DE19732855A1 - Soya extract containing group B soya saponin(s) - Google Patents

Soya extract containing group B soya saponin(s)

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Abstract

Soya extract contains 0.6-1.5 pts. wt. group B soya saponins per 1 pt. wt. glucoside isoflavones. The content of glucoside isoflavones of the extract is at least 13 wt.%. Also included is an Independent claim for the preparation of the soya extract which comprises: (a) extraction of ripe whole soya beans or oil-free soya flour with aliphatic alcohols or an aqueous mixture of the alcohols; (b) concentration of the extract from stage (a); (c) purification of the concentrated extract of stage (b) from oily and lipophilic substances by treatment with aliphatic hydrocarbons; (d) extraction of the active components with water-immiscible aliphatic alcohols and (e) concentration of the extract from stage (d) and drying.

Description

Die Erfindung betrifft neue Extrakte, erhalten durch Extraktion von reifen, vollständigen Sojabohnen oder aus ölfreiem Sojamehl (Glycine max. (L.) MERRIL, Familie der Leguminosen), ihre Her­ stellung und diese Extrakte enthaltende Formulierungen. Die neuen Extrakte sind durch ihren Gehalt an Isoflavonen und Sapo­ ninen in definierten Mengenverhältnissen gekennzeichnet.The invention relates to new extracts obtained by extraction from ripe, whole soybeans or from oil-free soy flour (Glycine max. (L.) MERRIL, family of legumes), their her position and formulations containing these extracts. The New extracts are due to their content of isoflavones and sapo marked in defined proportions.

Es ist bekannt, daß Soja Saponin- und Isoflavonkomponenten zu­ sätzlich zu Saccharid- und Aminosäurekomponenten sowie Proteine und Mineralsalze in Mengen enthält, die von deren geographischem Ursprung und den Redingungen, unter denen die Pflanze angebaut und geerntet wurde, abhängen.It is known that soybean saponin and isoflavone components in addition to saccharide and amino acid components as well as proteins and contains mineral salts in quantities different from their geographical Origin and the conditions under which the plant is grown and harvested depend.

Die Saponingehalte wurden in drei Klassen in Abhängigkeit von der chemischen Struktur ihrer Triterpenkomponenten unterteilt: Soja-Saponine der Gruppen A, B und E (Okubo K. et al., ACS Symp., Ser. 546, 330, 1994).
Saponin levels were divided into three classes depending on the chemical structure of their triterpene components: soy saponins of groups A, B and E (Okubo K. et al., ACS Symp., Ser. 546, 330, 1994).

Isoflavonkomponenten bestehen aus Glukosidisoflavonen (Daidzin, Genistin und Glycitin), die an die Saccharinkette geknüpfte Acylreste - z. B. Malonsäurereste - enthalten können.
Isoflavone components consist of glucoside isoflavones (daidzin, genistin and glycitin), the acyl residues linked to the saccharin chain - e.g. B. malonic acid residues - may contain.

Entsprechend in den letzten Jahren veröffentlichter biomedizini­ scher Literatur und epidemiologischer Informationen, hauptsäch­ lich in Bezug auf die Bevölkerung im Osten, die sich in großem Umfang mit Nahrungsmitteln auf Soja-Basis ernährt, reduziert die Verwendung dieser Nahrungsmittel in großem Ausmaß den Brustkrebs bei der Frau und den Prostatakrebs beim Mann (A. Nomura, B.E., Henderson J. Lee, American Journal of Clinical Nutrition, 1978, 31, 2020-2025; T. Hirayama in Diet, Nutrition and Cancer, 1986 S. 41-53, Y. Hayashi, M. Nagao, T. Sugimura, S. Takayama, L. Tomatis, L.W. Wattenberg and G.N. Wogan eds. Tokio: Japanese Scientific Society Press; R.K. Severson, A.M.Y. Nomura, J.S. Grove, G.N. Stemmerman, Cancer Research, 1989, 49, 1857-1860) Diese Daten, die noch einer klaren wissenschaftlichen Grundlage entbehren, werden gewöhnlich den Isoflavonaglykonen Genistein, Daidzein und Glycitein, die in den verschiedenen Nahrungsmitteln auf Sojabasis enthalten sind, zugeschrieben.According to biomedizini published in recent years scher literature and epidemiological information, mainly Lich in terms of the population in the east, which is large Scope fed with soy-based foods reduces the Breast cancer is widely used in these foods in women and prostate cancer in men (A. Nomura, B.E., Henderson J. Lee, American Journal of Clinical Nutrition, 1978, 31, 2020-2025; T. Hirayama in Diet, Nutrition and Cancer, 1986 Pp. 41-53, Y. Hayashi, M. Nagao, T. Sugimura, S. Takayama, L. Tomatis, L.W. Wattenberg and G.N. Wogan eds. Tokyo: Japanese Scientific Society Press; R.K. Severson, A.M.Y. Nomura, J.S. Grove, G.N. Stemmerman, Cancer Research, 1989, 49, 1857-1860) These data still have a clear scientific basis usually lack the isoflavone aglycone genistein, Daidzein and glycitein found in various foods are included on a soy basis.

Diese Isoflavone wurden in in-vitro Modellen hinsichtlich ihrer Befähigung mit Proteinkinasen, insbesondere mit Tyrosinki­ nase - Enzyme, die bei der Tumorzellenproliferation eine Rolle zu spielen scheinen - in Wechselwirkung zu treten, untersucht.These isoflavones were tested in in vitro models with regard to their Ability to use protein kinases, especially Tyrosinki nose - enzymes that play a role in tumor cell proliferation seem to play - interact, examined.

