应 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901892
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901901
表79 
反义寡核苷酸处理对短尾猴中尿蛋白与肌酐比率的效应 
  第-5天 第25天 第84天
PBS 0.003 0.01 0.00
ISIS304299 0.000 0.01 0.00
ISIS420915 0.003 0.00 0.00
ISIS420921 0.033 0.13 0.09
ISIS420922 0.010 0.05 0.02
ISIS420950 0.008 0.29 0.21
ISIS420955 0.000 0.61 n/a
ISIS420957 0.000 0.48 0.36
ISIS420959 0.005 0.08 0.03
n/a＝对于用ISIS420955处理的动物而言在第31天终止研究；因此随后天数的数据是不可用的。 
血液学 
为了评价ISIS寡核苷酸在短尾猴中的任何炎症效应，收集每只可用研究动物的为约0.5mL血液的血液样品于含有EDTA钾盐的管中。使用ADVIA120血液学分析仪(Bayer，USA)分析样品的红细胞(RBC)计数、白细胞(WBC)计数、单个白细胞百分比例如单核细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞的百分比以及样品的血小板计数和红细胞比容(％)。数据示于表80中。 
表80 
反义寡核苷酸处理对短尾猴中血液学参数的效应 
炎症因子的分析 
为了评价ISIS寡核苷酸对涉及炎症的因子的效应，在第86天收集所有可用动物的血液以用于补体C3分析以及用于测量细胞因子水平。对于补体C3分析，在不含用于血清分离的任何抗凝血剂的管中收集血液样品。将管置于室温90min并且然后离心(在室温下以3000rpm离心10min)以获得血清。在第86天使用Toshiba200FR NEO化学分析仪(Toshiba Co.，Japan)测量BUN和肌酐的浓度。结果示于表78，以mg/dL表示。使用自动分析仪(Toshiba200FR NEO化学分析仪，Toshiba co.，Japan)测量补体C3。数据示于表81中，以mg/dL表示。 
对于细胞因子水平分析仪，在含有用于血浆分离的EDTA的管中收集血液。然后将管离心(在室温以3000rpm离心10min)以获得血浆。将血浆样品送至Aushon Biosystems Inc.(Billerica，MA)以用于测量趋 化因子和细胞因子的水平。使用相应灵长类动物抗体测量TNF-α的水平并且测量MIP-1α、使用相应的交叉反应性人抗体测量MCP-1和MIP-1β的水平。在处理开始前第5天，并且随后在第3和84天获得测量。结果示于表82-85中。 
表81 
反义寡核苷酸处理对短尾猴中补体C3(mg/dL)的效应 
  C3
PBS 133
ISIS304299 96
ISIS420915 104
ISIS420921 91
ISIS420922 102
ISIS420950 70
ISIS420957 69
ISIS420959 95
表82 
反义寡核苷酸处理对短尾猴中MCP-1(pg/mL)的效应 
  第-5天 第3天 第86天
PBS 232 362 206
ISIS304299 219 292 427
ISIS420915 204 342 400
ISIS420921 281 407 2120
ISIS420922 215 482 838
ISIS420950 170 370 3355
ISIS420957 208 308 3485
ISIS420959 237 715 2035
表83 
反义寡核苷酸处理对短尾猴中TNF-α(pg/mL)的效应 
  第-5天 第3天 第86天
PBS 60 46 16
ISIS304299 46 35 24
[1042] 
ISIS420915 113 83 30
ISIS420921 57 50 56
ISIS420922 30 59 46
ISIS420950 48 54 266
ISIS420957 29 33 87
ISIS420959 22 77 74
表84 
反义寡核苷酸处理对短尾猴中MIP-1α(pg/mL)的效应 
  第-5天 第3天 第86天
PBS 6 7 7
ISIS304299 6 7 9
ISIS420915 5 5 10
ISIS420921 8 11 9
ISIS420922 9 8 5
ISIS420950 7 9 5
ISIS420957 6 6 6
ISIS420959 9 6 5
表85 
反义寡核苷酸处理对短尾猴中MIP-1β(pg/mL)的效应 
  第-5天 第3天 第86天
PBS 13 19 42
ISIS304299 17 23 54
ISIS420915 15 27 72
ISIS420921 23 43 112
ISIS420922 9 41 70
ISIS420950 8 25 126
ISIS420957 16 27 182
ISIS420959 36 46 117
凝血试验 
为了评价ISIS寡核苷酸对参与凝血途径的因子的效应，采用凝血的标准试验。使用猴的贫血小板血浆(PPP)在48hr内测量PT和 aPTT。PT和aPTT值在表86和87中提供并且以秒表示。在48hr内定量血浆上的纤维蛋白原水平并且将数据示于表88中。如表86-88中所示，相比于PBS对照，用ISIS寡核苷酸处理的猴中PT、aPTT和纤维蛋白原并未显著改变。 
表86 
反义寡核苷酸处理对PT(秒)的效应 
