DE2203377C3 - Wasserunlösliches, für einen Agglutinationstest bestimmtes immunologisches Diagnose-Reagenz - Google Patents

Wasserunlösliches, für einen Agglutinationstest bestimmtes immunologisches Diagnose-Reagenz

Info

Publication number
DE2203377C3
DE2203377C3 DE2203377A DE2203377A DE2203377C3 DE 2203377 C3 DE2203377 C3 DE 2203377C3 DE 2203377 A DE2203377 A DE 2203377A DE 2203377 A DE2203377 A DE 2203377A DE 2203377 C3 DE2203377 C3 DE 2203377C3
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
serologically
water
human
insoluble
latex
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired
Application number
DE2203377A
Other languages
English (en)
Other versions
DE2203377B2 (de
DE2203377A1 (de
Inventor
Hans Jacob New York N.Y. Hager (V.St.A.)
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of DE2203377A1 publication Critical patent/DE2203377A1/de
Publication of DE2203377B2 publication Critical patent/DE2203377B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2203377C3 publication Critical patent/DE2203377C3/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/815—Test for named compound or class of compounds
    • Y10S436/817—Steroids or hormones
    • Y10S436/818—Human chorionic gonadotropin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/868—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, or immunotolerance

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein wasserunlösliches, immunologisches Diagnose-Reagenz mit einem etwa dem von Wasser entsprechenden spezifischen Gewicht in Form diskreter Teilchen eines serologisch inerten Trägers, an den über Amidbindungen als serologisch bestimmendes Material menschliches Choriongonadotropin, menschliches Albumin oder denaturiertes Gammaglobulin gebunden ist.
Ferner betrifft die Erfindung die Verwendung dieser diagnostischen Reagenzien zum Nachweis von serologisch bestimmenden Materialien in menschlichen oder tierischen Korperflüssigkeiten insbesondere in Zusammenhang mit Schwangerschaft, zystischer Fibröse oder rheumaahnlicher Arthritis.
Die Diagnose von pathologischen oder anderen Zuständen in Menschen und Tieren wird oft unter Anwendung von immunologischen Prinzipien durchgeführt. Diese Prinzipien werden /um Nachweis von Antikörpern oder Antigenen in den Körperflüssigkeiten des Lebewesens bcnüt/t. Fm Antigen ist eint· fremde Substanz, welche, wenn sie dem Lebewesen appliziertwirdjdic Bildung vnngcvvissen löslichen und als Antikörper bezeichneten Substanzen bewirkt, irgendeine Substanz wie z. B1 ein Protein, welche normal nicht in einem bestimmten Lebewesen vorhanden ist, kann die Bildung von Antikörpern verursachen, wenn sie dem Lebewesen unter geeigneten Bedingungen applizicrt wird.
Nach ihrer Bildung reagieren die Antikörper mil den Antigenen.
Immunologische 'röstverfahren beruhen auf der Antigen-Antikörper-Realction, weiche sich gewöhnlich durch Unlöslichkeit oder Agglutination manifestiert.
Im allgemeinen wird die Anwesenheit eines Antigens oder eines Antikörpers dadurch bestätigt oder bestimmt, daß man den entsprechenden Antikörper oder das entsprechende Antigen einer Körperflüssigkeit des Lebewesens, meistens Urin, Blutserum oder einen speziell behandelten Blutextrakt, zugibt. Es
i» können jedoch auch andere Körperflüssigkeiten verwendet werden. Man stellt die Anwesenheit des Antikörpers oder des Antigens in der Körperflüssigkeit des Lebewesens fest, wenn sich ein unlöslicher Antigen-AntikörperkompIex bildet.
ι "i Weil einige Komplexe sich nur sehr langsam bilden und sehr geringe Teilchengrößen besitzen ist es notwendig Träger zu benützen, um sie sichtbar zu machen. Als Träger werden unter anderem Erythrocyten von Mensch und Schaf, Bakterien, Bentonit, Latex-
-ΊΙ teilchen wie z. B. Polystyrol, anionische phenoiische Harze und fein verteilte diazotierte Aminocellulose verwendet.
Die bekannten Träger, weiche die serologisch bestimmenden Materialien physikalisch binden, sind in
.'"> ihren Anwendungsmöglichkeiten und ihrer Brauchbarkeit für immunologische Diagnoseverfahren beschränkt, weil sie eine Anzahl Nachteile aufweisen. Einige der wichtigsten Nachteile sind in vielen Fällen ein Mangel an Empfindlichkeit und oft eine geringe
»ι Stabilität. Diese Mangel sind vor allem dadurch verursacht, daß, wenn Latexteilchen mit dem serologisch reaktiven Material überzogen sind, sich ein Gleichgewicht zwischen dem fix ien und dem gebundenen Material einstellt Dies hat eine kompetitive Hemmung
r. der Reaktion /wischen dem freien und dem an den Latex gebundenen Antikörper oder Antigen und dem entsprechenden Antigen oder Antikörper zur Folge. Ferner eignen sich kl sine Peptide nicht zu einer physikalischen Beschichtung von inerten Polymeren. Hierin durch wird die Anwendung dieses Verfahrens auf viele immunologische Diagnosemethoden vereitelt.
Aus der US-Patentschrift 3236732 ist es bereits bekannt. Choriongonadotropin durch chemische Bindung unter Benutzung von Konjugationsmitteln, z. B.
t, bis-Diazobenzidin, an Schaferythrocyten zu binden. Ferner ist es aus der DE-OS 1 961 541, Seiten 9 und 10 bekannt, auch Carbodiimide als Konjugationsmittel fur mikrobiologische Zellträger z>i verwenden. Als Zellträger werden in dieser Druckschrift, Seite 6, Abs.
,ti 2, /.eilen von Bakterien, Pilzen, Protozoen oder Viren genannt.
Es besteht jedoch noch ein Bedürfnis fur einen serologisch inerten Träger, welcher mit Choriongonadotropin. Albumin oder denaturiertem (iammaglo-
,, bulin ein diagnostisch verwendbares Reagenz bilden kann, das stabil, spezifisch und empfindlich ist, und eine leicht nachweisbare, visuelle Bewertung in sehr kurzer Zeit ermöglicht.
