CN104523594A

CN104523594A - 用阿米卡星脂质体制剂治疗肺病的方法

Info

Publication number: CN104523594A
Application number: CN201410564453.7A
Authority: CN
Inventors: 雷努.古普塔
Original assignee: Transave LLC
Current assignee: Insmed Inc; Transave LLC
Priority date: 2008-10-13
Filing date: 2009-10-13
Publication date: 2015-04-22
Also published as: JP2012505265A; UA115127C2; EP2349282B1; AU2009303542B2; ZA201102745B; MX344476B; EP2349282B8; US9724301B2; CA2739954A1; CN102186481A; US9114081B2; IL212268A0; US20160143849A1; RU2537238C2; RU2011119018A; ES2781761T3; IL251992A0; AU2009303542A1; EP2349282A4; WO2010045209A9

Abstract

本发明公开了治疗肺病的方法，包括施用有效剂量的雾化阿米卡星脂质体制剂至患者至少一个治疗周期，其中：该治疗周期包括一个15日至75日的施用期，随后是一个15日至75日的停药期；且有效剂量包含在施用期期间日施用100至2500mg的阿米卡星。

Description

用阿米卡星脂质体制剂治疗肺病的方法

本申请是基于申请日为2009年10月13日，优先权日为2008年10月13日，申请号为200980140740.2(PCT/US2009/060468)，发明名称为“用阿米卡星脂质体制剂治疗肺病的方法”的专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求2008年10月13日提交的美国申请号12/250,412的优先权权益，所述文献的内容在此全部引用作为参考。

发明背景

囊性纤维化(CF)，又称作黏稠物阻塞症，是外分泌腺的常染色体隐性遗传病。它影响肺、汗腺和消化系统，引起慢性呼吸的和消化的问题。它由囊性纤维化跨膜传导调节蛋白CFTR)中的突变引起。它是高加索人种中最常见的致命的常染色体隐性疾病。

CF的最初表现有时是在16％发生CF的婴儿中出现的胎粪性肠梗阻。CF的其他症状在幼童期间表现。肺和胰均异常地产生黏稠黏液。这种黏液开始堆积并且开始阻塞胰和肺的开口。肺部问题始于浓稠黏性黏液的持续存在并且是CF的最严重并发症之一。肺内的黏液可以变成细菌的生长培养基，导致慢性呼吸道感染和肺组织的最终永久性损伤。在CF末期期间，患者体验增加的胸充血、对活动不耐受、增加的罗音和增加的咳嗽，所述的咳嗽因来自肺动脉的细支气管出血而经常含有混杂血液的痰(咯血)。在患有CF的人中常见慢性和声音不固定(loose sounding)的咳嗽。这些浓稠分泌物也阻塞胰，从而阻止消化酶抵达肠道来帮助分解并吸收食物。频繁和恶臭的粪便连同粪便中可见的脂肪油经常是CF的早期体征。如果在生活早期不使用适当治疗辅助消化，这可能危害生长和总体营养。随着肺功能恶化，CF患者可以发生肺动脉高压症、慢性支气管炎和细支气管慢性扩张(支气管扩张)。肺脓肿极常见。通常因重度感染、肺炎或心衰而发生死亡。

囊性纤维化是排他地可遗传的，因为对获得本病的儿童而言，双亲必须均携带隐性基因。在遗传水平上，囊性纤维化最经常地因DNA中符合读框的缺失(in-frame deletion)3个碱基对引起。囊性纤维化因称作囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR)的蛋白质的异常形式的产生而导致。CFTR在跨上皮细胞运输氯离子方面发挥作用，其中所述的上皮细胞存在于肺和肠道中。在CF患者中，CFTR没有恰当地发挥作用，导致离子积聚于上皮细胞内部。由于水因渗透作用而跟随离子，这导致肺泡表面上缺水和黏稠黏液。最常见的CFTR蛋白异常是名为ΔF508的突变，其特征在于染色体位置7q31.1-31.2处编码氨基酸苯丙氨酸的DNA碱基对序列的3bp缺失。

除肺部感染之外，大部分患有CF的人也存在消化问题，特别是脂肪消化问题。消化问题导致吸收不良和体重增加与维持困难，这转而影响总体健康。这种情况归因于阻碍消化酶从胰脏释放的异常黏稠的黏液。用补充性酶治疗胰功能不全。通常需要脂溶性维生素A、D、E和K的水可溶混形式，因为降低的脂肪吸收可以导致这些维生素缺乏。

CF患者还因胰腺阻塞而具有升高的糖尿病发病率。这种慢性阻塞引起胰岛随时间降解并减少胰岛素产生，从而引起高血糖症。还存在CF患者对产生的胰岛素变得更耐受的证据，这种可能因感染或用糖皮质激素治疗触发。CF患者中的糖尿病通常称作CFRD，即囊性纤维化相关的糖尿病。一般的糖尿病膳食是不切实际的并且因而代之以调节胰岛素剂量以符合一般的高热量/高脂肪CF膳食。

许多CF患者某种程度地体验到他们的手指尖变宽，称作“杵状变”。这种病疾累及手指和脚趾并且导致指尖变圆和膨大。也可以在患有COPD或严重心脏病的人中见到这种病状。由于患有CF的人易于出现养分吸收不良，故骨质疏松症可以因低骨密度而在成年早期出现。对患有CF的人，重要的是进行定期双能X线吸收测定(DEXA)扫描以测量骨密度并根据需要开始治疗。当早期确诊时，治疗可以帮助防止更严重的并发症。

一些CF患者患有作为长期使用用来对付肺感染的霉素/米星类药物如妥布霉素之副作用的听力丧失。虽然这种副作用是熟知和理解的，但是这些特定抗生素具有治疗CF患者方面的高价值，并且往往必须将考虑听力丧失视为旨在保护生命和健康的必要平衡交换。CF主要在中欧和西欧起源的个体中发生。在美国，死亡时的中位数年龄已经从1969年的8.4岁升高至1998年的14.3岁。平均死亡年龄已经从1969年的14岁升高至2003年的32.4岁(囊性纤维化基金会(Cystic FibrosisFoundation))。平均寿命显著增加的主要贡献因素是对CF受试者中慢性呼吸道感染的改良抗生素治疗(Goss和Rosenfeld 2004)以及改善的营养和更早诊断。

CF受试者呼吸道健康上的主要因素是遭受铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)慢性感染。铜绿假单胞菌的感染率随年龄升高并且截止年龄18岁，美国80％的CF患者感染。治疗这种感染的困难在于多因素性，包括抗生素渗入感染部位(包括黏液栓)不良、抗生素由CF痰失活、细菌在生物膜中生长、表型变化(包括转变成黏液型的铜绿假单胞菌)和出现多药耐药性(Chmiel和Davis 2003；Gibson,Burns等人2003)。因为这种病原体的感染与不良临床结果相关，故肺部疗法的基石是优化对铜绿假单胞菌的治疗(Doring,Conway等人2000；Chmiel和Davis 2003；Gibson,Burns等人2003；Gibson,Emerson等人2003)。

防治患有CF的人中铜绿假单胞菌慢性感染的现有方法之一包括使用吸入型妥布霉素()的抑制性疗法。一日两次施用300mg吸入型妥布霉素28日后接28日停药的循环已经显示降低铜绿假单胞菌菌落计数，提高预测的FEV₁％，减少住院治疗并减少抗生素使用(Ramsey,Pepe等人1999)。然而，患者必须一日两次给药，每次给药是大约15-20分钟吸入时间。

每日胸部理疗和气溶胶剂吸入治疗是用于CF患者的非常常见的处方。一般的物理治疗涉及人工胸部叩击(打击)、正压力技术和/装置或可能使用装置如ThAIRapy Vest或胸内冲击通风器(IPV)以实现相同效果：疏松浓稠黏液。通常地给予的气溶胶化药物包括沙丁胺醇(albuterol)、异丙托溴铵(ipratropium bromide)和百慕时(Pulmozyme)以疏松分泌物并减少炎症。发现冲浪的CF患者更健康；因此，一些医院对不患哮喘的那些CF患者使用雾化的6％-10％盐水溶液以疏松分泌物。有时给予吸入型氨基糖苷类抗生素以对抗感染。正在使用有助清除黏液的众多药学物质。然而，仍未证明增溶黏液糖蛋白的N-乙酰半胱氨酸是显著有效的。重组人DNA酶(DNAse)通过降解CF患者的痰中浓的DNA量而降低痰粘度。DNA酶疗法在短期使用期间对增加气流是有益的并且也延长肺部疾病转剧发作之间的间隔。

取决于病例的严重性，CF患者一般或多或少定期、经常每隔6个月住院治疗。患者经常通过外周穿刺中心静脉插管(PICC line)、中心静脉导管(Central Line)或植入式人工血管(Port-a-Cath)获得静脉内抗生素。

囊性纤维化也可以导致支气管扩张。支气管扩张是黏液阻塞引起的呼吸道异常伸展和扩大。当身体不能除去黏液时,黏液变得黏稠并聚积于通气道中。阻塞和伴随的感染引起炎症，导致通道的变弱和变宽。变弱的通道可以结疤和变形，从而允许聚积更多黏液和细菌，造成感染和气道阻塞的循环。支气管扩张是造成部分支气管树局部不可逆性扩张的疾病。有关的支气管扩张、发炎并轻易地萎陷，从而导致气流阻塞和分泌物清除受损。支气管扩张与类型广泛的疾病相关，但是它通常因坏死性细菌感染(如由葡萄球菌属(Staphylococcus)或克雷伯氏菌属(Klebsiella)物种或百日咳博德特氏菌(Bordatella pertussis)引起的感染)引起。

支气管扩张是一种慢性阻塞性肺病(COPD)并且它可以并发肺气肿和支气管炎。本病通常地误诊为哮喘或肺炎。支气管扩张可以在任何年龄发生，最常见地在童年开始，但是症状可以直至很晚时期才明显。支气管扩张可以作为出生缺陷如原发性纤毛运动障碍或囊性纤维化的一部分症状出现。美国全部支气管扩张病例中约50％病例是因囊性纤维化产生的。它也可以在出生后因损伤或其他疾病如结核病、肺炎和流感而发展产生。

支气管壁扩张导致气流阻塞和分泌物清除受损，原因是扩张的区域破坏支气管的正常气压，造成痰汇集在扩张的区域内部而不被向上推动。汇集的痰提供有助感染性病原体生长的环境，并且肺的这些区域因而极容易遭受感染。肺遭遇的感染越多，肺组织和肺泡受损越多。当这种情况发生时，支气管变得更无弹性并扩张，这产生该疾病的永久的破坏性循环。

根据严重性水平的不同，存在3种类型的支气管扩张。纺锤状(圆柱状)支气管扩张(最常见类型)指不能远端地逐步变细的轻微发炎的支气管。在肿大性支气管扩张中，因为扩张区域与收缩区域混杂，故支气管壁呈串珠状。囊形(囊状)支气管扩张的特征在于支气管向四周重度、不可逆性气胀，伴有或没有气液平面(air-fluid levels)。慢性排痰性咳嗽(productive cough)是突出的，出现于多达90％的支气管扩张患者中。以日为基础而言，在76％的患者中产生痰。

