DE2901829C2 - - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft die Inaktivierung von Viren innerhalb lebender menschlicher und tierischer Organismen. Bei der Anwendung sollen Zellschädi­ gungen und andere schädliche Nebenwirkungen in den behandelten Organismen vermieden werden.

Die therapeutische Anwendung von Terpenen durch Inhalation ist bekannt aus
E1 = Chemical Abstracts, Vol. 81, 1974, Seite 478, 78099 f
E2 = Chemical Abstracts, Pharmacodynamics, Vol. 75, 1971, Seite 197 und
E3 = Chemical Abstracts, Vol. 74, 1971, Seite 202, 51906 k

In E1 ist die bakteriostatische und fungostatische und in E 2 und E3 die mucotropische Wirkung der Terpene beschrieben.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Viren innerhalb menschlicher und tierischer Organismen selektiv zu bekämpfen. Die Problematik liegt dabei darin, daß Viren keine Orgamellen, also keinen eigenen Syntheseapparat besitzen. Sie sind deshalb auf fremde Wirtszellen angewiesen, um sich zu vermehren.

Eine selektive Hemmung der Virusvermehrung ohne gleichzeitige Schädigung dieser Wirtszellen erwies sich bisher als schwierig.

Die Erfindung löst die gestellte Aufgabe durch die Verwen­ dung der durch Wasserdampfdestillation erhältlichen Terpene des Schwarzen-Pfeffer-Öls zur Inaktivierung von Viren innerhalb menschlicher und tierischer Organismen.

Schwarzer-Pfeffer-Öl zeigt viruzide Wirkung bereits in einer Konzentration, die um mehrere Zehnerpotenzen niedriger liegt als diejenige Konzentration, bei der Schwarzer-Pfeffer-Öl toxische Wirkung auf lebende Zellen zeigt.

Wie Vergleichsversuche zeigen, die weiter unten beschrieben sind, liegt die diesbezügliche Spanne, die die Grundlage für die praktische, therapeutische Anwendung ist, bei Schwarzer- Pfeffer-Öl und Zimtblüten-Öl gegenüber allen anderen unter­ suchten Terpenen überraschend hoch. Zimtblüten-Öl hat aber eine stark allergisierende Wirkung.

Man kann statt dieser natürlichen Terpene auch mit diesen identische synthetische Terpene einsetzen, sofern solche zur Verfügung stehen. Bevorzugt werden aber die aus den Gewürzpflanzen gewonnenen natürlichen Terpene.

Aus permanenten Stämmen der Typen "Girardi Heart" (GH), "Flow 12 000" (FL), "Intestine 407" (IN) und "Vero Kidney" (VE) wurden unter optimalen Kulturbedingungen Zellkulturen in diversen Kulturgefäßen kultiviert, so daß sich auf dem Boden der Gefäße ein Teppich der Zellkultur bildete, der je etwa 0,25 mg Zellsubstanz enthielt.

Außerdem wurde eine Suspension von Virusteilchen des Virus Adeno Typ 6 eingesetzt.

Für die in der Tabelle I aufgeführten insgesamt acht Terpene wurden von jeder Zellart zwanzig Zellkulturen bereitgestellt. Die zwanzig Zellkulturen jeder Zellart wurden mit dem betref­ fenden Typen in unterschiedlichen Mengen behandelt, und zwar wie folgt.

Die ersten beiden Zellkulturen erhielten 10⁵ mg Terpen, bezogen auf 10 kg Zellsubstanz. Die nächsten beiden Zellkulturen erhielten 10⁴ mg Terpen, bezogen auf 10 kg Zellsubstanz. Die nächsten beiden Zellkulturen erhielten 10³ mg Terpen, bezogen auf 10 kg Zellsubstanz und so fort bis zu den letzten beiden dieser zwanzig Zellkulturen, die 0,1 mg Terpen auf 10 kg Zellsubstanz erhielten. Es wurden also immer zwei gleichartige Zellkulturen mit der gleichen Menge des gleichen Terpens behandelt. Die eine dieser beiden gleichartigen Zellkulturen wurde zu Kontrollzwecken so belassen, während die zweite außer dem noch in Form der angesetzten Virussuspension mit 5 × 10⁶ Virusteilchen auf 0,25 mg Zellsubstanz geimpft wurde. In entsprechender Weise wurde auch mit den anderen Zellkulturen und den anderen Terpenen verfahren.

Die so behandelten Zellkulturen wurden stehengelassen und nach Ab­ lauf von vier bis sechs Tagen beobachtet. Die Beobachtung erfolgte durch mikroskopische Untersuchung der Zellkultur auf Zellschädi­ gung. Die beobachteten Schädigungen wurden in vier Stufen unter­ teilt wie folgt:
Stufe 0 bedeutet keine Schädigung
Stufe 1 bedeutet gelocktertes Wachstum der Zellverbände
Stufe 2 bedeutet die Zellen kugeln sich ab und lösen sich vom Boden
Stufe 3 bedeutet die Zellstrukturen sind weitgehend oder vollständig zerstört.