Es wurden kürzlich eine Anzahl Versuche durchgeführt, um pharma­ zeutische Präparate auf Basis von Soja-Extrakten für die präven­ tive Behandlung von Krebs herzustellen.A number of attempts have recently been made to pharma Zeutische preparations based on soy extracts for the prevent tive treatment of cancer.

Einige Patente berichten über Präparate von neuen Soja-Extrak­ ten, erhalten durch chemische oder enzymatische Hydrolyse der in Sojabohnen oder -keimen enthaltenen Isoflavonglycoside (Kikkoman Corp. J-08291191; Kikkoman Corp. J-07173148; Kelly GE WO-9323069; Kikkoman Corp. J-0511707566). All diese Patente richten sich ausschließlich auf die Herstellung von Isoflavonen hoher Konzentration und diesen Substanzen werden Antitumoraktivitäten zugeschrieben.Some patents report preparations of new soy extract obtained by chemical or enzymatic hydrolysis of the in Contains isoflavone glycosides (Kikkoman Corp. J-08291191; Kikkoman Corp. J-07173148; Kelly GE WO-9323069; Kikkoman Corp. J-0511707566). Judge all of these patents focus exclusively on the production of higher isoflavones Concentration and these substances become anti-tumor activities attributed to.

Es wurde nun gefunden, daß in Gegensatz zu dem zuvor Beschriebe­ nen Extrakte, welche Glukosidisoflavone und Soja-Saponine der Gruppe B in definierten Verhältnissen enthalten, erheblich wirk­ samer sind als Isoflavone allein.It has now been found that in contrast to the previously described extracts, which are glucoside isoflavones and soy saponins Group B contained in defined proportions, significantly effective are more saturated than isoflavones alone.

Demzufolge betrifft die Erfindung einen Extrakt, der 0,6 bis 1,5 Gewichtsteile, bevorzugt 1 Gewichtsteil, an Soja-Saponinen der Gruppe B je 1 Gewichtsteil an Glukosidisoflavonen enthält.Accordingly, the invention relates to an extract that is 0.6 to 1.5 parts by weight, preferably 1 part by weight, of soy saponins Group B contains 1 part by weight of glucoside isoflavones.

Wie durch HPLC-MS-Analysen gezeigt, besitzen Soja-Saponine der Gruppe B, die auf die Aktivität der Isoflavon-Komponenten einen positiven Einfluß ausüben, die folgenden Strukturen:
As shown by HPLC-MS analyzes, group B soy saponins, which have a positive influence on the activity of the isoflavone components, have the following structures:

Die Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Herstellung des vorstehend definierten Extraktes, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es die folgenden Stufen umfaßt:
The invention further relates to a method for producing the extract defined above, which is characterized in that it comprises the following stages:

  • a) die Extraktion reifer, vollständiger Sojabohnen oder von ölfreiem Sojamehl mit aliphatischen Alkoholen oder einer Mischung dieser Alkohole mit Wasser;a) the extraction of ripe, whole soybeans or of oil free soy flour with aliphatic alcohols or one Mixing these alcohols with water;
  • b) das Konzentrieren des Extrakts von Stufe a)b) concentrating the extract from step a)
  • c) die Reinigung des konzentrierten Extrakts von Stufe b) von öligen und lipophilen Substanzen durch Behandlung mit aliphatischen Kohlenwasserstoffen;c) purification of the concentrated extract from stage b) of oily and lipophilic substances by treatment with aliphatic hydrocarbons;
  • d) die Extraktion der aktiven Komponenten mit mit Wasser nicht mischbaren aliphatischen Alkoholen;d) the extraction of the active components with water immiscible aliphatic alcohols;
  • e) das Konzentrieren des Extrakts von Stufe d) und dessen Trocknung.e) concentrating the extract from stage d) and its Drying.

Insbesondere können die erfindungsgemäßen Extrakte hergestellt werden durch Extrahieren von reifen, vollständigen Sojabohnen oder von ölfreiem Sojamehl, enthaltend Soja-Saponine der Gruppe B und Glucosidisoflavone in dem reziproken Verhältnis von 3 : 2 bis 2 : 3 mit aliphatischen Alkoholen allein oder in Mischung mit Wasser - bevorzugt mit einer Mischung von Ethanol/Wasser, wie 95%igen Ethanol. Nach Konzentrieren des Extrakts und Reinigung von öligen und lipophilen Substanzen durch Behandlung mit ali­ phatischen Kohlenwasserstoffen (z. B. n-Hexan oder n-Heptan) werden die aktiven Komponenten mit mit Wasser nicht mischbaren aliphatischen Alkoholen wie n-Butanol, Isobutanol und Isoamyl­ alkohol, extrahiert. Nach Konzentrieren auf ein vermindertes Volumen wird die organische Phase unter Vakuum getrocknet. Die Erfindung betrifft weiterhin eine Abänderung des vorstehenden Verfahrens, bei der nach Stufe b) oder c) der konzentrierte Alkohol-Extrakt der folgenden Stufe d') unterzogen wird, an die sich die Stufe e) anschließt:
In particular, the extracts according to the invention can be prepared by extracting ripe, complete soybeans or oil-free soy flour, containing soybean saponins from group B and glucosidisoflavones in the reciprocal ratio of 3: 2 to 2: 3 with aliphatic alcohols alone or in a mixture with water. preferably with a mixture of ethanol / water, such as 95% ethanol. After concentrating the extract and purifying oily and lipophilic substances by treatment with aliphatic hydrocarbons (e.g. n-hexane or n-heptane), the active components are mixed with water-immiscible aliphatic alcohols such as n-butanol, isobutanol and isoamyl alcohol , extracted. After concentrating to a reduced volume, the organic phase is dried under vacuum. The invention further relates to a modification of the above process in which, after step b) or c), the concentrated alcohol extract is subjected to the following step d '), which is followed by step e):