除CF之外，支气管扩张的其他遗传原因或贡献因素还包括Kartagener综合征、Young氏综合征、α1-抗胰蛋白酶缺乏和原发性免疫缺陷。后天性支气管扩张更频繁地出现，最大病因之一是结核病。本病在儿童中一个尤其常见的原因是源自人免疫缺陷病毒的后天性免疫缺陷综合征。支气管扩张的其他原因包括呼吸道感染、阻塞、吸入和吸进氨和其他有毒气体、肺吸气、酒精中毒、使用海洛因和变态反应。抽烟也可能导致支气管扩张。

支气管扩张的诊断基于回顾临床史和高分辨率CT扫描结果中的特征性模式。此类模式包括“树芽(tree-in-bud)”畸形和带可确定边界的囊。如果临床史清晰地证实频繁的呼吸道感染以及通过血液检查和痰培养样品证实基础性问题，则也可以在无CT扫描证实的情况下确诊支气管扩张。

症状包括咳嗽(平躺时加重)、气短、异常胸音、虚弱、体重减轻和疲劳。在感染时，黏液可以变色、恶臭并且可以含有血液。症状严重性在患者间大幅变动，并且患者偶尔是无症状的。

支气管扩张的治疗旨在控制感染和支气管分泌物、减轻气道阻塞并防止并发症。这包括延长使用抗生素以防止有害感染以及用体位引流法和胸部理疗消除聚积的流体。外科手术也可以用来治疗局部支气管扩张，去除可能引起本疾病进展的障碍物。

一贯坚持的吸入型类固醇疗法可以减少痰产生并且在一段时间减少气道收缩会防止支气管扩张的进展。一种常用疗法是也用于哮喘治疗中的丙酸倍氯米松(beclometasone dipropionate)。吸入剂如沙丁胺醇(Albuterol，Salbutamol)、氟替卡松(Fluticasone，Flovent/Flixotide)和异丙阿托品(Ipratropium，Atrovent)的使用可以通过清洁气道和减轻炎症而帮助降低感染的可能性。

名称为Bronchitol的甘露醇吸入型干散剂(Mannitol dry inhalationpowder)已经由FDA批准用于患有支气管扩张的囊性纤维化患者。2005年2月批准的最初罕见药物适应症允许其用于治疗支气管扩张。最初的批准基于2期临床研究结果，所述结果显示该产品安全、耐受良好和有效刺激黏液水合作用/清除，因而改善患有慢性阻塞性肺病如支气管扩张的患者的生活质量。如2007年那样正在进行长期研究以确保该治疗的安全性和有效性。

经常给予支气管扩张患者针对感染的抗生素和支气管扩张药以打开气道。有时候，长期开具抗生素处方以防止复发性感染，尤其在患有囊性纤维化的人中。也存在帮助清除黏液的物理治疗技术。肺移植术也是严重病例的一个选择。死亡是不常见的，但是可以因大出血导致死亡。如果立即治疗肺感染，则支气管扩张发生的可能性较小。

肺炎是其中肺泡(肺的负责从空气吸收氧的微小充气囊泡)发炎并且充满了流体的肺及呼吸系统疾病。肺炎可以因多种原因引起，包括细菌、病毒、真菌或寄生虫感染和肺的化学或物理损伤。与肺炎相关的一般综合征包括咳嗽、胸痛、发热和呼吸困难。诊断工具包括X射线和痰检验。

因此，对用于治疗肺病(包括CF、肺部感染、COPD、支气管扩张和其他肺病)的疗法存在需求。此外，存在改善此类疾病患者中肺功能的需求。

发明简述

本发明部分地涉及治疗患者中肺病的方法，包括施用有效剂量的雾化阿米卡星脂质体制剂至该患者至少一个治疗周期，其中：

该治疗周期包括一个15日至75日的施用期，随后是一个15日至75日的停药期；

并且有效剂量包含在施用期期间日施用100至2500mg的阿米卡星。

在一些实施方案中，将治疗周期施用至该患者至少两次。在一些实施方案中，施用期是15日至35日或20日至35日。在其他实施方案中，施用期是约28日。在一些实施方案中，停药期是15日至35日或20日至35日。在其他实施方案中，停药期是约28日。仍在其他实施方案中，停药期是25日至75日、35日至75日或45日至75日。在其他实施方案中，停药期是约56日。

在一些实施方案中，施用期是约28日并且停药期是约28日，而在其他实施方案中，施用期是约28日并且停药期是约56日。

在一些实施方案中，有效剂量包含250至1,500mg阿米卡星、250至1000mg阿米卡星或约280至约560mg阿米卡星。在其他实施方案中，有效剂量是约280或约560mg阿米卡星。

在一些实施方案中，肺病选自由慢性阻塞性肺病、支气管扩张、肺部感染、囊性纤维化、α-1-抗胰蛋白酶缺乏及它们的组合组成的组。在其他实施方案中，肺病是细菌性肺部感染，如铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)感染。在一些实施方案中，肺病是支气管扩张。

在一些实施方案中，患者在施用期期间具有小于约10mcg/mL的阿米卡星血清C_max。在其他实施方案中，患者具有施用期间或施用后每克痰至少1000mcg的阿米卡星痰C_max持续至少15日。

在一些实施方案中，患者在施用期结束后具有肺中细菌感染的log₁₀CFU降低至少0.5至少15日。在其他实施方案中，log₁₀CFU降低是至少1.0。

在一些实施方案中，患者在施用期结束后体验到肺功能改善至少15日。例如，患者可以体验到FEV₁提高、血氧饱和度提高或二者均提高。在一些实施方案中，患者具有相对治疗周期之前的FEV₁提高了至少5％的FEV₁。在其他实施方案中，FEV₁提高5％至50％。在其他实施方案中，FEV₁相对治疗周期之前的FEV₁提高了25至500mL。在一些实施方案中，血氧饱和度相对治疗周期之前的血氧饱和度提高了至少1％。

在一些实施方案中，至肺部疾病转剧的时间长度是距施用的最末日至少20日。在其他实施方案中，至救援治疗的时间长度是距施用的最末日至少25日。

在一些实施方案中，阿米卡星脂质体制剂包含脂质，所述脂质选自由卵磷脂酰胆碱(egg phosphatidylcholine，EPC)、卵磷脂酰甘油(EPG)、卵磷脂酰肌醇(EPI)、卵磷脂酰丝氨酸(EPS)、卵磷脂酰乙醇胺(EPE)、卵磷脂酸(EPA)、大豆磷脂酰胆碱(SPC)、大豆磷脂酰甘油(SPG)、大豆磷脂酰丝氨酸(SPS)、大豆磷脂酰肌醇(SPI)、大豆磷脂酰乙醇胺(SPE)、大豆磷脂酸(SPA)、氢化卵磷脂酰胆碱(HEPC)、氢化卵磷脂酰甘油(HEPG)、氢化卵磷脂酰肌醇(HEPI)、氢化卵磷脂酰丝氨酸(HEPS)、氢化卵磷脂酰乙醇胺(HEPE)、氢化卵磷脂酸(HEPA)、氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)、氢化大豆磷脂酰甘油(HSPG)、氢化大豆磷脂酰丝氨酸(HSPS)、氢化大豆磷脂酰肌醇(HSPI)、氢化大豆磷脂酰乙醇胺(HSPE)、氢化大豆磷脂酸(HSPA)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(dioleylphosphatidyl-ethanolamine，DOPE)、棕榈酰硬脂酰磷脂酰胆碱(PSPC)、棕榈酰硬脂酰磷脂酰甘油(PSPG)、单油酰磷脂酰乙醇胺(MOPE)、胆固醇、麦角甾醇、羊毛甾醇、生育酚、脂肪酸的铵盐、磷脂的铵盐、甘油酯的铵盐、肉豆蔻胺、棕榈胺、月桂胺、硬脂胺、二月桂酰乙基磷酸胆碱(DLEP)、二肉豆蔻酰乙基磷酸胆碱(DMEP)、二棕榈酰乙基磷酸胆碱(DPEP)和二硬脂酰乙基磷酸胆碱(DSEP)、N-(2,3-二-(9-(Z)-十八烯氧基)-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、1,2-双(油酰氧基)-3-(三甲氨基)丙烷(DOTAP)、磷脂酰甘油(PGs)、磷脂酸(PAs)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二肉豆蔻酰磷脂酸(dimyristoylphosphatidylacid，DMPA)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)、二硬脂酰磷脂酸(DSPA)、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇(DMPI)、二棕榈酰磷脂酰肌醇(DPPI)、二硬脂酰磷脂酰肌醇(DSPI)、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸(DMPS)、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(DPPS)、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸(DSPS)、和它们的混合物组成的组。在其他实施方案中，阿米卡星脂质体制剂包含磷脂和固醇，如DPPC和胆固醇。在其他实施方案中，阿米卡星脂质体制剂包含约2:1重量比的DPPC和胆固醇。在一些实施方案中，阿米卡星脂质体制剂具有按重量计算约0.5至约1.0、约0.5至约0.7或约0.6的脂质对药物比率。

附图简述

图1描述在多级冲击器的级上所收集的阿米卡星脂质体雾化剂的质量分布作为截止直径的函数。表15注释的3个阿米卡星脂质体批次(称为1、2和3)用eFlow雾化器与ACI系统(实心符号)或LC Star雾化器与NGI系统(空心符号)来使用。

图2描述了吸入阿米卡星脂质体75mg/mL或妥布霉素后大鼠Log₁₀CFU/肺的降低。符号代表在滴注琼脂珠内的PA3064后18日和在盐水或上述抗生素之一的最后吸入时段后3日每只大鼠的Log₁₀CFU/肺。在2.0Log₁₀CFU处的值代表本方法中检测肺内细菌的下限。棒代表每个组的均值。使用微软公司的Excel软件计算均值与标准差和双尾t-检验结果。

图3描述了吸入阿米卡星脂质体和妥布霉素28日后大鼠Log₁₀CFU/肺的降低。通过吸入疗法但按照不同时间表给予等同剂量的上述抗生素。一日两次每日总共104分钟给予妥布霉素持续28日。如盐水那样，每日一次给予阿米卡星脂质体80分钟持续28日(Q1Dx28)。每隔一日，日一次160分钟给予阿米卡星脂质体持续28日(Q2Dx14)；或每日一次160分钟连续14日(Q1Dx14)，随后观察直至大鼠安乐死。符号代表在滴注琼脂珠内的铜绿假单胞菌PA3064后35日每只大鼠的Log₁₀CFU/肺。使用微软公司的Excel软件计算均值与标准差和双尾t-检验。

图4描述研究4的研究设计，其中患者每日接受阿米卡星脂质体持续28日，在施用的最末日后是监测28日时间。

图5描述了这样的曲线图，其显示与安慰剂相比在接受280mg剂量阿米卡星的儿科患者中氧饱和度相对基线的提高百分数。

图6描述了这样的曲线图，其显示与安慰剂相比在接受560mg剂量阿米卡星的儿科患者中的氧饱和度。

图7a描述安慰剂组中如FEV₁所测量的肺功能随年龄变化的曲线图。合并该研究中用作280和560mg阿米卡星组的安慰剂数据并按年龄进行划分。还合并了280和560mg阿米卡星组的Arikace^TM数据并按年龄进行划分。

