DE2851645A1 - Immunochemical reagents with latex carrier - based on copolymer of styrene! with di:vinyl!-benzene or methacrylate! ( NL 31.5.79) - Google Patents
Immunochemical reagents with latex carrier - based on copolymer of styrene! with di:vinyl!-benzene or methacrylate! ( NL 31.5.79)Info
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Abstract
Description
Beschreibungdescription
Zur Messung von physiologisch aktiven Substanzen in Körperflüssigkeiten, wie Blut, Urin und dgl., ist eine immunochemische Methode bekannt, welche sich die immunochemische Aktivität dieser Substanzen zunutze macht.For measuring physiologically active substances in body fluids, such as blood, urine and the like., An immunochemical method is known which is the makes use of immunochemical activity of these substances.
Bei der Messung eines immunochemisch-reaktiven Elements, d. h. Antigen oder Antikörper, wird ein Element (Antigen oder Antikörper) allein oder ein Element in Kombination mit dem anderen (Antikörper oder Antigen) mit einem zu testenden Fluid umgesetzt. Durch die dabei auftretende Agglutinierungsreaktion oder Agglutinierungs inhibierungsreaktion wird das immunochemisch-reaktive Element gemessen. Um die visuelle Bestätigung der Reaktion zu erleichtern, werden normalerweise kleine Teilchen als Träger für Antigen oder Antikörper eingesetzt.When measuring an immunochemically reactive element, i. H. antigen or antibody, becomes an element (antigen or antibody) alone or an element in combination with the other (antibody or antigen) with one to be tested Fluid implemented. Due to the agglutination reaction or agglutination that occurs inhibition reaction, the immunochemically reactive element is measured. To the visual To facilitate confirmation of the reaction, small particles are usually considered Carrier used for antigen or antibody.
Im Falle der Agglutinierungsreaktion wird der Antikörper (oder Antigen) an dem aus feinen Teilchen bestehenden Träger adsorbiert (dieses Verfahren wird als Sensibilisierungsverfahren bezeichnet). Dann wird der sensibilisierte, aus feinen Teilchen bestehende Träger mit einem zu testenden Fluid vermischt. Dabei reagiert das Antigen (oder der Antikörper) in dem Fluid mit dem Antikörper (oder Antigen), der an dem feinteiligen Träger adsorbiert ist, was eine sichtbare Agglutinierungsreaktion bedingt. Liegt kein zu messendes Antigen (oder Antikörper) in dem getesteten Fluid vor, dann erfolgt keine Agglutinierungsreaktion. Ist die Menge an Antigen (oder Antikörper) extrem gering, dann gibt sich die Reaktion visuell nicht als Agglutinierung zu erkennen.In the case of the agglutination reaction, the antibody (or antigen) adsorbed on the carrier composed of fine particles (this method is referred to as the awareness-raising process). Then the sensitized, out fine Particulate carrier mixed with a fluid to be tested. It reacts the antigen (or antibody) in the fluid with the antibody (or antigen), which is adsorbed on the finely divided carrier, resulting in a visible agglutination reaction conditional. There is no antigen (or antibody) to be measured in the tested fluid before, then there is no agglutination reaction. Is the amount of antigen (or Antibodies) extremely low, then the reaction does not appear visually as agglutination to recognize.
Im Falle der Agglutinierungsinhibierungsreaktion wird zuerst der feinteilige Träger bezüglich des Antigens (oder des Antikörpers) sensibilisiert. Dann wird der sensibilisierte feinteilige Träger zusammen mit dem Antikörper (oder Antigen) mit dem zu testenden Fluid umgesetzt.In the case of the agglutination inhibition reaction, the finely divided one becomes the first Carrier sensitized to the antigen (or antibody). Then the sensitized finely divided carriers together with the antibody (or antigen) with implemented in the fluid to be tested.
Obwohl das Verfahren zur Durchführung der Agglutinierungsinhibierungsreaktion das gleiche ist wie dasjenige zur Durchführung der Agglutinierungsreaktion, ist das Reaktionsergebnis entgegengesetzt. Beispielsweise erfolgt keine Agglutinierungsreaktion, wenn das zu messende Antigen (oder der Antikörper) in dem getesteten Fluid vorliegt.Although the method of carrying out the agglutination inhibition reaction is the same as that for carrying out the agglutination reaction the reaction result is the opposite. For example, there is no agglutination reaction, when the antigen (or antibody) to be measured is present in the fluid being tested.
