DE1214438B

DE1214438B - Process, device and diagnostic means for the detection of yellow body metabolism products

Info

Publication number: DE1214438B
Application number: DEW15303A
Authority: DE
Inventors: Werner Wild
Original assignee: FAIAG AG fur FORSCHUNG und IN
Current assignee: FAIAG AG fur FORSCHUNG und IN
Priority date: 1954-11-13
Filing date: 1954-11-13
Publication date: 1966-04-14
Also published as: NL109082C

Description

Verfahren, Einrichtung und Diagnosemittel zum Nachweis von Gelbkörperstoffwechselprodukten Die Erfindung betrifft ein Verfahren, Einrichtungen und Diagnosemittel zum Nachweis von Gelbkörperstoffwechselprodukten in von der Frau ausgeschiedenen Körperflüssigkeiten zum Zweck, die empfängnisfreien Tage der Frau zu bestimmen.Process, device and diagnostic means for the detection of corpus luteum metabolites The invention relates to a method, devices and diagnostic means for detection of luteal metabolites in body fluids excreted by women for the purpose of determining the woman's fertility-free days.

Die bekannten Verfahren zum Nachweis von Gelbkörperstoffwechselprodukten konnten bisher deshalb nicht zur Bestimmung der empfängnisfreien Tage der Frau herangezogen werden, da in den von der Frau ausgeschiedenen Körperflüssigkeiten stets gewisse Mengen dieser Stoffwechselprodukte vorhanden sind und hierauf gerichtete Nachweisreaktionen für den angegebenen Zweck als zu unzuverlässig erachtet wurden. The known methods for the detection of luteal metabolites could therefore not previously be used to determine the woman's fertility-free days because in the body fluids excreted by the woman there are always certain Quantities of these metabolic products are present and detection reactions aimed at them were deemed too unreliable for the stated purpose.

Die Erfindung geht von der Aufgabe aus, der geschilderten Schwierigkeit abzuhelfen und ein Nachweisverfahren für Gelbkörperstoffwechselprodukte vorzuschlagen, welches eine zuverlässige Bestimmung der empfängnisfreien Tage der Frau ermöglicht. The invention is based on the object, the difficulty outlined to remedy this and to propose a method of detection for corpus luteum metabolites, which allows a reliable determination of the woman's fertility-free days.

Die Aufgabe wird gemäß der Erfindung dadurch gelöst, daß mindestens ein in der Körperflüssigkeft keit vorkommendes Gelbkörperstoffwechselprodukt durch mit einer Farbänderung verbundene Reaktionen bestimmt wird und daß dabei Maßnahmen getroffen werden, um nur bei Anwesenheit solcher Mengen des Stoffwechselproduktes die Farbänderung festzustellen, die einem leistungsfähigen Gelbkörper entstammen. The object is achieved according to the invention in that at least a luteal metabolite that occurs in the body fluid reactions associated with a color change are determined and that measures are taken be taken to only in the presence of such quantities of the metabolic product determine the color change that comes from a powerful corpus luteum.

Eine bevorzugt zur Durchführung des erfindungsgemäßen Nachweisverfahrens verwendete Einrichtung zeichnet sich dadurch aus, daß unten an einen die zu prüfende Körperflüssigkeit enthaltenden Behälter ein Auslaufrohr lösbar angesetzt ist, das eine feine Austrittsöffnung für die zu prüfende Körperflüssigkeit aufweist, und daß lotrecht unter der Austrittsöffnung ein rohrförmiger Behälter vorgesehen ist, der eine Lösungsmittelsäule enthält und an seinem unteren Ende mit einem Überlaufrohr in Verbindung steht, und daß schließlich die freie Öffnung des Überlaufes so weit unter dem Niveau der freien Austrittsöffnung liegt, daß der aus der feinen Öffnung austretende Flüssigkeitsstrahl die Oberseite der Lösungsmittelsäule in Form einer Folge von Flüssigkeitstropfen erreicht. One preferred for carrying out the detection method according to the invention The device used is characterized by the fact that the one to be tested is attached to the bottom Body fluid containing container an outlet pipe is detachably attached, the has a fine outlet opening for the body fluid to be tested, and that a tubular container is provided perpendicularly under the outlet opening, which contains a solvent column and at its lower end with an overflow pipe is connected, and that finally the free opening of the overflow so far is below the level of the free outlet opening that that from the fine opening exiting liquid jet hits the top of the solvent column in the form of a Sequence of drops of liquid reached.

Ein Diagnosemittel zur Durchführung des Verfahrens gemäß der Erfindung ist dadurch gekennzeichnet, daß es in einem Totalvolumen von höchstens 60 ccm mindestens zwei Stoffgemische enthält, von denen das eine im Kontakt mit mindestens einem in einer Körperflüssigkeit der Frau vorkommenden Gelbkörperstoffwechselprodukt zu einer Farbän- derung führt, während das andere geeignet ist, die Farbänderung derart zu hemmen, daß nur solche Mengen des Stoffwechselprodukfes erkennbar sind, die einem leistungsfähigen Gelbkörper entstammen. A diagnostic means for carrying out the method according to the invention is characterized in that it has a total volume of at most 60 ccm at least contains two mixtures of substances, one of which is in contact with at least one in a corpus luteum metabolite occurring in a woman's body fluid to a Color change change leads, while the other is suitable, the color change in such a way inhibit that only such quantities of the metabolic product are recognizable that one powerful corpuscles originate from.

Als Kriterium bei der Bestimmung der empfängnisfreien Zeit bei der Frau galt bisher der Ovulationstermin. Dementsprechend sind alle bisher bekannten Methoden zur Bestimmung der empfängnisfreien Zeit auf eine möglichst genaue Ermittlung der Ovulation als solche gerichtet. Nach neuesten Erkenntnissen des Erfinders ist jedoch die Ovulation in bezug auf die empfängnisfreie Zeit bedeutungslos, weil die einer Ovulation im allgemeinen folgende biologische Sterilität der Frau nicht eine Folge der Ovulaton ist, sondern eine solche des sich im geplatzten Graafschen Follikel bildenden Corpus luteum. Aus diesem Grunde wird erfindungsgemäß bei der Bestimmung der empfängnisfreien Zeit nicht die Ovulation, sondern die Funktionstüchtigkeit des Corpus luteum ermittelt. As a criterion in determining the fertile period at the The ovulation date was previously applied to women. Accordingly, all are known so far Methods for determining the fertile period to be as accurate as possible directed towards ovulation as such. According to the inventor's latest findings however, ovulation is meaningless in relation to the time of pregnancy because the female biological sterility generally following ovulation does not result Consequence of the ovulation is, but one of the ruptured Graaf's follicle forming corpus luteum. For this reason, according to the invention, when determining During the non-pregnancy period, it is not ovulation, but functionality of the corpus luteum.

Der Gelbkörper erzeugt bekanntlich Progesteron, welches im Ablauf des mensuellen Zyklus der Frau die folgenden wichtigen Funktionen ausübt: 1. hemmt es die weitere Eireifung auf den Ovarien; 2. lähmt es die Gebärmuttermuskulatur als Schutz für das 3. unter seinem Einfluß sich in den sekretorischen Zustand umwandelnde und »aufwuchernde« Endometrium, und 4. erhöht es als weitere Schutzfunktion für das Endometrium die Viskosität des Zervikalschleimpfropfs in der Cervix. The corpus luteum is known to produce progesterone, which is in the process of the human menstrual cycle performs the following important functions: 1. Inhibits it further egg maturation on the ovaries; 2. It paralyzes the uterine muscles as a protection for the 3rd under its influence transforming itself into the secretory state and "proliferating" endometrium, and 4. it increases as a further protective function for the endometrium is the viscosity of the cervical plug in the cervix.

Diese vier Genitalfunktionen sind aber nur gewährleistet, wenn die Plogesteronpróduktion des Gelbkörpers ein genügend hohes Maß erreicht. These four genital functions are only guaranteed if the Plogesteronpróduktion the corpus luteum reaches a sufficiently high level.