图7b描述了接受吸入型阿米卡星脂质体的患者中的肺功能随年龄变化。

图8描述了比较560mg及280mg阿米卡星组和安慰剂组中(以mL测量的)FEV1变化的曲线图。

图9描述了560mg阿米卡星组、280mg阿米卡星组和安慰剂组中作为相对于基线的FEV1变化百分数的曲线图。

图10描述了全部患者中Log CFU变化的曲线图。

图11描述了黏液型菌株Log CFU变化的曲线图。

发明详述

I.定义

为了便利，在进一步描述本发明之前，这里收集在本说明书、实施例和所附权利要求中使用的某些术语。这些定义应当由本领域技术人员根据本公开的其余部分判读和理解。除非另外定义，本文中所用的全部技术术语和科学术语具有如本领域普通技术人员通常所理解的相同意义。

术语“肺病”指涉及受试者的呼吸道、尤其受试者的肺的任何疾病、失调或其他不健康状况。肺窘迫一般导致呼吸困难。

术语“治疗”是本领域公认的并且指治愈以及改善任何疾病或病况的至少一个症状。

术语“预防性”或“治疗性”治疗是本领域公认的并且指施用一种或多种主题组合物至宿主。如果主题组合物在临床表现不希望的病况(例如，宿主动物的疾病或其他不希望的病况)之前施用，则治疗是预防性的，即,它保护宿主免于发生这种不希望的病况，而如果在表现不希望的病况之后施用，则治疗是治疗性的(即,意图减小、改善或维持存在的不希望的病状或来自其的副作用)。

术语“治疗有效剂量”和“治疗有效量”指化合物的这种量，其导致预防或改善患者中的症状患者或导致想要的生物学结果，例如，临床体征改善、疾病发作延迟、细菌水平降低等。

术语“FEV₁”作为肺功能的度量是本领域熟知的，并且指一秒钟内用力呼气量。本文中所用的FEV₁值以mL度量，并且也以距离基线的变化百分数(例如距离治疗前值的变化)度量。

由主题方法待治疗的“患者”、“受试者”或“宿主”可以意指人或非人的动物。

术语“哺乳动物”是本领域已知的，并且示例性哺乳动物包括人、灵长类、牛、猪、犬、猫科动物和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。

术语“生物可利用的”是本领域公认的并且指主题发明的一种形式，其允许主题发明或所施用的一部分量被施用该主题发明的受试者或患者吸收、掺入或另外生理上可用于该受试者或患者。

术语“可药用盐”是本领域公认的并且指化合物的相对无毒的、无机和有机的酸加成盐,例如包括在本发明组合物中所含有的那些盐。

术语“可药用载体”是本领域公认的并且指涉及从一个器官或身体部分携带或运输任何主题组合物或其组分至另一个器官或身体部分的可药用物质、组合物或运载体，如液体或固体填料、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。每种载体必须是在兼容于主题组合物及其组分的意义上“可接受的”并且无害于患者。可以充当可药用载体的物质的一些实例包括：(1)糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和纤维素乙酸酯；(4)西黄蓍胶粉末；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇类，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；和(21)药学制剂中使用的其他无毒的兼容性物质。

II.阿米卡星脂质体

在目前公开的方法中有用的阿米卡星脂质体制剂可以如例如美国公开号20060073198或20080089927中所述那样制备，这两份文献因而通过引用的方式并入作为参考。一般地，阿米卡星以可药用盐的形式例如阿米卡星硫酸盐使用。

本发明组合物中所用的脂质可以是合成的、半合成的或天然存在的脂质，包括磷脂类、生育酚、类固醇、脂肪酸、糖蛋白如白蛋白、阴离子脂质和阳离子脂质。脂质可以是阴离子、阳离子或中性的。在一个实施方案中，脂质制剂基本上不含阴离子脂质、基本上不含阳离子脂质或基本上不含这两者。在一个实施方案中，脂质制剂仅包含中性脂质。在另一个实施方案中，脂质制剂不含阴离子脂质或阳离子脂质或这两者。在另一个实施方案中，脂质是磷脂。磷脂包括卵磷脂酰胆碱(EPC)、卵磷脂酰甘油(EPG)、卵磷脂酰肌醇(EPI)、卵磷脂酰丝氨酸(EPS)、卵磷脂酰乙醇胺(EPE)和卵磷脂酸(EPA)；大豆对应物，大豆磷脂酰胆碱(SPC)；SPG、SPS、SPI、SPE和SPA；氢化的卵和大豆对应物(例如，HEPC、HSPC)、由第2和3甘油位置中含有12至26个碳原子链的脂肪酸和第1甘油位置中不同首基的酯键构成的其他磷脂，其包括胆碱、甘油、肌醇、丝氨酸、乙醇胺以及相应的磷脂酸。这些脂肪酸上的链可以是饱和或不饱和的，并且磷脂可以由不同链长度和不同不饱和程度的脂肪酸构成。特别地，制剂的组成可以包括二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)(天然存在的肺表面活性剂的主要组分)以及二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)。其他实例包括二肉豆蔻酰卵磷脂酰胆碱(DMPC)和二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)和二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)和二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)和混合磷脂如棕榈酰硬脂酰磷脂酰胆碱(PSPC)和棕榈酰硬脂酰磷脂酰甘油(PSPG)、三酰甘油、二酰甘油、seranide、鞘氨醇、鞘磷脂和单酰化磷脂如单油酰磷脂酰乙醇胺(MOPE)。

所用的脂质可以包括脂肪酸的铵盐、磷脂的铵盐和甘油酯的铵盐、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰丝氨酸(PS)。脂肪酸包括饱和或不饱和的碳链长度12至26个碳原子的脂肪酸。一些具体实例包括：肉豆蔻胺、棕榈胺、月桂胺和硬脂胺、二月桂酰乙基磷酸胆碱(DLEP)、二肉豆蔻酰乙基磷酸胆碱(DMEP)、二棕榈酰乙基磷酸胆碱(DPEP)和二硬脂酰乙基磷酸胆碱(DSEP)、N-(2,3-二-(9(Z)-十八烯氧基)-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)和1,2-双(油酰氧基)-3-(三甲氨基)丙烷(DOTAP)。PG、PA、PI、PC和PS的实例包括DMPG、DPPG、DSPG、DMPA、DPPA、DSPA、DMPI、DPPI、DSPI、DMPS、DPPS和DSPS、DSPC、DMPC、DOPC、卵PC。

在另一个实施方案中，脂质体包含选自由磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酸(PA)、磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酰丝氨酸(PS)组成的组中的脂质。

在另一个实施方案中，脂质选自由卵磷脂酰胆碱(EPC)、卵磷脂酰甘油(EPG)、卵磷脂酰肌醇(EPI)、卵磷脂酰丝氨酸(EPS)、卵磷脂酰乙醇胺(EPE)、磷脂酸(EPA)、大豆磷脂酰胆碱(SPC)、大豆磷脂酰甘油(SPG)、大豆磷脂酰丝氨酸(SPS)、大豆磷脂酰肌醇(SPI)、大豆磷脂酰乙醇胺(SPE)、大豆磷脂酸(SPA)、氢化卵磷脂酰胆碱(HEPC)、氢化卵磷脂酰甘油(HEPG)、氢化卵磷脂酰肌醇(HEPI)、氢化卵磷脂酰丝氨酸(HEPS)、氢化卵磷脂酰乙醇胺(HEPE)、氢化卵磷脂酸(HEPA)、氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)、氢化大豆磷脂酰甘油(HSPG)、氢化大豆磷脂酰丝氨酸(HSPS)、氢化大豆磷脂酰肌醇(HSPI)、氢化大豆磷脂酰乙醇胺(HSPE)、氢化大豆磷脂酸(HSPA)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰硬脂酰磷脂酰胆碱(PSPC)、棕榈酰硬脂酰磷脂酰甘油(PSPG)、单油酰磷脂酰乙醇胺(MOPE)、生育酚、脂肪酸的铵盐、磷脂的铵盐、甘油酯的铵盐、肉豆蔻胺、棕榈胺、月桂胺、硬脂胺、二月桂酰乙基磷酸胆碱(DLEP)、二肉豆蔻酰乙基磷酸胆碱(DMEP)、二棕榈酰乙基磷酸胆碱(DPEP)和二硬脂酰乙基磷酸胆碱(DSEP)、N-(2,3-二-(9-(Z)-十八烯氧基)-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、1,2-双(油酰氧基)-3-(三甲氨基)丙烷(DOTAP)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)、二硬脂酰磷脂酸(DSPA)、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇(DMPI)、二棕榈酰磷脂酰肌醇(DPPI)、二硬脂酰磷脂酰肌醇(DSPI)、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸(DMPS)、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(DPPS)、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸(DSPS)、和它们的混合物组成的组。

在另一个实施方案中，脂质体包含磷脂酰胆碱。磷脂酰胆碱可以是不饱和的，如DOPC或POPC，或是饱和的，如DPPC。在另一个实施方案中，脂质体不包括固醇。在一个实施方案中，脂质体基本上由磷脂酰胆碱和固醇组成。在另一个实施方案中，脂质体基本上由DPPC和胆固醇组成。

由磷脂酰胆碱如DPPC组成的脂质体或脂质抗感染制剂辅助肺内细胞(如肺泡巨噬细胞)的摄取并帮助维持抗感染药在肺中释放(Gonzales-Rothi等人(1991))。除减少颗粒聚集之外，带负电荷的脂质如PGs、PAs、PSs和PIs还可以在吸入制剂的持续释放特征以及该制剂跨肺运输(胞吞转运作用)用于全身摄取方面发挥作用。

不受任何具体理论限制,认为当脂质包含中性脂质并且不包含带负电荷的或带正电荷的磷脂时，脂质体制剂具有改善的肺摄取。例如，当脂质仅包含中性脂质时，脂质体可以具有改善的生物膜或黏液层渗入作用。示例性中性脂质包括前述的磷脂酰胆碱如DPPC和固醇如胆固醇。

III.治疗的方法

本发明涉及治疗有需求的受试者中肺病的方法，包括施用有效量的任一种前述抗生素脂质体制剂至该受试者。在一些实施方案中，肺病是细菌性感染。在一些实施方案中，该方法包括通过每日吸入施用有效量的阿米卡星脂质体制剂(这里也称作“阿米卡星脂质体”)至有需求的患者。在一些实施方案中，通过吸入施用包括使脂质体制剂雾化。

在一些实施方案中，阿米卡星脂质体制剂每日施用持续一个时间段，随后是其中无脂质体制剂施用的第二时间段(“停药期”)。例如,在一些实施方案中，治疗肺病的方法包括施用有效剂量的雾化阿米卡星脂质体制剂至该患者至少一个治疗周期，其中：