Als feinteilige Träger sind Bentonit, Kaolin, Aktivkohle, Polystyrol-Latex sowie rote Blutzellen bekannt. Neben anderen Materialien wurden in weitem Umfange Polystyrol-Latex sowie rote Blutzellen verwendet.The finely divided carriers are bentonite, kaolin, activated carbon, polystyrene latex as well as red blood cells. In addition to other materials were widely used Polystyrene latex is used as well as red blood cells.
Ein Reagens für die immunochemische Messung unter Einsatz eines derartigen feinteiligen Trägers ist erforderlich, um eine für die geringste Menge einer getesteten Substanz (Antigen oder Antikörper) ausreichende Sensibilität zu erzielen.A reagent for immunochemical measurement using such finely divided carrier is required to have one for the least amount of one tested Substance (antigen or antibody) to achieve sufficient sensitivity.
Dabei muß das Reagens spezifisch genug sein, um ausschließlich mit der getesteten Substanz zu reagieren, ferner muß es in der Lage sein, diese Sensibilität und Spezifität während längerer Lagerung beizubehalten.The reagent must be specific enough to deal exclusively with to react to the tested substance, it must also be able to demonstrate this sensitivity and maintain specificity during prolonged storage.
Die herkömmlichen immunochemischen Reagenzien besitzen jedoch den Nachteil, daß dann, wenn die Sensibilität der Messung erhöht wird, das Reagens oft eine falsche positive Reaktion zeigt (beispielsweise gibt bei der Diagnose einer Schwangerschaft die von einer nicht schwangeren Frau erhaltene Probe eine Reaktion, welche auf eine Schwangerschaft hindeutet, d. h., daß keine spezifische Reaktion vorliegt).However, the conventional immunochemical reagents have Disadvantage that when the sensitivity of the measurement is increased, the reagent often shows a false positive reaction (e.g. when diagnosed with a Pregnancy the sample received from a non-pregnant woman a reaction, which indicates pregnancy, d. that is, no specific response present).
Außerdem kann die Sensibilität herkömmlicher Reagenzien nicht während längerer Lagerung beibehalten werden.In addition, the sensitivity of conventional reagents can not be during can be retained for longer periods of storage.
Aufgabe der Erfindung ist die Schaffung eines Reagenses für eine immunochemische Messung, da sich durch eine auch bei längerer Lagerung andauernde Meßsensibilität und -spezifität auszeichnet. Ferner soll durch die Erfindung ein verbesserter Träger für dieses Reagens zur Verfügung gestellt werden.The object of the invention is to provide a reagent for an immunochemical Measurement, as it is characterized by a measurement sensitivity that lasts even after prolonged storage and specificity. Furthermore, the invention is intended to provide an improved carrier for this reagent are available.
Die Erfindung betrifft ein Reagens für eine immunochemische Messung, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß ein Styrol/ Divinylbenzol-Co?olumerlatex (S. D. Latex), ein S. D. Latex mit eingeführten Hydroxyl- oder Carboxylgruppen oder ein Styrol/ Methacrylat-Copolymerlatex (S. M. Latex) mit einer Teilchengröße von 0,1 - 1,0 F als feinteiliger Träger verwendet wird.The invention relates to a reagent for an immunochemical measurement, which is characterized in that a styrene / divinylbenzene-co? olumerlatex (S. D. latex), a S. D. latex with hydroxyl or carboxyl groups introduced, or a styrene / methacrylate copolymer latex (S.M. latex) with a particle size of 0.1 - 1.0 F is used as a finely divided carrier.
Der erfindungsgemäß eingesetzte feinteilige Träger ist vorzugsweise ein S. D. Latex, S. M. Latex oder ein S. D. Latex mit eingeführten Hydroxyl- oder Carboxylgruppen, in ganz besonders bevorzugter Weise ein S. D. Latex mit eingeführten Hydroxylgruppen.The finely divided carrier used according to the invention is preferred a S.D. latex, S.M. latex, or a S.D. latex with hydroxyl or introduced Carboxyl groups, very particularly preferably a S. D. latex with introduced Hydroxyl groups.