Bei ungenügender Progesteronproduktion bzw. einem nicht voll funktionstüchtigen Corpus luteum (was mit oder ohne äußere Einflüsse der Fall sein kann, wie z. B. Kuren, Klimawechsel, Krankheiten usw.) ist als erstes die Hemmung der Eireifung auf den Ovarien nicht immer gewährleistet. Es bildet sich dann innerhalb der nächsten 8 bis 10 Tage ein zweiter sprungreifer Follikel im gleichen Menstruationszyklus heran, der unmittelbar vor der üblicherweise folgenden Regelblutung beim normalen Rückgang der an sich schon zu geringen Progesteronmenge platzt. Es ergibt sich eine prämenstruelle Sekundärovulation, die in der sogenannten »empfängnisfreien« Zeit zur Empfängnis führen kann. Der bei der Sekundarovulation entstehende zweite Gelbkörper verhindert das Eintreten der zu diesem Zeitpunkt üblichen Menstruation und verschiebt diese bis zu seiner Degeneration um 12 bis 14 Tage, sofern die Sekundärovulation nicht zur Befruchtung geführt hat Selbstverständlich kann sich die prämenstruelle Sekundärovulation auch bei einem voll funktionstüchtigen Corpus luteum ereignen; eine Befruchtung ist dann aber nicht möglich, weil bei genügend hoher Progesteronproduktion die Gebärmuttermucosa sich in aufgewuchertem Zustand und der .Zervikalschleim sich in erhöhter Viskosität befinden, so daß. diese beiden natürlichen Barrieren den eindringenden Spermatozoen den Eintritt und Durchgang durch die Gebärmutter und infolgedessen das Atfsteigézi bis zu den Ovarien verwehren. In the case of insufficient progesterone production or one that is not fully functional Corpus luteum (which can be the case with or without external influences, such as Cures, climatic changes, illnesses, etc.) is first of all the inhibition of egg maturation not always guaranteed on the ovaries. It then forms within the next 8 to 10 days a second follicle ready for cracking in the same menstrual cycle that immediately before the usual menstrual period in normal Decline in the amount of progesterone, which is already too low, bursts. There is one premenstrual secondary rovulation, which takes place during the so-called "conception-free" period can lead to conception. The second corpus luteum that occurs during the secondary development prevents the occurrence of menstruation, which is usual at this time, and postpones this up to its degeneration by 12 to 14 days, provided the secondary rovulation Did not lead to fertilization Of course, premenstrual Secondary rovulation can occur even with a fully functional corpus luteum; fertilization is then not possible because with a sufficiently high progesterone production the uterine mucosa is in an overgrown state and the cervical mucosa are in increased viscosity, so that. these two natural barriers denote invading spermatozoa prevent entry and passage through the uterus and consequently deny the atfsteigézi down to the ovaries.

Diese Zusammenhänge konnten experimentell unter praktischer Erprobung durch eine größere Anzahl Ehepaare festgestellt werden. Es ergaben sich dabei prämenstruelle Sekundårovulationen sowohl bei ungenügender als auch genügender Gelbkörperaktivität. Dabei stellten sich aber nur im ersten Fall Schwangerschaften ein, während der zweite Typ von Sekundärovulationen ohne Folgen blieb. These relationships could be experimentally tested under practical conditions can be determined by a larger number of married couples. It resulted in premenstrual disorders Secondary rovulations in the case of insufficient as well as sufficient corpus luteum activity. However, pregnancies only occurred in the first case, during the second Type of secondary rovulation remained without consequences.

Gemessen am wichtigsten Ausscheidungsprodukt des Progesterons, dem Pregnandiolglukuronid) das in seinem Komplex als »Verunrèìnigung« 95°/o Pregnanolon mitenthält, ergab sich auf Grund dieser empirischen Versuche, daß im durchschnittlichen Fall bei einer Tagesausscheidung von 3,5 mg Pregnan diolglnkuronid (inklusive Pregnanolori und in einigen Einzelfällen von mindestens 2,5 mg vom Vorliegen eines funktionstüchtigen Gelbkörpers gesprochen werden kann. Dieser i;usammenhang stimmt Xut überein mit der bereits bekannten Tatsache, daß während der Proliferationsphase des Endometriums 1 bis 2 mg Pregnandiolglukuronid pro Tag im Harn der Frau ausgeschieden werden, welche Minimalmengen dem Nebennierenrindenstoffwechsel oder einer zu frühen Luteinisierung des lRoikeRs entstammen. -flemgegeniiber betragen, wie bekannt, die in der eigentlichen Gelbkörperphase ausgeschiedenen Normalmengen an Pregnandiolglukuronid im Mittel 8 bis 9 mg pro Tag. As measured by the most important excretion product of progesterone, the Pregnanediol glucuronide) which in its complex as an "impurity" 95% pregnanolone contains, it was found on the basis of these empirical tests that on average Case with a daily excretion of 3.5 mg Pregnan diolglnkuronid (including Pregnanolori and in some individual cases of at least 2.5 mg from the presence of a functioning one Corpus luteum can be spoken. This context agrees with Xut the already known fact that during the proliferation phase of the endometrium 1 to 2 mg of pregnanediol glucuronide per day are excreted in the urine of the woman, which minimal amounts affect the adrenal cortex metabolism or too early luteinization of the lRoikeR. - Flemish amount, as is known, in the actual Luteal phase normal amounts of pregnanediol glucuronide excreted on average 8 to 9 mg per day.

Unterhalb des obengenannten S-chmnellenwertes von 3,5 bzw. 2,5 mg Pregnandiolglukuronid pro Tag ergeben sich befruchtungsfähige Sekundärovulationen, weil dann die gleichzeitige Aufwucherung der Gebärmutterschleimhaut als auch die Erhöhung der Zervikalschleimviskosität unvollkommen sind und nicht als Barrieren wirken können, während Sekundärovulationen oberhalb dieses Schwellenwertes nicht mehr befruchtungsfähig sind. Below the above mentioned threshold value of 3.5 or 2.5 mg Pregnanediol glucuronide per day results in fertile secondary rovulations, because then the simultaneous overgrowth of the uterine lining as well as the Increase in Cervical mucus viscosity are imperfect and not act as barriers can work, while secondary rovulations above this threshold do not are more fertile.

Bei Beachtung der genannten Schwellenwerte hingegen läßt sich aber nicht nur die Funktionstüchtigkeit des Gelbkörpers nachweisen, sondern gleichzeing werden auch die geringen aus dem Nebenniererrindenstoffwechsel stammenden (Umwandlung des Desoxycorticosterons in Progesteron) sowie die schon präovulativ im ungeplatzten Follikel allfällig erzeugten Mengen an Progesteron bzw. Pregnandiol »überbrückt«. Die bisher bekannten Verfahren, sei es nun zur Progesteron- oder Pregnandiolbestimmung sowie weitere Verfahren zur Bestimmung anderer Abbauprodukte des Progesterons können mit Empfindlichkeitsschwellen versehen werden, die den weiter obengenannten Schwellenwerten äquivalent sind. Damit werden solche rein quantitativen Stoffbestimmungsverfahren automatisch zu qualitatîven Verfahren zur Bestimmung der empfängnisfreien Zeit, sofern die zu ihrer Durchführung benötigte Verfahrensdauer nicht zu lang ist, um die Reaktion so frühzeitig zu erhalten, daß noch eine befrie digende Ausnützung möglich ist. However, if the threshold values mentioned are observed, not only prove the functionality of the corpus luteum, but at the same time are also the minor ones derived from the adrenal cortex metabolism (conversion desoxycorticosterone in progesterone) as well as the already preovulative in the unbreaked Follicle "bridged" any amounts of progesterone or pregnanediol produced. The previously known methods, be it for the determination of progesterone or pregnanediol as well as other methods for determining other degradation products of progesterone are provided with sensitivity thresholds that correspond to the threshold values mentioned above are equivalent. This means that such purely quantitative methods of substance determination are possible automatically leading to qualitative procedures for determining the fertility period, provided that the duration of the procedure required to carry it out is not too long to to get the reaction so early that there is still a satisfactory exploitation is possible.