Es zeigte sich, daß die geimpften Zellkulturen, die mit einem sehr geringen Terpenanteil geschützt waren die Stufe 3 beziehungs­ weise 2 erreicht hatten, weil die Viren die Zellen geschädigt hatten. Diejenigen geimpften Zellkulturen, die einen sehr hohen Terpenanteil enthielten, hatten ebenfalls die Stufe 3 beziehungs­ weise 2 erreicht, weil die Zellen durch das überschüssige Terpen geschädigt worden sind. Diejenigen der geimpften Zellkulturen jedoch, die nur einen mittelgroßen Terpenanteil enthielten, zeigten die Stufe 0, also keine Schädigung. Der mittelgroße Terpenanteil hat also die Viren hinreichend geschädigt und die Zellen vor Virenbefall geschützt ohne daß durch das Terpen un­ mittelbar die Zellen geschädigt wurden. Diejenigen Terpenkonzen­ trationen, bei denen in den geimpften Zellkulturen nach vier und sechs Tagen die Stufe 0 und nur vereinzelt die Stufe 1 be­ obachtet wurde, führen zu einer hinreichenden Virenschädigung ohne Zellschädigung und sind in der Tabelle I angegeben.

In der ersten Spalte der Tabelle I ist das angewendete Terpen, in der zweiten Spalte abgekürzt wie oben der behandelte Zellstamm und in der dritten Spalte ist die Menge des eingesetzten Terpen in mg bezogen auf 10 kg behandelte Zellsubstanz für diejenige Konzentrationsspanne angegeben, innerhalb derer keine wesentliche Zellschädigung (also Stufe 0) beobachtet wurde. Diese Spanne ist der Behandlungsbereich, der sich in jedem Fall über mehrere Zehnerpotenzen erstreckt. Für alle in der Tabelle aufgeführten Terpene tritt die angestrebte viruzide Wirkung also schon bei einer Konzentration auf, die um etliche Zehnerpotenzen geringer ist als die niedrigste Konzentration, bei der Zellschädigung be­ obachtet wurde, also Schädigung der zu schützenden Mikroorganismen auftreten könnte.

Tabelle I

Beispiel 1 (Injektionslösung)

50 g Schwarzer-Pfeffer-Öl werden in 2 l (Liter) 1,2-Propandiol gelöst. Die Lösung wird bei 121°C (Celsius) während 50 Minuten im Autoklaven sterilisiert, dann abgekühlt und in Portionen zu 2 g auf Ampullen abgefüllt.

Eine Ampulle enthält 50 mg Schwarzer-Pfeffer-Öl und enthält eine Durchschnitts-Tagesdosis für einen 70 kg schweren Erwach­ senen zur Therapie und Prophylaxe grippaler Infekte. Für menschliche und tierische Patienten anderen Gewichtes ist die Tagesdosis propor­ tional dem Patientengewicht abzuändern.

Das Mischungsverhältnis vom eingesetzten Terpen zum 1,2-Propandiol beträgt in diesem Beispiel 2,5 : 100; es sind auch andere Mi­ schungsverhältnisse für Injektionslösungen möglich, und zwar im Bereich zwischen 1 : 100 und 5 : 100, man muß jedoch die Tages­ dosis der Injektionslösung dann dem abgeänderten Terpengehalt der Injektionslösung anpassen.

Beispiel 2 (Aerosol)

325 g Schwarzer-Pfeffer-Öl werden in 631,8 g Äther vermischt mit 1805,07 g Äthanol gelöst. In diese Lösung werden 31,6 g Ester der Ricinusölfettsäuren mit oxäthyliertem Glycerin und 210,6 g Capryl/Caprinsäure-Triglycerid eingemischt. 2,68 g dieser Mischung werden zusammen mit 2,527 g Difluor-dichlormethan als Treibmittel in eine Sprühdose mit 20 ccm (Kubikzentimeter) Fas­ sungsvermögen abgefüllt. Die Sprühdose wird verschlossen und weist ein Dosierventil auf, das bei jeder Betätigung eine vor­ bestimmte Portion der Mischung freigibt, die dann unter dem Druck des Difluor-dichlormethan als Aerosol versprüht wird.

Durch entsprechende Einstellung und Bemessung des Dosierventils ist sichergestellt, daß mit jeder Betätigung eine Einzeldosis mit 6,5 mg Schwarzer-Pfeffer-Öl freigegeben wird.

Zur Therapie und Prophylaxe grippaler Infekte wird Aerosol in Mund oder Nase gesprüht und eingeatmet. Für einen 70 kg schweren Erwachsenen sind pro Tag acht solche Sprühportionen mit also insgesamt 8 × 6,5 = 50 mg Schwarzer-Pfeffer-Öl eine vorteilhafte Behandlung.

Mit dem Aerosol können auch von Virusinfekten betroffene Haut­ bezirke geheilt werden, wozu ein Hautareal von 50 cm² (Quadrat­ zentimeter) mit sieben Sprühportionen zu je 6,5 mg Schwarzer- Pfeffer-Öl besprüht wird.