  • d') die Adsorption der aktiven Komponenten an einem Adsorp­ tionsharz auf Polystyrolbasis; das Spülen des Harzes mit Wasser; und die Elution der aktiven Bestandteile mit Etha­ nol.d ') the adsorption of the active components on an adsorp polystyrene-based resin; rinsing the resin with Water; and elution of the active ingredients with Etha nol.

Entsprechend dieser Abänderung kann ein typischer Extrakt der Erfindung hergestellt werden durch Adsorption der aktiven Kom­ ponenten (Isoflavone und Saponine), die in dem konzentrierten Alkoholextrakt des pflanzlichen Materials enthalten sind, an einem Adsorptionsharz auf Polystyrolbasis wie Duolite oder jeg­ liches XAD, insbesondere XAD1180 aufgrund von dessen leicht sau­ rem pH; und Elution der Mischung der Isoflavone und der Soja- Saponine der Gruppe B wiederum mit Ethanol nach sorgfältigem Spülen der Harz-Säule mit Wasser zur Entfernung von Salzen und anderen nicht aktiven Komponenten.According to this modification, a typical extract of the Invention are made by adsorbing the active com components (isoflavones and saponins) that are concentrated in the Alcohol extract of the herbal material are included a polystyrene-based adsorption resin such as Duolite or any  Lich XAD, especially XAD1180 due to its slightly clean rem pH; and elution of the mixture of isoflavones and soy Group B saponins again with ethanol after careful Rinse the resin column with water to remove salts and other inactive components.

Der unter diesen Bedingungen erhaltene Extrakt enthält 13 bis 17 Gew.-% Isoflavone und 0,6 bis 1,5 Gewichtsteile Soja-Saponine der Gruppe B, entsprechend der Qualität des eingesetzten pflanz­ lichen Materials je 1 Gewichtsteil Glucosid-Isoflavone. Dieser Extrakt enthält auch eine große Menge an polyphenolischen Sub­ stanzen, die sich als wesentlich für die dem Extrakt innewohnen­ de Aktivität erwiesen.The extract obtained under these conditions contains 13 to 17% by weight of isoflavones and 0.6 to 1.5 parts by weight of soy saponins Group B, according to the quality of the plant used material 1 part by weight of glucoside isoflavones. This Extract also contains a large amount of polyphenolic sub punch that are essential for the extract activity proven.

Eine Ausführungsform des vorstehenden Verfahrens und dessen Abänderung umfaßt die folgenden Stufen:
An embodiment of the above method and its modification comprises the following stages:

  • f) das Suspendieren des Extrakts von Stufe e) in einer Mi­ schung von einem mit Wasser mischbaren Alkohol und Wasser und das Verdünnen mit einem mit Wasser nicht mischbaren aprotischen Lösungsmittel;f) suspending the extract from stage e) in a wed creation of a water-miscible alcohol and water and diluting with a water-immiscible aprotic solvent;
  • g) das Erhitzen der Mischung von Stufe f) zur Vervollstän­ digung der Auflösung und das Belassen bei Raumtemperatur;g) heating the mixture from step f) to completion resolution and leaving at room temperature;
  • h) das Sammeln der ausgefallenen Soja-Saponine der Gruppe B durch Filtration; h) collecting the group's failed soy saponins B by filtration;
  • i) die Abtrennung der organischen Phase von der Wasserpha­ se; und das Konzentrieren der organischen Phase und Trock­ nen zur Erzielung der Isoflavon-Komponenten; undi) the separation of the organic phase from the water phase se; and concentrating the organic phase and drying nen to achieve the isoflavone components; and
  • j) das Mischen der Saponine von Stufe h) und der Isoflavone von Stufe i), um den Extrakt zu bilden.j) mixing the saponins from step h) and the isoflavones from stage i) to form the extract.