Die Einführung eines solchen Schwellenwertes in irgendwelche bekannten Verfahren läßt sich einfach dadurch erreichen, daß 113 die Sichtbarkeit einer Farbreaktion bis zur vorgeschriebenen Grenze aufgehoben wird. Dies läßt sich erzielen, indem entweder durch beschränkte stöchiometrische Umsetzung nur so viel des reagierenden Stoffes in die Farbreaktion aufgenomien wird, daß diese erst beim Schwellenwert infolge ihrer eigenen Empfindlichkeitsgrenze anspricht (z.B. Verwendung schlechter Lösungsmittel, damit nur ein Teil des reagierenden Stoffes in Lösung geht), oder aber indem die Farbreaktion selbst durch chemisch oder physikalisch wirkende Zusätze gehemmt wird. Solche-Zusätze können oxydierende oder reduzierende (bleichende) und auch komplexbiidende Stoffe sein, die den emsprechenden Farbanteil maskieren oder auch Adsorp tions- oder Fällungsmittel, die den Schwellenwertanteil in sich aufnehmen oder -ausfällen, oder Komplementärfarben, die den Schwellenwertanteil kompensieren. The introduction of such a threshold in any known Method can be achieved simply by making 113 the visibility of a color reaction is canceled up to the prescribed limit. This can be achieved by either through limited stoichiometric conversion only so much of the reacting Substance is included in the color reaction that this only occurs at the threshold value responds due to its own sensitivity limit (e.g. use worse Solvent, so that only part of the reacting substance goes into solution), or but by the color reaction itself by chemically or physically acting additives is inhibited. Such additives can be oxidizing or reducing (bleaching) and also be complex-forming substances that mask the corresponding color component or also adsorption or precipitation agents that absorb the threshold value or failures, or complementary colors that compensate for the threshold portion.

Die heute bekannten Verfahren zur Bestimmung von Progesteron im Blut bzw. seinen Abbauproduk ten und speziell Pregnandiol im Harn sind für die Geburtenkontrolle praktisch unbrauchbar und eignen sich nur für klinisch-diagnostische Zwecke. Sie sind durchweg umständlich, verlangen teure Apparaturen und hochqualifiziertes Personal. Darüber hinaus liefern sie-allesamt die Resultate mit so großer Verspä tung, daß an eine praktische Anwendung ohne bedeutende Modifikationen gar nicht zu denken ist. The methods known today for the determination of progesterone in the blood or its degradation products and especially pregnanediol in the urine are used for birth control practically useless and are only suitable for clinical diagnostic purposes. she are all cumbersome, require expensive equipment and highly qualified personnel. In addition, they — all of them — are so late in delivering the results that not even thinking of a practical application without significant modifications is.

Das Verfahren nach der Erfindung vermeidet diese Nachteile. Da der Nachweis der empfängnisfreien Zeit keine quantitativell--'ormonbestnnung erfordert, sonderen nur die Feststellung eines Minimal-Hormanspiegels in halbqualitativer Weise, ist ein einfaches, rasch durchführbares Verfahren entwickelt worden.The method according to the invention avoids these disadvantages. Since the Evidence of the conception-free period does not require a quantitative - 'ormonbestnnung, only the determination of a minimal Horman level in a semi-qualitative way, a simple and quick process has been developed.

Das Verfahren ist so einfach durchführbar und der zu seiner Durchführung nötige Zeitaufwand so gering, daß es nicht nur für das speziell zum Zweck der Feststellung der ernpfängnisfreien Zeit für seine Kundinnen eingerichtete Laboratorium geeignet ist, sondern darüber hinaus von jedem Laien bzw jeder Frau selbst zu Hause angewendet werden kann Während im Laboratorium jede den Verfahrensanforderungen, im besonderen der Extraktion des Stoffwechselproduktes aus der Körperflüssigkeit angepaßte Apparatur geeignet ist, ist für den Laien eine speziell kleindimensionierte Einrichtung, die ein schematisches Arbeiten nach Gebrauchsanweisung ermöglicht, unerläßlich. Zur raschen und zuverlässigen Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens durch Laien wird das Diagnosemittel, d h die notwendigen Chemikalien, Lösungsmittel, Reagenzien, Farbstoffe usw. zweckmäßig als für je eine Bestimmung gebrauchsfertig dosierte und möglichst lange haltbare Packung zubereitet Diese Packungen bestehen z. B. aus Ampullen, Röhrchen u dgl. aus Glas oder Kunststoff sowie in Form von Portionenpackungen abgeschweißten Plastikschläuchen usw. The procedure is so easy to carry out and the one to carry it out The time required is so small that it is not just for the specific purpose of the determination laboratory set up for its customers during the period of pregnancy-free is, but also by every layperson or everyone Woman herself Can be used at home While in the laboratory each of the procedural requirements, in particular the extraction of the metabolic product from the body fluid adapted apparatus is suitable, is a specially small-sized one for the layman Device that enables schematic work according to the instructions for use, indispensable. For the rapid and reliable implementation of the method according to the invention by laypeople, the diagnostic agent, i.e. the necessary chemicals, solvents, Reagents, dyes, etc. expediently as ready-to-use for one determination each Dosed and long-lasting pack prepared These packs exist z. B. from ampoules, tubes and the like. Made of glass or plastic and in the form of portion packs welded plastic hoses, etc.

Solche für je eine Bestimmung kombinierten Pakkungen ersparen nicht nur das lästige Abmessen der einzelnen Portionen, sondern gewährleisten auch eine größere Haltbarkeit als z. B. bei immer wieder geöffneten Flaschen Ein solches erfindungsgemäß kombiniertes Diagnosemittel wiegt verpackt beispielsweise 30 g und hat ein Volumen von etwa 34 ccm; es läßt sich zu Jahrespackungen zu zwölf bis zwanzig Bestimmungen mit einem Totalgewicht von rund 500 g zusammenstellen. Das einzelne Diagnosemittel für eine Be-Bestimmung wiegt nicht ganz 16 g und besitzt ein Volumen von rund 19 ccm, also bedeutend weniger als bei sämtlichen bekannten Pregnandiolbesüm mungsverfahren, von denen kein einziges mit total weniger als 60 bis 70 ccm Chemikalien auskommen kann.Such packages combined for one determination each do not save only the annoying measuring of the individual portions, but also guarantee one greater durability than z. B. with repeatedly opened bottles Such according to the invention combined diagnostic agent weighs, for example, 30 g when packed and has a volume of about 34 cc; it can be made into annual packs of twelve to twenty determinations put together with a total weight of around 500 g. The single diagnostic tool for a Be determination weighs less than 16 g and has a volume of around 19 ccm, i.e. significantly less than with all known Pregnandiol specimen methods, none of which can manage with a total of less than 60 to 70 cc of chemicals can.

Die Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird nachfolgend in einer für den Pregnandiol-Pregnanolon-Komplex bevorzugten Ausführung rein beispielsweise beschrieben: Fig. 1 zeigt einen zur Einrichtung gehörigen Extraktionsapparat im Betriebszustand; Fig. 2 zeigt eine ganze Einrichtung ineinandetgeschachtelt im Nichtb etriebszustand; F i g 3 zeigt einen Schüttelbecher für die Waschflüssigkeiten mit aufgesetztem Deckel; Fig.4 zeigt einen Gefäßhalter mit einem Reak tionsgefäß, einem Brenner und einem Kondensatorschlauch im Betriebszustand. The method according to the invention is carried out below in an embodiment preferred for the pregnanediol-pregnanolone complex, purely for example described: Fig. 1 shows an extraction apparatus belonging to the device in Operating condition; Fig. 2 shows an entire device nested in non-b operating condition; Fig. 3 shows a shaker for the washing liquids attached lid; Fig.4 shows a vessel holder with a reac tion vessel, a Burner and a condenser hose in the operating state.

Das Verfahren besteht im wesentlichen darin, daß der Pregnandiolkomplex aus dem frischen, während 8 bis 10 Stunden ausgeschiedenen und dann mit Kochsalz abgesättigten Urin extrahiert, der Extrakt gewaschen, der Pregnandiol-Pregnanolon-Komplex anschließend direkt als Bariumsalz gefällt und dann als Präzipitat auf seinen Glukuronsäuregehalt mit Hilfe der Tollens-Reaktion untersucht wird. Sowohl in der Extraktionsstufe, der Extraktwaschung, der Fällung als auch der Farbreaktion nach T;àllens sind in das Verfahren gewollte Hemmstufen eingebaut, welche seine Empfindlichkeit auf den weiter obengenannten Schwellenwert reduzieren. Auf diese Hernmstufen wird später noch näher hingewiesen. The process consists essentially in that the pregnanediol complex from the fresh, excreted over 8 to 10 hours and then with table salt saturated urine extracted, the extract washed, the pregnanediol-pregnanolone complex then precipitated directly as a barium salt and then as a precipitate to its glucuronic acid content is investigated with the help of the Tollens reaction. Both in the extraction stage, the extract washing, the precipitation as well as the color reaction according to T; àllens are in the method incorporated intentional levels of inhibition, which its sensitivity to the Reduce the threshold mentioned above. This will be discussed later pointed out in more detail.