在一些实施方案中，前述的治疗周期施用至该患者至少两次。在其他实施方案中，治疗周期可以施用3、4、5、6次或更多次。

在施用期期间，每日施用阿米卡星脂质体。在一些实施方案中，阿米卡星脂质体可以在施用期期间每隔一日或每隔二日施用。如上所解释，施用期可以是15日至75日。在一些实施方案中，施用期是15日至35日或20日至35日。在其他实施方案中，施用期是20日至30日、25日至35日或25日至30日。在其他实施方案中，施用期是约25、26、27、28、29日或30日。在另一个实施方案中，施用期是约28日。

在停药期期间，阿米卡星脂质体制剂不施用至患者。在一些实施方案中，停药期是15日或更长，例如,15日至75日、15日至35日或20日至35日。在其他实施方案中，停药期是20日至30日、25日至35日或25日至30日。在其他实施方案中，停药期是约25、26、27、28、29日或30日。在其他实施方案中，停药期是约28日,而仍在其他实施方案中，停药期是至少29日。

在一些实施方案中，停药期是25日至75日、35日至75日或45日至75日。在其他实施方案中，停药期是50日至75日、50日至70日、50日至65日或50日至60日。在其他实施方案中，停药期是约50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60日，而在其他实施方案中，停药期是约56日。

在一些实施方案中，有效剂量包含施用期每日250至1,500mg阿米卡星、250至1000mg阿米卡星、250至750mg阿米卡星或250至700mg阿米卡星。在其他实施方案中，有效剂量是约280至约560mg阿米卡星。在其他实施方案中，有效剂量是约230mg至约330mg或约510mg至约610mg。在其他实施方案中，有效剂量的阿米卡星是每日约100、150、200、250、300、250、400、450、500、550、600、650、700或750mg阿米卡星。在其他实施方案中，有效剂量是约280mg至约560mg阿米卡星。

在一些实施方案中，施用期是约28日，并且剂量是约280至约560mg阿米卡星。在其他实施方案中，施用期是约28日，停药期是约28日并且剂量是约280mg至约560mg。在其他实施方案中，施用期是约28日，停药期是约56日并且剂量是约280mg至约560mg。

在一些实施方案中，肺病选自由慢性阻塞性肺病、支气管扩张、肺部感染、囊性纤维化、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、和它们的组合组成的组。在一些实施方案中，肺病是囊性纤维化。在其他实施方案中，肺病是细菌性肺部感染、假单胞菌属(例如，铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)感染、少动假单胞菌(P.paucimobilis)感染、恶臭假单胞菌(P.putida)感染、荧光假单胞菌(P.fluorescens)和食酸假单胞菌(P.acidovorans)感染、葡萄球菌感染、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染、链球菌(包括肺炎链球菌)感染、大肠杆菌(Escherichia coli)感染、克雷伯氏菌属(Klebsiella)感染、肠杆菌属(Enterobacter)感染、沙雷氏菌属(Serratia)感染、嗜血杆菌属(Haemophilus)感染、鼠疫耶尔森菌(Yersiniapesos)感染、类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)感染、洋葱伯克霍尔德氏菌(B.cepacia)感染、唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(B.gladioli)感染、多噬伯克霍尔德菌(B.multivorans)感染、越南伯克霍尔德菌(B.vietnamiensis)感染、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)感染、鸟分枝杆菌复合群(M.avium complex,MAC)(鸟分枝杆菌(M.avium)和胞内分枝杆菌(M.intracellular))感染、堪萨斯分支杆菌(M.kansasii)感染、蟾蜍分枝杆菌(M.xenopi)感染、海分枝杆菌(M.marinum)感染、溃疡分枝杆菌(M.ulcerans)感染或偶发分支杆菌复合群(M.fortuitum complex)(偶发分支杆菌(M.fortuitum)和龟分支杆菌(M.chelonei)感染。在一些实施方案中，感染是铜绿假单胞菌感染，而在其他实施方案中，感染是非结核性分枝杆菌感染。肺部感染可以与或可以不与囊性纤维化相关。因而，在一些实施方案中，肺病是囊性纤维化和肺部感染如铜绿假单胞菌感染。在其他实施方案中，肺病是支气管扩张。支气管扩张可以与或可以不与囊性纤维化相关。

本发明方法在肺病部位提供有利水平的阿米卡星，同时限制该药物的全身性暴露，并且也提供持久的益处至受试者持续令人惊讶地延长的时间段。不受任何具体理论限制,认为根据本文中所述方法施用阿米卡星脂质体在受试者的肺中产生“贮库”效应。具体而言，认为脂质体颗粒足够地小并且含有渗入和扩散穿过CF痰且进入细菌生物膜的适宜脂质制剂。脂质体屏蔽了中性脂质体中包埋的阳离子性阿米卡星以最小化与带负电荷的痰/生物膜的静电相互作用，所述的静电相互作用要不然本会降低阿米卡星的生物利用度。另外，存在铜绿假单胞菌衍生的毒力因子(鼠李糖脂)(Davey等人2003)，其释放阿米卡星脂质体。因此，假设可以局部地递送相对高浓度的药物至细菌性大菌落环境(bacterial macro-colony environment)。

另外，认为阿米卡星脂质体的吸入导致剂量依赖性地召集巨噬细胞作为针对吸入药物/脂质制剂的适应性应答。肺泡巨噬细胞(其已经在阿米卡星脂质体处理的大鼠中显示功能上正常)的存在可能在CF患者中是特别有益的。已知CF患者在其肺中具有数目减少并且功能可能不良的巨噬细胞，这可能导致铜绿假单胞菌肺部感染的慢性化，并且可能导致非结核性分枝杆菌感染在该群体中的更高流行率。巨噬细胞的剂量依赖性召集也可以有助于使用本发明方法所观察到的持续效应。具体而言，肺中的巨噬细胞可以摄取阿米卡星脂质体，并且随后在肺中停留一段时间，随后巨噬细胞释放阿米卡星脂质体。一项在铜绿假单胞菌慢性感染的CF患者中的阿米卡星脂质体临床研究(在下文示例中描述)已经显示安全性、耐受性和肺功能及呼吸道症状的剂量依赖性改善；和在28日治疗结束时痰细菌密度降低。肺功能的这种改善在用560mg剂量的阿米卡星脂质体的治疗完成(第56日)后持续至少28日，从而显示持续的治疗效果。

在一些实施方案中，本发明方法因而提供了在血液中和痰中有利的阿米卡星水平。例如,所述方法提供相对低的阿米卡星全身性暴露，同时在肺病部位提供高的持续阿米卡星水平。例如，在一些实施方案中，患者在施用期期间具有小于约25mcg/mL的阿米卡星血清C_max。在其他实施方案中，该血清C_max在施用期期间小于20、15、10、5或2mcg/mL。

在一些实施方案中，患者在施用期间或在施用后延续持久的时间段具有每克痰至少约500mcg的阿米卡星痰C_max，如至少15日。在其他实施方案中，阿米卡星的痰C_max是每克痰至少750、1000、1500、2000、2500、3000或3500mcg。

当肺病包括肺部感染时，本发明也提供在延续持久的时间段上肺中细菌的菌落形成单位降低。例如，CFU与基线值相比降低。在一些实施方案中，患者在施用期结束后具有肺中细菌感染的log₁₀CFU降低至少约0.5至少15日。在其他实施方案中，log₁₀CFU的降低是至少1.0、1.5、2.0或2.5。假单胞菌感染尤其可以形成称作“黏液型”假单胞菌的大菌落，特别在患有囊性纤维化的患者中。在一些实施方案中，假单胞菌感染的黏液型菌株的CFU如上所述降低。

在一些实施方案中，患者在施用期结束后体验到肺功能改善至少15日。例如，患者可以体验到一秒钟用力呼气量(FEV₁)提高、血氧饱和度提高或二者均提高。在一些实施方案中，患者具有相对治疗周期之前的FEV₁提高了至少5％或至少10％的FEV₁。在其他实施方案中，FEV₁提高5％至50％、5％至25％或5％至20％。在其他实施方案中，FEV₁提高5％至15％或5％至10％。在其他实施方案中，FEV₁提高10％至50％、10％至40％、10％至30％或10％至20％。FEV₁往往以mL度量。因此，在一些实施方案中，与治疗之前的FEV₁相比时，FEV₁提高至少25mL。在一些实施方案中，FEV₁提高25mL至500mL,25mL至400mL,25mL至300或25mL至200mL。在一些实施方案中，FEV₁提高50mL至500mL、50mL至400mL、50mL至300mL、50mL至200mL或50mL至100mL。

在一些实施方案中，与施用之前的血氧饱和度水平相比，受试者中的血氧饱和度提高。在一些实施方案中，血氧饱和度在施用期后提高至少1％或至少2％至少15日。在其他实施方案中，血氧饱和度水平提高约1％至50％、1％至25％、1％至20％、1％至15％、1％至10％或1％至5％。在其他实施方案中，血氧饱和度水平提高约2％至10％或2％至5％。

前述的持续时间段可以是施用期后至少20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70日或75日。在其他实施方案中，持续时间段是施用期后至少28、35、42、48日或56日。在其他实施方案中，持续时间段是15日至75日、15日至35日或20日至35日。在其他实施方案中，持续时间段是20日至30日、25日至35日或25日至30日。在其他实施方案中，持续时间段是约25日、约26日、约27日、约28日、约29日或约30日，或者约28日或至少29日。在其他实施方案中，持续时间段是25日至75日、35日至75日或45日至75日。在其他实施方案中，持续时间段是50日至75日、50日至70日、50日至65日或50日至60日。在其他实施方案中，持续时间段是约50、约51、约52、约53、约54、约55、约56、约57、约58、约59日或约60日，而在其他实施方案中，持续时间段是约56日。

在一些实施方案中，前述方法有利地提供患者中降低的肺部疾病转剧发生率。该方法也有利地增加至肺部疾病转剧的时间长度。例如,在一些实施方案中，至肺部疾病转剧的时间长度至少约20日。在其他实施方案中，该时间长度是20日至100日。在其他实施方案中，该时间长度是25日至100日、30日至100日、35日至100日或40日至100日。在其他实施方案中，该时间长度是25日至75日、30日至75日、35日至75日或40日至75日。在其他实施方案中，该时间长度是30日至60日。

在一些实施方案中，救援治疗的发生率降低。在其他实施方案中，救援治疗的时间长度减少，例如当患者具有肺部感染时，抗感染救援治疗的时间减少。在一些实施方案中，该时间长度是20日至100日。在其他实施方案中，该时间长度是25日至100日、30日至100日、35日至100日或40日至100日。在其他实施方案中，该时间长度是25日至75日、30日至75日、35日至75日或40日至75日。在其他实施方案中，该时间长度是30日至60日。

在一些实施方案中，前述方法中所用的阿米卡星脂质体制剂包含阿米卡星和上述的任意脂质。在一些实施方案中，阿米卡星脂质体制剂包含磷脂和固醇，如DPPC和胆固醇。在其他实施方案中，阿米卡星脂质体制剂包含约2:1重量比的DPPC和胆固醇。在一些实施方案中，阿米卡星脂质体制剂具有按重量计算约0.5至约1.0、约0.5至约0.7或约0.6的脂质对药物比率。在其他实施方案中，阿米卡星脂质体制剂具有按重量计算约0.3至约1.0的脂质对药物比率，而在其他实施方案中，脂质对药物比率是按重量计算约0.5至0.7或约0.65。该制剂中的脂质体可以具有100至1000nm、100至500nm、200至500nm或约300nm的改良直径。在一些实施方案中，阿米卡星在阿米卡星脂质体制剂中的总浓度是约20至100mg/mL、20至90mg/mL、30至90mg/mL、30至80mg/mL或40至80mg/mL。在其他实施方案中，该浓度是约30、40、50、60、70、80或90mg/mL。