  0hr 1hr 4hr 8hr 24hr 48hr
PBS 10.08 10.38 10.10 10.33 9.83 9.40
ISIS304299 10.38 10.30 10.48 10.20 9.95 9.53
ISIS420915 10.15 10.13 10.38 9.93 9.75 9.48
ISIS420921 10.28 10.13 10.43 10.18 9.80 9.55
ISIS420922 9.95 10.00 10.05 9.70 9.48 9.28
ISIS420950 10.30 10.47 10.57 10.27 9.63 9.50
ISIS420957 10.63 10.47 10.60 10.77 10.33 10.27
ISIS420959 10.08 10.10 10.20 10.15 9.80 9.55
表87 
反义寡核苷酸处理对aPTT(秒)的效应 
  0hr 1hr 4hr 8hr 24hr 48hr
PBS 19.40 19.70 20.13 20.20 19.43 17.30
ISIS304299 21.83 24.35 27.05 25.73 22.40 18.78
ISIS420915 20.05 22.83 23.83 24.00 21.78 17.90
ISIS420921 24.15 26.68 31.78 31.90 27.80 22.15
ISIS420922 25.28 29.48 34.83 33.90 29.13 25.08
ISIS420950 28.13 31.40 35.40 35.40 31.40 28.37
ISIS420957 29.13 33.27 39.13 37.40 36.50 29.93
ISIS420959 22.45 24.73 29.18 28.38 25.50 20.65
表88 
反义寡核苷酸处理对纤维蛋白原(mg/dL)的效应 
  0hr 1hr 4hr 8hr 24hr 48hr
PBS 212 203 240 247 282 272
ISIS304299 175 172 198 207 227 200
[1060] 
ISIS420915 213 196 204 258 257 215
ISIS420921 208 209 230 237 301 249
ISIS420922 278 277 335 338 400 304
ISIS420950 293 295 348 376 390 296
ISIS420957 280 299 344 330 434 328
ISIS420959 276 277 354 326 414 320
甲状腺全分析 
为了评价ISIS寡核苷酸对甲状腺激素的效应，将猴禁食过夜并且在处理开始前5天以及第51和86天采集每只可用研究动物的3.5mL血液。将所收集的血液样品保持在不含用于血清分离的抗凝血剂的管中。将管在室温保持90min，然后离心(在室温下以3000rpm离心10min)以获得血清。将血清样品送至Biomarkers Core Laboratoryof Emory University(Atlanta，GA)以用于甲状腺全分析。促甲状腺激素(TSH)的结果在表89中提供并且以μL/mL表示。总和游离T3激素的结果在表90和91中提供。总和游离T4激素的结果在表92和93中提供。总体而言，甲状腺全分析显示所有动物菌保持在可接受的激素水平，即使转甲状腺素蛋白表达水平减少，表明转甲状腺素蛋白反义寡核苷酸未影响激素水平。 
表89 
反义寡核苷酸处理对TSH(μL/mL)的效应 
  第-5天 第51天 第86天
PBS 0.8 0.7 1.0
ISIS304299 1.4 1.0 2.2
ISIS420915 1.4 1.5 2.5
ISIS420921 0.7 0.6 1.0
ISIS420922 1.0 1.2 1.9
ISIS420950 0.6 2.2 5.4
ISIS420957 0.6 2.6 4.9
ISIS420959 0.9 1.6 4.7
[1066]  表90 
反义寡核苷酸处理对总T3(ng/dL)的效应 
  第-5天 第51天 第86天
PBS 177 248 140
ISIS304299 202 226 176
ISIS420915 156 206 156
ISIS420921 217 204 137
ISIS420922 188 177 131
ISIS420950 260 208 105
ISIS420957 266 160 78
ISIS420959 299 219 137
表91 
反义寡核苷酸处理对游离T3(pg/mL)的效应 
  第-5天 第51天 第86天
PBS 7.7 5.8 5.2
ISIS304299 9.2 6.0 4.7
ISIS420915 8.9 5.6 4.5
ISIS420921 10.2 4.8 4.0
ISIS420922 8.9 5.4 3.7
ISIS420950 7.2 3.8 2.1
ISIS420957 8.8 4.0 2.4
ISIS420959 8.3 4.9 3.3
表92 
反义寡核苷酸处理对总T4(ng/dL)的效应 
  第-5天 第51天 第86天
PBS 5.8 4.9 4.4
ISIS304299 8.1 5.5 6.1
ISIS420915 8.3 5.7 5.5
ISIS420921 7.6 6.1 5.6
ISIS420922 7.3 6.1 5.8
ISIS420950 6.1 6.3 5.7
ISIS420957 6.3 4.4 5.0
ISIS420959 7.9 5.9 8.1
[1075]  表93 
反义寡核苷酸处理对游离T4(pg/mL)的效应 