Dementsprechend können die erfindungsgemäßen Extrakte bevorzugt auch solche, die durch einen sehr hohen Gehalt an Glucosidiso­ flavonen und Soja-Saponinen der Gruppe B in dem vorstehend be­ schriebenen Verhältnis gekennzeichnet sind, auch hergestellt werden aus den entsprechend dem vorstehend beschriebenen Ver­ fahren bzw. dessen Abänderung erhaltenen Extrakt. Hierzu kann wie folgt vorgegangen werden: Der besagte Extrakt wird in einem mit Wasser mischbaren Alkohol, wie Ethanol oder Methanol, mit einem Wassergehalt von 10 bis 50 Volumen% suspendiert und mit einem mit Wasser nicht mischbaren aprotischen Lösungsmittel, wie Methylenchlorid oder Ethylacetat, verdünnt. Die erhaltene hete­ rogene Mischung wird zur Vervollständigung der Auflösung des Extrakts erhitzt und bei Raumtemperatur belassen, damit die Soja-Saponine der Gruppe B ausfallen können. Die eine Reinheit von über 90% aufweisenden Saponine werden durch Filtrieren ge­ sammelt. Die Isoflavon-Komponenten, die eine Reinheit von mehr als 80% besitzen, werden aus der wäßrigen Mutterlauge durch Abtrennen der organischen Phase und Eindampfen und Trocknung der letztgenannten erhalten. Die Isoflavone und Saponine können dann gemischt werden, um einen Extrakt mit einem höchstmöglichen Gehalt an Glucosidisoflavonen und mit einem Gehalt an Soja-Sapo­ ninen der Gruppe B von 0,6 bis 1,5 Gewichtsteilen je 1 Gewichts­ teil Glucosidisoflavone zu erhalten.Accordingly, the extracts according to the invention can be preferred even those with a very high content of glucosidiso Group B flavones and soy saponins in the above be written relationship, are also produced are derived from the Ver drive or its modification received extract. This can proceed as follows: The said extract is in one water-miscible alcohol, such as ethanol or methanol a water content of 10 to 50% by volume and suspended with an water-immiscible aprotic solvent, such as Methylene chloride or ethyl acetate, diluted. The received hete rogene mixture is used to complete the dissolution of the Extracts heated and left at room temperature so that the Group B soy saponins may fail. The one purity of over 90% saponins are filtered collects. The isoflavone components that have a purity of more than 80%, are from the aqueous mother liquor Separate the organic phase and evaporate and dry the get the latter. The isoflavones and saponins can then be mixed to get an extract with the highest possible Contains glucoside isoflavones and contains soy sapo  ninen of group B from 0.6 to 1.5 parts by weight per 1 weight to obtain part of glucoside isoflavones.

Bevorzugte Bedingungen für die Durchführung der einzelnen Ver­ fahrensstufen des erfindungsgemäßen Verfahrens sind die folgen­ den. Hierbei sind die Maßeinheiten für Volumenteile l (Liter) und diejenigen für Gewichtsteile kg (Kilogramm).Preferred conditions for the implementation of each Ver The following are stages of the method according to the invention the. Here are the units of measurement for parts by volume l (liters) and those for parts by weight of kg (kilograms).

Stufe a: Die Extraktion des pflanzlichen Materials wird bevor­ zugt mit 12 bis 17 Volumina Lösungsmittel je 1 Teil (Gewicht) Biomasse durchgeführt. Die Extraktionstemperatur ist zweckmäßig höher als 55°C. Jede Extraktion wird zweckmäßigerweise innerhalb von weniger als 4 Stunden durchgeführt. Geeignete Lösungsmittel außer Ethanol sind unter anderem Methanol, Propanol und Isopro­ panol. Diese Lösungsmittel können bis zu 10% Wasser enthalten.Stage a: The extraction of the plant material is going on add 12 to 17 volumes of solvent to 1 part (weight) Biomass carried out. The extraction temperature is appropriate higher than 55 ° C. Any extraction is conveniently within performed in less than 4 hours. Suitable solvents In addition to ethanol, methanol, propanol and isopro are among others panol. These solvents can contain up to 10% water.

Stufe b: Die Konzentrierung des Extrakts erfolgt zweckmäßig bei einer Temperatur unterhalb 50°C unter Vakuum. Der Extrakt wird zweckmäßig bis zu einem Alkoholgehalt von 65 bis 75% eingeengt.Stage b: The extract is expediently concentrated at a temperature below 50 ° C under vacuum. The extract will expediently concentrated to an alcohol content of 65 to 75%.

Stufe c: Die Reinigung wird zweckmäßig mit 0,3 bis 0,6 Volumina an aliphatischen Kohlenwasserstoffen je 1 Teil (Gewicht) pflanz­ liches Material durchgeführt. Eine geeignete Vorgehensweise ist diejenige der Extraktion der öligen und lipophilen Substanzen.Step c: The cleaning is expedient with 0.3 to 0.6 volumes Plant 1 part (weight) of aliphatic hydrocarbons material carried out. A suitable course of action is that of extraction of the oily and lipophilic substances.

Stufe d: Die Extraktion der Wirkstoffe erfolgt zweckmäßig mit 0,2 bis 0,4 Volumina an alkoholischem mit Wasser nicht misch­ barem Lösungsmittel je Extraktion, berechnet auf 1 Teil (Ge­ wicht) an pflanzlichem Material; vorzugsweise werden drei Ex­ traktionen durchgeführt.Stage d: The extraction of the active ingredients is advantageously carried out with 0.2 to 0.4 volumes of alcoholic mixed with water solvent per extraction, calculated on 1 part (Ge  importance) of vegetable material; preferably three ex tractions carried out.

Stufe e: Die Konzentrierung des Extrakts von Stufe d erfolgt zweckmäßig bei einer Temperatur unterhalb 50°C unter Vakuum.Stage e: The extract from stage d is concentrated Appropriately at a temperature below 50 ° C under vacuum.

Stufe f: Der Extrakt von Stufe e) wird zweckmäßig in 5 bis 10 Volumina (je 1 Teil Extrakt) an wasserlöslichem Alkohol mit einem Alkohol-Wasserverhältnis im Bereich von 2 : 8 bis 3 : 7 Vol/Vol Extrakt suspendiert. Das aprotische, mit Wasser nicht misch­ bare Lösungsmittel wird zweckmäßig in einer Menge von 2 bis 5 Volumina, bezogen auf 1 Teil (Gewicht) des Extrakts von Stufe e verwendet.Stage f: The extract from stage e) is expediently in 5 to 10 Volumes (1 part extract each) of water-soluble alcohol with an alcohol-water ratio in the range of 2: 8 to 3: 7 vol / vol Extract suspended. The aprotic, not mixed with water bare solvent is appropriate in an amount of 2 to 5 Volumes based on 1 part (weight) of the extract from stage e used.