在一些实施方案中，前述方法包括：

施用有效剂量的雾化阿米卡星脂质体制剂至该患者至少一个治疗周期，其中：

治疗周期包括一个约28日的施用期，随后是一个约28日的停药期；

有效剂量包含在施用期期间日施用约280至约560mg的阿米卡星；

并且阿米卡星脂质体制剂包含约2:1比率的DPPC与胆固醇和约0.5至约0.7的脂质对阿米卡星比率。

在其他实施方案中，该方法包括：

治疗周期包括一个约28日的施用期，随后是一个约56日的停药期；

在其他实施方案中，本发明涉及在受试者中提供持久治疗效果的方法，包括：施用有效剂量的雾化阿米卡星脂质体制剂至该患者至少一个治疗周期，其中：该治疗周期包括一个15日至75日的施用期，随后是一个15日至75日的停药期；且有效剂量包含在施用期期间日施用100至2500mg的阿米卡星。

在另一个实施方案中，本发明涉及改善患有肺部疾病的患者中氧饱和度水平的方法，包括：施用有效剂量的雾化阿米卡星脂质体制剂至该患者至少一个治疗周期，其中：该治疗周期包括一个15日至75日的施用期，随后是一个15日至75日的停药期；且有效剂量包含在施用期期间日施用100至2500mg的阿米卡星。

在另一个实施方案中，本发明涉及改善患有肺部疾病的患者中FEV₁的方法，包括：施用有效剂量的雾化阿米卡星脂质体制剂至该患者至少一个治疗周期，其中：该治疗周期包括一个15日至75日的施用期，随后是一个15日至75日的停药期；且有效剂量包含在施用期期间日施用100至2500mg的阿米卡星。

在另一个实施方案中，本发明涉及降低患有细菌性肺部感染的患者的肺或痰中细菌密度的方法，包括：施用有效剂量的雾化阿米卡星脂质体制剂至该患者至少一个治疗周期，其中：该治疗周期包括一个15日至75日的施用期，随后是一个15日至75日的停药期；且有效剂量包含在施用期期间日施用100至2500mg的阿米卡星，并且其中细菌密度在施用的最末日后仍降低至少15日。

实施例

材料与方法的介绍

用于吸入的脂质基或脂质体氨基糖苷(如阿米卡星)制剂是封装在设计用于吸入施用的纳米级脂质体载体内部的持续释放的氨基糖苷类制剂。这些制剂的高浓度阿米卡星靶向地持续释放在肺和生物膜的渗入特性具有胜过吸入“游离”抗生素例如吸入型妥布霉素的几个优点。阿米卡星可以按约0.6-0.7:1(w/w)的靶向性脂质对药物比率封装于由二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)和胆固醇组成的脂质体中。下文提出在前述方法中有用的约70mg/mL阿米卡星脂质体制剂的实例：

组分	浓度
		阿米卡星¹	约70mg/mL
二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)	约30mg/mL
		胆固醇	约15mg/mL
1.5％NaCl	适量

¹作为硫酸阿米卡星添加至该制剂，USP(美国药典)。

这些制剂可以根据美国公开号20060073198或20080089927中所述的方法配制，这两份文献因而通过引用的方式并入作为参考。

这些制剂在治疗肺部病症(例如，患有因铜绿假单胞菌所致慢性感染的CF受试者)方面具有几个优点,包括：

1.能够通过实现高浓度和因持续释放所致的延长的半寿期而获得阿米卡星在肺中延长的抗生素效应。

2.能够将阿米卡星靶向肺中并且提高其有效浓度，其中该氨基糖苷具有低全身性水平。

3.由于脂质基或脂质体氨基糖苷的独特特性而更好靶向生物膜中生长的细菌的潜力。

4.在CF患者肺中的感染部位额外释放该药物，原因是从细菌分泌的磷脂酶C及鼠李糖脂和/或来自活化的多形核白细胞的磷脂酶A2或防御素的靶向作用。

5.阿米卡星是对氨基糖苷失活酶类具有独特抗性的半合成氨基糖苷。因此，一些耐受妥布霉素的铜绿假单胞菌菌株可能会仍对阿米卡星敏感。

6.阿米卡星比其他氨基糖苷类具有对巨蛋白(负责肾皮质氨基糖苷积聚的转运蛋白)更小的结合亲和力，并且因而固有地具有较低的肾毒性潜力。

7.脂质基或脂质体阿米卡星的半寿期和浓度曲线下面积(AUC)的增加连同生物膜渗入应当允许施用频率更少、杀菌活性增强和选择耐受生物的潜能降低。

临床前药物代谢动力学已经显示接受60mg/kg剂量阿米卡星脂质体气雾剂的大鼠的肺中阿米卡星的AUC(0-48小时)比通过吸入接受相等剂量妥布霉素的大鼠的肺中妥布霉素的AUC高5倍。对于大鼠，通常10％所施用的抗生素沉积在肺中。相反，在接受相等剂量妥布霉素的大鼠的肾中药物的AUC明显高于接受阿米卡星脂质体气雾剂的大鼠的肾脏AUC。另外，来自大鼠和犬中30日吸入毒理学研究的数据表明不存在伴随吸入型阿米卡星脂质体的安全性药学问题。

在假单胞菌感染的14日大鼠模型研究中，注意到每隔一日持续14日(Q2D x 7)施用的60mg/kg阿米卡星脂质体(75mg/mL)(这比其余组有效地递送一半累积剂量的氨基糖苷)与持续14日每日1次给予的60mg/kg阿米卡星脂质体和每日2次给予的妥布霉素一样有效。在该模型中28日给药的情况下，在接受每日以约60mg/kg给药或每隔一日以约120mg/kg给药的阿米卡星脂质体的动物中存在CFU的等同减少。以120mg/kg每日1次施用14日的阿米卡星脂质体与(一日两次施用)持续28日的妥布霉素60mg/kg/日一样有效，这表明阿米卡星脂质体以120mg/kg每日一次给药情况下更高的AUC并可能表明延长的抗生素后效应(见实施例3)。

动物模型中通过吸入施用阿米卡星脂质体导致高于细菌MIC的肺(AUC)增加，并表现出持久的治疗效果，与妥布霉素相比，给药的频率和持续时间减少。重要地，阿米卡星脂质体的临床前数据似乎支持以下假设：这种特定制剂可能优于其他吸入型产品，所述的其他吸入型产品受到从肺组织快速清除的困扰、从而必需频繁给药(Geller,Pitlick等人2002)，这给患者造成负担并可能限制患者的顺从性。

另外，临床经验表明：500mg每日一次持续14日施用的50mg/mL雾化阿米卡星脂质体被良好耐受，并且在CF患者中引起对肺功能的临床相关效果和铜绿假单胞菌密度的降低。另外，PK数据评价表明：甚至在500mg剂量上，阿米卡星脂质体的全身性暴露是很低的。就尿中回收的氨基糖苷的C_max或AUC或mg而言，与经吸入给予的阿米卡星脂质体相关的观察到的阿米卡星全身性暴露是用600mg/日TOBI所观察到的暴露的大约1/5至1/4，并且与阿米卡星的正常肠胃外给药相比小于1/200。该数据进一步表明在痰中实现高水平的阿米卡星。痰的中位数AUC值比第1日和第14日的血清中位数AUC值分别高290倍和980倍。

吸入型阿米卡星脂质体维持延长的定向肺暴露并且增强药物向感染部位的摄取。使用来自人临床1b/2a期研究的数据，在该研究中被铜绿假单胞菌慢性感染的CF患者接受多个剂量的阿米卡星脂质体50mg/ml，本文中所述分析的目标有三个：(1)使用群体药物代谢动力学(PK)建模来表征阿米卡星全身性暴露，包括近似的全身性生物利用度；(2)表征阿米卡星脂质体在痰中的分布；和3)表征相对于基线而言第7日和第14日的一秒钟用力呼气量(FEV₁)变化、预测的一秒钟用力呼气量百分数(预测的FEV₁％)、25％-75％用力肺活量之间的用力呼气流量(FEF_25-75％)及用力肺活量(FVC)的变化、铜绿假单胞菌菌落形成单位(CFU)的变化和阿米卡星暴露之间的药物代谢动力学-药物动力学(PK-PD)关系。

采用阿米卡星脂质体的临床前研究

用20和50mg/mL制剂实施几项临床前研究。在体外和体内模型中证实了阿米卡星脂质体的抗假单胞菌活性。另外，研究证实假单胞菌分泌的毒力因子促进阿米卡星从脂质体中进一步释放，并且表征了阿米卡星在大鼠和犬的肺中的沉积和持续释放。也确定了两个物种中30日施用阿米卡星脂质体的安全性。

非临床药物代谢动力学已经显示通过雾化作用接受60mg/kg剂量阿米卡星脂质体的大鼠的肺中阿米卡星的AUC(0-48小时)比通过吸入接受相等剂量妥布霉素的大鼠的肺中妥布霉素的AUC高5倍。肺中维持了高水平的阿米卡星(150小时内>250μg/mL)，表明有贮库效应。相反，在停止施用6小时内妥布霉素的肺水平是检测不到的。相反，药物在接受相等剂量妥布霉素的大鼠的肾中的AUC明显高于接受阿米卡星脂质体气雾剂的大鼠的AUC。所述动物的血清和尿中氨基糖苷的AUC不存在显著差异；血清水平在24小时后是检测不到的。这种曲线支持在施用雾化阿米卡星脂质体后阿米卡星在肺中预期的持续释放和贮库效应，这潜在地代表增强的功效曲线。阿米卡星脂质体的这些数据似乎支持以下假设：这种特定制剂可能优于其他吸入型产品，所述的其他吸入型产品受到从肺组织快速清除的困扰、从而必需频繁给药(Geller,Pitlick等人2002)并且给患者带来负担。另外，来自大鼠和犬中30日吸入GLP毒理学研究的毒物动力学数据显示，阿米卡星犬的肺沉积与游离阿米卡星治疗组相比存在15倍升高，具有可比较的血浆水平和尿水平，这表明伴随低全身性暴露的高肺浓度。

在假单胞菌慢性肺部感染的大鼠模型中体内评价阿米卡星脂质体的药物动力学效应(Cash,Woods等人1979)。在一个14日假单胞菌感染模型中，60mg/kg的阿米卡星脂质体(75mg/mL)每隔一日施用14日(Q2D x 7)。这个方案与60mg/kg的阿米卡星脂质体(每日一次给予14日)和妥布霉素(每日二次给予14日)一样有效。在给药延长至28日时，在接受每日以约60mg/kg给药或每隔一日以约120mg/kg给药的阿米卡星脂质体的动物中存在CFU的等同减少。还在这个实验中，以120mg/kg每日1次施用14日的阿米卡星脂质体与(一日两次施用)持续28日的妥布霉素60mg/kg/日一样有效。这显示在阿米卡星脂质体以120mg/kg每日一次给药情况下较高的AUC和延长的抗生素后效应。临床前药物动力学数据因而与因药物通过吸入向肺的部位特异性递送而增强的持久抗微生物益处一致。