I-s wurde nun gefunden, daß hierzu bestimmte, sc-
hir rologisch inerte Latexpolymertriiger besonders geeignet sind.
Die Erfindung betrifft daher ein wasserunlösliches, immunologisches Diagnose^Reagenz, das sich dadurch auszeichnet) daß der serologisch inerte Träger
r,'i ein Latexpolymeres mit einer Teilchengröße von (),() I bis 0,9 μ ist und aus einem carboxylierten Copolymer reu aus Butadien und Styrol uder einem Acrylonitrilpolymcren besteht.
Ein Merkmal der Erfindung besteht in der Auswahl ganz bestimmter Latexpolymerer. Es wurde nämlich gefunden, daß nicht alle Latexpolymere bzw. Latexcopolymere hierzu geeignet sind.
Ein weiteres Merkmal der Erfindung ist die erfindungsgemäße Teilchengröße des Latexpolymers. Latexteilchen solcher Größe wurden zwar bereits für physikalische Bindung des serologisch bestimmenden Materials eingesetzt, sofern aber der Stand der Technik eine chemische Bindung an Teilchen vornahm, waren die Teilchen wesentlich größer.
So wird z. B. in der GB-PS 1192784 eine chemische Bindung von Gonadotropin-Antikörpern an wasserunlöslichen Polymerteilchen offenbart, wobei als Träger »Sephadex« (G 25, superfine) verwendet wird, welches eine Teilchengröße von 10-40 μ besitzt.
Die Wasserunlöslichen Latexpolymere besitzen ein etwa dem von Wasser entsprechendes spezifisches Gewicht. Dies hai zur Folge, daß nach der Bindung an das serologisch bestimmende Material das spezifische Gewicht der Teilchen ungefähr 1,0 beträgt, wodurch erreicht wird, daß diese Teilchen in einer wäßrigen Suspension verbleiben. Die Teilchen müssen den immunologischen diagnostischen Tests gegenüber inert sein und auch eine genügende Ladungsdichte an der Oberfläche besitzen, damit nach der Bindung mit dem serologisch bestimmenden Material ihre abstoßenden Kräfte groß genug sind, um eine Agglutination zu verhindern. Weiter müssen die Teilchen reaktive Gruppen besitzer welche fähig sind, eine Amidbindung mit dem serologisch bestimmenden Material durch Kondensation einer primären oder sekundären Aminogruppe mit einer Carboxylgruppe zu bilden.
In dem Verfahren zur Herstellung des erfindungsgemäßen, wasserunlöslichen, immunologischen Diagnose-Reagenzes wird das serologisch bestimmende Material mit dem serologisch inerten Latexpolymeren in Anwesenheit eines wasserlöslichen Carbodiimids bei einer Temperatur von 5° bis 40° C umgesetzt.
Die Menge an serologisch bestimmendem Material, das an die serologisch inerten Latexpolymcr-Trager gebunden ist, beträgt in der Regel 0,01 bis 15,0 Gewichtsprozent. Jedoch wird jedes einzelne serologisch bestimmende Material in einer Menge benützt, welche sich in einem diagnostischen Test am zweckmäßigsten erweist. Aus diesem Grunde wird jedes Material mit dem Träger in einem Verhältnis kombiniert, welches den jeweiligen spezifischen Anforderungen am besten entspricht. Die vorliegende Erfindung umfaßt deshalb die Verwendung einer solchen Menge an serologisch bestimmendem Material in Kombination mit einem serologisch inerten Latexpolymer-Trager, die geeignet ist, ein für derartige diagnostische Zwecke nützliches Reagens zu liefern.
Die chemische Umsetzung zur Ausbildung der Amidbildungwird in Gegenwart eines wasserlöslichen Carbodiimids als Kondensationsmittel durchgeführt. Der Cirad der Bindung des serologisch bestimmenden Materials an den Trägern mittels Carbodiimide!! ist abhängig von der Dichte der reaktiven Gruppen in dem Polymeren. Die Dichte der reaktiven Gruppen ist für die Durchführbarkeit der Erfindung so lange nicht maßgebend, als eine ausreichende Menge davon vorhanden ist, um die Bindung einer genügenden Menge von dem serologisch bestimmenden Material zu gewährleisten und ein in einem diagnostischen Test nutzbares Reageriz zu liefern.
Besonders geeignete Trägerteilchen sind diejenigen, welche in Form einer wäßrigen Latexsuspension der zuvor genannten Polymere bzw. Copolymere mit einer Feststoff konzentration von 40% bis 60% im Handel erhältlich sind.
ί Geeignete Carbodiimide zur Herstellung der erfindungsgemäßen Reagenzien sind wasserlösliche Monocarbodiimide der allgemeinen Formel
R-N=C = N-R'
worin R und R' ein 5- oder ogliedriger Cycloal- w kylrest, ein Alkylrest mit 2 bis 12 Kohlenstoffatomen wie z. B. Äthyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, sec-Butyl, Isobutyl, tert.-Butyl, Amyl, Hexyl, Heptyl, Octyl, Nonyl, Decyl, Undecyl und Dodecyl; ein monoarylsubstituierter niederer ii Alkylrest, wie z. B. Benzyl, α- und /3-Phenyl-
äthyl; ein Monoarylrest, wie z. B. Phenyl; Morpholinyl; Piperidyl; ein Morpholinyl-substituierter niederer Alkylrest, wie z. B. Äthylmorpholinyl; ein Piperidyl-substituierter niederer Alkyl- _'ü rest wie z. B. Athylpiperidyl; ein Di-nieder
alkylamino-niederer Alkylrest; und ein Pyridylsubstituierter niederer Alkylrest wie ζ. Β. α, β und y Methyl- oder Äthylpyridyl bedeutet,
sowie Säureadditionssalze und quaternäre Amine daji von.
Das serologisch bestimmende Material wird in wäßrigem Medium, vorzugsweise bei Zimmertemperatur (203 C bis 25 ° C) mit dem Träger zur Reaktion gebracht. Die Temperatur kann jedoch auch zwischen so 5° C und 40° C liegen.
Im allgemeinen kann das Gewicht eines wasserlöslichen Carbodiimides 0,05 bis 2,0 Prozent des Gewichts der Teilchen betragen, jedoch wird in der Regel 1% benützt.
ü In der Regel liegt der pH-Wert der Reaktionen zwischen 5 und 7,5. Dieser pH-Wert wird unter Verwendung von geeigneten üblichen anorganischen Puffer-Systemen wie Phosphatpuffer u. JgI., aufrechterhalten.
4Ii Die Reaktion ist innerhalb 5 Minuten bis 24 Stunden, gewöhnlich in 4 bis 5 Stunden, vollständig abgelaufen.