Stufe g: Die Mischung wird, um eine vollständige Auflösung zu erreichen, zweckmäßig erhitzt und unter Rückfluß gehalten. An­ schließend hält man die Mischung bevorzugt 15 bis 24 h bei Raum­ temperatur.Stage g: The mixture is to complete dissolution reach, appropriately heated and kept under reflux. On finally, the mixture is preferably kept at room for 15 to 24 hours temperature.

Stufe i: Das Eindampfen der organischen Phase erfolgt zweckmäßig bei einer Temperatur von geringer als 30°C unter Vakuum.Stage i: The organic phase is advantageously evaporated at a temperature of less than 30 ° C under vacuum.

Stufe j: Vorzugsweise bereitet man aus den Saponinen von Stufe h und den Glucosidisoflavonen von Stufe g eine alkoholische Lö­ sung, die die Saponine und Glucosidisoflavone in einem Verhält­ nis von 1 : 1 enthält, welche dann zweckmäßig bei einer Temperatur unterhalb 50°C unter Vakuum zur Trockne eingeengt wird. Stage j: Preferably, one prepares from the saponins of stage h and the glucoside isoflavones of level g an alcoholic solution solution containing the saponins and glucosidisoflavones in a ratio contains 1: 1, which then expediently at a temperature is evaporated to dryness below 50 ° C under vacuum.  

Die Mengen der Isoflavone und der Soja-Saponine der Gruppe B werden durch HPLC-Analyse mit Hilfe einer Supelco-Sil LC-ABZ Säule (250 mm × 4,6 mm), 5 µm, und eines ternären Elutionsmit­ tels mit einem Gradienten, bestehend aus A) H2O (CF3COOH 0,01%), B) Acetonitril (CF3COOH 0,01%) und C) Methylalkohol (CF3COOH 0,01%), ermittelt. Die einzelnen Komponenten können durch Massenspektrometrie kombiniert mit HPLC über eine Thermo­ spray-Grenzfläche identifiziert und charakterisiert werden.The amounts of the group B isoflavones and soy saponins are determined by HPLC analysis using a Supelco-Sil LC-ABZ column (250 mm × 4.6 mm), 5 μm, and a ternary eluent with a gradient from A) H 2 O (CF 3 COOH 0.01%), B) acetonitrile (CF 3 COOH 0.01%) and C) methyl alcohol (CF 3 COOH 0.01%). The individual components can be identified and characterized by mass spectrometry combined with HPLC over a thermal spray interface.

Die erfindungsgemäßen Extrakte besitzen eine ausgeprägte anti­ proliferative Aktivität. Tabelle 1 gibt die antiproliferative Aktivität gegenüber einer Ovarialtumor-Zellinie (OVCA 433) wie­ der.The extracts according to the invention have a pronounced anti proliferative activity. Table 1 gives the antiproliferative Activity against an ovarian tumor cell line (OVCA 433) such as the.

Tabelle 1 Table 1

Antiproliferative Aktivität von Soja-Extrakten gegen­ über einer Ovarialtumor-Zellinie (OVCA 433) in vitro Antiproliferative activity of soybean extracts against an ovarian tumor cell line (OVCA 433) in vitro

Die Zellen wurden in einer Einschicht-Kultur auf einem Minimum an essentiellem Medium, das versetzt war mit Kalbserum und mit 200 Einheiten/ml Penicillin, um das Medium steril zu halten, gezüchtet. Für die Reproduzierbarkeit des Tests wurden die Zel­ len jede Woche trypsiniert und auf Platten in einer Dichte von 8 × 104 Zellen/ml gegeben und bei 37°C unter Luftatmosphäre mit einem Gehalt an 5% CO2 und Feuchtigkeit inkubiert. Zur Bewertung der Aktivität der Verbindungen wurden die Zellen in Vertiefungen (Falcon 3046, Becton Dickinson NY) in einer Konzentration von 1 × 105/ml in der minimalen Substratmenge gegeben. Nach 24 h wurde das Substrat durch frisches Substrat ersetzt und die in absolu­ tem Ethanol gelösten Verbindungen wurden zugesetzt. Kontrollen wurden analog mit dem Träger in Abwesenheit des zu testenden Wirkstoffs behandelt. Die vorstehend beschriebene Behandlung wurde in Intervallen von 24 Stunden während einer Testdauer von 72 h wiederholt. Die Inhibierung der Zellproliferation wurde durch direktes Auszählen der Zellen bewertet, wobei man das Wachstum der Kontrollen gegenüber demjenigen der "behandelten" Tests verglich. Wie gezeigt, besitzen die erfindungsgemäßen Extrakte eine antiproliferative Aktivität, die stärker ist als die Summe der antiproliferativen Aktivität ihrer Komponenten (synergistische Wirkung). Die erfindungsgemäßen Verbindungen inhibierten in-vivo die Zellproliferation, wie durch Messung der Größe von in nackte athymische Mäuse verpflanzten Tumoren, ent­ sprechend den literaturbekannten üblichen Bedingungen nachgewie­ sen wurde. Die Behandlung der Tiere mit Dosen im Bereich von 10 bis 500 mg/kg führte zu einer ausgeprägten Rückbildung der un­ tersuchten Tumore bis zu ihrem Verschwinden bei einem hohen Prozentanteil der Individuen.The cells were grown in a single layer culture on a minimum of essential medium supplemented with calf serum and with 200 units / ml penicillin to keep the medium sterile. For the reproducibility of the test, the cells were trypsinized every week and placed on plates at a density of 8 × 10 4 cells / ml and incubated at 37 ° C. in an air atmosphere containing 5% CO 2 and moisture. To evaluate the activity of the compounds, the cells were placed in wells (Falcon 3046, Becton Dickinson NY) in a concentration of 1 × 10 5 / ml in the minimum amount of substrate. After 24 h the substrate was replaced by fresh substrate and the compounds dissolved in absolute ethanol were added. Controls were treated analogously with the carrier in the absence of the active ingredient to be tested. The treatment described above was repeated at 24 hour intervals over a 72 hour test period. The inhibition of cell proliferation was assessed by counting the cells directly, comparing the growth of the controls with that of the "treated" tests. As shown, the extracts according to the invention have an antiproliferative activity which is greater than the sum of the antiproliferative activity of their components (synergistic effect). The compounds according to the invention inhibited cell proliferation in vivo, as was demonstrated by measuring the size of tumors transplanted into naked athymic mice, in accordance with the usual conditions known from the literature. Treatment of the animals with doses in the range from 10 to 500 mg / kg led to a marked regression of the examined tumors until they disappeared in a high percentage of the individuals.