Der zweckmäßigerweise vom Laien zu verwendende Extraktionsapparat (fig. 1) besteht aus einem Basisgefäß 1 und einem in diesem eingesetzten Extraktor 2 (Rohrdurchmesser vorteilhaft 1L3,5 mm, nicht über 20 nun), welcher am Basisgefäß 1 mittels Dichtungen 9 hermetisch abschließt. The extraction apparatus that is expediently to be used by laypeople (Fig. 1) consists of a basic vessel 1 and an extractor used in this 2 (pipe diameter advantageously 1L3.5 mm, not more than 20 now), which on the basic vessel 1 hermetically seals by means of seals 9.

Am Extraktor 2 ist - über eine Dichtung 14 ein Düsenstück 3 (Düsendurchmesser vorteilhaft 0,58 mm) angeschraubt und auf diesem über eine Dichtung 18 ein Kopfgefäß 4. Im Kopfgefäß 4 ist eingelegt ein mit einer Spannfeder 6 gehaltenes Sieb 7, und das Ganze ist verschlossen mit einem aufgelegten Deckel 5. Im oberen Teil des Extraktors 2 befinden sich eine aus einem Kolben 15, einer Anschlagschraube 16, einer Druckfeder 17 und einem Ventilschlauch 25 bestehende Pumpe sowie ein aus einem Ventilknopf 12, einer Ventilscheibe 11, einer Dichtung 10 und einer Durchlaßöffnung 13 bestehendes Ventil. Am Extraktor 2 sind seitlich angebracht ein Überlauf 2 sowie zuunterst ein Verschlußdeckel 8 Im oberen Teil des Diisenstückes 3, d. h. unmittelbar über der Düse, kann ein Regulierventil angebracht werden, um den Druck des durch die Düse strömenden Urinstrahles zu regulieren, dieses Ventil ist indessen nicht unbedingt notwendig und deshalb in der Zeichnung weggelassen.On the extractor 2 is - via a seal 14 a nozzle piece 3 (nozzle diameter advantageously 0.58 mm) and a head vessel on this via a seal 18 4. A sieve 7, and 7, held by a tension spring 6 is inserted into the head vessel 4 the whole thing is closed with an attached lid 5. In the upper part of the extractor 2 are one of a piston 15, a stop screw 16, a compression spring 17 and a valve hose 25 consisting of a pump and a valve button 12, a valve disc 11, a seal 10 and a passage opening 13 existing Valve. An overflow 2 and an overflow at the bottom are attached to the side of the extractor 2 Closure cover 8 In the upper part of the nozzle piece 3, d. H. immediately above the Nozzle, a regulating valve can be attached to control the pressure of the nozzle through the nozzle to regulate the flowing stream of urine, this valve is not essential necessary and therefore omitted in the drawing.

Im Nichtbetriebszustand der Einrichtung (Fig. 2) sind Kopfgefäß 4, Düsenstück 3 sowie alle übrigen Bestandteile im Innern des Basisgefäßes i untergebracht. Die Einrichtung besitzt dann nur noch rund ein Drittel ihrer Betriebshöhe. Der Deckel 5, dessen Dichtung 19 dazu bestimmt ist, einen.Schüttelbecher 23 abzuschließen (Fi g. 3), ist nun im oberen Teil des Extraktors 2 eingeschraubt, wo im Betriebszustand das Düsenstück 3 befestigt wird. Das Ventil 12 ist geschlossen und der Pumpenkolben 15 wird vom Deckel 5 niedergehalten. Zwei auf den Extraktor 2 aufgeklemmte Drahtklammern 24 sind dazu bestimmt, die beiden Reaktionsgefäße 2i, z. aus feuerfestem Glas (von denen im Schnitt F i g. 2 nur eines gezeichnet ist), und das Düsenstück 3 im Innern des Basisgefäßes bzw. des Kopfgefäßes-4 festzuhalten. Zuunterst ist der Schüttelbecher 23 vom erweiterten Beruhigungsteil des Extraktors 2, dahinter ein Brenner 24 und daneben ein Gefäßhalter 20 fixiert Ein Kondensatorschlauch 26 (F i g 4) und das Sieb 6, 7 sind, weil elastisch und deshalb überall im Innern der Einrichtung unterbringbar, nicht eingezeichnet. When the device is not in operation (Fig. 2), the top vessel 4, Nozzle piece 3 and all other components housed in the interior of the basic vessel i. The facility will then only have around a third of its operating height. The lid 5, the seal 19 of which is intended to close off a shaking beaker 23 (Fi G. 3), is now screwed into the upper part of the extractor 2, where in the operating state the nozzle piece 3 is attached. The valve 12 is closed and the pump piston 15 is held down by the cover 5. Two wire clips clamped onto the extractor 2 24 are intended for the two reaction vessels 2i, z. made of refractory glass (from those in section F i g. 2 only one is drawn), and the nozzle piece 3 inside of the base vessel or the head vessel-4. At the bottom is the shaker 23 from the expanded calming part of the extractor 2, behind a burner 24 and next to it a vessel holder 20 is fixed, a condenser hose 26 (FIG. 4) and that Sieves 6, 7 are, because they are elastic and can therefore be accommodated anywhere inside the device, not shown.

Als Sammelgefäß für den Harn und zu seiner Absättigung mit Kochsalz dient das Basisgefäß 1. Die Harnmenge aus 8 bis 10 Stunden Ausscheidungsdauer wird mit Leitungswasser bis zur unteren Marke am Basisgefäß 1 (Fig. 1) ergänzt, was einer Menge von 700 ccm entspricht, welche Menge innerhalb 8 bis 10 Stunden selten überschritten wird. As a collecting vessel for the urine and to saturate it with table salt serves the basic vessel 1. The amount of urine from 8 to 10 hours elimination time is supplemented with tap water to the lower mark on the base vessel 1 (Fig. 1), what a This corresponds to an amount of 700 ccm, which amount is seldom exceeded within 8 to 10 hours will.

Hierauf wird so viel Kochsalz beigefügt, daß das Flüssigkeitsniveau von der unteren bis zur oberen Marke ansteigt -(770 ccm). Nun wird der Extraktor 2 mit eingeschraubten Deckeln 5 und 8 in das Basisgefäß l eingesetzt, 60 daß dieses durch die Dichtungen 9 hermetisch verschlossen wird. Nach 40 Sekunden dauerndem, kräftigem Schütteln ist der Urin mit dem zugegebenen Kochsalz abgesättigt.So much table salt is then added that the liquid level increases from the lower to the upper mark - (770 cc). Now the extractor 2 with screwed-in lids 5 and 8 inserted into the basic vessel l, 60 that this is hermetically sealed by the seals 9. After 40 seconds of shaking vigorously, the urine is saturated with the added table salt.