Die Teilchengröße des feinteiligen Trägers beträgt vorzugsweise 0,8 - 1,0 p und insbesondere ungefähr 0,3 p. Liegt sie unterhalb 0,05 , dann ist die bei der Reaktion erhaltene Masse zu gering, um die Agglutinierung mit dem bloßen Auge zu erkennen. Liegt sie oberhalb 1,1 , dann neigt die Reaktion dazu, nicht spezifisch zu werden, so daß der Träger für eine Verwendung ungeeignet wird.The particle size of the finely divided carrier is preferably 0.8 - 1.0 p and especially about 0.3 p. If it is below 0.05, then it is The mass obtained in the reaction is too small to agglutinate with the bare Eye to recognize. If it is above 1.1, the reaction tends to be non-specific so that the carrier becomes unsuitable for use.
Die vorstehend beschriebene Wirkung wird anhand einiger Versuchsbeispiele näher erläutert.The above-described effect is demonstrated using a few test examples explained in more detail.
Versuchsbeispiel 1 Es wird ein Vergleich zwischen dem erfindungsgemäßen feinteiligen Träger und einem herkömmlichen Träger durchgeführt.Experimental Example 1 A comparison is made between that according to the invention finely divided carrier and a conventional carrier carried out.
Unter Verwendung eines S. D. Latex, eines S. D. Latex mit Hydroxyl- oder Carboxylgruppen sowie eines S. M. Latex gemäß vorliegender Erfindung sowie unter Einsatz eines herkömmlichen Polystyrollatex als Träger werden immunochemische Reagenzien nach dem in dem später folgenden Ausführungsbeispiel 1 beschriebenen Verfahren hergestellt.Using a S. D. latex, a S. D. latex with hydroxyl or carboxyl groups as well as an S.M. latex according to the present invention as well using a conventional polystyrene latex as a carrier become immunochemical Reagents according to that in the later following embodiment 1 described method produced.
Diese Reagenzien werden bei 2 bis 80C während der in der Tabelle I angegebenen Zeitspanne gelagert. Nachdem diese Zeitspannenabgelaufen sind werden sie auf eine Veränderung ihrer Sensibilität sowie auf das Auftreten nichtspezifischer Reaktionen durch Messung von menschlichem Choriumgonadotrophormon (hCG) getestet. Die Empfindlichkeit der Messung wird als Agglutinierungsgrad bei der Messung von hCG von 1,0 iu/ml und 0,5 iu/ml zum Ausdruck gebracht, während die nichtspezifische Reaktion als Agglutinierungsgrad bei der Messung des Urins einer nichtschwangeren Frau, das kein hCG enthält, festgestellt wird.These reagents are used at 2 to 80C during the period shown in Table I. specified period of time stored. After these periods of time have expired them for a change in their sensitivity as well as for the appearance of non-specific ones Responses tested by measuring human chorium gonadotrophormone (hCG). The sensitivity of the measurement is expressed as the degree of agglutination when measuring hCG of 1.0 iu / ml and 0.5 iu / ml were expressed while the non-specific Reaction as degree of agglutination when measuring the urine of a non-pregnant woman Woman who does not contain hCG is detected.
Die Bewertungen für den Agglutinierungsgrad sind wie folgt: (++) sichtbare starke Agglutinierung (+) klare sichtbare Agglutinierung (+) kaum sichtbare Agglutinierung (-) keine sichtbare Agglutinierung Als Styrol/Divinylbenzol-Copolymerlätex (S. D.-Latex) wird ein Latex verwendet, der von der Rhone Poulenc S.A. unter dem Warenzeichen'Sstapor PSl"lin den Handel gebracht wird.The ratings for the degree of agglutination are as follows: (++) visible strong agglutination (+) clearly visible agglutination (+) hardly visible agglutination (-) no visible agglutination as styrene / divinylbenzene copolymer latex (S. D. latex) a latex is used that is manufactured by Rhone Poulenc S.A. under the trademark 'Stapor PSl "lin is brought to trade.
Als Styrol/Divinylbenzol-Copolymerlatex (S. D.-Latex) mit eingeführten Hydroxylgruppen wird ein Latex verwendet, der von der gleichen Firma unter dem Warenzeichen "Estapor PSI 156" in den Handel gebracht wird.Also introduced as styrene / divinylbenzene copolymer latex (S.D. latex) Hydroxyl groups is used a latex made by the same company under the trademark "Estapor PSI 156" is put on the market.