Das Mischungsverhältnis vom eingesetzten Terpen zurr Aerosol­ substanz beträgt in diesem Beispiel 12 : 100; es sich auch an­ dere Mischungsverhältnisse für das Aerosol möglich, und zwar im Bereich zwischen 5 : 100 bis 20 : 100, man muß jedoch die Tages­ dosis dann dem abgeänderten Terpengehalt einer jeden Sprühportion anpassen.

Beispiel 3 (Kapsel)

Es wird eine Kapselfüllung hergestellt aus einer Mischung von 12,5 g Schwarzer-Pfeffer-Öl und 12,5 g Zimtblüten-Öl und 3 g Sojalecithin als Emulgator. Jede Kapsel enthält 28 mg dieser Kapselfüllung und ist von einer Kapselhülle umschlossen, die aus 87,5 mg Gelatine und 37,5 mg Glycerin besteht.

Zur Therapie und Prophylaxe grippaler Infekte werden oral ein bis vier solcher Kapseln pro Tag dem 70 kg schweren erwachsenen Patienten verabfolgt - bei mehreren Kapseln täglich verteilt über den Tag.

Eine Kapsel enthält 25 mg Terpen; es ist jedoch eine Abänderung möglich, dahingehend, daß eine Kapsel 10 bis 50 mg Terpen enthält, man muß jedoch die Tagesdosis dann dem abgeänderten Terpengehalt der Kapseln anpassen.

Beispiel 4 (Stift)

1 g Schwarzer-Pfeffer-Öl wird in eine formstabile Trägermasse eingemischt. Die Trägermasse besteht aus 59,84 g Vaseline album und 39,16 g Paraffin und wird bei 70°C gut mit dem Terpen ver­ mischt und anschließend in einer Form zu einem Stift ausgegossen und durch Abkühlen erhärtet.

Zur lokalen Behandlung wird durch Abrieb die Masse des Stiftes abgetragen und auf der Haut verteilt, so daß 1 ml (Milliliter) Stiftmasse - die im Beispiel 5 mg Terpen enthalten - auf 50 cm² Haut verteilt werden. Das kann 3× am Tag wiederholt werden.

Das Mischungsverhältnis vom eingesetzten Terpen zur Trägermasse beträgt in diesem Beispiel 1 : 100; es sind auch andere Mi­ schungsverhältnisse möglich, und zwar im Bereich von 1 : 100 bis 5 : 100.

Beispiel 5 (Salbe)

3,2 g Paraffinium durum und 86,8 g weiße Vaseline werden auf 60°C erwärmt und verrührt. In die warme Mischung werden 10 g Schwarzer-Pfeffer-Öl eingemischt. Die Mischung wird abgekühlt und kann als Salbe zur lokalen Anwendung verwendet werden. Etwa 0,1 ml Salbe - die etwa 5 mg Terpen enthalten - werden auf 50 cm² Haut­ fläche verteilt. Das kann 8× am Tag wiederholt werden.

Das Mischungsverhältnis vom eingesetzten Terpen zu der Mischung aus Paraffinium durum und weißer Vaseline beträgt in diesem Bei­ spiel 11 : 100; es sind auch andere Mischungsverhältnisse für die Salbe möglich, und zwar im Bereich zwischen 5 : 100 bis 20 : 100.

Beispiel 6 (Pflaster)

Es wird eine dampfdichte Pflasterfolie hergestellt aus Textil­ gewebe, das durch Beschichtung mit Kunststoff auf der Unterseite dampfdicht gemacht ist. Auf der anderen Seite - der Kontaktseite - ist das Pflaster in 1 mm (Millimeter) Stärke mit einer Pflaster­ masse beschichtet. Zur Herstellung der Pflastermasse werden 97 g Bleipflaster, 9 g gelbes Wachs, 9 g Dammar, 10 g Kolophonium und 1 g Terpentin vermischt, auf 100°C erhitzt und so lange umgerührt, bis die geschmolzene Masse nicht mehr schäumt. Dann werden 5 g Schwarzer-Pfeffer-Öl eingerührt und anschließend wird die Pflaster­ masse auf die Kontaktseite der Pflasterfolie gestrichen und durch Abkühlen erhärtet.

Das Pflaster wird mit der Kontaktseite auf ein Hautareal gelegt und dort für vier Stunden belassen. Es kann dann anschließend durch ein neues Pflaster ersetzt werden.

Das Mischungsverhältnis vom eingesetzten Terpen zur Pflastermasse beträgt in diesem Beispiel 4 : 100; es sind auch andere Mi­ schungsverhältnisse möglich, und zwar im Bereich zwischen 1 : 100 bis 10 : 100.

Mit den in den Beispielen angegebenen Präparaten und den angege­ benen Behandlungen läßt sich Virenbefall behindern oder zurück­ drängen, ohne daß dabei Zellschädigungen im behandelten Organis­ mus oder andere ernste Nebenwirkungen in Kauf genommen werden müssen.

Claims (1)

1. Verwendung der durch Wasserdampfdestillation erhältlichen Terpene des Schwarzen-Pfeffer-Öls zur Inaktivierung von Viren innerhalb menschlicher und tierischer Organismen.