  第-5天 第51天 第86天
PBS 3.4 2.4 1.7
ISIS304299 3.2 2.5 1.7
ISIS420915 5.0 1.8 1.7
ISIS420921 2.6 1.5 1.5
ISIS420922 3.5 1.6 1.5
ISIS420950 2.5 1.2 1.1
ISIS420957 2.4 1.2 1.2
ISIS420959 3.8 1.4 1.5
药动学研究
寡核苷酸浓度的测量 
测量全长寡核苷酸浓度以及总寡核苷酸浓度(包括降解形式)。所用方法是对先前公布的方法的改进(Leeds等人，1996；Geary等人，1999)，其包括苯酚-氯仿(液-液)萃取以及随后的固相萃取。在萃取之前加入内标(ISIS355868，27-mer2’-O-甲氧基乙基修饰的硫代磷酸酯寡核苷酸，GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT，在本文被称为SEQ ID NO：166)。使用校准曲线计算组织样品浓度，定量下限(LLOQ)为约1.14μg/g。计算肾中浓度与肝中浓度的比率。结果示于表94和95中，以μg/g组织表示。 
表94 
短尾猴的肝中的全长寡核苷酸浓度(μg/g) 
表95 
短尾猴的肝中的总寡核苷酸浓度(μg/g) 
Figure DEST_PATH_GDA00002775606901982
Figure IDA00002321109500011
Figure IDA00002321109500031
Figure IDA00002321109500041
Figure IDA00002321109500071
Figure IDA00002321109500081
Figure IDA00002321109500101
Figure IDA00002321109500111
Figure IDA00002321109500121
Figure IDA00002321109500131
Figure IDA00002321109500141
Figure IDA00002321109500151
Figure IDA00002321109500161
Figure IDA00002321109500181
Figure IDA00002321109500191
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Figure IDA00002321109500211
Figure IDA00002321109500221
Figure IDA00002321109500241
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Figure IDA00002321109500381
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Figure IDA00002321109500401
Figure IDA00002321109500411

Claims (62)

1.一种包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的序列的至少8个连续核碱基。 
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由15至25个连接核苷组成。 
3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由18至21个连接核苷组成。 
4.一种包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述连接核苷包含与在选自SEQ ID NO：1的核苷酸501-535或580-608的区域内的等长核碱基部分互补的至少8个连续核碱基部分。 
5.根据权利要求2所述的化合物，其中所述核碱基序列包含SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的序列的至少15个连续核碱基。 
6.根据权利要求3所述的化合物，其中所述核碱基序列包含SEQID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的序列的至少18个连续核碱基。 
7.根据权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸是单链寡核苷酸。 
8.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的所述核碱基序列与SEQ ID NO 1至少90％互补。 
9.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的所述核碱基序列与SEQ ID NO 1至少95％互补。 
10.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的所述核碱基序列与SEQ ID NO 1至少100％互补。 
11.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷间键合是经修饰的核苷间键合。 
12.根据权利要求11所述的化合物，其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯核苷间键合。 
13.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含经修饰的糖。 
14.根据权利要求13所述的化合物，其中所述至少一种经修饰的糖是双环糖。 