Als Styrol/Divinylbenzol-Copolymerlatex (S. D.-Latex) mit eingeführten Carboxylgruppen wird ein Latex verwendet, der von der genannten Firma unter dem Warenzeichen "Estapor PSI 162" vertrieben wird.Also introduced as styrene / divinylbenzene copolymer latex (S.D. latex) Carboxyl groups, a latex is used which is sold by the company mentioned under the Under the trademark "Estapor PSI 162".
Als Styrol/Methacrylat-Copolymerlatex wird ein Latex verwendet, der
von der erwähnten Firma unter dem Warenzeichen "Estapor PSI 153" im Handel ist.
Tabelle
I
Versuchsbeispiel 2 Menschliches Placentalactogen (hPL) wird als zu testende Substanz verwendet. Nach der in Beispiel 1 beschriebenen Weise wird ein Vergleich zwischen dem erfindungsgemäßen Träger und dem herkömmlichen durchgeführt. Dabei wird die nicht spezifische Reaktion durch den Agglutinierungsgrad bei der Messung des Serums einer nichtschwangeren Frau, das kein hPL enthält, zum Ausdruck gebracht, wobei die gleichen Bewertungen wie in Beispiel 1 verwendet werden.Experimental Example 2 Human placental lactogen (hPL) is called to testing substance used. According to the manner described in Example 1 is a Comparison carried out between the carrier according to the invention and the conventional one. The non-specific reaction is determined by the degree of agglutination in the Measurement of serum from a non-pregnant woman that does not contain hPL, expressed using the same ratings as in Example 1.
Die Ergebnisse gehen aus der Tabelle II hervor.The results are shown in Table II.
Tabelle II
Der herkömmliche Polystyrollatex erfährt eine frühe Veränderung dieser Eigenschaften.The conventional polystyrene latex undergoes an early change in these Properties.
Versuchsbeispiel 3 Ein Vergleich der Teilchengröße wird unter Einsatz des S. D. Latex mit Hydroxylgruppen durchgeführt. Reagenzien werden wie im Falle des Ausführungsbeispieles 3 hergestellt.Experimental Example 3 A comparison of particle size is used of the S. D. latex with hydroxyl groups. Reagents are as in the case of the embodiment 3 produced.
Während der in der Tabelle III angegebenen Zeitspannen werden die Reagenzien bei 37"C gelagert. Nach jeder Zeitspanne werden sie auf eine Veränderung der Empfindlichkeit sowie auf das Auftreten einer nichtspezifischen Reaktion durch Messung von hPL in ähnlicher Weise wie in Beispiel 2 getestet.During the periods of time given in Table III, the Reagents stored at 37 "C. After each period of time they will respond to a change the sensitivity and the occurrence of a non-specific reaction Measurement of hPL tested in a manner similar to Example 2.
Die Bewertungen des Agglutinierungsgrades sind die gleichen wie in Beispiel 1. Die Ergebnisse gehen aus der Tabelle III hervor.The ratings of the degree of agglutination are the same as in FIG Example 1. The results are shown in Table III.
Tabelle III
Wie in den Beispielen 1 bis 3 ausgeführt wird, sind die erfindungsgemäßen immunochemischen Reagenzien unter Einsatz von S. D. Latex, S. D. Latex mit Hydroxyl- oder Carboxylgruppen sowie S. M. Latex mit einer Teilchengröße von 0,1 -1,0 p als Träger entschieden besser als herkömmliche Reagenzien, in denen Polystyrollatex als Träger verwendet wird.As set out in Examples 1 to 3, those are according to the invention immunochemical reagents using S. D. latex, S. D. latex with hydroxyl or carboxyl groups as well as S.M. latex with a particle size of 0.1-1.0 p as Carriers decidedly better than traditional reagents in which polystyrene latex is used as a carrier.
Zur Herstellung des erfindungsgemäßen Reagens es wird das Antigen oder der Antikörper, aufgelöst in einer Pufferlösung; wie einem Glycin-Kochsalz-Puffer, einem Phosphat-Kochsalz-Puffer, einem Borat-Kochsalz-Puffer oder dgl., mit dem vorstehend erwähnten Copolymerlatex vermischt und gegebenenfalls erhitzt. Nach diesem Sensibilisierungsverfahren wird der Latex durch Zentrifugieren abgetrennt und erneut in dem gleichen Puffer suspendiert.The antigen is used to prepare the reagent according to the invention or the antibody dissolved in a buffer solution; like a glycine-saline buffer, a phosphate-saline buffer, a borate-saline buffer or the like. With the above mentioned copolymer latex mixed and optionally heated. After this awareness process the latex is separated by centrifugation and again in the same buffer suspended.