Das Endprodukt ist ein wasserunlösliches Material, welches in einer wäürigen Pufferlosung vom pH-Wert r, 5,0 bis 8,5 suspendiert ist, wobei der pH-Wert der Lösung von dem im einzelnen verwendeten System und von den Anforderungen an die Stabilität des serologisch bestimmenden Materials abhängig ist. Das spezifische Gewicht des Produktes entspricht etwa -,ο demjenigen vom Wasser, wodurch eine stabile Suspension des Produkts erreicht wird. Die Produkte können z. B. durch Zentrifugieren in Form weißer, etwa thixotropisch viskoser, tonartiger Materialien isoliert werden.
,·, Außer allfälligen Verunreinigungen, welche nicht auf die Spe/ifität der Reaktion einwirken, ist das serologisch bestimmende Material der einzige aktive Bestandteil in dem Produkt.
Als Beispiele fiir erfindungsgemaße spezifische
Mi Produkte können menschliches Choriongonadotropirij welches über eine Amidbindung an ein carboxy-
liertes Copolymer aus Butadien und Styrol mit einem Mortomeiertverhältnis Von 45% Butadien und 55% Styrol sowie einer Dichte von Carboxylgruppen
hi /,wischen 1 und 5 Gewichtsprozent (gewöhnlich
Ti Gewichtsprozent) gebunden ist, sowie menschliches
Albumin, welches über eine Amidhindung an ein carboxyliert Copolymer aus Butadien und Styrol mit
einem Monomerenverhältnis von 45% Butadien und 55% Styrol sowie eine Dichte von Carboxylgruppen zwischen 1 und 5 Gewichtsprozent (gewöhnlich 3 Gewichtsprozenten), gebunden ist, genannt werden.
Nach seiner Herstellung kann das Produkt in spezifischen diagnostischen Tests, welche auf immunologischen Prinzipien aufgebaut sind, verwendet werden.
Das Produkt kann in jeder vom spezifischen Test abhängigen Konzentration benützt werden, jedoch sind Konzentrationen zwischen 1 und 2,5 Gewichtsprozent geeignet, wobei eine Konzentration von 1,3 Gewichtsprozent bevorzugt ist. So kann z. B. das durch Bindung von menschlichem Choriongonadotropin an Trägerteilchen erhaltene Produkt als diagnostisches Reagenz zu*- Feststellung der Schwangerschaft der Frau verwendet werden. Dies kann zum Beispiel dadurch erreicht werden, daß man einen Tropfen einer Harnprobe auf ein sauberes Glasplättchen bringt, einen Tropfen anti-menschliches Choriongonadotropin-Serum zusetzt und schließlich einen Tropfen des menschlichen Choriong' nadoiropin-Trägers in wäßriger Suspension zugibt. Nach 2 Minuten wird das Testergebnis festgestellt. Die Genauigkeit beträgt 90 bis 98%.
Die Vorteile einer solchen Methode sind ihre Einfachheit, Schnelligkeit, Genauigkeit und die Vermeidung falscher positiver Ergebnisse. Der Grund hierfür ist, daß keine durch eine nichtspezifische Beschichtung verursachte Einwirkung von anderen Proteinen stattfindet.
Weiter kann /. B. das durch Bindung von Gammaglobulin auf Trägerteilchen erhaltene Produkt als diagnostisches Reagenz zur Feststellung, ob ein Patient unter rheumatischer Arthritis leidet, dienen. Dies kann z. B. dadurch erreicht werden, daß man das gepufferte Testserum auf ein Glasplättchen bringt und einen Tropfen des Gammaglobulin-Trägers Reagenz in wäßriger Suspension zusetzt. Die Ergebnisse werden nach einer Minute festgestellt und besitzen eine 80%ige Genauigkeit.
Die in derartigen immunologischen Testverfahren nutzbaren Reagenzien können vorteilhaft für kommerzielle Zwecke beispielsweise in eine diagnostische Testgarnitur mit zwei Behältern, der eine für das geeignete Antiserum und der andere für das durch eine Amidbindung an einen serologisch inerten Träger gebundene serologisch bestimmende Material in wäßriger Suspension, abgepackt werden. Die wäßrige Suspension des durch eine Amidbindung an einen serologisch inerten Träger gebundene serologisch bestimmende Material kann in irgendeiner Konzentration vorhanden sein. Jedoch ist eine Konzentration von 1,0 bis 2,5 Gewichtsprozent bevorzugt.
Die Erfindut/g wird anhand der folgenden Beispiele veranschaulicht.
Beispiel 1
377000 internationale Einheiten von menschlichem ("horiongonadotropin-Pulvcr werden in 65 ml einer sterilen Salzlösung gelöst, während 1 Stunde auf 80° C erhitzt und dann auf Raumtemperatur abgekühlt. 60 ml der gekühlten menschliches Choriongonadotropin enthaltenden Lösung werden schnell in einen Reaktionskolbcn, welcher 300 ml carboxyliertes Latex aus Styro! und Butadien (Dow No, 816) mit einem pH-Wert von 9,3, einem spezifischen Gewicht von 1,030 und einer Viskosität von 100 Cps (gemessen in einem Brookficld No. 1 bei 20 Upm) enthält, gegossen. Die Latexkonzentration wird auf 78-82 mg/ml eingestellt. Sobald das menschliche Choriongonadotropin gleichmäßig im Latex verteilt ist, wird eine Lösung von 1,8 g l-Cyc!ohexyI-3-[2-morpholinyl-(4)-äthyl]-carbodiimid-metlio-p-toluo!- sulfonat in 180 ml Wasser zugegeben. Die Reagenzien werden während 2 Stunden bei Raumtemperatur gemischt und danach bei 25,000 g und bei 10° C zentrifugiert.
Die überstehende Lösung wird abgegossen und die erhaltenen Latexkugeln während 10 Minunten in ungefähr 400 ml Wasser gemahlen und bei 10° C während 1,5 Stunden bei 25,000 g zentrifugiert. Die überstehende Lösung wird dann verworfen und die Kugeln in 400 ml eines Puffers, welcher 0,1 M Tris-HCl, 0,85 Prozent NaCl und 0,1 M ε-Amino-n-capronsäure enthält und einen pH-Wert von 8,2 besitzt, erneut suspendiert. Die gepufferte Mischung wird gemahlen und bei 10° C während 1,5 Sturen bei 25,000 g zentrifugiert. Die überstehende Lös".ng wird abgegossen und die Latexkugeln zurückgewonnen. Die Kugeln besitzen eine durchschnittliche Größe von ungefähr 0.20-0,25 μ, enthalten 0,75 Gewichtsprozent menschliches Choriongonadotropin und haben ein spezifisches Gewicht von 1,01.