Während des Schütteln füllt sich der Extraktor 2 durch den anliegenden Überlauf 2 a ebenfalls mit Harn. Nach Abschrauben des Deckels 5 zur Freilegung der oberen Öffnung des Extraktorrohres 2 wird das aus der Scheibe 11, der Dichtung 10 und der Öffnung 13 bestehende Ventil 12 geöffnet. Dieses erlaubt der Luft bei der anschließenden Extraktion, bei welcher sich das Basisgefäß 1 langsam füllt, den Abzug. Nach Einfüllen der z.B. in einer Portionenpackung aus Kunststoffschlauch enthaltenen Extraktflüssigkeit, bestehend aus 9 ccm Amylbutylalkohol im Volumenverhältnis 1:2, in das Extraktorrohr 2 bildet sich in diesem eine Lösungsmittelsäule, die sich auf dem salzgesättigten Urin darin aufschichtet; infolge des Überlaufes stellt sich das Lösungsmittel immer auf gleiches Niveau ein, nämlich etwa 4 cm unter der Düse. Nach dem Einfüllen werden auf den Extraktor 2 das Düsenstück 3 und auf dieses das Kopfgefäß 4 aufgeschraubt und in dieses letztere das Sieb 6, 7 eingelegt. Hierauf wird das mit salzgesättigtem Urin gefüllte Basisgefäß 1 abgenommen und in das Kopfgefäß 4 entleert. Das Basisgefäß 1 wird sofort wieder unten angebracht, da bald Urin durch den überlauf entweicht; der Deckel 5 wird auf das Gefäß 4 aufgelegt und der Apparat beiseite gestellt. During the shaking, the extractor 2 fills through the adjacent Overflow 2 a also with urine. After unscrewing the cover 5 to expose the The upper opening of the extractor tube 2 is made up of the disk 11, the seal 10 and the opening 13 existing valve 12 is opened. This allows the air at the subsequent extraction, in which the base vessel 1 slowly fills, the Deduction. After filling, e.g. in a portion pack made of plastic tubing contained extract liquid, consisting of 9 ccm amylbutyl alcohol in the Volume ratio 1: 2, in the extractor tube 2 a solvent column forms in this, which builds up on the salt-saturated urine in it; as a result of the overflow the solvent always adjusts to the same level, namely about 4 cm below the nozzle. After filling, the nozzle piece 3 and on the extractor 2 this screwed on the head vessel 4 and the sieve 6, 7 inserted into this latter. The base vessel 1 filled with salt-saturated urine is then removed and placed in the head vessel 4 emptied. The basic vessel 1 is immediately attached again at the bottom, as soon urine escapes through the overflow; the lid 5 is placed on the vessel 4 and put the machine aside.

Die Harnmenge von rund 770 ccm strömt nun während ungefähr 35 Minuten in feinem Strahl durch die Düse und prallt auf die Oberfläche des im Extraktor befindlichen Amylbutylalkohols an jener Stelle auf, wo sich-der Strahl in feine Tröpfchen aufzulösen beginnt ;(Durchflußmenge etwa 22 ccm je Minute). Hierbei wird der Harn in viele winzig kleine Tröpfchen zerschlagen, die langsam durch die Lösungsmittelschicht absinken, sich unter dieser wieder mit dem bereits extrahierten Harn vereinigen, durch den- Überlauf 2a emporsteigen und ins Basisgefäß 1 zurückfließen. Hierbei erfolgt die Extraktion des PregnandioIglukuronides aus dem Harn. The urine volume of around 770 ccm now flows for about 35 minutes in a fine jet through the nozzle and hits the surface of the extractor Amylbutyl alcohol at the point where the jet will dissolve into fine droplets begins; (flow rate about 22 ccm per minute). Here the urine is in many tiny droplets smashing slowly through the solvent layer sink, reunite under this with the urine that has already been extracted, Rise through the overflow 2a and flow back into the base vessel 1. Here the PregnandioIglucuronides are extracted from the urine.

Nach dem Passieren des Urins werden das Gefäß 4 und das Düsenstück 3 abgeschraubt, mit Wasser gespült und wieder angebracht. Die zur Extraktwaschung erforderliche Waschilüssigkeit, bestehend aus 5 ccm ammoniakalischem Äther-Butanol-Gemisch (aus einer Portionenpackung aus Kunststoff) im Volumenverhältnis 5:1 und 0,5 ccm Wasset mit 200 mg darin gelöstem Kochsalz, wird unter Zusatz von 35 ccm Trink- bzw. Leitungswasser in dem mit dem Deckel 5 verschlossenen Schüttelbecher 23 kräftig vermischt (Fig. 3) und - ins Kopfgefäß 4 entleert. Die Waschilüssigkeit passiert nun gleich wie der Harn bei der Extraktion die Extraktphase, wäscht diese, so daß der größte Teil der Verunreinigungen aus dem Extrakt ausgewaschen wird. Infolge des Äthercharakters der Waschflüssigkeit und der kleinen Kochsalzzugabe geht das Pregnandiolglukuronid in der Großzahl aller Fälle nicht in die Waschflüssigkeit über. Es gibt indessen aber Ausnahmefälle bei außerordentlich schwach verunreinigten Harnen: die Verunreinigungen sind dann bereits im ersten Moment der Waschung aus dem Extrakt entfernt, so daß der größte Teil der Waschflüssigkeit ohne weitere Stoffauinahme den Extrakt passiert und aus diesem Grunde das Pregnandiolglukuronid trotz Äther- und Kochsalzgehalt auswaschen kann. In solchen Fällen chronisch schwach verunreinigter Extrakte empfiehlt es sich, jeweils von den rund 40 ccm gemischter Waschflüssigkeit nur zwei Drittel oder in Exremfällen nur die Hälfte zu verwenden. Anschließend erfolgt eine Nachwaschung mit 35 bis 40 ccm gesättigtem Kochsalzwasser zwecks Entwässerung des trüben Extraktes und Entfernung von überschüssigem Ammoniak. After the urine has passed through, the vessel 4 and the nozzle piece become 3 unscrewed, rinsed with water and reattached. The one for extract washing required washing liquid, consisting of 5 ccm ammoniacal ether-butanol mixture (from a portion pack made of plastic) in a volume ratio of 5: 1 and 0.5 ccm Water with 200 mg of table salt dissolved in it, add 35 ccm of drinking or drinking water. Tap water in the closed with the lid 5 shaker 23 vigorously mixed (Fig. 3) and - emptied into the head vessel 4. The washing liquid happens Now just like the urine in extraction the extract phase, this washes it so that most of the impurities are washed out of the extract. As a result The etheric character of the washing liquid and the small addition of sodium chloride do In the majority of cases, pregnanediol glucuronide is not in the washing liquid above. However, there are exceptional cases in the case of extremely weakly polluted ones Urination: the impurities are already gone in the first moment of washing removed from the extract, so that most of the washing liquid can be removed without taking up any further substances the extract happens and for this reason the pregnanediol glucuronide despite ethereal and saline content can wash out. In such cases, chronically less polluted It is advisable to extract extracts from each of the approximately 40 ccm of mixed washing liquid to use only two thirds or in extreme cases only half. Then takes place a post-wash with 35 to 40 ccm of saturated saline water for the purpose of dehydration of the cloudy extract and removal of excess ammonia.

Der Extrakt ist hierauf meistens farblos klar.The extract is then mostly colorless and clear.

Nach dem Absetzen der letzten, feinsten in Suspension befindlichen Salzwassertröpfchen (2 bis 3 Minuten nach. der Salzwasserwaschung) werden Düsenstück 3 und Kopfgefäß 4 abgeschraubt und das. Ventil 12 geschlossen. Das Urinniveau im Basis- gefäß 1 steht infolge der Volumenzunahme durch die Waschflüssigkeiten nun etwas über der Überlauföffnung 2a. Ein entsprechend geformter Stechheber (in den Zeichnungen nicht dargestellt) wird auf die Dichtung 14 gepreßt und mit dem Zeigefinger der andern freien Hand der Pumpenkolben 15 betätigt. Der auf den Kolben drückende Finger ist zugleich Einlaßventil, und die ins Basisgefäß 1 gedrückte Luft wird durch den Ventilschlauch 25 am Entweichen gehindert. Durch den im Inneren des Gefäßes 1 erzeugten Überdruck steigt die Extraktphase im Extraktor empor, bis sie sich vollständig in dem auf der Dichtung 14 ruhenden Stechheber befindet. Dessen freie Öffnung am oberen Ende wird nun mit dem Finger zugehalten und der Extrakt in eines der Reaktionskölbchen 21 aus feuerfestem Glas umgeleert, das innen trocken sein muß. Anstatt mit Überdruck durch die Pumpe 15 kann der Extrakt natürlich auch mittels Pipette und Saugbällchen aus dem Extraktor 2 herausgesaugt werden. After settling the last, finest in suspension Salt water droplets (2 to 3 minutes after the salt water wash) become nozzle pieces 3 and head vessel 4 unscrewed and the valve 12 closed. The urine level in the Base- Vessel 1 is now due to the increase in volume due to the washing liquids slightly above the overflow opening 2a. A correspondingly shaped plunger (in the Drawings not shown) is pressed onto the seal 14 and with the index finger the other free hand of the pump piston 15 is actuated. The one pressing on the piston The finger is also the inlet valve, and the air pressed into the base vessel 1 is passed through the valve tube 25 prevented from escaping. Through the inside of the jar 1 generated overpressure rises the extract phase in the extractor until it is completely located in the lance resting on the seal 14. Its free opening on The upper end is now closed with your finger and the extract is transferred to one of the reaction bulbs 21 made of fireproof glass, which must be dry inside. Instead of overpressure The pump 15 can of course also use the extract by means of a pipette and suction balls be sucked out of the extractor 2.