Die Erfindung betrifft daher auch eine pharmazeutische Zusammen­ setzung, die als aktive Komponente den vorstehend definierten Extrakt enthält. Insbesondere betrifft die Erfindung eine diesen Extrakt enthaltende pharmazeutische Zusammensetzung für die Prävention oder die Behandlung von Krebs. Vor allem betrifft die Erfindung eine diesen Extrakt enthaltende pharmazeutische Zu­ sammensetzung für die Prävention und Behandlung von Brustkrebs bei der Frau und von Prostatakrebs beim Mann.The invention therefore also relates to a pharmaceutical combination setting that as the active component to those defined above Contains extract. In particular, the invention relates to them Pharmaceutical composition containing extract for the Prevention or treatment of cancer. Above all concerns Invention a pharmaceutical Zu containing this extract composition for the prevention and treatment of breast cancer in women and prostate cancer in men.

Die erfindungsgemäßen Produkte bzw. Extrakte können in geeigne­ ter Weise in Tabletten, Weich- oder Hartgelatinekapseln, granu­ laren Pulvern zur Herstellung von verwendungsbereiten Lösungen oder Fluids bzw. Flüssigkeiten, die mit ihrer Löslichkeit kom­ patibel sind, formuliert werden. Die Dosen des erfindungsgemäßen Extrakts liegen im Bereich von 30 mg bis 500 mg bei ein- oder mehrmaliger Verabreichung pro Tag, bevorzugt bei 200 mg bei zweimaliger Verabreichung pro Tag. Die zweckmäßige Verabrei­ chungsform ist die orale.The products or extracts according to the invention can be suitable ter way in tablets, soft or hard gelatin capsules, granu laren powders for the production of ready-to-use solutions or fluids or liquids that come with their solubility are tolerable, be formulated. The cans of the invention Extracts range from 30 mg to 500 mg at or repeated administration per day, preferably at 200 mg twice a day. Appropriate administration the oral form.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.The following examples illustrate the invention.

Beispiel 1example 1 Herstellung von Soja-Extrakt mit einem Isoflavon­ gehalt von 15 Gew.-% und einem Verhältnis Glucosidisoflavone/So­ ja-Saponine der Gruppe B von 1 : 1,5 durch Reinigung mit Lö­ sungsmittelnProduction of soy extract with an isoflavone content of 15 wt .-% and a ratio of glucosidisoflavones / So ja-saponins of group B of 1: 1.5 by cleaning with Lö solvents

10 kg von Öl befreites Sojamehl, enthaltend 0,2% Glucosidiso­ flavone und 0,3% Soja-Saponine der Gruppe B, werden fünfmal mit 30 l 95%igem Ethylalkohol am Rückfluß gekocht. Die Alkoholex­ trakte werden gemischt und im Vakuum bis auf 5 l eingeengt. Man verdünnt mit 1,5 l Wasser und extrahiert viermal mit 5 l n-He­ xan. Die Hexanphase wird verworfen und die konzentrierte Alko­ holphase viermal mit 2,5 l n-Butanol extrahiert. Die organische Phase wird konzentriert und unter Vakuum getrocknet. Man erhält 133 g Extrakt mit einem Isoflavongehalt von 15 Gew.-% und einem Gehalt an Soja-Saponinen der Gruppe B von 22,5 Gew.-%.10 kg of oil-free soy flour containing 0.2% glucosidiso flavone and 0.3% soy saponins of group B, are used five times 30 l of 95% ethyl alcohol boiled under reflux. The alcoholex  tracts are mixed and concentrated in vacuo to 5 l. Man diluted with 1.5 l water and extracted four times with 5 l n-He xan. The hexane phase is discarded and the concentrated alcohol extraction phase extracted four times with 2.5 l of n-butanol. The organic Phase is concentrated and dried under vacuum. You get 133 g extract with an isoflavone content of 15 wt .-% and one Group B soy saponins content of 22.5% by weight.

Ein HPLC-Diagramm eines nach dem Verfahren dieses Beispiels erhaltenen Extrakts wird in Fig. 1 gezeigt.An HPLC diagram of an extract obtained by the method of this example is shown in FIG. 1.