因而，通过吸入施用阿米卡星脂质体导致高于细菌MIC几倍的增加的肺浓度(AUC)，具有提供持久治疗效果的潜力，同时给药的频率和持续时间减少，特别是与妥布霉素相比时。

实施例1

1b/2a期研究

从两项人临床1b/2a期研究获得用于这个群体PK分析的数据，在所述研究中铜绿假单胞菌慢性感染的CF患者每日施用总共500mg阿米卡星脂质体(2个20分钟时段，期间一个5分钟休息时间)持续14日。

给药前并且在第1日和第14日给药后1、2、4、6、8、12和24小时获得阿米卡星血清样品，同时在第1日和第14日以6小时间隔收集尿样品持续24小时时间。痰样品也在第1日和第14日在该剂量施用后旋即、给药后4小时与6小时之间和在次日剂量施用之前收集，以及在第14、21和28日收集痰样品。使用液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)分析血清、痰和尿样品的阿米卡星。

肺功能试验(PFT)在第-14日至第0日的筛选期间并且在基线(即，在第1日剂量施用之前)处和在第1、7、14、21、28、35和42日实施。用于微生物学的痰样品也在基线处和在这些日期的每一日收集。在第1日和第14日给药后1.5小时和3小时实施额外的PFT。

药物代谢动力学分析

使用蒙特卡罗参数期望最大化(MC-PEM)，通过候选PK模型拟合数据，如S-ADAPT 1.53中那样进行，最初拟合血浆浓度，随后对血清及尿数据混合建模(co-modeling)。模型判别(model discrimination)基于数据的拟合和目标函数的变化。使用来自终末群体PK模型的事后检验参数估计，计算血清阿米卡星值在稳定状态的24小时曲线下面积(AUC)。首先以图形方式，随后通过使用11(SYSTATSoftware,Inc.,Richmond,CA)所产生的统计模型评估患者人口统计学和个体事后检验参数之间的协变量关系。使用线性梯形法则获得第1日和第14日0至24小时的痰AUC值。

PK-PD分析的因变量包括在第7日和第14日相对于基线(在第1日剂量施用前)的FEV₁、预测的FEV₁％、FEF_25-75％和FVC的PFT值变化和在这些日期的每一日相对于基线的log₁₀CFU变化。评价的自变量包括血清和痰的24小时平均AUC与基线最小抑制浓度(MIC)的比率，即铜绿假单胞菌的AUC:MIC比率。通过取得第1日和第14日AUC值的平均值计算24小时血清和痰平均AUC。

使用单一样品t-检验，评估每个上述因变量距离基线的平均变化的统计显著性。使用Spearman秩相关(r_s)，评估每个因变量与血清和痰的AUC:MIC比率之间关系的方向和强度。也评估了每个PFT值距离基线的变化与log₁₀CFU距离基线的变化之间关系的方向和强度。

结果

总共24位患者完成这两项研究，13位患者来自研究1并且11位患者来自研究2。全部患者的中位数(最小，最大)年龄是23.7(14,38)岁，基线处的中位数(范围)肌酸酐清除率(CrCL)为126(76.8,173)mL/分钟/1.73m²。

使用双室模型(一个吸收部位，肺，和中央室)获得对血清浓度数据的最稳健拟合，该模型具有进入肺的零级药物输入、从肺至中央室的一级过程和线性消除。允许第1日和第14日之间表观总体清除率(CLt/F)和表观中央室分布容积(Vc/F)的周期间变异(inter-occasionalvariation)统计地改善目标函数。通过拟合收集间隔中所回收阿米卡星的量作为血清浓度和肾清除率(CLr)的函数对尿数据建模。表1是拟合的PK参数值的概要。

表1.具有周期间变异-参数估计和标准误差的用于吸入的阿米卡星脂质体的结构性群体药物代谢动力学模型

观察的血清浓度数据对贝叶斯事后检验个体拟合血清浓度数据的拟合优异性是出色的，总体r²是0.98。

在表2和表3中分别显示血清和痰数据的AUC值。痰中位数AUC值比第1日和第14日的血清中位数AUC值分别高286倍和978倍。如更高的CV％值所证明，与血清AUC值(在第1日51.9％和在第14日42.4％)相比，更大变异性在痰中是明显的(在第1日117％和在第14日91.2％)。

表2 血清AUC值¹的概要-全部患者

¹AUC值以mcg/mL·小时计

表3 痰AUC值¹的概要-全部患者

¹AUC值以mcg/mL·小时计

血清(r²＝0.98)浓度和尿(r²＝0.38)浓度分别良好地和适度地通过模型拟合。在第7、第14和第21日，观察到的FEF_25-75％变化分别是0.49(p<0.001)、0.42(p＝0.02)和0.34L/秒(p＝0.04)。在第7日和第14日，观察到的FEV₁变化分别是0.24(p＝0.002)和0.13L(p＝0.10)，并且预测的FEV₁％的变化分别是7.49(p<0.001)和4.38L/秒(p＝0.03)。确定了log₁₀CFU与血清AUC:MIC比率之间的显著关系(p≤0.05)，以及log₁₀CFU变化与FEV₁、预测的FEV₁％及FVC的变化之间的显著关系(p≤0.05)。

可获得全部24位患者的基线PFT数据和第14日PFT数据，并且对于第7和21日实施的PFT，可获得23位患者的此类数据。可获得全部24位患者的微生物学数据。由于没有报道研究2在第1日给药之前收集的MIC值，使用筛选MIC值以及CFU计数作为基线值。

使用单一样品t-检验，评估每个上述因变量距离基线的平均变化的统计显著性。使用Spearman秩相关(r_s)，评估每个因变量与血清和痰的AUC:MIC比率之间的关系的方向和强度。

PFT值在第7日相对于基线的平均变化对于全部PFT终点是统计显著的。预测的FEV₁％和FEF_25-75％在第14日相对于基线的平均变化也是统计显著的(分别是p＝0.029和p＝0.016)。在第21日，FEF_25-75％相对于基线的平均变化是仍保持统计显著的单一PFT(p＝0.036)。无论考虑的研究日期是哪一个，log₁₀CFU距离基线的平均变化不是统计显著的。

如表4中所显示，无论是否评价第7日或第14日的变化，PFT值距离基线的变化与痰或血清AUC:MIC比率之间的关联性均不是统计显著的。如表5中所显示，对于第7日或第14日，log₁₀CFU距离基线的变化与血清AUC:MIC比率之间的关联性是统计显著的。提高血清AUC:MIC比率与log₁₀CFU在第7日(r_s＝-0.46，p＝0.048)和第14日(r_s＝-0.45，p＝0.048)相对于基线的更大下降相关。

对于FEV₁、预测的FEV₁％和FVC，PFT值和log₁₀CFU在第7日和第14日相对于基线的变化之间的关联性是统计显著的(p<0.05)。

表4.肺功能试验值距离基线的变化与血清和痰的AUC:MIC比率之间的关系－全部患者

表5.log₁₀CFU变化与血清和痰的AUC:MIC比率之间的关系－全部患者

尽管在第7日和第14日铜绿假单胞菌log₁₀CFU距离基线的平均变化不是统计显著的，但是log₁₀CFU在这些时间点上距离基线的变化与血清AUC:MIC比率之间的关联性是统计显著的；血清AUC:MIC比率提高与log₁₀CFU的降低相关。相反，这种关系不支持痰AUC:MIC并且证实了阿米卡星脂质体的痰动力学的巨大变异性，这也用TOBI予以证明(Geller,Pitlick等人2002)。

log₁₀CFU变化与血清AUC:MIC比率之间和PFT值变化与log₁₀CFU之间的显著关系和用吸入型阿米卡星脂质体治疗2周期间铜绿假单胞菌的log₁₀CFU缺乏明显降低表明可能要求更高剂量以更可靠地在大的患者群体中有效。

1a/2b期研究总结

已经完成了两项使用阿米卡星脂质体50mg/mL的1b/2a期研究。这两项研究在设计上相似。总共24位CF患者(具有预测的FEV₁大于等于40％)每日接受500mg阿米卡星脂质体持续14日。使用PARI LC Star雾化器经过2个20分钟吸入时段伴以时段之间一个5分钟休息期的时间施用该药物。存在13位招入研究1的患者和11位招入研究2的患者。患者人口统计学是相似的，例外是基线处的假单胞菌MIC。在研究1中，平均MIC(μg/mL)是8(范围1.5-6)；并且在研究2中，平均MIC是41μg/mL(范围8-192)。招入研究2的患者早先使用过吸入型抗生素，并且按照协议，被允许在该研究的第28日后恢复用/Colistin治疗。研究1中的患者未使用过吸入型抗生素，并且在随访期期间不接受额外的吸入型抗生素。500mg剂量的阿米卡星脂质体(50mg/mL)被良好耐受并且在所选的患者中改善肺功能并降低痰中铜绿假单胞菌的密度。表6中显示研究1和研究2的患者人口统计学的细节(合并)。

表6.研究1和研究2中患者人口统计学

变量	均值	SD	中位数	最小值	最大值
						年龄	23.7	6.96	22.5	14.0	38.0
重量(kg)	59.1	13.0	58.6	43.4	99.6
						高度(cm)	168	8.10	168	155	194
IBW(kg)	61.4	8.99	60.0	47.9	87.7

CrCL(mL/分钟)

125

20.9

126

76.8

173

这些人临床1b/2a期研究中的全部功效分析在本质上均是探索性的。功效终点包括：

痰中铜绿假单胞菌的密度(log₁₀CFU/g)距离基线的变化；

肺功能试验距离基线的变化(FEV₁、预测的FEV₁％、FVC和FEF_(25-75％))。

确定在第14日铜绿假单胞菌痰密度、FEV₁和预测的FEV₁％的改变作为首要功效终点。

开展痰样品的定量培养和对每一种形态学不同的铜绿假单胞菌的后续阿米卡星易感性测试。记录筛查时和第14日从每位受试者培养出的具有最高MIC的分离株的阿米卡星MIC。将痰中铜绿假单胞菌的密度(每克痰的CFU)计算为全部形态类型总数的log₁₀值。