Die delikate Pumpeinrichtung ließe sich so erübrigen.The delicate pumping device could thus be dispensed with.

Der gewaschene Extrakt ist trotz seiner Farblosigkeit noch relativ stark verunreinigt. Aus diesem Grunde wird das Pregnandiolglukuronid vorteilhaft als Bariumsalz direkt aus dem Extrakt ausgefällt, was infolge der Löslichkeits- und Konzentrationsverhältnisse nicht in herkömmlicher Weise möglich ist. Dem Extrakt werden hierzu aus dem entsprechenden Beutel des Diagnosemittels 0,3 g -Silicagel von 0,2 bis 1,0 mm Körnung zugesetzt, das mit rund 28 mg Bariumacetat durch Wässern in destilliertem Wasser mit 100 g Bariumacetat je Liter und nachheriges Trocknen imprägniert ist. Extrakt und Silicagel werden ungefähr 1 Minute lang mäßig geschüttelt. Zuerst lagert sich hierbei am Silicagel ein Teil der im Extrakt verbliebenen Restfeuchtigkeit ab und bildet einen Wassermantel um dieses, der das obige Bariumsalz in höchster Konzentration gelöst enthält. Fast gleichzeitig werden vom feuchten Silicagel fast alle im Extrakt vorhandenen Stoffe adsorbiert, indem sie durch den Bariumsalz-Wassermantel passieren. Bei dieser Passage wird das Natrium-Pregnandiolglukuronid augenblicklich als Barium-Pregnandiolglukuronid ausgefällt und infolge der mechanischen Wirkung des Schüttelns in kristalliner Form sofort aus dem Wassermantel heraus in den Exrakt zurückgewaschen. Diese Operation, die sich aus einer Adsorption, fast gleichzeitigen Fällung und quasi Desorption zusammensetzt und theoretisch die konventionellen Stufen der Adsorption, Elution, Trocknung, Neulösung, Fällung usw. in einer einzigen Stufe vollbringt, wird im folgenden als Adsorptionsfällung bezeichnet. The washed extract is still relative in spite of its colorlessness heavily contaminated. For this reason, the pregnanediol glucuronide becomes beneficial precipitated as a barium salt directly from the extract, which is due to the solubility and concentration ratios is not possible in a conventional manner. The extract To do this, 0.3 g silica gel is obtained from the corresponding bag of the diagnostic agent 0.2 to 1.0 mm grain size added, with around 28 mg of barium acetate by soaking in distilled water with 100 g of barium acetate per liter and subsequent drying is impregnated. The extract and silica gel are shaken gently for approximately 1 minute. First of all, part of the residual moisture in the extract is deposited on the silica gel and forms a water jacket around it, which contains the above barium salt in its highest Contains dissolved concentration. Almost simultaneously from the moist silica gel become almost all substances present in the extract are adsorbed by passing them through the barium salt water jacket happen. During this passage the sodium pregnanediol glucuronide becomes instantaneous precipitated as barium-pregnanediol glucuronide and as a result of the mechanical effect of shaking in crystalline form immediately out of the water jacket into the extract washed back. This operation, resulting from adsorption, is almost simultaneous Precipitation and quasi desorption and theoretically the conventional stages adsorption, elution, drying, redissolution, precipitation, etc. in a single step accomplishes, is referred to below as adsorption precipitation.

Das Suspensionskristallisat wird mit der flüssigen Phase unter Zurücklassung des Silicagels in ein zweites trockenes Kölbchen 21 umgeleert und zur Beschleunigung der Absetzung der Suspension 0,5 ccm Gasolin, Petroläther, Benzol usw. und 0,1 ccm n/1000-Salzsäure aus einer weiteren Portionenpakkung des Diagnosemittels zugesetzt und durch sehr kräftiges Schütteln vermischt. Dadurch werden die festen Kristallisatbestandteile an ihrer Oberfläche naß und »klebrig«; sie lagern sich gegenseitig aneinander ab und sinken dadurch und infolge der durch die Feuchtigkeit verursachten Gewichtszunahme relativ rasch (innerhalb 10 bis 20 Minuten) in den Grund des Kölbchens ab, wo sie ebenfalls infolge ihres Feuchtigkeitsgehaltes klebenbleiben. Hierdurch wird ein einfaches Ableeren der Mutterflüssigkeit ohne Aufwirbeln des Niederschlages möglich. Der Salzsäuregehalt der Feuchtigkeit verhindert eine Adsorption uronsaurer Verunreinigungen am Präzipitat. The suspension crystals are left with the liquid phase of the silica gel emptied into a second dry flask 21 and accelerated the deposition of the suspension 0.5 cc of gasoline, petroleum ether, benzene, etc. and 0.1 cc n / 1000 hydrochloric acid added from another portion pack of the diagnostic agent and mixed by very vigorous shaking. This results in the solid crystallizate components wet and "sticky" on their surface; they deposit one another on one another and decrease as a result of this and as a result of the weight gain caused by moisture Relatively quickly (within 10 to 20 minutes) into the bottom of the flask, where they are also stick due to their moisture content. Through this will a simple emptying of the mother liquor without whirling up the precipitate possible. The hydrochloric acid content of the moisture prevents adsorption of uronic acids Impurities on the precipitate.

Anschließend wird die überstehende Flüssigkeit abgeleert, das Kölbchen 21 kurze Zeit umgekehrt stehengelassen, um ein restloses Ablaufen der Extraktflüssigkeit zu ermöglichen, und der an der Kölbchenwandung klebende Rückstand in Leitungs-.wasser aufgenommen, welches bis zum Teilstrich des Kölbchens 21 (Fig.4) eingefüllt wird. Diesem Wasser werden 1,5 ccm reine, konzentrierte Salzsäure(speziflsches Gewicht 1,19) und 0 5 ccm Athyl-oder Propylalkohol (rein) mit 3 mg Naphthoresorcin aus weiteren Portionenpackungen des Diagnosemittels zugesetzt. Soll die Naphthoresorcinlösungemindestens 1 Jahr haltbar gemacht werden, so wird der Alkohol entlüftet (durch Kochen unter Rückflußkondensation) und hierauf vor der Lösung des Naphthoresorcins mit CO2 gesättigt. Then the supernatant liquid is emptied, the flask 21 left standing upside down for a short time to ensure that the extract liquid runs off completely to allow, and the residue sticking to the flask wall in tap water recorded, which is filled up to the graduation of the flask 21 (Figure 4). 1.5 ccm of pure, concentrated hydrochloric acid (specific weight 1.19) and 0.5 cc of ethyl or propyl alcohol (pure) with 3 mg of naphthoresorcinol from further Portion packs of the diagnostic agent added. Should the naphthoresorcinol solution at least Can be preserved for 1 year, the alcohol is deaerated (by boiling under Reflux condensation) and then saturated with CO2 before the solution of the naphthoresorcinol.

Zum Abstellen der Kölbchen 21 bedient man sich des Kölbchenhalters 20 (Fig. 4), der mit dem eingespannten Kölbchen 21 zusammen ein sicher stehendes Dreibein bildet, da er an seinem Ende einen breiten, zweizehigen Fuß besitzt. Sofern keine andere Flamme zur Verfügung steht, wird der lediglich aus einem Näpfchen bestehende Brenner 22 (F i g. 4) mit Alkohol, Brennsprit, einer Metatablette, Kölnisch Wasser usw. oder, wenn jedes andere Brennmaterial fehlt, beim Abgießen mit der Extraktphase gefüllt (die allerdings beim Breunen etwas rußt) und angezündet. Auf das Kölbchen 21 wird der Kondensatorschlauch 26 aufgesetzt und das Reaktionsgemisch nach Beginn des Siedens während einer Minute über der Flamme gekocht. Der beim. To put down the flask 21 one uses the flask holder 20 (Fig. 4), which together with the clamped flask 21 is a safe standing Forms a tripod because it has a broad, two-toed foot at its end. Provided If no other flame is available, the one that only consists of one cup Burner 22 (Fig. 4) with alcohol, methylated spirits, a metatablet, colognes etc. or, if there is no other fuel, when decanting with the extract phase filled (which, however, is somewhat sooty when it is Breunen) and lit. On the flask 21, the condenser hose 26 is attached and the reaction mixture after the start of boiling over the flame for one minute. The at.