Zur weiteren Verbesserung des erfindungsgemäßen Reagenses bezüglich der Lagerungsstabilität kann ein Protein, das nicht an dieser Immunoreaktion teilnimmt (beispielsweise Rinderserumalbumin, Eialbumin oder CytochromC) als Stabilisator verwendet werden.To further improve the reagent according to the invention with respect to A protein that does not take part in this immunoreaction may affect storage stability (for example bovine serum albumin, egg albumin or cytochrome C) as a stabilizer be used.
Die folgenden Beispiele erläutern Ausführungsformen der Erfindung.The following examples illustrate embodiments of the invention.
Beispiel 1 Aus dem Anti-hCG-Serum, das aus einem Kaninchen erhalten worden ist, das gegenüber hCG immunisiert worden ist, wird eine d-Globulinfraktion durch Aussalzen mit Natriumsulfat gereinigt und dann in 0,75 %igem Glycinsalzpuffer (pH 8,2) in einer Konzentration von 0,06 % aufgelöst.Example 1 From the anti-hCG serum obtained from a rabbit that has been immunized against hCG becomes a d-globulin fraction Purified by salting out with sodium sulfate and then in 0.75% glycine salt buffer (pH 8.2) dissolved at a concentration of 0.06%.
20 ml der erhaltenen Lösung werden mit 20 ml einer 10 %igen Suspension von S. D. Latex mit eingeführten Hydroxylgruppen (Estapor PSI 156, Warenzeichen der Rhone Poulenc S.A., Frankreich) mit einer Teilchengröße von ungefähr 0,3 ji vermischt und auf 370C während einer Zeitspanne von 10 Minuten erhitzt.20 ml of the solution obtained are mixed with 20 ml of a 10% suspension from S. D. latex with introduced hydroxyl groups (Estapor PSI 156, trademark der Rhone Poulenc S.A., France) with a particle size of approximately 0.3 ji mixed and heated to 370C over a period of 10 minutes.
Dabei wird das Anti-hCG- Y-Globulin an dem Träger adsorbiert. Nach einer Zentrifugenabscheidung wird der Niederschlag erneut in 70 ml des Glycinsalzpuffers unter Gewinnung eines Reagenses suspendiert. Die Messung des zu testenden Fluids unter Einsatz dieses Reagenses erfolgt durch eine Agglutinierungsreaktion, so daß das Reagens zu einer direkten Reaktion mit dem getesteten Fluid gebracht werden muß.The anti-hCG-Y globulin is adsorbed on the carrier. To centrifugal separation, the precipitate is again in 70 ml of the glycine salt buffer suspended to give a reagent. The measurement of the fluid to be tested using this reagent is carried out through an agglutination reaction so that the reagent can be brought into direct reaction with the fluid under test got to.
Beispiel 2 hCG wird in 1/15 m Phosphatsalzpuffer (pH 6,4) in einer Konzentration von 0,03 % aufgelöst. 50 ml der erhaltenen Lösung werden mit 50 ml einer 10 %igen Suspension von S. D. Latex mit eingeführten Hydroxylgruppen (Estapor PSI 156, Warenzeichen der Rhone Poulenc S. A., Frankreich) vermischt und auf 370C während einer Zeitspanne von 30 Minuten erhitzt. Dabei wird das hCG an dem Träger adsorbiert. Nach einer Zentrifugenabscheidung wird der Niederschlag erneut in 175 ml des Phosphatsalzpuffers suspendiert, wobei ein Reagens erhalten wird. Die Agglutinierungsinhibierungsreaktion wird zur Messung der zu testenden Flüssigkeit unter Einsatz dieses Reagens es verwendet, so daß es erforderlich ist, das Reagens mit der zu testenden Flüssigkeit zusammen mit dem Anti-hCG-Antikörper zur Reaktion zu bringen.Example 2 hCG is in 1/15 M phosphate salt buffer (pH 6.4) in a Concentration of 0.03% dissolved. 50 ml of the resulting solution with 50 ml a 10% suspension of S. D. latex with introduced hydroxyl groups (Estapor PSI 156, trademark of Rhone Poulenc S.A., France) and set to 370C heated for a period of 30 minutes. In doing so, the hCG is attached to the wearer adsorbed. After a centrifuge separation, the precipitate is again in 175 ml of the phosphate salt buffer is suspended to obtain a reagent. The agglutination inhibition reaction if the liquid to be tested is measured using this reagent, it is so that it is necessary to combine the reagent with the liquid to be tested to react with the anti-hCG antibody.