表7中显示合并群体(n＝24)的基线特征概要。

表7.研究1和研究2中患者的基线量值

研究1：在该研究中，招入对阿米卡星敏感的铜绿假单胞菌分离株(阿米卡星MIC<64μg/mL)感染的CF患者和未使用过吸入型抗生素的那些受试者。阿米卡星脂质体500mg每日一次持续2周的施用显示铜绿假单胞菌总计数对数值从基线至第14日的平均变化为1.09(n＝13；95％置信区间,2.09至0.09)。在13位受试者中的9位受试者观察到计数降低。用阿米卡星脂质体治疗未导致铜绿假单胞菌耐药菌株的选择。平均铜绿假单胞菌阿米卡星MIC在第0日是8.04μg/mL并且在第14日是30.79μg/mL。在第14日,一位受试者中的单个分离株具有不敏感性MIC(>256μg/mL)；全部其他第14日分离株均对阿米卡星敏感。无人住院治疗或接受静脉内抗假单胞菌抗生素。此外，存在如FEV₁从基线至第14日提高+260mL所度量的肺功能改善(n＝13；95％置信区间，+30mL至+500mL)。预测的FEV₁％从基线至第14日的相应变化是+7.32％。在13位受试者中的9位受试者观察到FEV₁提高。还注意到FEF_(25-75％)(均值：570mL)和FVC(均值：180mL)的提高。

研究2：研究2在被铜绿假单胞菌感染并且使用过吸入抗生素治疗的CF患者群体中进行。在这些患者中，阿米卡星脂质体500mg每日一次持续2周的施用在该研究期间未显出铜绿假单胞菌密度的任何显著变化(对于从第1日的变化，p值≥0.297)。具有黏液型铜绿假单胞菌的患者的比例在该研究期间一直保持恒定。在施用阿米卡星脂质体500mg后没有观察到FEV₁、预测的FEV₁％、FVC和FEF_(25-75％)的统计显著变化。然而，在第7日、第14日(治疗结束)和第15日观察到显示预测的FEV₁％、FVC和FEF_(25-75％)改善的趋势。

综合功效概要：研究1和研究2

下文在表8、9、10和11中总结来自研究1和研究2中24位患者合并群体的数据。铜绿假单胞菌log CFU变化的微生物学终点显示该合并群体中细菌密度降低，但是这没有达到统计显著性。但是，当分析来自未使用过吸入型抗生素的患者(研究1)的数据时，在治疗结束时观察到CFU的统计显著性降低。可能解释这种效应的因素是痰样品中的固有变异性、方法学与定量微生物学报道方式的实验室间变异性和研究2中具有较高MIC(包括耐药分离株)的患者的招入。全部上述因素进一步因每项研究的小样本容量复杂化。

通过肺功能试验的测量对临床益处的评估显示肺功能的统计显著性改善，如FEV₁从基线至第7日提高+240mL所度量(n＝23；p值0.0024)。在第14日的效果是FEV₁距离基线提高126mL，这不是统计显著的。预测的FEV₁％从基线至第7日的相应统计显著性提高是+7.49％(n＝24；p值0.0002)，并且在第14日是+4.37％(n＝24；p值0.0285)。在采用小气道评估的情况下，也注意到肺功能的改善，如FEF_(25-75％)在第7日提高+494mL(n＝23；p值0.001)和在第14日提高+423mL(n＝24；p值0.0162)所度量。这些数据支持患有慢性假单胞菌感染的CF患者中临床上有意义的肺功能改善，其中所述的CF患者已经接受一个14日阿米卡星脂质体疗程。

表8 全部患者中FEV₁在多个时间距离基线的变化

时间点	人数	均值	变异系数	p值
					第7日(给药前)	23	0.24	1.4	0.0024
第14日(给药前)	24	0.126	2.86	0.1006
					第21日	23	0.073	4.91	0.3397

表9 全部患者中预测的FEV₁％在多个时间距离基线的变化

时间点	人数	均值	变异系数	p值
					第7日(给药前)	23	7.491	1.09	0.0002
第14日(给药前)	24	4.379	2.10	0.0285
					第21日	23	2.713	3.25	0.1544

表10 全部患者中FEF_25-75在多个时间距离基线的变化

时间点	人数	均值	变异系数	p值
					第7日(给药前)	23	0.494	1.26	0.001
第14日(给药前)	24	0.423	1.89	0.0162
					第21日	23	0.338	2.15	0.0361

表11 全部患者中CFU在多个时间距离基线的变化

时间点

人数

均值

变异系数

p值

第7日	19	-0.154	-7.37	0.5616
					第14日	20	-0.315	-4.42	0.3242
第21日	20	0.24	5.4	0.4182

实施例2

1期临床研究

分别用20mg/mL和50mg/mL阿米卡星脂质体制剂在健康志愿者和在CF患者完成两项1期单剂量临床研究。6位健康志愿者接受单个剂量的120mg阿米卡星脂质体并良好地耐受之，并显示放射标记的脂质体在肺中延长的停留，测量的半寿期是46小时。

将阿米卡星脂质体施用至一项人临床I期研究(研究3)中患有慢性铜绿假单胞菌感染的CF受试者。将90mg(n＝6)、270mg(n＝6)或500mg(n＝4)单个剂量施用至CF受试者以评价用于吸入的阿米卡星脂质体的安全性、耐受性和药物代谢动力学。评价了总共24个借助Pari LCStar雾化器通过吸入而施用单个剂量阿米卡星脂质体或安慰剂的患者给药时间。报道了两例严重不良事件(二者均出现在安慰剂组中)。这两个事件均恢复而无后遗症。在该试验期间给药的24个患者时间中17个患者时间(71％)经历总共41例不良事件(AE)。就报告的AE而言，报告不良事件的16位患者中有10位患者(62.5％)在治疗组并且8位患者中有7位(87.5％)在安慰剂组。头疼是治疗组中报告的最常见AE并且没有患者因AE而中断该研究。通过吸入施用的单个剂量500mg阿米卡星脂质体是良好耐受的并且安全的。

另外，PK数据确认了药物的最小全身性药物水平和高痰水平，并且药物动力学建模估算了可能因自脂质体缓慢释放所致的长消除半寿期。

实施例3

2期临床研究

在图4中概述了研究设计。该研究中包括的患者是年龄大于或等于6岁的患有慢性铜绿假单胞菌感染的CF患者。患者在开始本研究之前28日停用吸入型抗生素。患者根据基线FEV₁(预测的％)划分层次并且按2:1对Arikace^TM或安慰剂(1.5％NaCl)随机化分配。组1采用雾化器通过吸入接受280mg有效药物并且组2按此方式接受560mg有效药物或接受安慰剂28日，并且随后是无吸入型抗生素施用的28日持续期。在56日研究期期间每周评价安全性、药物代谢动力学、Pa痰密度、生活质量(CFQ-R)和疾病转剧率。

概而言之，每日施用280mg和560mg阿米卡星脂质体持续28日显得是安全和良好耐受的。阿米卡星脂质体以280mg和560mg施用28日导致肺功能的剂量依赖性改善，这在给药完成后至少持续28日。接受阿米卡星脂质体的患者与接受安慰剂的那些患者(18.18％)相比体验了更少的肺部疾病转剧(7.14％)。另外，与安慰剂(19日)相比，至疾病转剧的时间在阿米卡星组中延长(41日)。接受阿米卡星的组在28日治疗期期间未体验肺部疾病转剧。与安慰剂组相比，接受阿米卡星脂质体的患者表现更大临床益处，如CFQR-呼吸量表生活质量改善所度量。

图5和图6描述了显示与安慰剂相比在儿科患者(年龄6至12岁)中氧饱和度距离基线的变化的曲线图。该结果显示在28日治疗期期间开始并持续超出该治疗期的氧饱和度改善。在大于12岁的患者中也观察到氧饱和度的相似改善。

图7a和图7b分别描述了按照年龄分组的情况下，如安慰剂组和阿米卡星组中用力呼气量(FEV₁)所度量的肺功能变化。安慰剂组中的患者显示FEV₁第56日总体降低，而接受阿米卡星脂质体的患者在治疗期间和治疗后直至28日一致地表现出FEV₁的提高。安慰剂组具有以下的肺功能值变化(以mL度量)：

表12：安慰剂组中FEV₁的变化

年龄

第7日

第14日

第21日

第28日

第35日

第56日

6-12	-79	-88(117)	26	0(61)	-6	-4
							13-18	87	2(80)	25	26(149)	25	-65
18+	102	-22(150)	46	36(135)	-24	-56

阿米卡星组具有以下的肺功能值变化(mL)：

表13：阿米卡星脂质体治疗组中FEV₁的变化

年龄	第7日	第14日	第21日	第28日	第35日	第56日
							6-12	173	232(117)	138	154(165)	110	178
13-18	136	133(157)	143	158(153)	79	44
							18+	103	94(107)	68	46(95)	29	55

图8中描述了560mg组、280mg组和安慰剂组中全部患者FEV₁(以mL度量)距离基线的变化的比较结果。数据再次显示接受阿米卡星脂质体的患者中持续长达56日的持久作用，其中与280mg组相比，该作用在560mg组中甚至更明显。图9代表作为百分数的距离基线的变化。FEV₁在560mg组中显著地提高，在第56日与安慰剂相比具有224mL(17.6％)升高的持久治疗效果。

来自该研究的数据也显示，与安慰剂相比CFU在接受阿米卡星脂质体的患者中显著降低，并且这种降低至少持续至第35日。与280mg组相比，CFU降低对于接受560mg阿米卡星的组更明显，如图10中所见。图11描述了黏液型菌株的Log CFU变化。这些结果表明，与安慰剂相比，接受阿米卡星脂质体的组中铜绿假单胞菌密度降低，如logCFU所度量，并且这种效果至少持续至该研究的第35日。带有铜绿假单胞菌黏液型菌株的患者也对用阿米卡星脂质体治疗敏感。在280mg组中看到1.2log CFU降低，并且在560mg组中看到2.0log CFU降低。在560mg组第35日以1.8log CFU下降持续这种降低，而在280mg组中以0.4log CFU下降持续这种降低。

药物代谢动力学数据揭示了接受阿米卡星脂质体的患者的痰中高水平的阿米卡星，平均C_max(CV)为3496(0.973)mcg/g。平均曲线下面积(AUC)值对于280mg组是13,120(1.63)mcg/g*小时，而平均AUC对于560mg组是22,445(0.831)mcg/g*小时。另一方面，血清药物代谢动力学数据表明低的阿米卡星全身性暴露，C_max均值(SD)是2.27(1.58)mcg/mL。

接受阿米卡星脂质体的患者也具有减少的肺部疾病转剧频率和时间。见表14。

表14：肺部疾病转剧

*在治疗期间无疾病转剧

如表14中所见，与安慰剂组相比，用阿米卡星脂质体(包括280mg组和560mg组)治疗的患者中疾病转剧的百分数更低。另外，与安慰剂组中的19.3日相比，接受阿米卡星脂质体的患者中至疾病转剧的时间(40.6日)长得多。

与安慰剂组相比，接受吸入型阿米卡星脂质体的患者中抗假单胞菌救援治疗也减少，如表15中所见。

表15：抗假单胞菌救援治疗

*在治疗期间无救援

如表15中所见，与安慰剂组相比，接受吸入型阿米卡星脂质体的患者中较低百分数的患者需要抗假单胞菌救援治疗。另外，与安慰剂组(21.3日)相比，需要救援治疗之前的时间在接受阿米卡星脂质体的患者中减少(43.0日)。