Kochen aus dem Kölbchen entweichende übelriechende Dampf kondensiert dabei im Kondensatorschlauch 26, so daß die ganze Reaktion praktisch geruchlos vor sich geht. Diese (ieruchsvemichtung durch Kondensation ist von Bedeutung, denn ohne sie würde in vielen Fällen die Anwendung durch Laien, also in Wohnräumen, unmöglich gemacht.The foul-smelling steam escaping from the flask condenses while doing so in the condenser hose 26, so that the entire reaction is practically odorless is going. This (fox extermination through condensation is important, because without in many cases it would make it impossible to use by laypeople, i.e. in living spaces made.

Nach dem Erkalten des Reaktionsgemisches wird der Kondensatorschlauch 26 in horizontaler Lage vom Kölbchen 21 abgenommen, um ein Auslaufen des Kondensates zu vermeiden. Aus der letzten Portionenpackung des Diagnosemittels werden 1,5 ccm mit 4 mg Anilin-Fettgrün je Liter leicht grüngefärbten Benzols, Tuluols oder Xylols zugesetzt und das Ganze kräftig während 15 bis 20 Sekunden geschüttelt. After the reaction mixture has cooled down, the condenser hose becomes 26 removed from the flask 21 in a horizontal position to prevent the condensate from running out to avoid. The last portion pack of the diagnostic agent becomes 1.5 ccm with 4 mg aniline fatty green per liter of light green colored benzene, tuluene or xylene added and the whole thing shaken vigorously for 15 to 20 seconds.

Die von der sich oben abscheidenden Benzolschicht ausgezogene rotviolette Färbung ist die Indikation für die empfängnisfreie Zeit, Bleibt die Lösung grün, wasserklar oder gelb bis bräunlich, so ist entweder gar keine oder eine ungenügende Gelbkörperaktivität und infolgedessen Empfängnisgefahr vorhanden. In diesem Fall wird die Analyse 2 bis 3 Tage später wiederholt, bis die rotviolette Färbung erscheint. Normalerweise reicht eine monatlich einbis zweimalige Vornahme der Bestimmung für die Praxis vollständig aus, wobei die erste Bestimmung bei z. B. 28- bis 30tägigem Zyklus auf den 17. bis 18. Zyklustag fällt. Die eigentliche Arbeitszeit zur Vornahme der Bestimmung beträgt nur rund 15 Minuten und deren gesamthafte Durchführungsdauer etwa 1 Stunde (gegenüber einigen Stunden Arbeitszeit und einigen Tagen Durchfthrungsdauer bei be- kannten Verfahren zur Pregnandiolbestimmung). Die präovulative empfängnisfreie Zeit wird wie bisher auf Grund der Methode nach Knaus-Ogiuo berechnet, wobei sich in der Praxis zeigte, daß die Zuverlässigkeit durch diese Kombination nur unwesentlich verändert wird, weil eine Vorverlegung der Ovulation sehr selten vorkommt. The reddish-violet drawn from the benzene layer deposited on top The color is the indication for the conception-free period. If the solution remains green, water-clear or yellow to brownish, there is either none or insufficient Yellow body activity and, as a result, there is a risk of conception. In this case the analysis is repeated 2 to 3 days later until the red-violet color appears. Normally, one or two determinations a month is sufficient for the practice completely, the first determination at z. B. 28 to 30 days The cycle falls on the 17th to 18th day of the cycle. The actual working time to make the determination is only around 15 minutes and the entire duration of the process about 1 hour (compared to a few hours of work and a few days to complete at loading known procedures for the determination of pregnanediol). The preovulative conception-free As before, time is calculated on the basis of the Knaus-Ogiuo method, whereby in practice showed that the reliability due to this combination is only insignificant is changed because advancing ovulation is very rare.

Gegenüber den bisher bekannten Verfahren unter scheidet sich das vorliegende vor allem in bezug auf seine außerordentliche Spezifität und seine relative Empfindlichkeit, was die Verwendung von weniger als ein Drittel Tagesharnmenge zuläßt, Der äußerst geringe Zeitaufwand erlaubt es, den Eintritt der empfängnisfreien Zeit schon 8 bis 9 Stunden nach Beginn der ersten Pregnandiolbildung im weiblichen Organismus festzustellen. Damit kann praktisch von einer Verspätung gegenüber dem biologischen Eintritt der sterilen Phase nicht mehr gesprochen werden. This differs from the previously known processes present mainly in terms of its extraordinary specificity and its relative Sensitivity, which allows the use of less than a third of the daily amount of urine, The extremely short time required allows the conception-free period to begin already 8 to 9 hours after the beginning of the first pregnanediol formation in the female organism ascertain. This can be practically of a delay compared to the biological When the sterile phase begins, it is no longer possible to speak.

Die Art der Extraktion in dünnem Strahl ist bedingt durch die äußerst geringe Menge der verwendeten Lösungsmittel von nur 9 ccm bzw. ein Fünfundachtzigstel der Harnmenge oder rund ein Zehntel bis ein Zwanzigstel der bekannten Verfahren. Bei herkömmlicher Extraktionsart (Schütteln2 Preßlufteinblasen, Rührwerk usw.) wurde sich die kleine Lösungsmittelmenge unter der mechanischen Einwirkung schon in ungefähr 50Q cc,-in' salzgesättigtem Urin völlig auflgsen. Die Zugabe von Amylalkohol zum Butylalkohol reduziert die Löslichkeit für Pregnandiol und stellt infiolgeessen eine erste Stufe im totalen Schwellenwert dar. The type of extraction in a thin stream is due to the extreme small amount of the solvents used of only 9 cc or one eighty-fifth the amount of urine or around a tenth to a twentieth of the known methods. With the conventional extraction method (shaking, 2 blowing in compressed air, agitator, etc.) the small amount of solvent under the mechanical influence is already approximately Dissolve 50Q cc, -in 'of salt-saturated urine completely. The addition of amyl alcohol to the Butyl alcohol reduces the solubility for pregnanediol and represents infiolgeessen represents a first level in the total threshold.

Die Waschungsart besitzt gegenüber konventionellen Arten durch beispielsweise zweinaliges Ausschütteln mit je einem Drittel des Extraktvolumens an n/3- bis nIl 0-Natronlauge eine rund dreißiginal höhere Wirksamkeit, die einerseits durch die das Extraktvolumen um ein Mehrfaches übersteigende Waschfiüssigkeitsmenge und andererseits durch den Äthercharakter des Waschwassers bedingt ist, welches letztere wiederum einem Übergang des Pregnandiolglukuronides in die Waschflüssigkeit stark entgegenwirkt. Da es jedoch unmöglich ist, den Übergang eines kleinen Anteils an Pregnandiol in die Waschflüssigkeit zu verhindern, so stellt dieser restliche Übergang einen weiteren Teil des Gesamtschwellenwertes dar. The washing type has over conventional types by for example shaking twice with a third of the extract volume each at n / 3- to nIl 0 sodium hydroxide solution is around three original more effective, on the one hand by the the amount of washing liquid exceeding the volume of the extract several times, and on the other hand is conditioned by the ethereal character of the washing water, which in turn is the latter strongly counteracts a transfer of the pregnanediol glucuronide into the washing liquid. However, since it is impossible to transfer a small amount of pregnanediol into To prevent the washing liquid, this remaining transition represents another Part of the overall threshold.