Beispiel 2Example 2 Herstellung eines Soja-Extrakts mit einem Isofla­ vongehalt von 15 Gew.-% und einem Verhältnis Glucosidisoflavo­ ne/Soja-Saponine der Gruppe B von 1 : 1,5 durch Reinigung an Poly­ styrolharzProduction of a soy extract with an isofla content of 15 wt .-% and a ratio of glucoside isoflavo ne / soy saponins of group B of 1: 1.5 by purification on poly styrene resin

Das in Beispiel 1 hergestellte wäßrige Konzentrat wird nicht mit n-Butanol extrahiert, sondern mit polyethoxyliertem Rhizi­ nusöl (Cremophor®) behandelt, um die harzartigen Rückstände aus der Einengung der Alkoholphase aufzulösen. Man bringt es dann in einer Säule auf XAD1180 Harz, suspendiert in gereinigtem Wasser (5 l) auf. Die Säule wird bis zur vollständigen Entfernung von Salzen, Zuckern und oberflächenaktiven Mitteln mit Wasser ge­ spült und dann mit etwa 10 l 95%igem Ethylalkohol eluiert. Nach Konzentrieren und Trocknen des Ethanol-Eluats erhält man 130 g Extrakt mit der gleichen Zusammensetzung wie derjenigen des in Beispiel 1 erhaltenen Extrakts. The aqueous concentrate produced in Example 1 is not extracted with n-butanol, but with polyethoxylated Rhizi Nut oil (Cremophor®) treated to remove the resinous residues of the narrowing of the alcohol phase. Then you bring it in a column on XAD1180 resin suspended in purified water (5 l). The column is removed until the complete removal of Salt, sugar and surface active agents with water rinsed and then eluted with about 10 l of 95% ethyl alcohol. To Concentrating and drying the ethanol eluate gives 130 g Extract with the same composition as that of in Example 1 extract obtained.  

Beispiel 3Example 3 Herstellung eines Soja-Extrakts mit einem Isofla­ von-Gehalt von 43 Gew.-% und einem Verhältnis Glucosidisofla­ vone/Soja-Saponine der Gruppe B von 1 : 1Production of a soy extract with an isofla content of 43% by weight and a ratio of glucoside isofla vone / soy saponins of group B of 1: 1

Man suspendiert 200 g des in Beispiel 1 oder 2 erhaltenen Ex­ trakts in 1 l wäßrigem 20%igen Ethylalkohol und verdünnt mit 0,5 l Ethylacetat. Die Suspension wird einem Gegenstrom-Erhitzen unter starkem Rühren bis zur vollständigen Auflösung unterzogen und dann während einer Nacht belassen. Die ausgefallenen Saponi­ ne (38 g, Reinheit 93%) werden durch Filtrieren gewonnen und die Ethylacetat und Wasser enthaltende wäßrige Mutterlauge wird abgetrennt. Die organische Phase wird unter Vakuum eingeengt und getrocknet. Der Isoflavon-Rückstand - 37 g mit einer Reinheit von 81% - wird in 1 l Ethylalkohol gelöst und mit 32 g kristal­ lisierten Saponinen versetzt, um zu einem Produkt zu gelangen, das Isoflavone und Saponine in einem Gewichtsverhältnis von 1 : 1 enthält. Die Alkohollösung wird unter Vakuum zur Trockne einge­ engt und ergibt 69 g Extrakt mit einem Gehalt an 43 Gew.-% Gluco­ sidisoflavonen und 43 Gew.-% Soja-Saponinen der Gruppe B.200 g of the Ex obtained in Example 1 or 2 are suspended tracts in 1 l aqueous 20% ethyl alcohol and diluted with 0.5 l of ethyl acetate. The suspension is subjected to countercurrent heating subjected to vigorous stirring until completely dissolved and then left for one night. The fancy saponi ne (38 g, purity 93%) are obtained by filtration and the Aqueous mother liquor containing ethyl acetate and water separated. The organic phase is concentrated in vacuo and dried. The isoflavone residue - 37 g with a purity of 81% - is dissolved in 1 l of ethyl alcohol and crystallized with 32 g added saponins to get to a product the isoflavones and saponins in a weight ratio of 1: 1 contains. The alcohol solution is dried to dryness under vacuum constricts and gives 69 g of extract containing 43% by weight of gluco sidisoflavones and 43% by weight of group B soy saponins

Beispiel 4Example 4 Herstellung von Soja-Extrakt enthaltenden HartgelatinekapselnProduction of hard gelatin capsules containing soy extract

Soja-Extrakt hergestellt entsprechend Beispiel 1Soybean extract prepared according to example 1 200,0 mg200.0 mg LactoseLactose 67,5 mg67.5 mg Mikrokristalline CelluloseMicrocrystalline cellulose 22,5 mg22.5 mg Kolloidales SiliciumdioxidColloidal silica 3,0 mg3.0 mg Croscarmellose-natrium (vernetztes Polymeres von Carboxymethylcellulose-natrium)Croscarmellose sodium (cross-linked polymer of carboxymethyl cellulose sodium) 21,0 mg21.0 mg TalkTalk 8,0 mg8.0 mg MagnesiumstearatMagnesium stearate 3,0 mg3.0 mg

Beispiel 5Example 5 Herstellung von Soja-Extrakt enthaltenden TablettenProduction of tablets containing soy extract