Beispiel 3 Aus dem Anti-hPL-Antiserum, das aus einem Kaninchen, welches gegenüber hPL immunisiert worden ist, erhalten worden ist, wird eine t-Globulinfraktion durch Aus salzen mit Natriumsulfat und Auflösen in 1/15 m Boratsalzpuffer (pH 7,0) in einer Konzentration von 0,06 % gereinigt.Example 3 From the anti-hPL antiserum obtained from a rabbit which immunized against hPL becomes a t-globulin fraction by salting out with sodium sulfate and dissolving in 1/15 m borate salt buffer (pH 7.0) Purified at a concentration of 0.06%.
20 ml der erhaltenen Lösung werden mit 20 ml einer 10 %igen Suspension von S. D. Latex mit eingeführten Carboxylgruppen (Estapor PSI 162, Warenzeichen der Rhone Poulenc S. A., Frankreich) mit einer Teilchengröße von ungefähr 0,3 p vermischt und auf 560C während einer Zeitspanne von 20 Minuten erhitzt. Dabei wird das Anti-hPL- t-Globulin an dem Träger adsorbiert. Nach einer Zentrifugenabscheidung wird der Niederschlag erneut in 70 ml der Boratsalzpufferlösung suspendiert, wobei ein Reagens erhalten wird. Eine Agglutinierungsreaktion wird zur Messung der zu testenden Flüssigkeit unter Einsatz dieses Reagenses angewendet, so daß es notwendig ist, das Reagens zu einer direkten Reaktion mit der zu testenden » Flüssigkeit zu bringen.20 ml of the solution obtained are mixed with 20 ml of a 10% suspension from S. D. latex with introduced carboxyl groups (Estapor PSI 162, trademark der Rhone Poulenc S.A., France) with a particle size of about 0.3 p mixed and heated to 560C over a period of 20 minutes. It will the anti-hPL-t globulin adsorbs to the carrier. After a centrifuge separation the precipitate is resuspended in 70 ml of the borate salt buffer solution, wherein a reagent is obtained. An agglutination reaction is used to measure the too testing liquid using this reagent applied so that it is necessary is, the reagent to react directly with that to be tested “Bring liquid.
Beispiel 4 hPL wird in einer Glycinsalzpufferlösung (pH 8,2) in einer Konzentration von 0,05 % aufgelöst. 50 ml der erhaltenen Lösung werden mit 50 ml einer 10 %igen Suspension von S. D.Example 4 hPL is in a glycine salt buffer solution (pH 8.2) in a Concentration of 0.05% dissolved. 50 ml of the resulting solution with 50 ml a 10% suspension of S. D.
Latex (Teilchengröße ungefähr 0,3 p) mit eingeführten Carboxylgruppen (Estapor PSI 162, Warenzeichen der Rhone Poulenc S.A., Frankreich) vermischt und auf 560C während einer Zeitspanne von 30 Minuten erhitzt. Dabei wird das hPL an dem Träger adsorbiert. Nach einer Zentrifugenabscheidung wird der Niederschlag erneut in 175 ml der Glycinsalzpufferlösung suspendiert, wobei ein Reagens erhalten wird. Eine Agglutinierungsinhibierungsreaktion wird zur Messung der zu testenden Flüssigkeit unter Einsatz dieses Reagenses angewendet, so daß es notwendig ist, das Reagens sowie den Anti-hPL-Antikörper mit der zu testenden Flüssigkeit zur Umsetzung zu bringen.Latex (particle size approximately 0.3 µm) with introduced carboxyl groups (Estapor PSI 162, trademark of Rhone Poulenc S.A., France) mixed and heated to 560C over a period of 30 minutes. The hPL will be an adsorbed on the carrier. After centrifugal separation, the precipitate becomes again suspended in 175 ml of the glycine salt buffer solution to obtain a reagent. An agglutination inhibition reaction is used to measure the liquid to be tested using this reagent is applied so that it is necessary to use the reagent and the anti-hPL antibody with the liquid to be tested for conversion bring.