Die wichtigste und das Verfahren am meisten verbessernde sowie auch verkürzende Operation ist die Adsorptionsfällung. Sie kann als katalytische Fällung bezeichnet werden, wobei das Adsorbens die Rolle des Katalysators spielt. Außer der- wesentlichen Vereinfachung der Methode bietet sie den Vorteil, daß die Fällung zu einer ausgesprochen zeitbedingten Operation wird: nur dem am raschesten und leichtesten ausfallenden Stoff gelingt sie, da alle eventuell langsamer ausfallenden Stoffe bereits vor ihrer Fällung am Silicagel fest gebunden sind. Die Adsorptionsfällung ist deshalb spezifischer als die konventionellen Fällungsmethoden. Da das Zurückbleiben geringer Mengen Ba-Preguandiol in kristalliner Form im Innern der Poren des Silicagels nicht zu verhindern ist, ferner ein weiterer Teil einfach am Silicagel ohne andere Umsetzungen adsorbiert bleibt und ein anderer Teil noch im Extrakt gelöst enthalten ist, ergibt sich ein gewisser Verlust an Pregnandiol im Endresultat, der wiederum als Anteil am Gesamtschwellenwert zu betrachten ist. The most important and the most improving of the procedure as well The shortening operation is adsorption precipitation. It can be used as a catalytic precipitation with the adsorbent playing the role of the catalyst. Except the essential simplification of the method, it offers the advantage that the precipitation becomes a decidedly time-related operation: only the quickest and easiest It succeeds in precipitating material, as all materials which may precipitate more slowly are already firmly bound to the silica gel before they are precipitated. Adsorption precipitation is therefore more specific than conventional precipitation methods. As the lagging behind small amounts of Ba-Preguandiol in crystalline form inside the pores of the silica gel cannot be prevented, furthermore another part simply on silica gel without others Reactions remains adsorbed and another part is still contained in the extract as a solution there is some loss of pregnanediol in the end result, which in turn is to be regarded as a proportion of the overall threshold value.

Die Zugabe von n/1000-HCl und Gasolin nach erfolgter Fällung zum Extrakt dient zur Beschleunigung der Absetzung und zur Vermeidung der Adsorption von Verunreinigungen am Präzipitat. Durch die Ausziehung des bei der Glukuronsäurereaktion nach Tollens gebildeten Farbstoffes mittels Benzol oder seiner Homologen an Stelle von Äther wird der Test spezifischer. Durch die Grünfärbung des Benzols werden schwach positive Befunde vermieden, indem jede nur schwache Rotfärbung durch die Komplementärfarbe Grün überdeckt wird. Infolgedessen sind jene physiologischen Minimaiwerte an Pregnandiol, welche ihre Ursache in der Umwandlung des Desoxycorticosterons in Progesteron, in einer präovulativen ovariellen Progesteronsekretion und in einer eventuell ungenügenden »normalen« Gelbkörperaktivität haben, nicht feststellbar. Diese Grünfärbung soll als wichtigster Teil des Gesamtschwellenwertes dessen genaue Einstellung ermöglichen. Die gleiche Wirkung wie durch die verschiedenen aufgeführten Einzelstufen des Schwellenwertes könnte durch Reduktion des anfänglich verwendeten Volumens Körperflüssigkeit der Frau bzw. The addition of n / 1000-HCl and gasoline after the precipitation to the Extract is used to accelerate sedimentation and avoid adsorption of impurities on the precipitate. By pulling out the in the glucuronic acid reaction after Tollens formed dye by means of benzene or its homologues in place from ether the test becomes more specific. The green color of the benzene will make it faint positive results avoided by only changing the color to a faint red color due to the complementary color Green is covered. As a result, those physiological minimum values of pregnanediol are which its cause in the conversion of deoxycorticosterone into progesterone, in a preovulative ovarian progesterone secretion and possibly insufficient Have "normal" corpus luteum activity, not detectable. This green color is supposed to as the most important part of the overall threshold, enable its precise setting. The same effect as through the various listed individual levels of the threshold value could be achieved by reducing the volume of body fluid initially used Woman or

Urin insofern erzielt werden, als daß dann die gesamthaft durch das Verfahren laufenden Mengen einfach der natürlichen Empfindlichkeitsgrenze der Bestimmungsmethode unterworfen würden. Solche natürlichen Empfindlichkeitsgrenzen besitzen indessen meistens sehr stark »schleichenden« Charakter mit einer breiten Schwankungszone, so daß ein eigentlicher Schwellenwertpunkt auf diese Weise kaum erreichbar wäre.Urine to the extent that the total then through the Procedure running amounts simply exceed the natural limit of sensitivity of the determination method would be subjected. However, such natural limits of sensitivity have mostly very "creeping" character with a wide fluctuation zone, so that an actual threshold value point would hardly be attainable in this way.

Praktische Versuche mit dem neuen, erfindungsgemäßen Verfahren haben eine wesentlich höhere Zuverlässigkeit als bei den besten herkömmlichen Verhütungsmitteln ergeben. Es hat sich gezeigt, daß das Versagerrisiko dieser neuen Art Geburtenregelung um acht- bis zehnmal geringer ist als bei den bisherigen Methoden. Have practical trials with the new method according to the invention much higher reliability than the best conventional contraceptives result. It has been shown that the risk of failure of this new type of birth control is eight to ten times less than with the previous methods.

Claims

Claims: 1. Method for the detection of luteal metabolites in body fluids excreted by the woman for the purpose of making the conception-free Determine days of the woman, characterized in that at least one is in the body fluid occurring luteal metabolism product by associated with a color change Reactions is determined and that measures are taken to only be in presence such amounts of the metabolic product to determine the color change that one powerful corpuscles originate from.

2. The method according to claim 1, characterized in that an in luteal metabolite found in the woman's body fluid Formation of a dye caused to react and the recognizability of this dye is reduced to such an extent that only such quantities of the metabolic product are recognizable that come from a powerful corpus luteum.

3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that a metabolite of progesterone found in woman's urine to form a Dye to the reaction brought and this dye by the presence of a Complementary dye is masked so far that only such amounts of the progesterone metabolite can be seen that come from a powerful corpus luteum.

4. The method according to any one of claims 1 to 3, characterized in that that pregnanediol glucuronide occurring in the urine of women in the presence of a mixture converted by at least two reactants into a dye and this then is extracted from the reaction solution with a solvent, which solvent contains such a large amount of a complementary dye that only such amounts Pregnandiol glucuronide are recognizable, which come from a powerful corpus luteum.

5. The method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that that in the presence of hydrochloric acid and naphthoresorcinol a glucuronic acid reaction of the Pregnanediol glucuronides occurring in the urine of the woman takes place and that the formed red-violet dye is extracted by benzene, which is such a large Amount of a green complementary dye that contains only such amounts of pregnanediol glucuronide can be seen that come from a powerful corpus luteum.

6. Device in the form of an extraction apparatus for implementation of the method according to one of the preceding claims, characterized in that an outlet pipe at the bottom of a container (4) containing the body fluid to be tested (3) is detachably attached, which has a fine outlet opening for the body fluid to be tested has, and that perpendicularly under the outlet opening a tubular container (2) is provided which contains a solvent column and at its lower end communicates with an overflow pipe (2a), and that finally the free opening of the overflow (2a) is so far below the level of the fine outlet opening, that the liquid jet emerging from the fine opening hits the top of the Solvent column reached in the form of a sequence of liquid droplets.

7. Device according to claim 6, characterized in that the dimensions the fine opening of the extraction apparatus are such that they generate a jet of liquid of a maximum of 100 ccm per minute, and that the tubular container (2) has a diameter of not more than 20 mm.

8. diagnostic means for performing the method according to claim 1, characterized in that it is in a total volume of at most 60 ccm at least contains two mixtures of substances, one of which is in contact with at least one in luteal metabolism occurring in a woman's body fluid to a Color change, while the other is appropriate, causes the color change in such a way to inhibit that only those amounts of the metabolic product are recognizable that one powerful corpuscles originate from.

9. Diagnostic agent according to claim 8, characterized in that it Contains at least two mixtures of substances, one of which is in contact with at least one progesterone metabolite found in the woman's urine Formation of one dye leads to it, while the other has a complementary color to it has, which masks this so far by addition to the dye that only such Amounts of metabolism selproducts are recognizable, which are a powerful corpus luteum come from.

Publications Considered: The American Journal of Physiology, 121, H 1, 1938, pp. 98 to 106.