Das Produkt eignet sich für die Verpackung in eine diagnostische Testgarnitur, welche zwei Behälter besitzt, wovon einer den gepufferten menschlichen Choriungonadotropin-Träger und der andere amimenschliches Choriongonadotropin-Serum enthält. Die geeignete Menge des menschlichen Choriongonadotropin-Trägers im entsprechenden Behälter der Testgarnitur ist 2,2 ml und die Konzentration 13.5 mg/ml in einem aus Tris-HCI, NaCl und f-Amino-n-Capronsäure bestehenden Puffer vom pH-Wert 8,2 und 0,01 Prozent Thimerosal. Das antimenschliche Choriongonadotropin-Serum wird in einem Verhältnis von ungefähr ! zu 60, in eine ().! M Tris, 0,85 Prozent NaCI. 0,1 M ε-Amino-n-Capronsäure, 1 Prozent Rinderalbumin und 0,1 Prozent NaN2 enthaltende, gepufferte Lösung vom pH-Wert 7,9-8,2, verdünnt.
Das anti-menschliche Choriongonadotropin-Serum wird durch bekannte Methoden von Kaninchen erhalten. Zu diesem Zweck werden die Kaninchen mit menschlichem Choriongonadotropin immunisiert, das anti-Serum gewonnen, der Titer bestimmt und schließlich zur Verwendung aufbewahrt.
Beispiel 2
2 ml einer 6prozcntigen Suspension menschlichen Albumins werden mit 50 ml destilliertem Wasser verdünnt und während 10 Minuten gerührt. Es werden 8 ml carboxyliertes Copolymer aus Butadien und Styrol sowie 50 Piozent Feststoffe (Dow 816) zugesetzt und weitere 37 ml eines 0.1 M Phosphatpuffers vom pH-Wert 5,5 zugegeben. Die Mischung wird während 10 Minuten porührt. und es werden 160 ml einer lprozentigen wäßrigen Lösung von l-Cyclohexyl-3-[2-morphölinyl-(4)-atliylJ-carbödiimid-methö-p-töluolsulfonat zugefügt. Das Reaktionsgemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt.
Das Produkt wird durch Zentrifugieren in Form einer tonartigen, weißen Masse, welche aus Teilchen mit einer Teilchengröße von ungefähr 0,2 μ besteht, ein spezifisches Gewicht Von 1,01 besitzt und 10 Gewichtsprozent menschliches Albumin enthält, zurückgewonnen.
Das Produkt wird in einer mit 0,1 M Tris-HCI auf einen pH-Wert von 7,2—7,4 gepufferten Salzlösung suspendiert, die 0,1% Carboxymethylcellulose enthält. Es entsteht eine milchige weiße Suspension, weiche sich für die Verpackung in diagnostischen Garnituren eignet.
Das Produkt wird in eine diagnostische Testgarnitur mit zwei Behältern, wovon einer eine gepufferte, wäßrige Albumin-Träger Suspension in einer Konzentration von 1,8 mg/ml und der andere genau verdünntes anti-menschliches Albumin-Serum von der Ziege enthält. Jeder Behälter enthält ungefähr 1 bis 2 ml Reagenz.
Die gemäß diesem Beispiel hergestellten Reagenzien können in dem auf menschliches Albumin in Mekonium gerichteten Test wie folgt verwendet werden:
2 ml anti-menschliches Albumin-Serum werden in ein Reagenzglas gegeben, dann wird nnißr Rühren 1 ml Mekonium (Volumenverhältnis 1:50) in Kochsalzlösung zugegeben und während 10 Minuten bei 37° C inkubiert. Es werden dann zwei Tropfen der Albumin-Träger-Suspension unter Rühren zugesetzt. Nach einer Stunde bei 37° C werden die Ergebnisse des Tests abgelesen. Eine Agglutination zeigt, daß weniger als 16 μ/ml Albumin in dem Mekonium anwesend waren und keine Agglutination zeigt, daß Albumin in einer Konzentration von 16 μ/ml oder höher vorhanden war. Diese Menge menschliches Albumin in Mekonium ist ungewöhnlieh hoch und es können weitere Tests durchgeführt werden, um das Vorhandensein eines anormalen oder kranken Zustandes wie z. B. cystische Fibröse festzustellen.
Beispiel 3
Denaturiertes Gammaglobulivi wird hergestellt, indem man eine Colin Fraktion Ii in einer Konzentration von 1 Prozent in destilliertem Wasser suspendiert. Die Suspension wird über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen und dann während 30 Minuten bei 10000 Upm zentrifugiert. Die überstehende Lösung wird abgegossen und durch Whatman Papier No. 1 filtriert.
20 ml einer 1:10 wäßrigen Suspension von Äcryio-'< nitril-Latex (Hycar-Lätex 1571) werden mit 20 ml denaturiertem lprozentigem Gammaglöbulin (hergestellt wie vorstehend beschrieben) gemischt. Dann werden 10 ml einer lprozentigen Lösung von 1 -Cyclohexyl^ 3- [2- morphoIinyl-(4)-äthyl]-carbodiirnidii' metho-p-toluolsulforiai zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird während 10 Minuten in einem Wasserbad bei einer Temperatur von 56° C erhitzt. Die erhaltene Suspension wird während einer Stunde bei 15 000 Upm zentrifugiert. Die überstehende ιοί Ί sung wird abgegossen Und der Rückstand in 50 ml von 0,1 M Giycin-Kochsalz-Puffcr vom pH-Wert 8,2 wieder suspendiert. Die Suspension wird nochmals zentrifugiert und der Rückstand in Form eine» Materials, welches aus weißen tonartigen Teilchen mit einer 2" Durchschnittsgröße von 0,09 μ besieht, 0,01 bis 1 Prozent Gammaglöbulin enthält und ein spezifisches Gewicht von 1,01 besitzt, zurückgewonnen.
Die Gammaglobulin-Träger-Teilchen werden in einen 0,1 M Glycin-Kochsalz-Puffer vom pH-Wert > > 8,2 suspendiert und in einem diagnostischen immunologischen Test für rheumaähnliche Arthritis wie folgt verwendet:
50 Mikroliter Testserum werden auf ein sauberes Glasplättchen aufgetragen. Es wird ein Tropfen 0,1 M «ι Glycin-Kochsalz-Puffer vom pH-Wert 8,2 zugegeben und mit einem Holzstäbchen gemischt. Dann werden zwei Tropfen des hergestellten Reagenzes zugefügt und die Reagenzien nochmals gemischt. Das Plättchen wird während einer Minute leicht geschaukelt. Ji Schließlich wird das Ergebnis des Tests beobachtet. Eine Agglutination am Plättchen ist ein Zeichen, daß das Serum einen Rheumatoid-Faktor enthält, keine Agglutination zeigt, daß das Serum von diesem Faktor frei ist.
«09 682/122

Claims (4)

Patentansprüche:
1. Wasserunlösliches, tür einen Agglutinationstest bestimmtes immunologisches Diagnose-Reagenz mit einem etwa dem von Wasser entsprechenden spezifischen Gewicht in Form diskreter Teilchen eines serologisch inerten Trägers, an den über Amidbindungen als serologisch bestimmendes Material menschliches Choriongonadotropin, menschliches Albumin oder denaturiertes Gammaglobulin gebunden ist, dadurch gekennzeichnet, daß der serologisch inerte Träger ein Latexpolymeres mit einer Teilchengröße von 0,01 bis 0,9 μ ist und aus einem carboxylierten Copolymeren aus Butadien und Styrol oder einem Acrylonitrilpolymeren besteht.
2. Reagenz nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das serologisch inerte Latexpolymere ein wasserunlösliches carboxyliertes Copo-Iymeres aus Styrol und Butadien und das serologisch bestimmende Material menschliches Choriongonadotropin ist.
3. Verwendung eines Reagenz nach einem der Ansprüche I bis 2 zum Nachweis des Vorhandenseins von Schwangerschaft, zystischer Fibröse oder rheumaähnlicher Arthritis in menschlichen oder tierischen Körperflüssigkeiten.
4. Verwendungeines Reagenz nach Anspruch 2 zum Nachweis des Vorhandenseins einer Schwangerschaft.
DE2203377A 1971-02-01 1972-01-25 Wasserunlösliches, für einen Agglutinationstest bestimmtes immunologisches Diagnose-Reagenz Expired DE2203377C3 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11173771A 1971-02-01 1971-02-01
US00218481A US3857931A (en) 1971-02-01 1972-01-17 Latex polymer reagents for diagnostic tests

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DE2203377A1 DE2203377A1 (de) 1972-08-17
DE2203377B2 DE2203377B2 (de) 1979-05-23
DE2203377C3 true DE2203377C3 (de) 1980-01-10

Family

ID=26809182

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2203377A Expired DE2203377C3 (de) 1971-02-01 1972-01-25 Wasserunlösliches, für einen Agglutinationstest bestimmtes immunologisches Diagnose-Reagenz
DE2301858A Pending DE2301858A1 (de) 1971-02-01 1973-01-15 Immunologisches diagnose-reagens

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2301858A Pending DE2301858A1 (de) 1971-02-01 1973-01-15 Immunologisches diagnose-reagens

Country Status (8)

Country Link
US (1) US3857931A (de)
AT (2) AT322733B (de)
AU (1) AU5009672A (de)
CA (1) CA975296A (de)
DE (2) DE2203377C3 (de)
FR (2) FR2125001A5 (de)
GB (2) GB1346862A (de)
NL (2) NL7201308A (de)

Families Citing this family (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4264766A (en) * 1877-09-19 1981-04-28 Hoffmann-La Roche Inc. Immunological diagnostic reagents
US4118349A (en) * 1971-05-12 1978-10-03 Behringwerke Aktiengesellschaft Process for the manufacture of polystyrene latex compounds
US3972992A (en) * 1973-06-29 1976-08-03 Hoffmann-La Roche Inc. Diagnostic test for opium alkaloids
US3888864A (en) * 1973-06-29 1975-06-10 Hoffmann La Roche Amino lower alkyl ether derivatives of opium alkaloids
US4118379A (en) * 1974-09-06 1978-10-03 Behringwerke Aktiengesellschaft Amidated immune globulins and process for preparing them
US4048298A (en) * 1975-02-25 1977-09-13 Rohm And Haas Company Solid phase double-antibody radioimmunoassay procedure
CA1083508A (fr) * 1975-11-13 1980-08-12 Jacques Grange Supports porteurs de chaines laterales, procedes d'obtention de ces supports, procedes de fixation de composes organiques comportant un residu glucidique sur lesdits supports, produits et reactifs resultant de ladite fixation chimique
US4046723A (en) * 1976-04-22 1977-09-06 The Dow Chemical Company Azide bonding of a protein to a latex
US4101549A (en) * 1976-05-26 1978-07-18 Hoffmann-La Roche Inc. Aminophenyl esters of 5-carboxyalkyl barbituric acids
US4210723A (en) * 1976-07-23 1980-07-01 The Dow Chemical Company Method of coupling a protein to an epoxylated latex
US4045384A (en) * 1976-07-23 1977-08-30 The Dow Chemical Company Method for forming an amide bond between a latex and protein
US4092114A (en) * 1976-10-20 1978-05-30 Fisher Scientific Company Indirect latex test for determination of immunoglobulins
IT1087285B (it) * 1976-11-10 1985-06-04 Hoffmann La Roche Procedimento di determinazione immunologico
US4350677A (en) * 1976-11-22 1982-09-21 Massachusetts Institute Of Technology Reagent for optimizing agglutination
GB1603406A (en) * 1977-08-31 1981-11-25 Nat Res Dev Assay of immune complexes
GB1592450A (en) * 1976-12-10 1981-07-08 Technicon Instr Biological analysis
US4140662A (en) * 1977-03-25 1979-02-20 Ortho Diagnostics, Inc. Attachment of proteins to inert particles
CH628738A5 (de) * 1977-08-03 1982-03-15 Hoffmann La Roche Immunologisches diagnose-reagenz.
EP0001223A3 (en) * 1977-09-19 1979-12-12 F.Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft Latex coated with a polyhydroxy compound, process for the preparation of this latex, immunological reagent containing this latex, process for the preparation of this reagent, application of this reagent, testing procedure utilising this reagent and reagent kit containing this reagent
CA1101330A (en) * 1977-09-19 1981-05-19 Ernst A. Fischer Immunological material bonded to carboxylated latex polymer and process for making it
JPS5489019A (en) * 1977-11-29 1979-07-14 Mochida Pharm Co Ltd Immunochemical measuring reagent
GB2027031A (en) * 1978-08-02 1980-02-13 Hoffmann La Roche Diagnostic Reagent Comprising a Proteinaceous Material Bonded to a Latex
AU528246B2 (en) * 1978-10-14 1983-04-21 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Stable immunoassay reagent for hapten determination
JPS55162059A (en) * 1979-06-05 1980-12-17 Mochida Pharmaceut Co Ltd Measuring method for antigen, antibody or their complex and measurement reagent kit
US4329151A (en) * 1979-08-17 1982-05-11 Icl Scientific Stable diagnostic reagent and method for qualitative determinations of streptococci infections
US4421896A (en) * 1979-11-13 1983-12-20 The Dow Chemical Company Method of coupling a protein to a polymer particle containing hydrazide groups in a polymer latex and the products formed therefrom
JPS5719660A (en) * 1980-07-09 1982-02-01 Fuji Photo Film Co Ltd Microcapsule for immune reaction
US4357142A (en) * 1980-07-18 1982-11-02 Akzona Incorporated Glass support coated with synthetic polymer for bioprocess
JPS57103649A (en) * 1980-12-18 1982-06-28 Asahi Chemical Ind Sterilized gamma-globulin fixing column
DE3174918D1 (en) * 1980-12-23 1986-08-14 Boehringer Mannheim Gmbh Hydrophilic latex particles, process for their preparation and their use
US4525459A (en) * 1982-01-27 1985-06-25 University Of Miami New purified glycoproteins and use in diagnosing infectious mononucleosis
US4460694A (en) * 1981-03-26 1984-07-17 University Of Miami Bovine glycoproteins and use in diagnosing infectious mononucleosis
JPS57182168A (en) * 1981-05-02 1982-11-09 Mitsubishi Chem Ind Ltd Immunochemical reagent
US4582810A (en) * 1983-09-30 1986-04-15 Becton, Dickinson And Company Immuno-agglutination particle suspensions
US4536478A (en) * 1984-04-05 1985-08-20 Seragan Diagnostics, Inc. Method for reducing non-specific interferences in agglutination immunoassays
AU7359487A (en) * 1986-05-30 1987-12-22 Johns Hopkins University, The Receptor-targeted drug delivery systems
US5053054A (en) * 1988-09-12 1991-10-01 Ortho Pharmaceutical Corporation Methods and reagents for staining intracellular components
FR2638234B1 (fr) * 1988-10-21 1992-11-27 Rhone Poulenc Chimie Support pour molecules biologiquement actives ou lui-meme biologiquement actif, son procede de preparation et son application en biologie
US5723218A (en) * 1990-04-16 1998-03-03 Molecular Probes, Inc. Dipyrrometheneboron difluoride labeled flourescent microparticles
US5262297A (en) * 1990-06-18 1993-11-16 Eastman Kodak Company Specific binding analytical and separation methods using carboxy containing polymers
US5147777A (en) * 1990-06-18 1992-09-15 Eastman Kodak Company Biologically active reagents prepared from carboxy-containing polymer, analytical element and methods of use
US5210289A (en) * 1990-06-18 1993-05-11 Eastman Kodak Company Carboxy containing monomers
US5149737A (en) * 1990-06-18 1992-09-22 Eastman Kodak Company Carboxy containing monomers and polymers and latices prepared from same
EP0466170B1 (de) * 1990-07-13 1997-11-05 Canon Kabushiki Kaisha Nachweisreagens
US5232984A (en) * 1990-10-15 1993-08-03 The Board Of The Regents The University Of Texas Biocompatible microcapsules
US5380536A (en) 1990-10-15 1995-01-10 The Board Of Regents, The University Of Texas System Biocompatible microcapsules
US5308749A (en) * 1991-01-25 1994-05-03 Eastman Kodak Company Method of preparing biologically active reagents from succinimide-containing polymers, analytical element and methods of use
US5200462A (en) * 1991-01-25 1993-04-06 Eastman Kodak Company Succinimide containing polymers and lattices prepared from same
US6090925A (en) 1993-03-09 2000-07-18 Epic Therapeutics, Inc. Macromolecular microparticles and methods of production and use
US5981719A (en) * 1993-03-09 1999-11-09 Epic Therapeutics, Inc. Macromolecular microparticles and methods of production and use
CA2167931A1 (en) * 1993-08-27 1995-03-02 Edward N. Granados Hydrazine derivatized cells
CA2167362A1 (en) * 1995-02-10 1996-08-11 Alexei Dmitri Klimov Apparatus and method for conducting a binding assay on an absorbent carrier material
DE19518771C2 (de) * 1995-05-22 1997-12-04 Deutsches Krebsforsch Mittel enthaltend einen Komplex aus einem polymeren Mediator und einem Peptid, sowie eine Trägeroberflächen zur adsorptiven Bindung des Komplexes
US6103536A (en) 1997-05-02 2000-08-15 Silver Lake Research Corporation Internally referenced competitive assays
CA2335460A1 (en) 1998-06-18 1999-12-23 Johns Hopkins University School Of Medicine Polymers for delivery of nucleic acids
EP1177448A2 (de) 1999-04-29 2002-02-06 Dade MicroScan Inc. Schneller kombinierter test zur identifizierung von mikroorganismen und ihrer empfindlichkeit für antimikrobielle reagenzien
US6306665B1 (en) 1999-10-13 2001-10-23 A-Fem Medical Corporation Covalent bonding of molecules to an activated solid phase material
US20040018577A1 (en) * 2002-07-29 2004-01-29 Emerson Campbell John Lewis Multiple hybrid immunoassay
US20080050842A1 (en) * 2003-02-15 2008-02-28 Golovlev Valeri V Method of visualization and quanitification of biopolymer molecules immobilized on solid support
JP4581571B2 (ja) * 2004-09-06 2010-11-17 富士ゼロックス株式会社 粒子のマレイミジル基量を測定する定量方法
DE602006012489D1 (de) 2005-07-01 2010-04-08 Roche Diagnostics Gmbh Carboxylierte latexteilchen
US7569396B1 (en) 2006-09-08 2009-08-04 Purplecow Llc Caffeine detection using internally referenced competitive assays
US7919331B2 (en) * 2006-12-21 2011-04-05 Silver Lake Research Corporation Chromatographic test strips for one or more analytes
CN102109521A (zh) * 2010-12-16 2011-06-29 中国环境科学研究院 检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的免疫胶乳微球及其制备方法
WO2024038338A1 (en) 2022-08-15 2024-02-22 Solventum Intellectual Properties Company Functionalized porous substrates and their use for detecting analytes