15.根据权利要求14所述的化合物，其中至少一个双环糖中的每一个包含4’-CH2-N(R)-O-2’桥，其中R独立地是H、C1-C12烷基或保护基团。 
16.根据权利要求14所述的化合物，其中至少一个双环糖中的每一个包含4’-CH(CH3)-O-2’桥。 
17.根据权利要求13所述的化合物，其中至少一种经修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。 
18.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其包含至少一个经四氢吡喃修饰的核苷，其中四氢吡喃环代替所述呋喃糖环。 
19.根据权利要求18所述的化合物，其中所述至少一个经四氢吡喃修饰的核苷中的每一个具有以下结构： 
Figure DEST_PATH_FDA00002775606800031
其中Bx是任选保护的杂环碱基部分。 
20.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中至少一个核苷包含经修饰的核碱基。 
21.根据权利要求20所述的化合物，其中所述经修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。 
22.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含： 
由连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
由连接核苷组成的5’翼区段；和 
由连接核苷组成的3’翼区段； 
其中所述缺口区段位于所述5’翼区段与所述3’翼区段之间并且其中每个翼区段的每个核苷包含经修饰的糖。 
23.根据权利要求22所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含： 
由10个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
由5个连接核苷组成的的5’翼区段；和 
由5个连接核苷组成的的3’翼区段； 
其中所述缺口区段位于所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；并且其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合。 
24.根据权利要求22所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含： 
由8个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
由5个连接核苷组成的的5’翼区段；和 
由5个连接核苷组成的的3’翼区段； 
其中所述缺口区段位于所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；并且其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合。 
25.根据权利要求22所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸包含： 
由8个连接脱氧核苷组成的缺口区段； 
由6个连接核苷组成的的5’翼区段；和 
由6个连接核苷组成的的3’翼区段； 
其中所述缺口区段位于所述5’翼区段与所述3’翼区段之间，其中每个翼区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖；并且其中每个核苷间键合是硫代磷酸酯键合。 
26.根据权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成。 
27.一种组合物，其包含根据权利要求1-26中任一项所述的化合物或其盐和至少一种药学上可接受的载体或稀释剂。 
28.一种方法，其包括向动物施用根据权利要求1-26中任一项所述的化合物或组合物。 
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述动物是人。 
30.根据权利要求28所述的方法，其中施用所述化合物预防、治疗、减轻或延缓转甲状腺素蛋白淀粉样变性的进展。 
31.根据权利要求28所述的方法，包括共施用所述化合物或组合物和第二活性剂。 
32.根据权利要求31所述的方法，其中伴随施用所述化合物或组合物和第二活性剂。 
33.根据权利要求28所述的方法，其中所述施用是针对脉络丛。 
34.一种减少动物中的转甲状腺素蛋白mRNA或蛋白表达的方法，其包括向所述动物施用根据权利要求1-26中任一项所述的化合物或组合物以减少动物中的转甲状腺素蛋白mRNA或蛋白表达。 
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述动物是人。 
36.根据权利要求34所述的方法，其中减少转甲状腺素蛋白mRNA或蛋白表达预防、治疗、减轻或延缓转甲状腺素蛋白淀粉样变性的进展。 
37.根据权利要求34所述的方法，包括共施用所述化合物或组合物和第二活性剂。 
38.根据权利要求37所述的方法，其中伴随施用所述化合物或组合物和第二活性剂。 
39.根据权利要求34所述的方法，其中所述施用是针对脉络丛。 
40.一种用于治疗患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的人的方法，包括鉴定所述患有转甲状腺素蛋白淀粉样变性的人和向所述人施用治疗有效量的根据权利要求1-26中任一项所述的化合物或组合物，从而治疗所述人的转甲状腺素蛋白淀粉样变性。 