实施例4

阿米卡星脂质体的雾化

表16中显示从eFlow 40L产生的阿米卡星脂质体的气溶胶特性。与从LC Star产生的喷雾剂相比时，eFlow的质量中位数空气动力学直径(MMAD)值是约0.5μm更大。图1中显示了来自雾化阿米卡星脂质体的ACI(用eFlow)和NGI(用LC Star)阶式冲击器(cascade impactor)的实际尺寸依赖性质量分布。来自eFlow/ACI测量方法的气溶胶在大小分布上略微窄于来自LC Star/NGI的气溶胶。这种差异反应在较低的平均几何标准差(GSD)(1.66对1.99)上，其中该平均几何标准差是MMAD周围该分布的宽度的度量，见表16中的值。这种较窄分布弥补了较大MMAD的任何潜在影响，并且因此，在可吸入范围(小于5μm小滴大小)内的雾化药物的量对于eFlow和LC Star是可比较的。

表16.用eFlow和LC Star雾化器雾化的阿米卡星脂质体的特性

Andersen阶式冲击器以流速28.3L/分钟，18℃和50％湿度使用。NGI冲击器以流速15L/分钟和5℃使用以实现大于60％湿度。*直径小于5μm的所命名的药物剂量的百分质量数。

实施例5

阿米卡星脂质体对大鼠中铜绿假单胞菌肺部感染的效果

使用慢性肺部感染模型(Cash,Woods等人1979)研究了吸入型阿米卡星脂质体(阿米卡星脂质体)的功效，在该模型中将嵌入琼脂糖珠基质中的铜绿假单胞菌滴注于大鼠的气管中。开发这种黏液型假单胞菌的动物模型以模仿CF患者中见到的慢性假单胞菌感染(Cantin和Woods 1999)。大鼠肺用最初分离自一位CF患者的10⁴CFU的黏液型铜绿假单胞菌菌株(黏液型菌株3064)接种。三日后，通过每日一次持续14个剂量(Q1D x 14)吸入施用60mg/kg阿米卡星脂质体(75mg/mL)或每隔一日持续7个剂量(Q2D x 7)(每个剂量6mg/kg)。为了比较，通过每日两次持续14日(每个剂量30mg/kg，每日总共60mg/kg)吸入施用妥布霉素。与盐水对照相比，在全部三个治疗组中存在细菌密度的显著降低(见图2)。在大鼠的三个治疗组之间不存在log₁₀CFU/肺的降低的显著性差异。应当指出每隔一日(Q2D x 7)施用14日的阿米卡星脂质体(75mg/mL)与该模型中每日给药方案一样有效，其中所述的施用有效地递送一半累积剂量的氨基糖苷。

如图3所示，在该模型中当给药延长至28日时，在接受以约60mg/kg每日给药或以约120mg/kg每隔一日给药的阿米卡星脂质体的动物中存在CFU的等同减少。但是，与按照相同时间表接受1.5％盐水的动物相比时，仅观察到后一组是统计显著的(分别地是p＝0.24和0.03)。在这两种情况下，盐水对照组中均存在相当大数目的同样经历2log CFU降低的动物。更长持续时间(14日后)的盐水吸入治疗似乎增强了大鼠清除肺部感染和推测可能维持慢性感染病状的琼脂珠的自发性能力。将每日接受阿米卡星脂质体约120mg/kg持续14日的大鼠又观察另一个14日并在第35日使其安乐死。这些动物的肺具有低于检测限的细菌，如每日接受妥布霉素60mg/kg(每日给予2次)持续28日并随后安乐死的组中的情况那样。数据显示，在这个实验中，以120mg/kg每日1次施用14日的阿米卡星脂质体与(一日两次施用)持续28日的妥布霉素60mg/kg/日一样有效。这个结果表明采用120mg/kg阿米卡星脂质体时较高的AUC并且可能地显示延长的抗生素后效应。

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引用并入作为参考

本文中所援引的全部美国专利和公布的美国专利申请因而通过引用的方式并入作为参考。

等同物

利用不超出常规的实验，本领域普通技术人员会认识到或者能够确定本文中所述的本发明具体实施方案的众多等同物。此类等同物涵盖在以下权利要求书中。

Claims

1.治疗患者中肺病的方法，包括施用有效剂量的雾化阿米卡星脂质体制剂至该患者至少一个治疗周期，其中：

2.权利要求1所述的方法，其中遵循治疗周期至少两次。

3.权利要求1所述的方法，其中施用期是15日至35日。

4.权利要求1所述的方法，其中施用期是20日至35日。

5.权利要求1所述的方法，其中施用期是约28日。

6.权利要求1所述的方法，其中停药期是15日至35日。

7.权利要求1所述的方法，其中停药期是20日至35日。

8.权利要求1所述的方法，其中停药期是约28日。

9.权利要求1所述的方法，其中停药期是25日至75日。

10.权利要求1所述的方法，其中停药期是35日至75日。

11.权利要求1所述的方法，其中停药期是45日至75日。

12.权利要求1所述的方法，其中停药期是约56日。

13.权利要求1所述的方法，其中施用期是约28日并且停药期是约28日。

14.权利要求1所述的方法，其中施用期是约28日并且停药期是约56日。

15.权利要求1所述的方法，其中有效剂量包含250至1500mg阿米卡星。

16.权利要求1所述的方法，其中有效剂量是250至1000mg阿米卡星。

17.权利要求1所述的方法，其中有效剂量是约280至约560mg阿米卡星。

18.权利要求1所述的方法，其中有效剂量是约230至约330mg阿米卡星。

19.权利要求1所述的方法，其中有效剂量是约510至约610mg阿米卡星。

20.权利要求1所述的方法，其中有效剂量是约280或约560mg阿米卡星。

21.权利要求1所述的方法，其中有效剂量是约280或约560mg阿米卡星。

22.权利要求1所述的方法，其中有效剂量是约280或约560mg阿米卡星。

23.权利要求1所述的方法，其中肺病选自由慢性阻塞性肺病、支气管扩张、肺部感染、囊性纤维化、α-1-抗胰蛋白酶缺乏、和它们的组合组成的组。

24.权利要求23所述的方法，其中肺病是细菌性肺部感染。

25.权利要求24所述的方法，其中肺部感染是铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)感染。

26.权利要求23所述的方法，其中肺病是支气管扩张。

27.权利要求1所述的方法，其中患者在施用期期间具有小于约10mcg/mL的阿米卡星血清C_max。

28.权利要求1所述的方法，其中患者具有每克痰至少1000mcg的阿米卡星痰C_max。

29.权利要求24所述的方法，其中阿米卡星痰C_max在施用期间是每克痰至少1000mcg。

30.权利要求24所述的方法，其中阿米卡星痰C_max是施用后每克痰至少1000mcg持续至少15日。

31.权利要求24所述的方法,其中患者在施用期结束后具有肺中细菌感染的log₁₀CFU降低至少0.5，该降低持续至少15日。

32.权利要求31所述的方法,其中log₁₀CFU的降低是至少1.0。

33.权利要求1所述的方法，其中患者在施用期结束后体验到肺功能改善至少15日。

34.权利要求33所述的方法，其中改善包括FEV₁提高、血氧饱和度提高或二者均提高。

35.权利要求34所述的方法，其中患者具有相对治疗周期之前的FEV₁提高了至少5％的FEV₁。

36.权利要求34所述的方法，其中FEV₁提高约5％至约50％。

37.权利要求34所述的方法，其中FEV₁相对治疗周期之前的FEV₁提高了约25至约500mL。

38.权利要求34所述的方法，其中血氧饱和度相对治疗周期之前的血氧饱和度提高了至少1％。

39.权利要求1所述的方法，其中患者中至肺部疾病转剧的时间是约20日或更长。

40.权利要求1所述的方法，其中至救援治疗的时间是约20日或更长。

41.权利要求1所述的方法，其中阿米卡星脂质体制剂包含脂质和阿米卡星并且脂质对阿米卡星具有约0.3至约1.0的重量比。

42.权利要求41所述的方法，其中脂质对阿米卡星的比率是按重量计算约0.5至约0.7。

43.权利要求41所述的方法，其中脂质对阿米卡星的比率是按重量计算约0.6。

44.权利要求1所述的方法，其中所述阿米卡星脂质体制剂包含脂质，所述脂质选自由卵磷脂酰胆碱(EPC)、卵磷脂酰甘油(EPG)、卵磷脂酰肌醇(EPI)、卵磷脂酰丝氨酸(EPS)、磷脂酰乙醇胺(EPE)、磷脂酸(EPA)、大豆磷脂酰胆碱(SPC)、大豆磷脂酰甘油(SPG)、大豆磷脂酰丝氨酸(SPS)、大豆磷脂酰肌醇(SPI)、大豆磷脂酰乙醇胺(SPE)、大豆磷脂酸(SPA)、氢化卵磷脂酰胆碱(HEPC)、氢化卵磷脂酰甘油(HEPG)、氢化卵磷脂酰肌醇(HEPI)、氢化卵磷脂酰丝氨酸(HEPS)、氢化磷脂酰乙醇胺(HEPE)、氢化磷脂酸(HEPA)、氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)、氢化大豆磷脂酰甘油(HSPG)、氢化大豆磷脂酰丝氨酸(HSPS)、氢化大豆磷脂酰肌醇(HSPI)、氢化大豆磷脂酰乙醇胺(HSPE)、氢化大豆磷脂酸(HSPA)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、棕榈酰硬脂酰磷脂酰胆碱(PSPC)、棕榈酰硬脂酰磷脂酰甘油(PSPG)、单油酰磷脂酰乙醇胺(MOPE)、胆固醇、麦角甾醇、羊毛甾醇、生育酚、脂肪酸的铵盐、磷脂的铵盐、甘油酯的铵盐、肉豆蔻胺、棕榈胺、月桂胺、硬脂胺、二月桂酰乙基磷酸胆碱(DLEP)、二肉豆蔻酰乙基磷酸胆碱(DMEP)、二棕榈酰乙基磷酸胆碱(DPEP)和二硬脂酰乙基磷酸胆碱(DSEP)、N-(2,3-二-(9-(Z)-十八烯氧基)-丙-1-基-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、1,2-双(油酰氧基)-3-(三甲氨基)丙烷(DOTAP)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酸(PA)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)、二棕榈酰磷脂酸(DPPA)、二硬脂酰磷脂酸(DSPA)、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇(DMPI)、二棕榈酰磷脂酰肌醇(DPPI)、二硬脂酰磷脂酰肌醇(DSPI)、二肉豆蔻酰磷脂酰丝氨酸(DMPS)、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(DPPS)、二硬脂酰磷脂酰丝氨酸(DSPS)、和它们的混合物组成的组。

45.权利要求44所述的方法，其中阿米卡星脂质体制剂包含磷脂和固醇。

46.权利要求45所述的方法，其中阿米卡星脂质体制剂包含DPPC和胆固醇。

47.权利要求46所述的方法，其中阿米卡星脂质体制剂包含约2:1重量比的DPPC和胆固醇。

48.权利要求47所述的方法，其中阿米卡星脂质体制剂具有按重量计算约0.3至约1.0的脂质对药物比率。

49.权利要求48所述的方法，其中脂质对药物的比率是按重量计算约0.5至约0.7。

50.权利要求48所述的方法，其中脂质对药物的比率是按重量计算约0.6。