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1172768A (en) * 1966-04-26 1969-12-03 Ici Australia Ltd New Graft Copolymers
US3639558A (en) * 1968-02-19 1972-02-01 Louis Csizmas Immunological reagent particles having proteinaceous materials covalently bonded thereto
US3720760A (en) * 1968-09-06 1973-03-13 Pharmacia Ab Method for determining the presence of reagin-immunoglobulins(reagin-ig)directed against certain allergens,in aqueous samples
US3502545A (en) * 1968-09-27 1970-03-24 Monsanto Co Process for the separation of water-soluble polymeric materials from unbound protein or peptide using semiporous gel
US3652761A (en) * 1969-09-04 1972-03-28 Corning Glass Works Immunochemical composites and antigen or antibody purification therewith
US3709868A (en) * 1971-03-08 1973-01-09 Hoffmann La Roche Opium alkaloid antigens and antibodies specific therefor

Also Published As

Publication number Publication date
AU5009672A (en) 1974-06-20
FR2125001A5 (de) 1972-09-22
NL7300682A (de) 1973-07-19
GB1346862A (en) 1974-02-13
GB1382003A (en) 1975-01-29
DE2301858A1 (de) 1973-07-19
AT322737B (de) 1975-06-10
AU3783372A (en) 1973-07-19
DE2203377B2 (de) 1979-05-23
US3857931A (en) 1974-12-31
CA975296A (en) 1975-09-30
FR2168789A5 (de) 1973-08-31
NL7201308A (de) 1972-08-03
DE2203377A1 (de) 1972-08-17
AT322733B (de) 1975-06-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2203377C3 (de) Wasserunlösliches, für einen Agglutinationstest bestimmtes immunologisches Diagnose-Reagenz
EP0019741B1 (de) Latex-Reagenz, Verfahren zu seiner Herstellung, seine Verwendung und ein das Reagenz enthaltendes Mittel
EP0224134B1 (de) Verfahren zur Quantifizierung von Zellpopulationen bzw. Subpopulationen sowie hierfür geeignetes Reagenz
EP0054685B1 (de) Hydrophile Latexpartikel, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
EP0008432B1 (de) Immunologisches Bestimmungsverfahren
DE2529937C2 (de) Verfahren zur Herstellung eines Latexreagenz für serologische Reaktionen
WO2003019182A1 (de) Verfahren zur herstellung von protein-beladenen mikropartikeln
EP0080614A2 (de) Ein Latex, biologisch aktive Latexkonjugate und Verfahren zu ihrer Herstellung
DE2833886A1 (de) Immunologisches reagenz
DE2840768A1 (de) Immunologisches reagenz
EP0008682A1 (de) Mit einem Proteinmaterial beschichteter Latex, Verfahren zur Herstellung dieses Latex, immunologisches Reagenz enthaltend diesen Latex, Verfahren zur Herstellung dieses Reagenzes, Verwendung dieses Reagenzes, Bestimmungsverfahren unter Verwendung dieses Reagenzes und Reagenziengarnitur enthaltend dieses Reagenz
DE2710264A1 (de) Verfahren zur bewertung eines immunkomplexes und analyse seiner bestandteile
DE2934756C2 (de) Zusammensetzung zur Bestimmung von beta 2 -Humanmikroglobulin und Verfahren zu deren Herstellung und deren Anwendung
DE2934757C2 (de) Zusammensetzung und Verfahren zur Bestimmung von Humanimmunglobulin-G
DE2712044A1 (de) Stabile immunologische reagenzien
EP3413051B1 (de) Aktivierungstest zur diagnose einer heparin-induzierten thrombozytopenie
EP0345732A2 (de) Verfahren zur Bestimmung eines Antikörpertiters
CH591694A5 (en) Immunological assay using latex supported serological reactant - as aq. suspension of same density as water, with reactant bonded by amide links
EP0014965B1 (de) Immunologisches diagnostisches Reagenz zur Bestimmung der Schwangerschaft, Verfahren zu dessen Herstellung sowie dessen Verwendung zur Bestimmung der Schwangerschaft
DE1920866A1 (de) Reagens fuer einen diagnostischen Test auf Mononucleosis infectiosa und Verfahren zu seiner Herstellung
WO1989007764A1 (en) Method for detecting antibodies specific for rheumatic diseases, in particular chronic polyarthritis, and reagent therefor
CH621876A5 (de)
US3697639A (en) Serological test for the detection of hepatitis
EP0290017B1 (de) Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Serumproteinen in Körperflüssigkeiten und Mittel zur Durchführung des Verfahrens
GB1577131A (en) Serological testing

Legal Events

Date Code Title Description
C3 Grant after two publication steps (3rd publication)