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述治疗减少所述人中以下的至少一种：坐立不安、缺乏协调、眼球震颤、痉挛性下肢轻瘫、缺乏肌肉协调、视觉受损、失眠症、罕见感觉、肌阵挛、失明、失语症、腕管综合征、癫痫发作、蛛网膜下腔出血、脑的中风和出血、脑水肿、共济失调、和痉挛性麻痹、昏迷、感觉性神经病变、感觉异常、感觉减退、运动神经病变、自身性神经病变、直立性神经病变、直立性低血压、循环便秘、循环腹泻、恶心、呕吐、减少出汗、阳痿、胃排空延迟、尿潴留、尿失禁、进展性心脏病、疲劳、呼吸急促、体重减轻、食欲缺乏、麻木、发麻、虚弱、舌肿大、肾病变综合征、充血性心力衰竭、运动性呼吸困难、外周性水肿、心律不齐、心悸、头晕、晕厥、直立性低血压、外周神经问题、感觉运动受损、下肢神经病变、痛觉过敏、改变的温度感觉、下肢衰弱、恶病质、外周性水肿、肝肿大、紫癜、舒张期功能障碍、早产儿心室收缩、颅神经病变、深部肌腱反射减少、玻璃体中的淀粉样沉积、玻璃体混浊、干眼、青光眼、斜瞳孔中的齿状外观或由水分保持引起的足肿胀。 
42.根据权利要求40所述的方法，包括共施用所述化合物或组合物和第二活性剂。 
43.根据权利要求42所述的方法，其中伴随施用所述化合物或组合物和第二活性剂。 
44.根据权利要求40所述的方法，其中所述施用是针对脉络丛。 
45.一种用于减少或预防转甲状腺素蛋白淀粉样变性的方法，其包括向人施用治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物，由此减少或预防转甲状腺素蛋白淀粉样变性。 
46.根据权利要求45所述的方法，包含共施用所述化合物或组合物和第二活性剂。 
47.根据权利要求46所述的方法，其中伴随施用所述化合物或组合物和第二活性剂。 
48.根据权利要求45所述的方法，其中所述施用是针对脉络丛。 
49.一种用于减轻转甲状腺素蛋白淀粉样变性的症状的方法，包括向需要其的人施用包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1特异性杂交，由此减轻所述人中转甲状腺素蛋白淀粉样变性的症状。 
50.一种用于减少与转甲状腺素蛋白淀粉样变性相关的症状的进展的速率的方法，包括向需要其的人施用包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1特异性杂交，由此减少所述人中转甲状腺素蛋白淀粉样变性的症状的进展的速率。 
51.一种用于逆转由与转甲状腺素蛋白淀粉样变性相关的症状指示的退化的方法，包括向需要其的人施用包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述经修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO：1特异性杂交，由此逆转所述人中由与转甲状腺素蛋白淀粉样变性相关的症状指示的退化。 
52.根据权利要求49、50或51所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸是单链寡核苷酸。 
53.根据权利要求49、50或51所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸的所述核碱基序列与SEQ ID NO 1至少90％互补。 
54.根据权利要求49、50或51所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸的所述核碱基序列与SEQ ID NO 1至少95％互补。 
55.根据权利要求49、50或51所述的方法，所述经修饰的寡核苷酸的所述核碱基序列与SEQ ID NO 1至少100％互补。 
56.根据权利要求49、50或51所述的方法，其中所述经修饰的寡核苷酸由20个连接核苷组成。 
57.根据权利要求49、50或51所述的方法，其中所述症状是至少一种身体症状、至少一种认知症状、至少一种精神症状和至少一种外周症状中的至少一种。 
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述至少一种身体症状选自由以下组成的组：坐立不安、缺乏协调、无意引发的运动、无意未完成的运动、不稳定步态、舞蹈病、僵硬、扭体运动、异常姿势、不稳定性、异常面部表达、咀嚼困难、吞咽困难讲话困难、癫痫发作和睡眠紊乱。 
59.根据权利要求57所述的方法，其中所述至少一种认知症状选自由以下组成的组：记忆受损、判断受损和思考、计划受损、灵活性受损、抽象思维受损、规则获取受损、适当行动起始受损、不适当行动受损、短时记忆受损、长期记忆受损、偏执狂、定向障碍、混乱、幻觉和痴呆。 
60.根据权利要求57所述的方法，其中所述至少一种精神症状选自由以下组成的组：痴呆；焦虑症、抑郁症、感情迟钝、自我中心症、攻击性、强迫行为、易怒、人格改变(包括记忆力受损、判断和思考)以及自杀观念。 
61.根据权利要求57所述的方法，其中所述至少一种外周症状选自由以下组成的组：脑质量减少、肌肉萎缩、心力衰竭、葡萄糖耐量受损、体重减轻、骨质疏松症和睾丸萎缩。 
62.根据权利要求49-61中任一项所述的方法，其中所述化合物包含由12至30个连接核苷组成的经修饰的寡核苷酸，其中所述连接核苷包含SEQ ID NO：25、80、86、87、115、120、122或124中所述的序列的至少12个连续核碱基。 
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