Soja-Extrakt hergestellt gemäß Beispiel 3Soybean extract prepared according to Example 3 400,0 mg400.0 mg Soja-PolysaccharideSoy polysaccharides 155,5 mg155.5 mg Mikrokristalline CelluloseMicrocrystalline cellulose 57,0 mg57.0 mg HydroxypropylmethylcelluloseHydroxypropylmethyl cellulose 12,0 mg12.0 mg Hydriertes pflanzliches ÖlHydrogenated vegetable oil 19,5 mg19.5 mg Kolloidales SiliciumdioxidColloidal silica 3,0 mg3.0 mg MagnesiumstearatMagnesium stearate 3,0 mg3.0 mg

Claims (9)

1. Soja-Extrakt, gekennzeichnet durch einen Gehalt an 0,6 bis 1,5 Gewichtsteilen Soja-Saponinen der Gruppe B je 1 Gewichtsteil Glucosidisoflavone.1. Soy extract, characterized by a content of 0.6 to 1.5 parts by weight of group B soy saponins, 1 part by weight of glucoside isoflavones. 2. Soja-Extrakt gemäß Anspruch 1, gekennzeichnet durch einen Gehalt an 1 Gewichtsteil Soja-Saponine der Gruppe B je 1 Ge­ wichtsteil Glucosidisoflavone.2. Soybean extract according to claim 1, characterized by a Content of 1 part by weight of soy saponins of group B per 1 Ge most of the glucoside isoflavones. 3. Verfahren zur Herstellung eines Extrakts gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es die folgenden Stufen umfaßt:
  • a) die Extraktion von reifen, vollständigen Sojabohnen oder von ölfreiem Sojamehl mit aliphatischen Alkoholen oder einer Mischung dieser Alkohole mit Wasser;
  • b) das Konzentrieren des Extrakts von Stufe a)
  • c) das Reinigen des konzentrierten Extrakts von Stufe b) von öligen und lipophilen Substanzen durch Behandlung mit aliphatischen Kohlenwasserstoffen;
  • d) das Extrahieren der aktiven Komponenten mit mit Wasser nicht mischbaren aliphatischen Alkoholen;
  • e) das Konzentrieren des Extrakts von Stufe d) und dessen Trocknung.
3. A process for producing an extract according to claim 1 or 2, characterized in that it comprises the following stages:
  • a) the extraction of ripe, whole soybeans or oil-free soy flour with aliphatic alcohols or a mixture of these alcohols with water;
  • b) concentrating the extract from step a)
  • c) cleaning the concentrated extract from step b) of oily and lipophilic substances by treatment with aliphatic hydrocarbons;
  • d) extracting the active components with water-immiscible aliphatic alcohols;
  • e) concentrating the extract from stage d) and drying it.
4. Abänderung des Verfahrens gemäß Anspruch 3, worin nach Stufe b) oder Stufe c) der konzentrierte Alkoholextrakt der folgenden Stufe d') unterzogen wird, an die sich Stufe e) anschließt
  • d') die Adsorption der aktiven Komponenten an einem Adsorp­ tionsharz auf Polystyrolbasis; das Spülen des Harzes mit Wasser; und die Elution der aktiven Bestandteile mit Etha­ nol.
4. Modification of the method according to claim 3, wherein after stage b) or stage c) the concentrated alcohol extract is subjected to the following stage d '), which is followed by stage e)
  • d ') the adsorption of the active components on an adsorption resin based on polystyrene; rinsing the resin with water; and elution of the active ingredients with ethanol.
5. Verfahren gemäß Anspruch 3 oder 4, umfassend die folgenden zusätzlichen Stufen:
  • f) das Suspendieren des Extrakts von Stufe e) in einer Mischung von einem mit Wasser mischbaren Alkohol und von Wasser und das Verdünnen mit einem mit Wasser nicht mischbaren aprotischen Lösungsmittel;
  • g) das Erhitzen der Mischung von Stufe f) zur vollständigen Auflösung und das Belassen bei Raumtemperatur;
  • h) das Sammeln der ausgefallenen Soja-Saponine der Gruppe B durch Filtrieren;
  • i) das Abtrennen der organischen Phase von der Wasserphase; und das Konzentrieren der organischen Phase und Trocknen, um die Isoflavon-Komponenten zu erzielen; und
  • j) das Mischen der Saponine von Stufe h) und der Isoflavone von Stufe i) zur Bildung des Extrakts.
5. The method according to claim 3 or 4, comprising the following additional stages:
  • f) suspending the extract from step e) in a mixture of a water-miscible alcohol and water and diluting it with a water-immiscible aprotic solvent;
  • g) heating the mixture from step f) to complete dissolution and leaving at room temperature;
  • h) collecting the failed Group B soy saponins by filtration;
  • i) separating the organic phase from the water phase; and concentrating the organic phase and drying to obtain the isoflavone components; and
  • j) mixing the saponins from stage h) and the isoflavones from stage i) to form the extract.
6. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend als wirksame Kom­ ponente einen Extrakt gemäß Anspruch 1 oder 2.6. Pharmaceutical composition containing as an effective com component an extract according to claim 1 or 2. 7. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 6 für die Prävention oder Behandlung von Krebs.7. Pharmaceutical composition according to claim 6 for the Prevention or treatment of cancer. 8. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 6 oder 7 für die Prävention oder Behandlung von Brustkrebs bei der Frau.8. Pharmaceutical composition according to claim 6 or 7 for the prevention or treatment of breast cancer in women. 9. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 6 oder 7 für die Prävention oder Behandlung von Prostatakrebs beim Mann.9. Pharmaceutical composition according to claim 6 or 7 for the prevention or treatment of prostate cancer in men.
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