Beispiel 5 Aus dem Antiöstriolserum, das aus einem Xaninchen, das gegenüber Ostriol-16,17<lisuccinyl-BSA (abgekürzt als östriol) immunisiert worden ist, erhalten worden ist, wird eine r-Globulinfraktion durch Aussalzen mit Natriumsulfat gereinigt und in 1/15 m Phosphatsalzpuffer (pH 6,4) in einer Konzentration von 0,08 % aufgelöst. 5 ml der erhaltenen Lösung werden mit einer 10 %igen Suspension von S. D. Latex (Teilchengröße ungefähr 0,3 ii) (Estapor PSI 152, Warenzeichen der Rhone Poulenc S.A., Frankreich) vermischt und auf- 450C während einer Zeitspanne von 60 Minuten erhitzt. Dabei wird das Antiöstriol- t-Globulin an dem Träger adsorbiert. Nach einer Zentrifugenabscheidung wird der Niederschlag erneut in 175 ml Phosphatsalzpuffer suspendiert, wobei ein Reagens erhalten wird. Die Agglutinierungsinhibierungsreaktion wird zur Messung der zu testenden Flüssigkeit unter Einsatz dieses Reagenses verwendet, so daß es notwendig ist, das Reagens mit der zu testenden Flüssigkeit zu vermischen und dann eine östriollösung der Mischung zur Reaktion zuzusetzen.Example 5 From the antiestriol serum obtained from a Xaninchen, the immunized against estriol-16.17 <lisuccinyl-BSA (abbreviated as estriol) is obtained, an r-globulin fraction is obtained by salting out with sodium sulfate purified and in 1/15 M phosphate salt buffer (pH 6.4) at a concentration of 0.08 % resolved. 5 ml of the solution obtained are with a 10% suspension of S. D. latex (particle size approximately 0.3 ii) (Estapor PSI 152, trademark of Rhone Poulenc S.A., France) and heated to-450C for a period of 60 Minutes heated. The anti-estriol-globulin is adsorbed on the carrier. After a centrifuge separation, the precipitate is again in 175 ml of phosphate salt buffer suspended to obtain a reagent. The agglutination inhibition reaction will to measure the liquid to be tested using this Reagenses are used, so it is necessary to mix the reagent with the liquid to be tested to mix and then add an estriol solution to the mixture to react.
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Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4390517A (en) * | 1979-12-19 | 1983-06-28 | New England Nuclear Corporation | Method, composition and kit for stabilizing radiolabeled compounds |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3857931A (en) * | 1971-02-01 | 1974-12-31 | Hoffmann La Roche | Latex polymer reagents for diagnostic tests |
DE2529937A1 (en) * | 1974-07-08 | 1976-01-29 | Takeda Chemical Industries Ltd | SEROLOGICAL REAGENT AND METHOD FOR MANUFACTURING IT |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3957741A (en) * | 1974-01-17 | 1976-05-18 | California Institute Of Technology | Crosslinked, porous, polyacrylate beads |
CA1083508A (en) * | 1975-11-13 | 1980-08-12 | Jacques Grange | Supports having lateral chains, process for obtaining such supports, process for the fixation of organic compounds comprising a glucidic residue on said supports, products and reactives from said chimical fixation |
-
1977
- 1977-11-29 JP JP14292677A patent/JPS5489019A/en active Pending
-
1978
- 1978-11-29 NL NL7811724A patent/NL7811724A/en not_active Application Discontinuation
- 1978-11-29 DE DE19782851645 patent/DE2851645C2/en not_active Expired
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3857931A (en) * | 1971-02-01 | 1974-12-31 | Hoffmann La Roche | Latex polymer reagents for diagnostic tests |
DE2529937A1 (en) * | 1974-07-08 | 1976-01-29 | Takeda Chemical Industries Ltd | SEROLOGICAL REAGENT AND METHOD FOR MANUFACTURING IT |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Römpp: Chemie-Lexikon, 7. Aufl., 1973, Bd. 2, S. 880 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS5489019A (en) | 1979-07-14 |
DE2851645C2 (en) | 1982-04-08 |
NL7811724A (en) | 1979-05-31 |
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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OAP | Request for examination filed | ||
OD | Request for examination | ||
8125 | Change of the main classification |
Ipc: G01N 33/54 |
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D2 | Grant after examination | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |