DE3650776T2

DE3650776T2 - Polysaccharideester und ihre Salze

Info

Publication number: DE3650776T2
Application number: DE3650776T
Authority: DE
Inventors: Francesco Della Valle; Aurelio Romeo
Original assignee: Fidia Farmaceutici SpA
Current assignee: Fidia Farmaceutici SpA
Priority date: 1985-07-08
Filing date: 1986-07-07
Publication date: 2004-03-11
Anticipated expiration: 2006-07-08
Also published as: EP0216453A2; PT82941A; AU591501B2; NO862734D0; KR870001230A; FI94767B; IN165582B; NO305369B1; EP0216453B1; US4965353A; DE3650501T2; NO862734L; NZ216786A; FI862878A; KR870001901B1; EP0696598A1; IE861813L; JPS6264802A; FI94766B; FI892710A0

Description

Hintergrund und Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft neue Polysaccharidester, genauer Hyaluronsäureester, und deren Verwendung auf dem Gebiet der Pharmazie und Kosmetik sowie auf dem Gebiet biologisch abbaubarer Kunststoffe. Die Erfindung umfasst daher neue Medikamente, kosmetische, medizinische und chirurgische Artikel.
Der Begriff „Hyaluronsäure" (nachstehend auch als „HY" bezeichnet) wird in der Literatur zur Bezeichnung eines sauren Polysaccharids mit verschiedenen Molekülmassen verwendet, welches aus D-Glucuronsäure- und N-Acetyl-D-glucosaminresten aufgebaut ist, die in der Natur in Zelloberflächen, in den extrazellulären Grundstoffen der Bindegewebe von Wirbeltieren, in der Synovialflüssigkeit von Gelenken, in der Glaskörperflüssigkeit des Auges, im Gewebe der menschlichen Nabelschnur und in Hahnenkämmen vorkommen.
Hyaluronsäure spielt im biologischen Organismus eine wichtige Rolle, erstens als mechanische Stütze der Zellen vieler Gewebe, wie der Haut, der Sehnen, der Muskeln und des Knorpels, und ist deshalb der Hauptbestandteil der intrazellulären Matrix. Hyaluronsäure hat in den biologischen Prozessen aber noch andere Funktionen, wie z. B. die Wasseranlagerung von Geweben, die Schmierung, Zellmigration, Zellfunktion und -differenzierung (siehe zum Beispiel A. Balazs et al., Cosmetics & Toiletries, Nr. 5/84, Seiten 8–17). Hyaluronsäure kann aus den obenstehend erwähnten natürlichen Geweben, wie z. B. Hahnenkämmen, oder auch aus bestimmten Bakterien extrahiert werden. Hyaluronsäure kann heute auch durch mikrobiologische Verfahren hergestellt werden. Die Molekülmasse der durch Extraktion gewonnenen, vollständigen Hyaluronsäure liegt im Bereich von 8–13 Millionen. Die Molekülkette des Polysaccharids kann jedoch unter Einwirkung verschiedener physikalischer und chemischer Faktoren, wie z. B. mechanischer Einflüsse, oder unter Einwirkung von Strahlung, hydrolysierender, oxidierender oder enzymatischer Wirkstoffe sehr leicht abgebaut werden. Aus diesem Grund werden mit den herkömmlichen Reinigungsverfahren für die ursprünglichen Extrakte oft abgebaute Fraktionen mit einer geringeren Molekülmasse erhalten (siehe Balzazs et al., obenstehend zitiert). Hyaluronsäure, ihre Molekülfraktionen und die jeweiligen Salze wurden als Medikamente verwendet, und auch ihre Verwendung bei Kosmetika wurde vorgeschlagen (siehe zum Beispiel den obenstehend erwähnten Artikel von Balazs et al. und das französische Patent Nr. 2478468).
Als Heilmittel wurden Hyaluronsäure und ihre Salze insbesondere bei der Behandlung von Gelenkserkrankungen, wie in der Veterinärmedizin zur Heilung von Arthritis bei Pferden, eingesetzt [Acta Vet. Scand. 167, 379 (1976)]. In der Augenchirurgie wurden Hyaluronsäure sowie ihre Molekülfraktionen und Salze als Hilfs- und Ersatzheilmittel für natürliche Gewebe und Organe eingesetzt (siehe zum Beispiel Balazs et al., Modern Problems in Ophthalmology, Band 10, 1970, S. 3 – E. B. Strieff S. Karger Hrsgb., Basel; Viscosurgery and the Use of Sodium Hyaluronate During Intraocular Lens Implantation, eine zum Internationalen Kongress und dem Ersten Filmfestival der intraokularen Implantation, Cannes, 1979, vorgestellte Arbeit; U.S.-Patent Nr. 4,328,803 mit einer Zusammenfassung der Literatur über die Anwendungen von HY in der Augenheilkunde; und U.S.-Patent Nr. 4,141,973).
In der Europäischen Patentveröffentlichung Nr. 0138572 wird eine Molekülfraktion der Hyaluronsäure beschrieben, die beispielsweise als Natriumsalz für intraokulare und intraartikuläre Injektionen verwendet werden kann, welche als Ersatz für die Flüssigkeiten im Augeninneren bzw. für Gelenkserkrankungstherapien geeignet sind.
Hyaluronsäure kann auch als Zusatzstoff für eine breite Vielfalt von für medizinische und chirurgische Artikel genutzten Polymermaterialien, wie z. B. Polyurethane, Polyester, Polyolefine, Polyamide, Polysiloxane, Vinyl- und Acrylpolymere und Kohlenstofffasern, verwendet werden, wodurch diese Materialien biokompatibel gemacht werden. In diesem Fall erfolgt die Zugabe von HY oder eines ihrer Salze zum Beispiel durch Überziehen der Oberfläche solcher Materialien, durch Dispersion in denselben oder durch beide Verfahren. Solche Materialien können zur Herstellung verschiedener hygienischer und medizinischer Artikel, wie z. B. Herzklappen, intraokularer Linsen, Gefäßklemmen, Schrittmacher und dergleichen, verwendet werden (siehe U.S.-Patent Nr. 4,500,676).
Obwohl der Begriff „Hyaluronsäure" gewöhnlich nicht ordnungsgemäß verwendet wird, und zwar, wie aus dem Obenstehenden ersichtlich, in der Bedeutung einer vollständigen Polysaccharidfolge mit wechselnden D-Glucuronsäure- und N-Acetyl-D-glucosaminresten mit unterschiedlichen Molekülmassen oder sogar in der Bedeutung abgebauter Fraktionen derselben, und obwohl die Pluralform „Hyaluronsäuren" passender erscheinen mag, soll in der Diskussion weiterhin die Singularform zur Bezeichnung der Hyaluronsäure in ihren verschiedenen Formen, einschließlich ihrer Molekülfraktionen, verwendet werden und wird auch die Abkürzung „HY" oft zur Beschreibung dieses Sammelbegriffs verwendet.
In der Literatur findet sich, die Hyaluronsäureester betreffend, eine Beschreibung des Methylesters einer hochmolekularen Hyaluronsäure, der durch Extraktion aus menschlichen Nabelschnüren erhalten wird [Jeanloz et al., J. Biol. Chem. 186 (1950), 495–511, und Jager et al., J. Bacteriology 1065–1067 (1079)]. Dieser Ester wurde durch Behandlung einer freien Hyaluronsäure mit Diazomethan in Etherlösung erhalten, und es erwies sich, dass darin im Wesentlichen alle Carboxylgruppen verestert waren. Ferner wurden auch Methylester von Oligomeren der HY mit etwa zwischen 5 und 15 Disaccharideinheiten beschrieben [siehe Biochem. J. (1977) 167, 711–716]. Ebenso ist ein mit Methylalkohol in einem Teil der alkoholischen Hydroxylgruppen veretherter Hyaluronsäuremethylester beschrieben. [Jeanloz et al., J. Biol. Chem. 194 (1952), 141–150; und Jeanloz et al., J. Helvetica Chimica Acta 35 (1952), 262–271]. Es wurde von keiner biologischen Wirkung und daher auch keiner pharmazeutischen Verwendung dieser Ester berichtet.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Gemäß einem Ziel der vorliegenden Erfindung weisen die Hyaluronsäureester mit cycloaliphatischen, aliphatisch-cycloaliphatischen oder heterocyclischen Alkoholen, bei denen alle oder nur ein Teil der Carboxylgruppen der Säure verestert sind, und die Salze der partiellen Ester mit Metallen oder organischen Basen, die, von einem pharmakologischen Standpunkt aus betrachtet, biokompatibel oder akzeptabel sind, interessante und wertvolle bioplastische und pharmazeutische Eigenschaften auf und können in unzähligen Bereichen, einschließlich der Kosmetik, der Chirurgie und der Medizin, eingesetzt werden. Im Falle der Hyaluronsäure, bei der die neuen Produkte qualitativ die gleichen oder ähnliche physikalisch-chemische, pharmakologische und therapeutische Eigenschaften aufweisen, sind sie beträchtlich beständiger, besonders was die Einwirkung natürlicher, für den Abbau des Polysaccharidmoleküls im Organismus verantwortlicher Enzyme, besonders z. B. Hyaluronidase, betrifft, und bewahren die obenstehend erwähnten Eigenschaften daher über äußerst lange Zeiträume hinweg.
Eine erste Gruppe von erfindungsgemäßen Estern, die sowohl in der Therapie als auch in den anderen obenstehend erwähnten Bereichen von Nutzen sind, umfasst daher jene, bei denen die Qualitäten der Hyaluronsäure selbst ausschlaggebend sind und ausgenutzt werden können. Solche Ester stammen von Alkoholen der obenstehend erwähnten Reihe, welche selbst keine feststellbare pharmakologische Wirksamkeit aufweisen, wie beispielsweise von den einfachen Alkoholen der cycloaliphatischen Reihe.
Eine zweite Gruppe von in der Therapie nützlichen Estern umfasst andererseits jene Ester, bei denen die pharmakologischen Qualitäten des Alkoholbestandteils dominieren. Das heißt, Ester von HY mit pharmakologisch aktiven Alkoholen, wie z. B. Steroidalkoholen, wie jene des Cortisontyps mit entzündungshemmender Wirkung. Diese Verbindungen besitzen Eigenschaften, die jenen des Alkohols qualitativ ähnlich sind, jedoch, ebenfalls im Vergleich zu bereits bekannten Estern, einen differenzierteren Wirkungsbereich haben, wodurch eine besser ausgeglichene, konstante und gleichmäßige pharmakologische Wirkung sichergestellt und üblicherweise eine ausgeprägte verzögerte Wirkung erzielt wird.
Eine dritte Gruppe von erfindungsgemäßen HY-Estern, die einen besonders originellen und nützlichen Aspekt darstellen, verleiht den Estern, im Vergleich zu den beiden vorhergehenden Gruppen, eine gemischtere Beschaffenheit; das heißt, Ester, bei denen ein Teil der Carboxylgruppen von HY mit einem pharmakologisch aktiven Alkohol und ein anderer Teil mit einem pharmakologisch neutralen Alkohol oder einem, dessen Wirkungsfähigkeit vernachlässigbar ist, verestert ist. Durch die passende Dosierung der prozentualen Anteile der beiden als Veresterungsbestandteil dienenden Alkoholarten ist es möglich, Ester mit derselben pharmakologischen Wirkungsfähigkeit wie jener des pharmakologisch aktiven Alkohols zu erhalten, und zwar ohne die spezifische Wirkungsfähigkeit von Hyaluronsäure, allerdings mit den obenstehend erwähnten Qualitäten einer besseren Stabilität und besseren biologischen Verfügbarkeit, und zwar hinsichtlich der erwünschten und für den pharmakologisch aktiven Alkohol charakteristischen Wirkungsfähigkeit und aufgrund der Estergruppen des pharmakologisch inerten Alkohols.
Eine vierte Gruppe von Estern umfasst jene von gemischter Beschaffenheit, bei denen die Estergruppen von zwei verschiedenen therapeutisch aktiven Substanzen abgeleitet sind. In diesem Fall können auch die Ester partiell oder vollständig sein, das heißt, nur manche Carboxylgruppen werden durch zwei verschiedene, therapeutisch aktive Alkohole verestert, beispielsweise durch ein Cortisonsteroid und ein Antibiotikum oder ein Phenothiazin, während die Carboxylgruppen frei oder beispielsweise mit Alkalimetallen, insbesondere mit Natrium, als Salze ausgebildet sein können oder alle Carboxylgruppen mit den obenstehend erwähnten Alkoholen verestert sind. Es ist jedoch auch möglich, Ester mit drei oder mehreren Alkoholbestandteilen herzustellen, wie z. B. Ester, bei denen ein Teil der Carboxylgruppen mit einem therapeutisch aktiven Alkohol, ein anderer Teil mit einem anderen therapeutisch aktiven Alkohol, ein dritter Teil mit einem therapeutisch inaktiven Alkohol verestert ist und ein vierter Teil möglicherweise mit einem Metall und mit einer therapeutisch aktiven oder inaktiven Base als Salz ausgebildet ist oder Carboxylgruppen in freier Form umfasst.
Bei den obenstehend erwähnten Estern, bei denen einige der Carbonsäuregruppen frei bleiben, können diese mit Metallen oder organischen Basen, wie z. B. mit Alkali- oder Erdalkalimetallen, oder mit Ammoniakbasen oder stickstoffhaltigen organischen Basen als Salze ausgebildet sein.
Die meisten HY-Ester weisen im Gegensatz zur HY selbst einen gewissen Grad an Löslichkeit in organischen Lösungsmitteln auf. Diese Löslichkeit hängt vom prozentualen Anteil veresterter Carboxylgruppen und von der Art der an das Carboxyl gebundenen Alkylgruppe ab. Eine HY-Verbindung, deren Carboxylgruppen vollständig verestert sind, ist bei Raumtemperatur daher zum Beispiel in Dimethylsulfoxid gut löslich (Der Benzylester von HY löst sich in DMSO im Ausmaß von 200 mg/ml). Die meisten vollständigen Ester von HY sind, im Gegensatz zur HY und insbesondere ihrer Salze, auch in Wasser schlecht löslich.
Die zuvor erwähnten Löslichkeitseigenschaften ermöglichen in Verbindung mit besonderen und bemerkenswerten viskoelastischen Eigenschaften die Verwendung von HY- Estern zur Herstellung hygienischer und medizinischer Präparate, die in einer Salzlösung unlöslich sind und die besondere erwünschte Form besitzen. Diese Materialien werden erhalten, indem eine Lösung eines HY-Esters in einem organischen Lösungsmittel hergestellt wird, die hochviskose Lösung in die Form des gewünschten Artikels gebracht wird und das organische Lösungsmittel mit einem anderen Lösungsmittel, welches mit ersterem mischbar ist, aber in welchem der HY-Ester unlöslich ist, extrahiert wird.
Schließlich umfasst die vorliegende Erfindung auch die Verwendung der obenstehend erwähnten, neuen Produkte als Vehikel für aktive pharmazeutische Substanzen und Medikamente, welche die obenstehend erwähnten veresterten Hyaluronsäurederivate und eine oder mehrere dieser aktiven Substanzen umfassen. Bei solchen Medikamenten wird der Hyaluronsäureester oder eines seiner Salze vorzugsweise von pharmakologisch inaktiven Alkoholen abgeleitet, kann aber auch ein Ester sein, der von einem pharmakologisch aktiven Alkohol abgeleitet wird und selbst eine pharmakologische Wirkungsfähigkeit aufweist. Die Vehikelwirkung des durch den Hyaluronsäureester oder eines seiner Salze dargestellten Bestandteils muss sich in einer zufriedenstellenderen Assimilation der aktiven Substanz unter Bedingungen, welche mit der biologischen Umgebung des zu behandelnden Organs besonders vereinbar sind, bemerkbar machen. Dies gilt insbesondere für das Gebiet der Augenheilkunde. Von diesen Medikamenten, die einen Hyaluronsäureester als Vehikel enthalten, sind jene für die örtliche Anwendung von besonderer Bedeutung. Das Hauptziel der vorliegenden Erfindung bilden daher die vollständigen oder partiellen Ester von Hyaluronsäure mit Alkoholen der cycloaliphatischen, aliphatisch-cycloaliphatischen oder heterocyclischen Reihe sowie die Salze derartiger partieller Ester mit anorganischen oder organischen Basen.
Einen zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung stellen die pharmazeutischen Zubereitungen dar, die, wie obenstehend beschrieben, als Wirkstoff einen oder mehrere Hyaluronsäureester oder eines von deren Salzen enthalten, sowie die Verwendung solcher Ester für therapeutische Zwecke.
Einen dritten Aspekt der vorliegenden Erfindung stellen Medikamente dar, welche umfassen:

1) eine pharmakologisch aktive Substanz oder eine Kombination pharmakologisch aktiver Substanzen und
2) ein Trägervehikel, zusammengesetzt aus einem vollständigen oder partiellen Ester von Hyaluronsäure mit Alkoholen der cycloaliphatischen, aliphatischcycloaliphatischen oder heterocyclischen Reihe oder den Salzen solcher partieller Ester mit anorganischen oder organischen Basen, falls gewünscht, zusätzlich Hyaluronsäure oder eines ihrer Salze mit anorganischen oder organischen Basen, sowie die Verwendung solcher Medikamente für therapeutische Zwecke.

Einen vierten Aspekt der vorliegenden Erfindung stellen die obenstehend beschriebene Verwendung der Ester und ihrer Salze in Kosmetika sowie kosmetische Artikel, die solche Ester enthalten, dar.
Einen fünften Aspekt der vorliegenden Erfindung stellen die obenstehend beschriebene Verwendung der Ester und ihrer Salze zur Herstellung hygienischer und chirurgischer Kunststoffartikel sowie diese Artikel selbst dar.
Eine weitere Verwendung der erfindungsgemäßen neuen Ester betrifft die Herstellung hygienischer, kosmetischer und chirurgischer Artikel, bei denen die Hyaluronsäureester als Vehikel für die diesem Zweck dienenden Grundstoffe, wie die verschiedenen, obenstehend erwähnten Polymere, wirken.
Ein weiteres Ziel der Erfindung stellen schließlich die Verfahren zur Herstellung der Hyaluronsäureester und der Salze der partiellen Ester dar.
Die Alkohole der cycloaliphatischen oder aliphatisch-cycloaliphatischen Reihe können sich von mono- oder polycyclischen Kohlenwasserstoffen ableiten, können vorzugsweise eine Höchstanzahl von 34 Kohlenstoffatomen haben, können unsubstituiert sein und können einen oder mehrere Substituenten, wie z. B. jene, die obenstehend für die aliphatischen Alkohole erwähnt sind, enthalten. Unter den von cyclischen monoannularen Kohlenwasserstoffen abgeleiteten Alkoholen sind jene mit einer Höchstanzahl von 12 Kohlenstoffatomen, wobei die Ringe vorzugsweise zwischen 5 und 7 Kohlenstoffatome haben, die beispielsweise durch ein bis drei untere Alkylgruppen, wie z. B. Methyl-, Ethyl-, Propyl- oder Isopropylgruppen, substituiert sein können, besonders zu beachten. Als spezifische Alkohole dieser Gruppe können die Folgenden erwähnt werden: Cyclohexanol, Cyclohexandiol, 1,2,3-Cyclohexantriol und 1,3,5-Cyclohexantriol (Phloroglucitol), Inositol und jene Alkohole, die von p-Methan, wie z. B. Carvomenthol, Menthol und α-γ-Terpineol, 1-Terpineol, 4-Terpineol und Piperitol, abgeleitet sind, oder die Mischung dieser als „Terpineol" bekannten Alkohole: 1,4- und 1,8-Terpin. Unter den Alkoholen, die sich von Kohlenwasserstoffen mit kondensierten Ringen ableiten, wie jenen von Thujan, Pinan oder Comphan, sind die Folgenden zu erwähnen: Thujanol, Sabinol, Pinolhydrat, D- und L-Borneol und D- und L-Isoborneol.
Für die Ester der vorliegenden Erfindung zu verwendende, aliphatischcycloaliphatische polycyclische Alkohole sind Sterine, Cholsäuren und Steroide, wie z. B. Sexualhormone und deren synthetische Analoga, insbesondere Corticosteroide und deren Derivate. Es ist daher möglich, Folgendes zu verwenden: Cholesterin, Dihydrocholesterol, Epidihydrocholesterol, Koprostanol, Epikoprostanol, Sitosterol, Stigmasterol, Ergosterol, Cholsäure, Desoxycholsäure, Lithocholsäure, Estriol, Estradiol, Equilenin, Equilin und deren Alkylatderivate sowie deren Ethinyl- oder Propinylderivate in Position 17, wie z. B. 17α-Ethinestradiol oder 7α-Methyl-l7α-ethinylestradiol, Pregnenolon, Pregnandiol, Testosteron und dessen Derivate, wie z. B. 17α-Methyltestosteron, 1,2-Dehydrotestosteron und 17α-Methyl-1,2-dehydrotestosteron, die Alkinylatderivate in Position 17 von Testosteron und 1,2-Dehydrotestosteron, wie z. B. 17α-Ethinyltestosteron, 17α-Propinyltestosteron, Norgestrel, Hydroxyprogesteron, Corticosteron, Desoxycorticosteron, 19-Nortestosteron, 19-Nor-l7α-methyltestosteron und 19-Nor-l7α-ethinyltestosteron, Antihormone, wie z. B. Cyproteron, Cortison, Hydrocortison, Prednison, Prednisolon, Fluorcortison, Dexamethason, Betamethason, Paramethason, Flumethason, Fluocinolon, Fluprednyliden, Clobetasol, Beclomethason, Aldosteron, Desoxycorticosteron, Alfaxolon, Alfadolon, Bolasteron. Als Veresterungsbestandteile für die erfindungsgemäßen Ester sind die Folgenden nützlich: Genine (Aglykone) der auf das Herz wirkenden Glucoside, wie z. B. Digitoxigenin, Gitoxigenin, Digoxigenin, Strophanthidin, Tigogenin und Saponine.
Andere, erfindungsgemäß zu verwendende Alkohole sind die vitaminartigen, wie z. B. Axerophthol, die Vitamine D₂ und D₃, Aneurin, Lactoflavin, Ascorbinsäure, Riboflavin, Thiamin, Pantothensäure.
Unter den heterocyclischen Alkoholen können die Folgenden als Derivate der obenstehend erwähnten cycloaliphatischen oder aliphatisch-cycloaliphatischen Alkohole betrachtet werden, wenn ihre linearen oder cyclischen Ketten durch ein oder mehrere, beispielsweise ein bis drei, Heteroatome unterbrochen sind, die beispielsweise aus der durch -O-, -S-, -N, -NH- gebildeten Gruppe ausgewählt sind, und darunter können eine oder mehrere, insbesondere ein bis drei, ungesättigte Bindungen, z. B. Doppelbindungen, sein, wobei somit auch heterocyclische Verbindungen mit aromatischen Strukturen inbegriffen sind. Die Folgenden sollten beispielsweise erwähnt werden: Furfurylalkohol, Alkaloide und Derivate, wie z. B. Atropin, Scopolamin, Cinchonin, 1a-Cinchonidin, Chinin, Morphin, Codein, Nalorphin, N-Butylscopolammoniumbromid, Ajmalin; Phenylethylamine, wie z. B. Ephedrin, Isoproterenol, Epinephrin; Phenothiazin-Arzneimittel, wie z. B. Perphenazin, Pipothiazin, Carphenazin, Homofenazin, Acetophenazin, Fluophenazin, N-Hydroxyethylpromethazinchlorid; Thioxanthen-Arzneimittel, wie z. B. Flupenthixol und Clopenthixol; krampflösende Mittel, wie z. B. Meprophendiol; Antipsychotika; wie z. B. Opipramol; Mittel gegen Erbrechen, wie z. B. Oxypendyl; Analgetika, wie z. B. Carbetidin und Phenoperidin und Methadol; Schlafmittel, wie z. B. Etodroxizin; Appetitzügler, wie z. B. Benzidrol und Diphemethoxidin; leichte Beruhigungsmittel, wie z. B. Hydroxyzin; Muskelentspanner, wie z. B. Cinnamedrin, Diphyllin, Mephenesin, Methocarbamol, Chlorphenesin, 2,2-Diethyl-1,3-propandiol, Guaifenesin, Hydrocilamid; Koronargefäßdilatatoren, wie z. B. Dipyridamol und Oxyfedrin; Ganglienblocker, wie z. B. Propanolol, Timolol, Pindolol, Bupranolol, Atenolol, Metoprolol, Practolol; Tumorwachstumshemmer, wie z. B. 6-Azauridin, Cytarabin, Floxuridin; Antibiotika, wie z. B. Chloramphenicol, Thiamphenicol, Erythromycin, Oleandomycin, Lincomycin; Antivirenmittel, wie z. B. Idoxuridin; peripher wirkende Gefäßerweiterer, wie z. B. Isonicotinalkohol; Karboanhydrasehemmer, wie z. B. Sulocarbilat; Asthmamittel und entzündungshemmende Mittel, wie z. B. Tiaramid; Sulfamide, wie z. B. 2-p-Sulfanilonoethanol.
Wie obenstehend besprochen, können in manchen Fällen Hyaluronsäureester von Interesse sein, wo sich die Estergruppen von zwei oder mehreren therapeutisch aktiven Hydroxylsubstanzen ableiten, und können natürlich alle möglichen Varianten erhalten werden. Besonders interessant sind die Substanzen, bei denen zwei Arten von verschiedenen, von Arzneimitteln mit Hydroxylcharakter abgeleiteten Estergruppen vorhanden sind und bei denen die verbleibenden Carboxylgruppen frei sind, mit Metallen oder mit einer oder mehreren verschiedenen Basen, die nachstehend aufgelistet sind, möglicherweise auch mit Basen, die selbst therapeutisch aktiv sind und beispielsweise dieselbe oder eine ähnliche Wirkungsfähigkeit aufweisen wie der Veresterungsbestandteil, als Salze ausgebildet sind. Insbesondere ist es möglich, Hyaluronsäureester zu haben, die einerseits von einem entzündungshemmenden Steroid, wie z. B. einem der zuvor erwähnten, und andererseits von einem Vitamin, von einem Alkaloid oder von einem Antibiotikum, wie z. B. einem der aufgelisteten, abgeleitet sind.
Der Grad der Veresterung von Hyaluronsäure mit den obenstehend erwähnten Alkoholen hängt in erster Linie von den speziellen Eigenschaften ab, die in den verschiedenen Anwendungsgebieten zu erzielen sind, beispielsweise eine stärkere oder geringere Lipophilie oder Hydrophilie bezüglich gewisser Gewebe, wie z. B. der Haut.
Normalerweise verstärkt ein hoher Veresterungsgrad bis hin zur vollständigen Veresterung von Hyaluronsäure deren lipophilen Charakter und verringert daher deren Löslichkeit in Wasser. Für eine therapeutische Verwendung der neuen Ester dieser Erfindung ist es beispielsweise besonders wichtig, den Veresterungsgrad zu regeln, um trotz eines im Vergleich zur Hyaluronsäure oder deren Natriumsalz guten und erhöhten Lipophiliegrads eine ausreichende Wasserlöslichkeit, zum Beispiel eine Löslichkeit von 10 mg/ml, sicherzustellen. Natürlich ist es notwendig, den Einfluss der Molekülgröße desselben Veresterungsbestandteils, welche die Wasserlöslichkeit üblicherweise in umgekehrt proportionaler Weise beeinflusst, zu bedenken. Wie bereits gesagt, kann die Veresterung der Carboxylgruppen von Hyaluronsäure verschiedene Rollen spielen, die in verschiedenen Gebieten nützlich sein können, beispielsweise in der Medizin, wo die Ester als Heilmittel eingesetzt werden, oder in der Chirurgie, wo sie als Kunststoffartikel eingesetzt werden. Hinsichtlich der Verwendung in der Therapie wurde bereits gesagt, dass es möglich ist, die Veresterung eines Alkohols, der selbst therapeutisch aktiv ist, wie z. B. eines entzündungs hemmenden Cortisteroids mit Hyaluronsäure als Mittel zur Verbesserung seiner therapeutischen Wirksamkeit in Betracht zu ziehen.
Hinsichtlich ähnlicher therapeutisch aktiver Alkohole fungiert Hyaluronsäure daher als besonders effizientes Vehikel, das mit der biologischen Umgebung in perfekter Weise kompatibel ist. In der obenstehenden Liste von Alkoholen, die zur erfindungsgemäßen Veresterung zu verwenden sind, scheinen mehrere dieser pharmakologisch aktiven Alkohole auf, und daher sind die möglichen Anwendungen der entsprechenden Ester offensichtlich, da die Anzeigen dieselben sind wie jene für die freien Alkohole. Wie bereits gesagt, ist es bei partiellen Estern mit therapeutisch aktiven Alkoholen wiederum möglich, die gesamten verbleibenden Carboxylgruppen des Hyaluronsäurebestandteils oder einen Teil davon mit einem pharmakologisch inerten Alkhol, wie z. B. den einfachen Alkoholen der cycloaliphatischen Reihe, zu verestern.
Ein besonders interessanter Aspekt der vorliegenden Erfindung ist die Möglichkeit, stabilere Arzneimittel als die zur Zeit erhältlichen herzustellen. Es ist daher einerseits möglich, Hyaluronsäureester mit therapeutisch inaktiven Alkoholen herzustellen, die in typischen Indikationen der Hyaluronsäure selbst, wie für intrartikuläre Injektionen, verwendet werden, wobei der Ester als Gleitmittel wirkt. Aufgrund der im Vergleich zur freien Säure verbesserten Beständigkeit der Ester gegenüber der Hyaluronidase ist die Erzielung einer recht beträchtlich verlängerten Wirkung möglich. Andererseits ist es möglich, für die obenstehend erwähnten HY-Ester mit therapeutisch aktiven Alkoholen, die möglicherweise auch mit therapeutisch aktiven Basen als Salze ausgebildet sind, Arzneimittel mit „verzögerter" Wirkung zu erhalten. Die Freisetzung der aktiven Alkohole durch Esterase und jene der als Salze ausgebildeten Gruppen durch die Hydrolysewirkung ist sehr langsam.
Hinsichtlich der Verwendung in der Kosmetik ist es vorzuziehen, vollständige oder partielle Ester von Hyaluronsäure mit pharmakologisch inerten Alkoholen zu verwenden, wie z. B. mit einfachen Alkoholen der cycloaliphatischen Reihe, beispielsweise Derivaten von Cyclopentan oder Cyclohexan und deren Derivaten, die durch niedrigere Alkylgruppen, z. B. Alkyle mit zwischen 1 und 4 Kohlenstoffatomen, insbesondere Methylgruppen, substituiert sind. Von besonderem Interesse sind auch Ester mit cycloaliphatischen und aliphatischen Alkoholen – cycloaliphatische Verbindungen, die von Terpen abgeleitet sind, wie die obenstehend erwähnten, und jene, die von therapeutisch aktiven Alkoholen abgeleitet sind, und die ebenfalls in der Kosmetik verwendet werden können.
Jene Alkohole, die bevorzugt zur Herstellung von Artikeln zur hygienischen und chirurgischen Verwendung einzusetzen sind, sind im Wesentlichen die gleichen wie jene, die obenstehend hinsichtlich der Anwendung in der Kosmetik angeführt wurden. Bei den erfindungsgemäßen partiellen Estern kann der prozentuale Anteil an veresterten Gruppen in Hinblick auf die Verwendung, für welche das Produkt bestimmt ist, stark variieren, und dies vor allem hinsichtlich der Verwendung in den verschiedenen, obenstehend erwähnten Anwendungsgebieten.
Von besonderem Interesse sind jedoch jene partiellen Ester, bei denen mindestens 5% und höchstens 90% aller Carboxylgruppen von HY verestert sind, und insbesondere jene, die einen Veresterungsprozentsatz aufweisen, der zwischen 50 und 80% liegt.
Das Zahlenverhältnis zwischen den verschiedenen Arten von Estergruppen kann offensichtlich auch bei den gemischen partiellen Estern variieren. Im Fall zweier Arten solcher Gruppen variiert das Verhältnis zum Beispiel vorzugsweise zwischen 0 : 1 : 1 und 1 : 01, und das gleiche gilt für vollständige Ester. Bei den für eine therapeutische Verwendung bestimmten Estern variiert das Verhältnis vorzugsweise zwischen 0,5 : 1 und 1 : 0,5. Solche Verhältnisse gelten vorzugsweise auch für vollständige Ester und sind bei den partiellen Estern mit Bezug auf die obenstehend erwähnten Prozentangaben, welche die einschließliche Zahl der veresterten Gruppen betreffen, zu bevorzugen.
Bei den erfindungsgemäßen partiellen Estern können die nicht veresterten Carboxylgruppen frei gehalten oder als Salze ausgebildet werden. Zur Bildung solcher Salze werden die Basen gemäß dem Kriterium dessen, wofür das Produkt bestimmt ist, ausgewählt. Es ist möglich, anorganische Salze zu bilden, die von Alkalimetallen, wie z. B. Kalium und insbesondere Natrium und Ammonium, von Erdalkalimetallen, wie z. B. Calcium, oder von Magnesium- oder Aluminiumsalzen abgeleitet sind.
Besonders interessant sind die Salze mit organischen Basen, insbesondere mit stickstoffhaltigen Basen und daher mit aliphatischen, arylaliphatischen, cycloaliphatischen oder heterocyclischen Aminen.
Diese Ammoniaksalze können von therapeutisch akzeptablen, aber inaktiven Aminen oder von Aminen mit therapeutischer Wirkung abgeleitet sein. Von den ersteren sollten vor allem die aliphatischen Amine in Betracht gezogen werden, wie z. B. Mono-, Di- und Trialkylamine mit Alkylgruppen mit einer Höchstanzahl von 18 Kohlenstoffatomen oder Arylalkylamine mit derselben Anzahl von Kohlenstoffatomen im aliphatischen Teil, bei denen Aryl eine möglicherweise durch 1 und 3 Methylgruppen oder Halogenatome oder Hydroxylgruppen substituierte Benzolgruppe bedeutet. Die biologisch inaktiven Basen zur Salzbildung können auch cyclisch sein, wie z. B. die monocyclischen Alkylenamine mit Ringen aus zwischen 4 und 6 Kohlenstoffatomen, wobei der Ring möglicherweise durch Heteroatome, ausgewählt aus der aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel bestehenden Gruppe, unterbrochen ist, wie z. B. durch Piperidin oder Morpholin, und können zum Beispiel durch Amin- oder Hydroxylfunktionen, wie z. B. Aminoethanol, Ethylendiamin, Ephedrin oder Cholin, substituiert sein.
Es ist auch möglich, die quartären Ammoniumsalze der partiellen Ester zu bilden, beispielsweise die Salze von Tetraalkylammonium mit der obenstehend erwähnten Anzahl an Kohlenstoffatomen, und vorzugsweise Salze eines Typs, bei dem die vierte Alkylgruppe zwischen 1 und 4 Kohlenstoffatome besitzt, beispielsweise eine Methylgruppe ist.
Unter den biologisch aktiven Aminen, deren therapeutische Wirkungen genutzt werden können, befinden sich alle stickstoffhaltigen und basischen Arzneimittel, wie jene, die in den folgenden Gruppen enthalten sind:
Alkaloide, Peptide, Phenothiazine, Benzodiazepine, Thioxanthene, Hormone, Vitamine, krampflösende Mittel, Antipsychotika, Mittel gegen Erbrechen, Anästhetika, Schlafmittel, Appetitzügler, Beruhigungsmittel, Muskelentspanner, Koronargefäßdilatatoren, antineoplastische Mittel, Antibiotika, antibakterielle Mittel, Antivirenmittel, Antimalariamittel, Karboanhydrasehemmer, nicht steroide entzündungshemmende Mittel, Vasokonstriktoren, cholinergische Agonisten, cholinergische Antagonisten, adrenergische Agonisten, adrenergische Antagonisten, Antinarkotika.
All diese Arzneimittel mit basischen stickstoffhaltigen Gruppen, die hinsichtlich der Erfindung angeführt sind und die Verwendung der Ester betreffen, können als Beispiele genannt werden.
Gemäß einem besonderen Aspekt der vorliegenden Erfindung können die neuen Hyaluronsäureester und deren Salze als ausgezeichnetes Vehikel für therapeutisch aktive Substanzen verwendet werden. Zu diesem Zweck ist es möglich, die vollständigen Ester oder die partiellen Ester der als Salze ausgebildeten, partiellen Ester in den verbleibenden Carboxylgruppen zu verwenden, beispielsweise mit einer der obenstehend erwähnten, therapeutisch akzeptablen, aber nicht biologisch aktiven Substanzen, vor allem mit Alkalimetallen, zum Beispiel Natrium. Dies sind die obenstehend erwähnten Medikamente, die aus einer zwei Bestandteile enthaltenden Kombination bestehen:
Bestandteil (1) – eine pharmakologisch aktive Substanz oder eine Kombination zweier oder mehrerer aktiver Substanzen; und
Bestandteil (2) – ein Trägervehikel, umfassend einen partiellen oder vollständigen Ester von Hyaluronsäure mit einem Alkohol oder die Salze solcher partieller Ester mit einer organischen oder anorganischen Base, gegebenenfalls zusätzlich Hyaluronsäure oder eines Salzes davon mit einer anorganischen oder organischen Base.
Die bei diesen Medikamenten zu verwendenden Hyaluronsäureester sind vor allem jene, bei denen der veresternde Alkohol, zum Beispiel ein einfacher cycloaliphatischer Alkohol, wie obenstehend beschrieben, selbst nicht pharmakologisch aktiv ist. Medikamente dieser Art, bei denen der Ester auch pharmakologisch aktiv ist, wie beispielsweise im Fall eines der obenstehend beschriebenen, von Alkoholen mit pharmakologischer Wirkung abgeleiteten Estern, sind von diesem Aspekt der Erfindung nicht ausgeschlossen.
Desgleichen umfasst die Erfindung auch Medikamente dieser Art, bei denen die Ester des Bestandteils (2) auch mit therapeutisch aktiven Basen als Salze ausgebildet sind. Diese Basen können dieselben, im Hyaluronsäureester getragenen, pharmakologisch aktiven Substanzen sein, und die Mischung enthält daher in diesem Fall, wie untenstehend beschrieben, Salze eines partiellen Esters von Hyaluronsäure mit therapeutisch aktiven Basen, möglicherweise in Gegenwart eines Überschusses des aktiven Basenbestandteils (1). Dieser Fall kann andererseits dort auftreten, wo die getragene Substanz nicht von basischer Natur ist und freie Carboxylgruppen im Hyaluronsäureester mit therapeutisch aktiven Basen noch immer als Salze ausgebildet sind.
Die Verwendung von Hyaluronsäureestern als Vehikel erlaubt daher die Herstellung der obenstehend beschriebenen, neuen Medikamente einschließlich 1) einer pharmakologisch aktiven Substanz oder einer Kombination zweier oder mehrerer solcher Substanzen und 2) eines obenstehend beschriebenen Hyaluronsäureesters oder eines seiner Salze, und solche Medikamente stellen ein weiteres Ziel der Erfindung dar. Bei Verwendung von partiellen HY-Estern wird bei solchen Medikamenten die mögliche Salzbildung der verbleibenden Carboxylgruppen vorzugsweise mit therapeutisch neutralen anorganischen oder organischen Basen, insbesondere mit Alkalimetallen, wie z. B. Natrium oder Ammonium, durchgeführt. Sollte die aktive Substanz, Bestandteil (1), oder eine entsprechende Kombination von Substanzen basische Gruppen, wie beispielsweise Amingruppen enthaltende Antibiotika, aufweisen und sollten partielle Ester von Hyaluronsäure mit verbleibenden freien Carboxylgruppen verwendet werden, so werden die entsprechenden Salze zwischen den Carboxylgruppen und diesen basischen Substanzen gebildet. Die neuen Medikamente umfassen daher insbesondere partielle Ester von Hyaluronsäure, die mit pharmakologisch aktiven Substanzen teilweise und vollständig als Salze ausgebildet sind und eine basische Beschaffenheit aufweisen. Wie obenstehend beschrieben, sind die kombinierten Medikamente des hier beschriebenen Typs, bei denen der Bestandteil (1) eine pharmakologisch aktive Substanz zur örtlichen Anwendung ist, von besonderer Bedeutung.
Die Verwendung von Hyaluronsäureestern als Vehikel für örtlich anzuwendende Arzneimittel ist insbesondere in der Augenheilkunde von Nutzen, wo eine besondere Kompatibilität der neuen Produkte mit dem Hornhautepithel und daher eine ausgezeichnete, ohne irgendwelche Sensibilisierungswirkungen auftretende Verträglichkeit zu beobachten ist. Bei Verabreichung der Medikamente in Form von konzentrierten Lösungen mit viskoelastischen Eigenschaften oder in fester Form ist es überdies möglich, homogene und stabile Filme zu erhalten, die vollkommen transparent sind und auf dem Hornhautepithel haften, wodurch eine anhaltende biologische Verfügbarkeit des Arzneimittels gewährleistet wird und dieses daher ausgezeichnete Präparate mit verzögerter Wirkung darstellt.
Derartige ophthalmische Medikamente sind insbesondere im tierärztlichen Bereich wertvoll, zum Beispiel angesichts dessen, dass es zur Zeit keine tierärztlichen Spezialartikel für die augenärztliche Verwendung gibt, die Chemotherapeutika enthalten. In der Tat werden üblicherweise Präparate verwendet, die für die Verwendung beim Menschen gedacht sind, und diese garantieren nicht immer einen bestimmten Wirkungsbereich oder berücksichtigen nicht die besonderen Bedingungen, unter denen die Behandlung stattfinden muss. Dies ist zum Beispiel bei der Behandlung von infektiöser Keratoconjunctivitis, epidemischer Keratoconjunctivitis oder IBK, einer Infektion, von der gewöhnlich Rinder, Schafe und Ziegen befallen werden, der Fall. Für diese drei Arten gibt es vermutlich bestimmte etiologische Faktoren, und insbesondere beim Rind scheint der Haupt-Mikroorganismus, der involviert ist, Moraxella bovis zu sein (obwohl andere Erreger viralen Ursprungs nicht ausgeschlossen werden sollten, wie zum Beispiel das Rinotracheitis-Virus, beim Schaf Mikoplasma, Rickettsiae und Clamidiae und bei der Ziege Rickettsiae). Die Krankheit äußert sich in akuter Form und neigt dazu, sich schnell auszubreiten: in den Anfangsstadien ist die Symptomatologie gekennzeichnet durch Blepharospasmus und übermäßige Tränensekretion, gefolgt von Eiterexsudat, Bindehautentzündung und Hornhautentzündung, oftmals von Fieber, Appetitverlust und Rückgang der Milchproduktion begleitet. Besonders ernst sind Hornhautverletzungen, die in den Endstadien sogar die Perforation der Hornhaut selbst verursachen können. Das klinische Fortschreiten der Krankheit variiert von einigen Tagen bis mehreren Wochen.
Bei der Behandlung kommt eine riesige Auswahl an Chemotherapeutika zur Anwendung, die sowohl örtlich (oftmals in Verbindung mit steroiden entzündungshemmenden Mitteln), als auch systemisch verabreicht werden und Tetracyline, wie z. B. Oxytetracyclin, Penicilline, wie z. B. Cloxacillin und Benzylpenicillin, Sulfonamide, Polymyxin B (in Verbindung mit Miconazol und Prednisolon), Chloramphenicol, Tylosin und Chlormycetin umfassen. Die örtliche Behandlung der Erkrankung stellt trotz ihrer scheinbaren Einfachheit noch immer ein ungelöstes Problem dar, da es mit den bisher verwendeten, augenärztlichen Präparaten aus dem einen oder anderen Grund nicht möglich war, therapeutisch wirksame Konzentrationen von Antibiotika oder Sulfamiden in der Tränensekretion zu erhalten. In Anbetracht der hauptsächtlich geneigten Kopfposition bei diesen Tieren ist dies im Fall von Lösungen ganz verständlich, dasselbe gilt aber auch für halbfeste Medikamente, da die gewöhnlich verwendeten Arzneimittelvehikel nicht die notwendigen Eigenschaften einer Haftung an der Hornhautoberfläche besitzen, da sie üblicherweise keine genügend hohe Konzentration an aktiver Substanz aufweisen und keine perfekte Verteilung derselben erreichen können (d. h., ein Verteilungsgradient ist vorhanden). Diese Mängel des herkömmlichen Colliriums bei der augenärztlichen Anwendung wurden beispielsweise von Slatter et al., Austr. Vet. J., 1982, 59 (3), S. 69–72, beschrieben.
Mit den Estern der vorliegenden Erfindung können diese Schwierigkeiten überwunden werden. Die Gegenwart des Hyaluronsäureesters als Vehikel für ophthalmische Arzneimittel ermöglicht in der Tat die Formulierung ausgezeichneter Präparate, die keine Konzentrationsgradienten der aktiven Substanz aufweisen und daher vollkommen homogen sind, eine perfekte Transparenz und ausgezeichnete Haftung am Hornhautepithel ohne Sensibilisierungswirkungen sowie eine ausgezeichnete Vehikeleigenschaft der aktiven Substanz und möglicherweise eine verzögerte Wirkung besitzen.
Die obenstehend erwähnten Eigenschaften der neuen Medikamente können natürlich auch in anderen Bereichen als der Augenheilkunde ausgenutzt werden. Sie können in der Dermatologie und bei Erkrankungen der Schleimhäute, beispielsweise im Mund, genutzt werden. Überdies können sie angewandt werden, um durch den beispielsweise bei Zäpfchen auftretenden Effekt der transkutanen Absorption eine systemische Wirkung zu erhalten. All diese Anwendungen sind sowohl in der Human- als auch in der Veterinärmedizin möglich. In der Humanmedizin sind die neuen Medikamente besonders geeignet für die Anwendung in der Pädiatrie. Die vorliegende Erfindung umfasst daher insbesondere all diese therapeutischen Anwendungen.
Um der Kürze Willen soll von nun an, wenn die aktive Substanz des erfindungsgemäßen Bestandteils (1) erwähnt wird, davon ausgegangen werden, dass auch die Kombination einer oder mehrerer aktiver Substanzen inbegriffen ist.
Der obenstehend beschriebene Bestandteil (1) kann in erster Linie in Hinblick auf seine Verwendung in den verschiedenen therapeutischen Bereichen definiert werden, angefangen von der Unterscheidung zwischen Human- und Veterinärmedizin, gefolgt von der Spezifizierung der verschiedenen Anwendungsgebiete bezüglich der zu behandelnden Organe oder Gewebe, wie, die örtliche Anwendung betreffend, der Augenheilkunde, Dermatologie, Otorhinolaryngologie, Frauenheilkunde, Angiologie, Neurologie oder aller Arten von Erkrankungen innerer Organe, die durch örtliche Anwendungen, zum Beispiel durch rektale Anwendungen, behandelt werden können.
Die Vehikelwirkung der Hyaluronsäureesfer kommt auch bei kombinierten Medikamenten des obenstehend erwähnten Typs zum Tragen, bei denen die aktive Substanz nicht nur örtlich oder durch nasale oder rektale Absorption, beispielsweise durch Nasensprays oder Präparate zur Inhalation in die Mundhöhle oder den Rachen, sondern auch auf oralem oder parenteralem Weg, beispielsweise auf intramuskulärem, subkutanem oder intravenösem Weg, wirkt, da sie die Absorption des Arzneimittels am Ort der Anwendung begünstigt. Die neuen Medikamente können daher, abgesehen von den bereits erwähnten Bereichen, praktisch auf allen Gebieten der Medizin angewandt werden, wie z. B. der inneren Medizin, zum Beispiel bei Erkrankungen des Herz-Kreislauf-Systems, bei Infektionen des Atmungssystems, des Verdauungssystems, des Nierensystems, bei Erkrankungen einer endokrinologischen Natur, in der Onkologie, in der Psychiatrie etc., und können daher auch vom Standpunkt ihrer speziellen Wirkung aus betrachtet klassifiziert werden, und zwar möglicherweise als Anästhetika, Analgetika, entzündungshemmende Mittel, Wundheilmittel, antimikrobielle Mittel, adrenergische Agonisten und Antagonisten, Zytostatika, Antirheumatika, Antihypertonika, diuretische Mittel, Sexualhormone, immunitätsstimulierende Mittel und Immunsuppressiva, wobei zum Beispiel eines der Arzneimittel jene Wirkungsfähigkeit besitzt, die bereits für therapeutisch aktive Alkohole, die als erfindungsgemäßer Veresterungsbestandteil zu verwenden sind, oder für die zur Salzbildung der freien Carboxylgruppen eingesetzten, therapeutisch aktiven Basen beschrieben wurde.
Der Bestandteil (1) der obenstehend erwähnten Medikamente kann erfindungsgemäß auch eine Kombination zweier oder mehrerer aktiver Substanzen sein, wie sie in vielen bekannten Medikamenten enthalten ist.
Im Bereich der Augenheilkunde können die Indikationen zum Beispiel die Folgenden sein: die miotischen, entzündungshemmenden, wundheilenden und antimikrobiellen Wirkungen.
Beispiele für erfindungsgemäß in ophthalmischen Medikamenten zu verwendende, pharmakologisch aktive Substanzen sind die Folgenden: basische und nicht basische Antibiotika, wie z. B. Aminoglycoside, Makrolide, Tetracycline und Peptide, wie z. B. Gentamycin, Neomycin, Streptomycin, Dihydrostreptomycin, Kanamycin, Amikacin, Tobramycin, Spectinomycin, Erythromycin, Oleandomycin, Carbomycin, Spiramycin, Oxytetracyclin, Rolitetracyclin, Bacitracin, Polymyxin B-Gramicidin, Colistin, Chloramphenicol, Lincomycin, Vancomycin, Novobiocin, Ristocetin, Clindamycin, Amphotericin B, Griseofulvin, Nystatin und möglicherweise deren Salze, wie z. B. Sulfat oder Nitrat, oder Kombinationen derselben untereinander oder mit anderen Wirkstoffen, wie den untenstehend erwähnten.
Andere ophthalmische Arzneimittel, die erfindungsgemäß vorteilhaft verwendet werden können, sind die Folgenden: andere Antiinfektionsmittel, wie z. B. Diethylcarbamazin, Mebendazol, Sulfaminsäuren, wie z. B. Sulfacetamid, Sulfadiazin, Sulfisoxazol, Antivirenmittel und Tumorwachstumshemmer, wie z. B. Ioddesoxyuridin, Adeninarabinosid, Trifluorthymidin, Acyclovir, Ethyldesoxyuridin, Bromvinyldesoxyuridin, 5-Iod-5'-amino-2',5'-didesoxyuridin; entzündungshemmende Steroid-Mittel, wie z. B. Dexamethason, Hydrocortison, Prednisolon, Fluormetholon, Medryson und möglicherweise deren Ester, zum Beispiel Phosphorsäure; entzündungshemmende Nicht-Steroid-Mittel, wie z. B. Indomethacin, Oxyphenbutazon, Flurbiprofen; Wundheilmittel, wie z. B. der epidermale Wachstumsfaktor, EGF; lokale Anästhetika, wie z. B. Benoxinat, Proparacain und möglicherweise deren Salze; cholinergische Agonisten, wie z. B. Pilocarpin, Methcholin, Carbomylcholin, Aceclidin, Physostigmin, Neostigmin, Demecarium und möglicherweise deren Salze; cholinergische Antagonisten, wie z. B. Atropin, und deren Salze; adrenergische Agonisten, wie z. B. Noradrenalin, Adrenalin, Naphazolin, Methoxamin, und möglicherweise deren Salze; adrenergische Antagonisten, wie z. B. Propanolol, Timolol, Pindolol, Bupranolol, Atenolol, Metoprolol, Oxprenolol, Practolol, Butoxamin, Sotalol, Butathrin, Labetolol, und möglicherweise deren Salze.
Beispiele für die allein oder in Kombination untereinander oder mit anderen dermatologisch wirksamen Grundbestandteilen zu verwendenden, aktiven Substanzen sind die Folgenden: Heilmittel, wie z. B. Antiinfektionsmittel, Antibiotika, antimikrobielle Mittel, entzündungshemmende Mittel, Zytostatika, Zytotoxika, Antivirenmittel, Anästhetika und Prophylaktika, wie z. B. Sonnenschutzmittel, Deodorants, Antiseptika und Desinfektionsmittel. Von den Antibiotika sind besonders wichtig: Erythromycin, Bacitracin, Gentamycin, Neomycin, Aureomycin, Gramicidin und deren Kombinationen, von den antibakteriellen Mitteln und Desinfektionsmitteln: Nitroflurzon, Mafenid, Chlorhexidin und Derivate von 81-Hydroxychinolin und möglicherweise deren Salze; von den entzündungshemmenden Mitteln vor allem die Corticosteroide, wie z. B. Prednisolon, Dexamethason, Flumethason, Clobetasol, Triamcinolonacetonid, Betamethason und deren Ester, wie z. B. Valerate, Benzoate, Dipropionate; von der zytotoxischen Gruppe: Fluoruracil, Methotrexat, Pdophyllin; von den Anästhetika: Dibucain, Lidocain, Benzocain.
Diese Auflistung liefert natürlich nur einige Beispiele, und es können alle anderen in der Literatur beschriebenen Mittel verwendet werden.
Als Kombinationen von Arzneimitteln, die in der Dermatologie verwendet werden können, sollten die verschiedenen Antibiotika erwähnt werden, wie z. B. Erythromycin, Gentamycin, Neomycin, Gramicidin, Polymyxin B untereinander, oder Kombinationen dieser Antibiotika mit entzündungshemmenden Mitteln, beispielsweise mit Corticosteroiden, zum Beispiel Hydrocortison + Neomycin, Hydrocortison + Neomycin + Polymyxin B + Gramicidin, Dexamethason + Neomycin, Fluometholon + Neomycin, Prednisolon + Neomycin, Triamcinolon + Neomycin + Gramicidin + Nystatin, oder alle anderen, in den herkömmlichen dermatologischen Präparaten verwendeten Kombinationen.
Die Kombinationen verschiedener aktiver Substanzen sind natürlich nicht auf diesen Bereich beschränkt, sondern in jedem der obenstehend erwähnten Gebiete der Medizin können Kombinationen verwendet werden, die jenen ähnlich sind, die für die bekannten pharmazeutischen Zubereitungen des Stands der Technik bereits verwendet werden.
Wird, wie im obenstehenden Fall, ein Bestandteil (1) mit basischer Beschaffenheit verwendet, können die Salze, die mit einem partiellen Hyaluronsäureester gebildet werden (da letzterer im Überschuss eingesetzt wird), verschiedenen Typen angehören, das heißt, es können alle verbleibenden Carboxylgruppen oder nur ein aliquoter Teil als Salze gebildet werden, wodurch Ester-saure Salze oder Ester-neutrale Salze hergestellt werden. Die Anzahl der frei zu haltenden, sauren Gruppen kann für die Herstellung von Medikamenten mit einem besonderen pH-Wert von Bedeutung sein. Umgekehrt ist es möglich, den basischen Bestandteil (1) im Übermaß zu verwenden, in welchem Fall alle im Hyaluronsäureester zur Verfügung stehenden Carboxylgruppen mit der Base als Salze ausgebildet werden.
Gemäß einem besonderen Aspekt der Erfindung ist es möglich, bei der Herstellung von Medikamenten dieses Typs von zuvor isolierten und möglicherweise gereinigten Salzen auszugehen, die in ihrem festen wasserfreien Zustand als amorphe Pulver vorliegen, welche bei Kontakt mit dem zu behandelnden Gewebe eine durch Viskosität und elastische Eigenschaften gekennzeichnete, wässrige Lösung bilden. Diese Eigenschaften bleiben sogar bei stärkeren Verdünnungen erhalten, und es ist daher möglich, anstelle der obenstehend erwähnten wasserfreien Salze, mehr oder weniger konzentrierte wässrige Lösungen oder Salzlösungen, möglicherweise unter Zugabe anderer Arzneimittelvehikel oder Zusätze, wie z. B. anderer Mineralsalze zur Regulierung des pH-Werts und des osmotischen Drucks, zu verwenden. Es ist natürlich möglich, die Salze auch für die Herstellung von Gels, Einlagen, Cremes oder Salben zu verwenden, die auch andere Arzneimittelvehikel oder Inhaltstoffe enthalten, welche bei traditionellen Formulierungen dieser pharmazeutischen Zubereitungen verwendet werden.
Gemäß einem Hauptaspekt der Erfindung werden die Medikamente, welche den Hyaluronsäureester oder dessen Salze mit therapeutisch aktiven oder inaktiven Substanzen als Vehikel enthalten, jedoch allein verwendet (außer möglicherweise mit einem wässrigen Lösungsmittel). Die Erfindung umfasst auch die Gemische, die aus allen Arten der hier beschriebenen Medikamente erhältlich sind, Gemische derselben Medikamente und möglicherweise auch Gemische der neuen Hyaluronsäureester mit freier Hyaluronsäure oder Gemische ihrer Salze, zum Beispiel von Natriumsalzen.
Der erfindungsgemäße Bestandteil (1) kann auch in Form von Kombinationen oder Gemischen von zwei oder mehreren dieser Arzneimittel und möglicherweise auch mit anderen Grundbestandteilen vorliegen. In der Augenheilkunde zum Beispiel kann ein Arzneimittel mit einer antibiotischen oder antiphlogistischen Substanz und einem Vasokonstriktor oder mit mehreren Antibiotika, einer oder mehreren antiphlogistischen Substanzen oder mit einem oder mehreren Antibiotika, einem Mydiatrikum oder einem Miotikum oder einem Wundheilmittel oder einem Antiallergikum etc. kombiniert werden. Folgende Kombinationen ophthalmischer Arzneimittel können zum Beispiel eingesetzt werden: Kanamycin + Phenylephrin + Dexamethasonphosphat; Kanamycin + Betamethasonphosphat + Phenylephrin; oder ähnliche Kombinationen mit anderen in der Augenheilkunde verwendeten Antibiotika, wie z. B. Rolitetracyclin, Neomycin, Gentamycin, Tetracyclin.
Werden anstelle von nur einer aktiven Substanz, des Bestandteils (1), Kombinationen aktiver Substanzen, wie z. B. die obenstehend erwähnten, verwendet, können die Salze der basischen aktiven Substanzen und des partiellen Esters von Hyaluronsäure Mischsalze aus einer oder mehreren dieser basischen Substanzen oder möglicherweise Mischsalze dieses Typs mit einer bestimmten Anzahl anderer Säuregruppen der mit den obenstehend erwähnten Metallen oder Basen als Salze ausgebildeten Polysaccharide sein. Es ist zum Beispiel möglich, Salze eines partiellen Esters von Hyaluronsäure oder einer der Molekülfraktionen Hyalastin oder Hyalectin mit einem pharmakologisch inaktiven Alkohol und mit einem bestimmten Prozentsatz an Säuregruppen, die mit dem antibiotischen Kanamycin als Salze ausgebildet sind, und einem anderen Prozentsatz an Carboxylgruppen, die mit dem Vasokonstriktor Phenylephrin als Salze ausgebildet sind, herzustellen, und ein verbleibender Prozentsatz an Säuregruppen kann beispielsweise frei sein oder mit Natrium oder einem der anderen obenstehend erwähnten Metalle als Salz ausgebildet sein. Es ist auch möglich, diese Art von Mischsalz mit freier Hyaluronsäure oder deren Fraktionen oder deren Metallsalzen zu mischen, wie obenstehend bezüglich der Medikamente, die Salze einer einzigen aktiven Substanz mit den obenstehend erwähnten Polysaccharidestern enthalten, erwähnt wurde.
In Analogie zu den hinsichtlich der Augenheilkunde und Dermatologie besprochenen Beispielen ist es möglich zu verstehen, welche erfindungsgemäßen Medikamente in den obenstehend erwähnten Bereichen der Medizin, wie zum Beispiel der Otorhinolaryngologie, der Zahnheilkunde oder der inneren Medizin, zum Beispiel der Endokrinologie, verwendbar sind. Solche Präparate können daher zum Beispiel entzündungshemmende Mittel, Vasokonstriktoren oder Vasokompressoren, wie sie bereits in Hinblick auf die Augenheilkunde erwähnt wurden, Vitamine, Antibiotika, wie sie obenstehend erwähnt wurden, Hormone, Chemotherapeutika, antibakterielle Mittel etc., wie sie ebenfalls obenstehend hinsichtlich der Verwendung in der Dermatologie erwähnt wurden, sein.
Die aus einem Hyaluronsäureester und einer pharmakologisch aktiven Substanz kombinierten Medikamente können andere pharmazeutische Vehikel enthalten, wie z. B. jene, die untenstehend hinsichtlich der nur Hyaluronsäureester enthaltenden pharmazeutischen Zubereitungen erwähnt sind, und können in Form von Salben, Cremes, Pastillen, Gelatinekapseln, Kapseln, wässrigen oder öligen Lösungen, Sprays, Zäpfchen etc. vorliegen. Gemäß einem besonderen Aspekt der vorliegenden Erfindung wird jedoch die Verwendung von Medikamenten bevorzugt, die eine Kombination aus Bestandteil (1) und (2) enthalten, wobei der Bestandteil (2) das einzige Vehikel darstellt (abgesehen von einem möglichen Lösungsmittel, wie z. B. einem wässrigen Lösungsmittel).
Von den Medikamenten der Erfindung sind gemäß jedem einzelnen Fall jene von besonderer Bedeutung, die einen für die Umgebung, in der sie angewandt werden sollen, geeigneten Aciditätsgrad, d. h., einen physiologisch tolerierbaren pH-Wert, aufweisen. Die Einstellung des pH-Werts, beispielsweise bei den obenstehend erwähnten Salzen des partiellen Esters von Hyaluronsäure mit einer basischen aktiven Substanz, kann durch die passende Regulierung der Mengen an Polysaccharid, dessen Salzen und der basischen Substanz selbst erfolgen. Ist die Acidität eines Salzes des partiellen Esters von Hyaluronsäure mit einer basischen Substanz zu hoch, so kann der Überschuss an freien Säuregruppen somit beispielsweise mit den obenstehend erwähnten anorganischen Basen, zum Beispiel mit dem Natrium- oder Kalium- oder Ammoniumhydrat, neutralisiert werden.
Verfahren zur Herstellung von HY-Estern der Erfindung
Verfahren A:
Die erfindungsgemäßen Hyaluronsäureester können durch Verfahren hergestellt werden, die per se für die Veresterung von Carbonsäuren bekannt sind, zum Beispiel durch die Behandlung einer freien Hyaluronsäure mit den gewünschten Alkoholen in Gegenwart von katalysierenden Substanzen, wie z. B. starken anorganischen Säuren oder Ionenaustauschern des Säuretyps, oder mit einem Veretherungsmittel, welches in der Lage ist, den gewünschten alkoholischen Rest in Gegenwart von anorganischen oder organischen Basen einzuführen. Als Veretherungsmittel können die in der Literatur bekannten verwendet werden, speziell die Ester verschiedener anorganischer Säuren oder organischer Sulfonsäuren, wie z. B. Wasserstoffsäuren, d. h. Halogenkohlenwasserstoffe, wie z. B. Methyl- oder Ethyliodid, oder neutrale Sulfate oder Kohlenwasserstoffsäuren, Alfite, Carbonate, Silikate, Phosphite oder Kohlenwasserstoffsulfonate, wie z. B. Methylbenzol oder p-Toluolsulfonat oder Methyl- oder Ethylchlorsulfonat. Die Reaktion kann in einem geeigneten Lösungsmittel stattfinden, beispielsweise in einem Alkohol, der bevorzugt der in die Carboxylgruppe einzuführenden Gruppe entspricht. Die Reaktion kann jedoch auch in nichtpolaren Lösungsmitteln, wie z. B. Ketonen, Ethern, wie z. B. Dioxan, oder in aprotischen Lösungsmitteln, wie z. B. Dimethylsulfoxid, stattfinden. Als Base kann beispielsweise ein Hydrat eines Alkali- oder Erdalkalimetalls oder Magnesium- oder Silberoxid oder ein basisches Salz eines dieser Metalle, wie z. B. ein Carbonat, und von den organischen Basen eine tertiäre azotierte Base, wie z. B. Pyridin oder Collidin, verwendet werden. Anstelle der Base kann auch ein Ionenaustauscher des basischen Typs verwendet werden.
Ein anderes Versterungsverfahren setzt die Metallsalze oder Salze mit organischen azotierten Basen, beispielsweise Ammoniumsalze oder ammoniumsubstituierte Salze, ein. Vorzugsweise werden die Salze der Alkali- oder Erdalkalimetalle verwendet, es können aber auch alle anderen Metallsalze verwendet werden. Die Veresterungsmittel sind auch in diesem Fall jene, die obenstehend erwähnt wurden, und dasselbe gilt für die Lösungsmittel. Vorzugsweise werden aprotische Lösungsmittel, beispielsweise Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid, eingesetzt.
Bei den gemäß dieser Verfahrensweise oder gemäß der anderen untenstehend beschriebenen Verfahrensweise erhaltenen Estern können, falls gewünscht, freie Carboxylgruppen der partiellen Ester in einer per se bekannten Art und Weise als Salze ausgebildet werden.
Verfahren B:
Die Hyaluronsäureester der vorliegenden Erfindung können jedoch vorteilhaft gemäß einem zweiten Verfahren hergestellt werden, welches im Allgemeinen zur Herstellung von Carbonsäureestern von sauren Polysacchariden mit Carboxylgruppen eingesetzt werden kann. Dieses Verfahren besteht in der Behandlung eines quartären Ammoniumsalzes eines sauren, Carboxylgruppen enthaltenden Polysaccharids mit einem Veretherungsmittel, vorzugsweise in einem aprotischen organischen Lösungsmittel. Als saure Ausgangspolysaccharide können, abgesehen von der Hyaluronsäure, beispielsweise andere saure Polysaccharide eines tierischen oder pflanzlichen Ursprungs und synthetisch modifizierte Derivate davon verwendet werden, wie z. B. Säure-Hemicellulose, die nach dem Ausfällen von Xylanen, deren Disaccharidkomponenten aus D-Glucuronsäure und D-Xylopyranose bestehen, aus den alkalischen Extrakten gewisser Pflanzen zu gewinnen sind (siehe „The Carbohydrates" von W. Pigman, Seiten 668–669 – R. L. Whistler, W. M. Corbett), die Pektine und sauren Polysaccharide, die aus demselben zu gewinnen sind, das heißt, Galacturonan, saure Polysaccharide, die aus Pflanzengummi (Exsudaten), wie z. B. arabischem Gummi, Tragantgummi, zu gewinnen sind, und schließlich saure Polysaccharide, die aus Seetang, wie z. B. Agar und irischen Moosen, gewonnen werden. Als Ausgangsmaterial können natürlich auch die durch den Abbau all der obenstehend erwähnten Polysaccharide erhaltenen Molekülfraktionen verwendet werden.
Als organische Lösungsmittel werden bevorzugt aprotische Lösungsmittel, wie z. B. Dialkylsulfoxide, Dialkylcarboxamide, wie insbesondere niedrigere Alkyldialkylsulfoxide, speziell Dimethylsulfoxid, und niedrigere Alkyldialkylamide von niederaliphatischen Säuren, wie z. B. Dimethyl- oder Diethylformamid oder Dimethyl- oder Diethylacetamid, eingesetzt.
Es sind aber auch andere Lösungsmittel, die nicht immer aprotisch sind, in Betracht zu ziehen, wie z. B. Alkohole, Ether, Ketone, Ester, speziell aliphatische oder heterocyclische Alkohole und Ketone mit einem niedrigen Siedepunkt, wie z. B. Hexafluorisopropanol, Trifluorethanol und N-Methylpyrrolidon.
Die Reaktion erfolgt vorzugsweise in einem Temperaturbereich, der zwischen etwa 0°C und 100°C, insbesondere zwischen etwa 25°C und 75°C, z. B. bei etwa 30°C, liegt.
Die Veresterung wird vorzugsweise durch allmähliche Zugabe des Veresterungsmittels zum obenstehend erwähnten Ammoniumsalz in einem der obenstehend erwähnten Lösungsmitteln, zum Beispiel Dimethylsulfoxid, durchgeführt.
Als Alkylierungsmittel können jene verwendet werden, die obenstehend erwähnt wurden, insbesondere die Halogenkohlenwasserstoffe, beispielsweise Alkylhalogene. Als den Ausgangsstoff bildende, quartäre Ammoniumsalze werden bevorzugt die niedrigeren Ammoniumtetraalkylate, deren Alkylgruppen vorzugsweise zwischen 1 und 6 Kohlenstoffatome aufweisen, eingesetzt. Meistens wird das Hyaluronat von Tetrabutylammonium eingesetzt. Es ist möglich, diese quartären Ammoniumsalze herzustellen, indem ein Metallsalz von Hyaluronsäure, und zwar vorzugsweise eines der obenstehend erwähnten, insbesondere Natrium- oder Kaliumsalz, in wässriger Lösung mit einem mit einer quartären Ammoniumbase als Salz ausgebildeten Sulfonharz umgesetzt wird.
Das Tetraalkylammoniumsalz des sauren Polysaccharids kann durch Gefriertrocknung des Eluats erhalten werden. Die Tetraalkylammoniumsalze von sauren Polysacchariden, die als Ausgangsverbindungen für die neue Verfahrensweise eingesetzt werden und von Niederalkylen, insbesondere Alkylen mit zwischen 1 und 6 Kohlenstoffatomen, abgeleitet sind, sind neu und bilden einen weiteren Gegenstand der vorliegenden Erfindung. Überraschenderweise zeigte sich, dass derartige Salze in den obenstehend erwähnten organischen Lösungsmitteln löslich sind, weshalb die Veresterung eines sauren Polysaccharids gemäß der obenstehend erwähnten Verfahrensweise B besonders einfach ist und reichliche Ausbeuten erbringt. Eine exakte Dosierung der Anzahl an zu veresternden Carboxylgruppen eines sauren Polysaccharids ist daher nur unter Anwendung dieser Art von Verfahrensweise möglich.
Das neue Verfahren B ist speziell zur Herstellung von Hyaluronsäureestern gemäß der vorliegenden Erfindung gut geeignet. Insbesondere die quartären Ammoniumsalze von Hyaluronsäure, speziell jene, die von Niederalkylen, insbesondere von Alkylen mit zwischen 1 und 6 Kohlenstoffatomen, abgeleitet sind, sind daher neu als Ausgangsverbindungen für das neue Verfahren und bilden einen besonderen Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
Eine Variation der zuvor beschriebenen Verfahrensweise besteht in der Umsetzung von Kaliumsalz oder saurem Polysaccharidnatrium, das in einer geeigneten Lösung, wie z. B. Dimethylsulfoxid, suspendiert ist, mit einem geeigneten Alkylierungsmittel in Gegenwart katalytischer Mengen eines quartären Ammoniumsalzes, wie z. B. Tetrabutylammoniumiodid.
Zur Herstellung der neuen Ester gemäß der vorliegenden Erfindung können Hyaluronsäuren jeglichen Ursprungs verwendet werden, wie beispielsweise die aus den obenstehend erwähnten natürlichen Ausgangsmaterialien, wie z. B. Hahnenkämmen, extrahierten Säuren. Die Herstellung derartiger Säuren ist in der Literatur beschrieben: Vorzugsweise werden gereinigte Hyaluronsäuren eingesetzt. Erfindungsgemäß werden besonders Hyaluronsäuren verwendet, die Molekülfraktionen der vollständigen Säuren umfassen, welche direkt durch Extraktion der organischen Materialien erhalten werden und deren Molekülmassen in einem weiten Bereich variieren, beispielsweise von etwa 90%–80% (MW = 11,7 – 10,4 Millionen) bis 0,2% (MW = 30.000) der Molekülmasse der vollständigen Säure mit einer Molekülmasse von 13 Millionen, vorzugsweise zwischen 5% und 0,2%. Solche Fraktionen können durch verschiedene, in der Literatur beschriebene Verfahrensweisen erhalten werden, wie z. B. durch Hydrolyse, Oxidation, enzymatische oder physikalische Verfahren, wie z. B. mechanische Verfahren oder Bestrahlungsverfahren. Während dieser Reinigungsverfahren werden daher oft primordiale Extrakte gebildet (siehe beispielsweise den obenstehend in „Cosmetics & Toiletries" zitierten Artikel von Balazs et al.). Die Abtrennung und die Reinigung der erhaltenen Molekülfraktionen werden mittels bekannter Techniken bewerkstelligt, beispielsweise durch Molekülfiltration.
Eine Fraktion von gereinigter HY, die für die erfindungsgemäße Verwendung geeignet ist, ist zum Beispiel die von Balazs in der Broschüre „Healon" – A guide to its use in Ophthalmic Surgery, D. Miller & R. Stegmann, Hrsgb. John Wiley & Sons N. Y. 81983: S. 5, beschriebene, die als „nicht entzündliches NIF-NaHA-Natriumhyaluronat bekannt ist.
Von besonderer Bedeutung als Ausgangsmaterialien für die Ester der vorliegenden Erfindung sind zwei von der Hyaluronsäure erhältliche, gereinigte Fraktionen, beispielsweise jene, die aus Hahnenkämmen extrahiert werden und als „Hyalastin" und „Hyalectin" bekannt sind. Die Hyalastinfraktion hat eine mittlere Molekülmasse von etwa 50.000 bis 100.000, während die Hyalectinfraktion eine mittlere Molekülmasse hat, die zwischen etwa 500.000 und 730.000 liegt. Eine kombinierte Fraktion dieser beiden Fraktionen wurde ebenfalls isoliert und ist gekennzeichnet durch eine mittlere Molekülmasse von etwa 250.000 bis etwa 350.000. Diese kombinierte Fraktion kann mit einer Ausbeute von 80% der vollständigen, in dem bestimmten Ausgangsmaterial verfügbaren Hyaluronsäure erhalten werden, während die Hyalectinfraktion mit einer Ausbeute von 30% und die Hyalastinfraktion mit einer Ausbeute von 50% der Ausgangs-HY erhalten werden kann. Die Herstellung dieser Fraktionen ist in den Beispielen A–C beschrieben.
Die Salzbildung von HY mit den obenstehenden Metallen zur Herstellung von Ausgangssalzen für das bestimmte, obenstehend beschriebene, erfindungsgemäße Veresterungsverfahren wird in einer per se bekannten Art und Weise durchgeführt, beispielsweise durch Umsetzung von HY mit der berechneten Menge an Base, zum Beispiel mit Alkalihydraten oder mit basischen Salzen solcher Metalle, wie z. B. Carbonaten und Bicarbonaten.
Bei den partiellen Estern der vorliegenden Erfindung können alle verbleibenden Carboxylgruppen oder nur ein Teil davon als Salze ausgebildet werden, indem die Mengen an Base so dosiert werden, dass der gewünschte stöchiometrische Salzbildungsgrad erzielt wird. Mit dem richtigen Salzbildungsgrad ist es möglich, Ester mit einem breiten Bereich verschiedener Dissoziationskonstanten zu erhalten, welche daher in Lösung oder „in situ" zum Zeitpunkt der therapeutischen Anwendung den gewünschten pH-Wert ergeben.
Von den neuen Produkten der vorliegenden Erfindung. sind die obenstehend beschriebenen Ester und deren Salze und jene, die in den folgenden, der Veranschaulichung dienenden Beispielen beschrieben sind, von besonderer Bedeutung.
Die vorliegende Erfindung umfasst auch Modifikationen der Herstellungsverfahren für die neuen Ester und deren Salze, bei denen ein Verfahren in jeder beliebigen Stufe unterbrochen wird oder mit einer Zwischenverbindung gestartet wird, mit der die verbleibenden Stufen ausgeführt werden, oder bei denen die Ausgangsprodukte in situ gebildet werden.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele veranschaulicht, welche nicht als Einschränkung der Erfindung anzusehen sind.
Herstellungsbeispiele
Die folgenden Beispiele A–C beschreiben die Verfahren zur Herstellung der bevorzugten Hyaluronsäurefraktionen, die bei der vorliegenden Erfindung verwendet werden.
Beispiel A – Verfahren zur Gewinnung eines Gemisches aus Hyalastin- und Hyalectinfraktionen, die eine nicht entzündliche Wirkung haben
Frische oder gefrorene Hahnenkämme (3000 g) werden in einem Fleischwolf zerkleinert und danach in einem mechanischen Homogenisator sorgfältig homogenisiert. Die so erhaltene Paste wird in einen AISI 316-Behälter aus rostfreiem Stahl oder in ein Glas gegeben und mit 10 Volumenteilen wasserfreiem Aceton behandelt. Das Ganze wird 6 Stunden lang mit einer Geschwindigkeit von 50 U/min gerührt. Es wird 12 Stunden lang absetzen gelassen, und das Aceton wird durch Absaugen abgezogen. Die Acetonextraktion wird solange wiederholt, bis das abgezogene Aceton den richtigen Feuchtigkeitsgrad erreicht hat (Karl-Fischer-Verfahren). Das Ganze wird danach zentrifugiert und bei einer geeigneten Temperatur 5–8 Stunden lang vakuumgetrocknet. Auf diese Weise werden etwa 500–600 g trockene, pulverisierte Hahnenkämme erhalten.
300 g des trockenen Pulvers werden unter wässrigen Bedingungen mit Papain (0,2 g) enzymatisch aufgeschlossen und mit einem Phosphatpuffer gepuffert, und zwar in Gegenwart einer geeigneten Menge Cysteinhydrochlorid. Das Resultat wird 24 Stunden lang mit 60 U/min gerührt, wobei die Temperatur konstant bei 60–65°C gehalten wird. Danach wird es bei 25°C gekühlt, und Celite^R (60 g) wird zugegeben, wobei eine Stunde lang weitergerührt wird. Das sich ergebende Gemisch wird filtriert, bis eine klare Flüssigkeit erhalten wird. Die klare Flüssigkeit wird daraufhin einer Molekülultrafiltration unterzogen, bei der Membrane mit einer Molekülausschlussgrenze von 30.000 verwendet werden, so dass jene Moleküle, die eine Molekülmasse von mehr als 30.000 haben, auf der Membran zurückgehalten werden.
Das Produkt wird auf das 5 bis 6-fache des ursprünglichen Volumens ultrafiltiert, indem dem Produkt bei der Ultrafiltration kontinuierlich destilliertes Wasser beigegeben wird. Die Wasserzugabe wird eingestellt, und die Ultrafiltration wird fortgesetzt, bis das Volumen auf 1/3 des ursprünglichen Volumens reduziert ist.
Die restliche Flüssigkeit wird durch Zugabe von Natriumchlorid 0,1 M gemacht, und die Temperatur wird auf 50°C gebracht. Unter Rühren mit 60 U/min werden 45 g Cetylpyridiniumchlorid zugegeben. Es wird 60 Minuten lang gerührt, und danach werden 50 g Celite^R zugegeben. Unter Rühren wird die Temperatur des Ganzen auf 25°C gebracht, und der durch Zentrifugation gebildete Niederschlag wird gesammelt. Der erhaltene Niederschlag wird in einer 0,01 M-Lösung in Natriumchlorid (5 Liter), die 0,05% Cetylpyridiniumchlorid enthält, suspendiert. Die sich ergebende Suspension wird 60 Minuten lang bei 50°C gerührt; die Temperatur wird dann auf 25°C gebracht, und der Niederschlag wird zentrifugiert. Der Waschvorgang wird dreimal wiederholt, wonach der Niederschlag in einem Sammelgefäß, welches 3 Liter einer 0,05 M-Natriumchloridlösung enthält, die 0,05% Cetylpyridiniumchlorid enthält, gesammelt wird. Er wird 60 Minuten lang mit 60 U/min gerührt, und die Temperatur wird zwei Stunden lang konstant bei 25°C gehalten. Der Überstand wird durch Zentrifugation entfernt. Die Prozedur wird mehrmals mit Lösungen von 0,1 M-Natriumchlorid, die 0,05% Cetylpyridiniumchlorid enthalten, wiederholt. Das Gemisch wird zentrifugiert, und der Überstand wird verworfen. Der Niederschlag wird in einer Lösung von 0,30 M-Natriumchlorid, die 0,05% Cetylpyridiniumchlorid enthält (3 Liter), dispergiert. Das Gemisch wird gerührt, und sowohl der Niederschlag als auch die klare Flüssigkeit werden gesammelt. Die Extraktion wird mit dem Niederschlag weitere drei Male wiederholt, wobei jedes Mal 0,5 Liter der gleichen wässrigen Lösung verwendet werden.
Zum Schluss wird der Fällungsrückstand entfernt, und die klaren Flüssigkeiten werden alle in einem einzigen Behälter zusammengegeben. Die Temperatur der Flüssigkeit wird unter konstantem Rühren auf 50°C gebracht. Die Flüssigkeit wird danach mit auf 0,23 M gebracht. 1 g Cetylpyridiniumchlorid wird zugegeben, und das Rühren wird 12 Stunden lang beibehalten.
Das Gemisch wird bei 25°C gekühlt und dann zunächst durch eine Celite^R-Packung und danach durch einen Filter filtriert. Es wird daraufhin nochmals einer Molekülultrafiltration durch eine Membran mit einer Molekülausschlussgrenze von 30.000 unterzogen, wobei unter Zusatz einer Lösung von 0,33 M-Natriumchlorid auf das Dreifache des ursprünglichen Volumens ultrafiltriert wird. Die Zugabe der Natriumchloridlösung wird unterbrochen und das Volumen auf ¼ des Ausgangsvolumens reduziert. Die so konzentrierte Lösung wird bei 25°C unter Rühren (60 U/min) mit 3 Volumenteilen Ethanol (95%ig) ausgefällt. Der Niederschlag wird durch Zentrifugation gesammelt, und der Überstand wird verworfen. Der Niederschlag wird in 1 Liter einer 0,01 M-Natriumchloridlösung gelöst, und die Fällung wird mit 3 Volumenteilen Ethanol, 95%, wiederholt.
Der Niederschlag wird gesammelt und zuerst mit 75%igem Ethanol (dreimal), dann mit absolutem Ethanol (dreimal) und zuletzt mit absolutem Aceton (dreimal) gewaschen. Das so erhaltene Produkt (HYALASTIN + HYALECTIN-Fraktion) hat eine mittlere Molekülmasse, die zwischen 250.000 und 350.000 liegt.
Die Ausbeute an HY beträgt 0,6% des ursprünglichen frischen Gewebes.
Beispiel B – Verfahren zur Gewinnung der Hyalastinfraktion aus dem Gemisch, welches durch das in Beispiel A beschriebene Verfahren erhalten wurde
Das Gemisch, welches durch das in Beispiel A beschriebene Verfahren erhalten wurde, wird in bidestilliertem apyrogenem Wasser in einem Verhältnis von 10 mg Produkt je 1 ml Wasser gelöst. Nach einer Konzentrationstechnik an der Membran ohne Wasserzusatz wird die erhaltene Lösung einer Molekularfiltration durch Filtermembrane mit einer Molekülausschlussgrenze von 200.000 ausgesetzt. Während des Ultrafiltrationsverfahrens durch Membrane mit einer Molekülausschlussgrenze von 200.000 passen Moleküle mit einer Molekülmasse, die 200.000 übersteigt, nicht durch, während die kleineren Moleküle zusammen mit dem Wasser durch die Membran hindurchlaufen. Während des Filtrationsvorgangs wird kein Wasser zugesetzt, so dass sich das Volumen verringert und deshalb ein Konzentrationsanstieg bei den Molekülen mit einer Molekülmasse, die 200.000 übersteigt, besteht. Das Produkt wird ultrafiltriert, bis das Volumen über der Membran auf 10% des Ausgangsvolumens reduziert ist. Es werden 2 Volumenteile bidestilliertes apyrogenes Wasser zugegeben, und danach wird nochmals ultrafiltriert, bis das Volumen auf 1/3 reduziert ist. Der Vorgang wird noch zweimal wiederholt. Die durch die Membran hindurchlaufende Lösung wird mit Natriumchlorid auf 0,1 M gebracht und dann mit 4 Volumenteilen 95%igem Ethanol ausgefällt. Der Niederschlag wird dreimal mit 75%igem Ethanol gewaschen und danach vakuumgetrocknet.
Das so erhaltene Produkt (HYALASTIN-Fraktion) hat eine mittlere Molekülmasse, die zwischen 50.000 und 100.000 liegt. Die Ausbeute an HY entspricht 0,4% des ursprünglichen frischen Gewebes.
Beispiel C – Verfahren zur Gewinnung der Hyalectinfraktion
Die in dem Behälter über der Ultrafiltrationsmembran mit einem Molekülausschluss von 200.000 wie in Beispiel B gesammelte, konzentrierte Lösung wird mit Wasser verdünnt, bis eine Lösung, die 5 mg/ml Hyaluronsäure enthält, erhalten wird, was durch eine quantitative Analyse, bezogen auf die Dosierung der Glucuronsäure, bestimmt wird.
Die Lösung wird in Natriumchlorid auf 0,1 M gebracht und dann mit 4 Volumenteilen 95%igem Ethanol ausgefällt. Der Niederschlag wird dreimal mit 75%igem Ethanol gewaschen und danach vakuumgetrocknet.
Das so erhaltene Produkt (HYALECTIN-Fraktion) hat eine mittlere Molekülmasse, die zwischen 500.000 und 730.000 liegt. Dies entspricht einer spezifischen Hyaluronsäurefraktion mit einer definierten Molekülkettenlänge von etwa 2.500 bis 3.500 Saccharideinheiten mit hohem Reinheitsgrad. Die Ausbeute an HY entspricht 0,2% des ursprünglichen frischen Gewebes.
Beispiel D – Herstellung des Tetrabutylammoniumsalzes von Hyaluronsäure (HY)
4,02 g HY-Natriumsalz (10 m.Äq.) werden in 400 ml destilliertem H₂O gelöst. Die Lösung wird danach bei 4°C in einer Thermostatsäule, die 15 ml Sulfonharz (Dowex 50 × 8) in Tetrabutylammoniumform enthält, eluiert. Das natriumfreie Eluat wird sofort gefroren und gefriergetrocknet. Ausbeute: 6,18 g.
Beispiel 1 – Herstellung des (partiellen) Cortisonesters (C₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 20% der Carboxylgruppen sind verestert – 80% der Carboxylgruppen sind als Salz (Na) ausgebildet
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 105.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 0,850 g (2 m.Äq.) 21-Brom-4-pregnen-17α-ol-3, 11, 20-trion werden zugegeben, und die resultierende Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
Das Produkt wird dann in 300 ml Wasser, welches 1% Natriumchlorid enthält, aufgelöst, und die Lösung wird unter konstantem Rühren langsam in 1.500 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und zweimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich 24 Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird. 4,5 g der im Titel erwähnten, partiellen Cortisonesterverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Cortisons gemäß British Pharmacopea, 1980, S. 127, durchgeführt.
Beispiel 2 – Herstellung des (partiellen) Hydrocortisonesters (C₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 20% der Carboxylgruppen sind verestert – 80% der Carboxylgruppen sind als Salz (Na) ausgebildet
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 80.000, was 20 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 0,850 g (2 m.Äq.) 21-Brom-4-pregnen-11β, 17α-diol-3, 20-dion werden zugegeben, und die resultierende Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
Das Produkt wird dann in 300 ml Wasser, welches 1% Natriumchlorid enthält, aufgelöst, und die Lösung wird unter konstantem Rühren langsam in 1.500 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und zweimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich 24 Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird. 4,4 g der im Titel erwähnten, partiellen Hydrocortisonesterverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Hydrocortisons gemäß British Pharmacopea, 1980, S. 224, durchgeführt.
Beispiel 3 – Herstellung des (partiellen) Fluorcortisonesters (C₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 20% der Carboxylgruppen sind verestert – 80% der Carboxylgruppen sind als Salz (Na) ausgebildet
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 80.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 0,89 g (2 m.Äq.) 9-Fluor-21-brom-4-pregnen-11β, 17α-diol-3, 20-dion werden zugegeben, und die resultierende Lösung wird 12 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 62 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
Das Produkt wird dann in 300 ml Wasser, welches 1% Natriumchlorid enthält, aufgelöst, und die Lösung wird unter konstantem Rühren langsam in 1.500 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und zweimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich 24 Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird. 4,6 g der im Titel erwähnten, partiellen Fluorcortisonverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Fluorcortisons gemäß British Pharmacopea, 1980, S. 196, durchgeführt.
Beispiel 4 – Herstellung des (partiellen) Desoxycorticosteronesters (C₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 20% der Carboxylgruppen sind verestert – 80% der Carboxylgruppen sind als Salz (Na) ausgebildet
6,21 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 105.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 0,661 g (2 m.Äq.) 21-Brom-4-pregnen-3, 20-dion werden zugegeben, und die resultierende Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
Das Produkt wird dann in 300 ml Wasser, welches 1% Natriumchlorid enthält, aufgelöst, und die Lösung wird unter konstantem Rühren langsam in 1.500 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und zweimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich 24 Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird. 4,5 g der im Titel erwähnten, partiellen Desoxycorticosteronesterverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Desoxycorticosterons gemäß British Pharmacopea, 1980, S. 137, durchgeführt.
Beispiel 5 – Herstellung des (gemischten) Ethanol- und Cortisonesters (C₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 80% der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert – 20% der Carboxylgruppen sind mit Cortison (C₂₁) verestert
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 70.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 1,25 g (8 m.Äq.) Ethyliodid werden zugegeben, und die resultierende Lösung wird 12 Stunden lang bei 30°C gehalten.
0,85 g (2 m.Äq.) 21-Brom-4-pregnen-17α-ol-3, 11, 20-trion werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der danach filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
4,6 g der im Titel erwähnten, gemischten Ethanol- und Cortisonesterverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Cortisons gemäß British Pharmacopea, 1980, durchgeführt.
Eine quantitative Bestimmung der Ethoxyle wird gemäß R. H. Cundif und P. C. Markunas durchgeführt [Anal. Chem. 33, 1028–1030 (1961)].
Beispiel 6 – Herstellung des Gemischten) Ethanol- und Hydrocortisonesters (C₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 80% der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert – 20% der Carboxylgruppen sind mit Hydrocortison (LC₂₁) verestert
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 125.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 1,25 g (8 M.Äq.) Ethyliodid werden zugegeben, und die Lösung wird 12 Stunden lang bei 30°C gehalten.
0,85 g (2 m.Äq.) 21-Brom-4-pregnen-11β, 17α-diol-3, 20-dion werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
4,6 g der im Titel erwähnten, gemischten Ethanol- und Hydrocortisonesterverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Hydrocortisons gemäß British Pharmacopea, 1980, durchgeführt.
Eine quantitative Bestimmung der Ethoxyle wird gemäß R. H. Cundiff und P. C. Markunas durchgeführt [Anal. Chem. 33, 1028–1030 (1961)].
Beispiel 7 – Herstellung des (gemischten) Ethanol- und Fluorcortisonesters (C₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 80% der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert – 20% der Carboxylgruppen sind mit Fluorcortison (C₂₁) verestert
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 70.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 1,25 g (8 m.Äq.) Ethyliodid werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
0,89 g (2 m.Äq.) 9α-Fluor-21-Brom-4-pregnen-11β, 17α-diol-3, 20-dion werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
4,6 g der im Titel genannten, gemischten Ethanol- und Fluorcortisonesterverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Fluorcortisons gemäß British Pharmacopea, 1980, durchgeführt.
Eine quantitative Bestimmung der Ethoxyle wird gemäß R. H. Cundiff und P. C. Markunas durchgeführt [Anal. Chem. 33, 1028–1030 (1961)].
Beispiel 8 – Herstellung des Gemischten) Ethanol- und Desoxycorticosteronesters (C₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 80% der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert – 20% der Carboxylgruppen sind mit Desoxycorticosteron (C₂₁) verestert
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 70.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 1,25 g (8 m.Äq.) Ethyliodid werden zugegeben, und die resultierende Lösung wird 12 Stunden lang bei 30°C gehalten.
0,661 g (2 m.Äq.) 21-Brom-4-pregnen-3, 20-dion werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten. Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
4,6 g der im Titel genannten, gemischten Ethanol- und Desoxycorticosteronesterverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Desoxycorticosterons gemäß British Pharmacopea, 1980, durchgeführt.
Eine quantitative Bestimmung der Ethoxyle wird gemäß R. H. Cundiff und P. C. Markunas durchgeführt [Anal. Chem. 33, 1028–1030 (1961)].
Beispiel 9 – Herstellung des (partiellen und gemischten) Ethanol- und Desoxycorticosteronesters von Hyaluronsäure (HY) – 40% der Carboxylgruppen sind mit Desoxycorticosteron (C₂₁) verestert – 40% der Carboxylgruppen sind als Salz (Na) ausgebildet
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 125.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 0,62 g (4 m.Äq.) Ethyliodid werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
0,85 g (2 m.Äq.) 21-Brom-4-pregnen-3, 20-dion werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten. Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
4,5 g der im Titel genannten, partiellen und gemischten Ethanol- und Desoxycorticosteronesterverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Desoxycorticosterons gemäß British Pharmacopea, 1980, durchgeführt.
Eine quantitative Bestimmung der Ethoxyle wird gemäß R. H. Cundiff und P. C. Markunas durchgeführt [Anal. Chem. 33, 1028–1030 (1961)].
Beispiel 10 – Herstellung des (partiellen und gemischten) Ethanol- und Cortisonesters von Hyaluronsäure (HY) – 40% der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert – 20% der Carboxylgruppen sind mit Cortison (C₂₁) verestert – 40% der Carboxylgruppen sind als Salz (Na) ausgebildet
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 125.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 0,62 g (4 m.Äq.) Ethyliodid werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
0,85 g (2 m.Äq.) 21-Brom-4-pregnen-17α-ol-3, 11, 20-trion werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
4,5 g der im Titel genannten, partiellen und gemischten Ethanol- und Cortisonverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Cortisons gemäß British Pharmacopea, 1980, durchgeführt.
Eine quantitative Bestimmung der Ethoxyle wird gemäß R. H. Cundiff und P. C. Markunas durchgeführt [Anal. Chem. 33, 1028–1030 (1961)].
Beispiel 11 – Herstellung des (partiellen und gemischten) Ethanol- und Hydrocortisonesters (LC₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 40% der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert – 20% der Carboxylgruppen sind mit Hydrocortison (C₂₁) verestert – 40% der Carboxylgruppen sind als Salz (Na) ausgebildet
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 70.000, was 10 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 0,62 g (4 m.Äq.) Ethyliodid werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
0,85 g (2 m.Äq.) 21-Brom-4-pregnen-11β, 17α-diol-3, 20-dion werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 200 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
4,5 g der im Titel genannten, partiellen und gemischten Ethanol- und Hydrocortisonesterverbindung werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Hydrocortisons gemäß British Pharmacopea, 1980, durchgeführt.
Eine quantitative Bestimmung der Ethoxyle wird gemäß R. H. Cundiff und P. C. Markunas durchgeführt [Anal. Chem. 33, 1028–1030 (1961)].
Beispiel 12 – Herstellung des (partiellen und gemischten) Ethanol- und Fluorcortisonesters (C₂₁) von Hyaluronsäure (HY) – 40% der Carboxylgruppen sind mit Ethanol verestert – 20% der Carboxylgruppen sind mit Fluorcortison (C₂₁) verestert – 40% der Carboxylgruppen sind als Salz (Na) ausgebildet
6,2 g HY-Tetrabutylammoniumsalz mit einer Molekülmasse von 65.000, was 20 m.Äq. einer Monomereinheit entspricht, werden bei 25°C in 310 ml Dimethylsulfoxid gelöst, 0,62 g (4 m.Äq.) Ethyliodid werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
0,89 g (2 m.Äq.) 9α-Fluor-21-brom-4-pregnen-11β, 17α-diol-3, 20-dion werden zugegeben, und die Lösung wird 24 Stunden lang bei 30°C gehalten.
Eine 100 ml Wasser und 5 g Natriumchlorid enthaltende Lösung wird daraufhin zugegeben, und das resultierende Gemisch wird unter konstantem Rühren langsam in 2.000 ml Aceton gegossen. Ein Niederschlag bildet sich, der filtriert und dreimal mit 100 ml Aceton/Wasser 5 : 1 und dreimal mit 100 ml Aceton gewaschen und schließlich acht Stunden lang bei 30° vakuumgetrocknet wird.
4,6 g des im Titel genannten, partiellen und gemischten Ethanol- und Fluorcortisonesters werden erhalten. Nach einer milden Alkalinhydrolyse mit einer hydroalkoholischen Lösung von Na₂CO₃ und einer Extraktion mit Chloroform wird eine quantitative Bestimmung des Fluorcortisons gemäß British Pharmacopea, 1980, durchgeführt.
Eine quantitative Bestimmung der Ethoxyle wird gemäß R. H. Cundiff und P. C. Markunas durchgeführt [Anal. Chem. 33, 1028–1030 (1961)].
Studien zur biologischen Wirksamkeit
1) Studien zur entzündunσshemmenden Wirkung
Die technische Wirkung der neuen Ester und der neuen Medikamente gemäß der Erfindung kann demonstriert werden, indem beispielsweise die entzündungshemmende Wirkung mancher partieller Ester von Hyaluronsäure mit antiphlogistischen Corticosteroiden, welche im Modell einer durch Dextran im Kaninchenauge hervorgerufenen, exsudativen Phlogosis gemessen wird, sichtbar gemacht wird.
Materialien
9 Hyaluronsäureester von Cortison, Hydrocortison und Fluorcortison (9 – Fluorhydrocortison), die durch die Codenamen HYC1–HYC9 identifiziert sind, wurden untersucht. Die Tabelle 1 beschreibt diese Verbindungen und zeigt die Prozentsätze der Anzahl an Carboxylgruppen von HY, die mit den obenstehenden Corticosteroiden verestert sind, und, wo anwendbar, den Prozentsatz jener, die mit einfachen aliphatischen Alkoholen verestert sind, und jener, die mit Alkalimetallen (Na) als Salze ausgebildet sind:
Die Wirkung der Verbindungen der Tabelle 1 wurde mit jener der entsprechenden Cortisone verglichen.
Alle Derivate, abgesehen von HYC4, HYC5 und HYC6 (in DMSO aufgelöst) wurden in einer Salzlösung (2 mg/ml) aufgelöst.
Verfahren
Bei 48 Kaninchen wurde mittels intraokularer Injizierung von Dextran (1% in Salzlösung, 0,1 ml) eine aseptische (exsudative) Phlogosis hervorgerufen. Die verschiedenen Produkte wurden durch Einträufelung in das rechte Auge (RE) der Kaninchen verabreicht, während in das linke Auge (LE) nur ein Vehikel eingeträufelt wurde.
Die Behandlung (3 Tropfen alle 6 Stunden) wurde unverzüglich nach der Injizierung von Dextran begonnen und wurde 16 Tage lang fortgesetzt.
Ophthalmische Untersuchung
Die beiden Augen jedes Kaninchens wurden durch eine Schlitzlampe beobachtet. Insbesondere Folgendes wurde beobachtet: der Zustand des Bindehaut- und Hornhautepithels, die vordere Kammer (Vorhandensein eines Tyndalleffekts), der Zustand der Iris und des hinteren Augensegments. Mit einer Goldmann-Linse wurde der Zustand des Augenhintergrunds untersucht. Das Vorhandensein von Anzeichen einer Entzündung (Hyperemie, Exsudat, Trübheit der Flüssigkeiten etc.) wurde verzeichnet. Der Prozentsatz an Augen, die keinerlei Zeichen einer Phlogosis aufwiesen, wurde danach berechnet.
Ergebnisse
Wie aus den in Tabelle 2 angeführten Ergebnissen ersichtlich, stellte sich heraus, dass alle HYC-Derivate eine beträchtliche entzündungshemmende Wirkung besaßen, die jener der parallel dazu untersuchten, entsprechenden Cortisone durchwegs überlegen war, sie reduzierten nicht nur an jedem Tag der Beobachtung den Prozentsatz an Augen, die eine Phlogosis aufwiesen, sondern verringerten auch die Dauer der Entzündung. Die wirksamsten dieser Derivate scheinen HYC4, HYC5 und HYC6 zu sein, vermutlich da sie lipophiler sind. Tabelle 2 Entzündungshemmende Wirkung der HYC-Derivate (Hyaluronsäureester) auf die durch Dextran hervorgerufene, aseptische (exsudative) Phlogosis beim Kaninchenauge
Die Werte werden als Prozentsätze (Anzahl der Augen ohne Anzeichen einer Phlogosis aus der Gesamtanzahl der behandelten Augen) ausgedrückt. In Klammer steht die Zahl der behandelten Augen.
2) Studien zur Absorption und biologischen Verfügbarkeit
Die technische Wirkung der neuen erfindungsgemäßen Produkte kann durch eine Studie zur Absorption und biologischen Verfügbarkeit einiger Hydrocortisonderivate mit Hyaluronsäure demonstriert werden. Die verwendeten Derivate sind jene, die obenstehend beschrieben und als HYC2, HYC5 und HYC8 identifiziert wurden.
Materialien und Verfahren
Tiere
Männliche Sprague-Dawley-Ratten mit einem Körpergewicht von 250–350 g wurden eingesetzt, welche von Charles River-Calco (Como) bezogen und ad libitum mit Wasser und einem von „Italiana Mangimi", einem Lizenznehmer von Charles River, hergestellten Mischfutter in Pelletform mit dem Codenamen 4RF 21 gefüttert wurden.
Behandlung
Hydrocortison wurde in Form von Natriumhemisuccinatsalz in einer Dosierung von 1,34 mg/kg (was 1 mg/kg Hydrocortisonbase entspricht) auf allgemeinem intravenösem Weg und in einer Dosierung von 1,34 mg/kg und 2,68 mg/kg (was 2 mg/kg Hydrocortisonbase entspricht) auf subkutanem Weg verabreicht (der i.v.-Weg wurde in Betracht gezogen, um die pharmakokinetischen Parameter zu bestimmen, die als Vergleich für die Ermittlung der Absorption jedes anderen Verabreichungswegs dienen).
Die drei HYC-Derivate wurden auf subkutanem Weg in Dosierungen von 6,5 und 13 mg/kg verabreicht (wobei die Dosierungen etwa 1 und 2 mg/kg in Hydrocortisonbase entsprechen). All die verschiedenen Produkte wurden in einer sterilen Salzlösung aufgelöst, abgesehen von HYC5, das aufgrund seiner Unlöslichkeit in vollständig wässrigen Lösungen zuerst unter Zugabe der geringsten Menge an Dimethylsulfoxid, die notwendig war, gelöst und danach mit einer Salzlösung auf das richtige Volumen gebracht wurde. Alle Verbindungen wurden mit einem konstanten Volumen von 1 ml/kg injiziert.
Sammeln der Plasmaproben
Nach der Verabreichung wurde jedem Tier in Gegenwart eines gerinnungshemmenden Mittels (Natriumheparin) durch eine Herzpunktion 0,3 ml Blut entnommen.
Die Blutentnahmezeiten waren wie folgt: *15 Min., 30 Min., 60 Min., 120 Min., 180 Min., 300 Min.; 360 Min., 420 Min., 480 Min. (*beschränkt auf den intravenösen Weg).
Dosierung von Hydrocortison
Das Hydrocortison wurde unter Anwendung eines Iodatnachweises durch das Radioimmunoassay-Verfahren (Cortisolo Kit, Biodata, cod. 10394) dosiert. Es erwies sich, dass die in sechs (doppelten) Wiederholungen eines Kontrollserums mittels bekannter Kontrollanalyse bestimmte Genauigkeit und Exaktheit des Verfahrens 3,03% bzw. 0,021% betrug. Die Linearität des Verfahrens liegt zwischen 1 und 1000 ng/ml. Die Beobachtungsgrenze liegt bei 1 ng/ml.
Die Dosis der Cortisolemia bei der Ratte wird weder von den Basenspiegeln noch von den zirkadischen Rhythmen dieses Hormons beeinflusst, da das Stoffwechselmuster der endogenen Glucocorticoidhormone bei der Ratte zur Produktion von Corticosteron und nicht von Cortisol führt (siehe E. L. Green: Biology of the laboratory mouse).
Ein vorläufiger Nachweis hat gezeigt, dass das Dosierungsverfahren nur für freies Cortisol spezifisch ist. Der Anticortisol-Antikörper stellt keinerlei Art von Konkurrenz für irgendeinen der drei HYC-Derivate dar.
Ergebnisse
In Tabelle 3 sind die Ergebnisse der durchschnittlichen Plasmaspiegel von Hydrocortison nach einer i.v.- und einer s.c.-Injektion (1 und 2 mg/kg) verzeichnet. Es sollte betont werden, dass nach der s.c.-Injektion eine ziemlich rasche Absorption des Produkts erfolgt (Tmax wurde nach etwa 30 Min. ermittelt, Cmax war gleich wie die i.v.-Weg-Spiegel bei derselben Dosierung). In Tabelle 4 sind die pharmakokinetischen Parameter von Cortisol verzeichnet, die grafisch aus den Kurven des plasmatischen Rückgangs berechnet wurden. In Tabelle 3 sind die durchschnittlichen Cortisolspiegel nach einer subkutanen Verabreichung der drei HYC-Derivate in Dosierungen von 6,5 und 13 mg/kg verzeichnet (was etwa 1 und 2 mg/kg in Hydrocortisonbase entspricht). In Tabelle 4 sind die pharmakokinetischen Parameter im Verhältnis zum Cortisol verzeichnet, die durch das Resteverfahren grafisch aus der Plasmaabsorptionskurve der drei HYC-Produkte berechnet wurden.
Es ist anzumerken, dass die Kinetik des von den drei Derivaten mit Hyaluronsäure freigesetzten Hydrocortisons nicht linear ist; das heißt, zwischen den dosierungsabhängigen Parametern, wie dem Bereich unter der Plasmarückgangskurve und den Plasmaspiegeln, existiert kein direktes Verhältnis. Da die Kinetik von Cortisol selbst linear ist und sich ein erstes Ordnungsmodell ergibt, kann gefolgert werden, dass im Fall der HYC-Derivate der Sättigungsprozess in der Hydrolyse der Esterbindung zwischen Hyaluronsäure und Cortisol besteht. Diese (sich einer Nullordnungskinetik zuneigende) Phase ist selbst nicht mit der Absorption des aktiven Grundbestandteils verbunden, und daher wurde die Kinetik der drei HYCs gleichermaßen gemäß einem ersten Ordnungsmodell aufgeschlüsselt.
Schlussfolgerungen
Im Vergleich zu Hydrocortison erweist sich die biologische Verfügbarkeit der drei untersuchten Produkte als vollständig und sogar als überlegen gegenüber jener der Schnellfreisetzungszubereitung. Diesbezüglich ist die Absorption jedoch langsamer (maximale Zeitdauer etwa 2 Stunden), und maximale Konzentrationen, die jenen von subkutan verabreichtem Cortisol entsprechen, werden nicht erreicht. Es zeigt sich jedoch, dass die plasmatische Cortisolemia mehrere Stunden nach der Verabreichung im Durchschnitt höher ist. Eine Veresterung mit Hyaluronsäure bestimmt daher eine langsamere Freisetzung von Hydrocortison, und dies ist das gewünschte Ziel.
3) Studien zur Hauthydratation
Die Hydrolyse der Esterbindung ist, wie bereits gesagt wurde, ein Sättigungsprozess; das heißt, sie tendiert zu einer Nullordnungskinetik. Dies ist ein sehr wünschenswerter Faktor für eine verzögerte Form, da ein kontrolliert freisetzendes Präparat definitionsgemäß „ein Präparat ist, welches die Freisetzung eines konstanten Aliquoten eines aktiven Grundbestandteils in einer vorgegebenen Zeit bestimmt", und dies ist der durch eine Nullordnungskinetik erreichte Zustand.
Die Haut kann aufgrund der komplexen Natur ihrer physiologischen Funktionen nicht ausschließlich als passives, umhüllendes Organ betrachtet werden, sondern eher als dynamisches, mehrfunktionelles Organ. Die volle funktionelle Kapazität der Haut wird grundsätzlich durch das Vorhandensein einer intakten hydrolipiden Umhüllung garantiert, was einen richtigen Feuchtigkeitsgehalt in der Hornschicht erfordert, der sich gemäß deren Speichervermögen stark ändert (Die Werte variieren zwischen 10% und 60% Wassergehalt). Die Feuchtigkeit der Haut hängt von einer Reihe endogener und exogener Faktoren ab.
Die Feuchtigkeit der Haut beeinflusst grundlegend die Bildung des hautspezifischen hydrolipiden Films, welcher die Substanzen, die sie abgibt, modifiziert und speichert und so die Grundlage für die Ausübung ihrer Schutzfunktionen bildet.
Die Schutzmittel, die bisher zur Wiederherstellung des maximalen Hydratationsgrads der Haut verwendet werden, bringen die Verwendung von starkhygroskopischen Substanzen, wie z. B. Glycerin, Natriumlactat und Propylenglycol, mit sich. Diese Substanzen hatten jedoch den Nachteil, dass sie unter trockenen Bedingungen die Feuchtigkeit von der Haut selbst anstatt von der äußeren Umgebung abziehen und so die Haut noch trockener machen.
Aus diesem Grund werden zur Zeit biologische Substanzen bevorzugt, was, und das stellt deren besondere Charakteristika dar, in den obenstehend erwähnten, natürlichen Hydratationsfaktoren begründet ist. In diesen Zusammenhang fällt das beträchtliche Interesse an der Verwendung von Hyaluronsäure.
Die Hydratation der Haut und ihre Ernährung scheinen eng mit dem HY-Gehalt des Hautgewebes verbunden zu sein. Es wurde in der Tat demonstriert, dass die exogene Zufuhr von HY merklich zum Hydratationszustand des Hautgewebes beiträgt.
Diese besonderen Charakteristika der Hyaluronsäure werden auch, und in sogar noch verstärktem Maße, bei den veresterten HY-Derivaten gemäß der vorliegenden Erfindung gefunden, die aus diesem Grund im Bereich der Kosmetika im großen Umfang eingesetzt werden können.
Pharmazeutische Zubereitungen
Ein Ziel der vorliegenden Erfindung besteht in der Bereitstellung von pharmazeutischen Zubereitungen, die einen oder mehrere der obenstehend erwähnten Hyaluronsäureester und deren Salze enthalten, oder eines oder mehrerer Medikamente, die aus der Kombination eines dieser Ester mit einer pharmakologisch aktiven Substanz zur örtlichen Anwendung entstehen, wie obenstehend beschrieben. Dies sind Medikamente, bei denen der Hyaluronsäureester als Vehikel für die aktive Substanz fungiert.
Die Hyaluronsäureester als aktiven Grundbestandteil enthaltenden, pharmazeutischen Zubereitungen enthalten sowohl im Fall von Estern mit therapeutisch inaktiven Alkoholen, die für die gleichen Anwendungen wie die Hyaluronsäure selbst bestimmt sind, als auch von Estern mit therapeutisch aktiven Alkoholen, die für die gewöhnlichen Anwendungen solcher Alkohole bestimmt sind, die üblichen Arzneimittelvehikel und können zur oralen, rektalen, parenteralen, subkutanen, örtlichen oder intradermalen Anwendung eingesetzt werden. Sie liegen deshalb in fester oder halbfester Form vor, zum Beispiel als Pastillen, Tabletten, Gelatinekapseln, Kapseln, Zäpfchen und Weichgelatinekapseln. Für die parenterale und subkutane Anwendung können Formen verwendet werden, die für die intramuskuläre oder intradermale Verabreichung bestimmt oder für Infusionen oder intravenöse Injektionen geeignet sind. Es ist daher möglich, Lösungen der aktiven Verbindungen oder gefriergetrocknete Pulver der aktiven Verbindungen bereitzustellen, die zu einem oder mehreren pharmazeutisch verträglichen Arzneimittelvehikeln oder Verdünnern, die für die obenstehend erwähnten Verwendungen geeignet sind und eine mit den physiologischen Flüssigkeiten kompatible Osmolarität aufweisen, zugegeben werden sollen. Für die lokale Anwendung können Präparate in Form von Sprays, zum Beispiel Nasensprays, Cremes oder Salben zur örtlichen Anwendung oder speziell hergestellte Heftpflaster zur intradermalen Verabreichung eingesetzt werden. Die Löslichkeit der Hyaluronsäureester in organischen Lösungsmitteln mit niedrigen Siedepunkten macht sie besonders geeignet für die Herstellung von „Sprays".
Die Zubereitungen der Erfindung können Menschen oder Tieren verabreicht werden. Sie enthalten bei Lösungen, Sprays, Salben und Cremes vorzugsweise zwischen 0,01% und 10% des aktiven Bestandteils und bei Zubereitungen in fester Form zwischen 1% und 100%, vorzugsweise zwischen 5% und 50%, der aktiven Verbindung. Die zu verabreichende Dosis hängt von den individuellen Erfordernissen, der gewünschten Wirkung und dem gewählten Verabreichungsweg ab. Die tägliche Dosierung solcher Zubereitungen kann entschieden werden gemäß der Anwendung der entsprechenden bekannten Zubereitungen, und zwar sowohl der Hyaluronsäure für die jeweiligen Behandlungen, beispielsweise die Behandlung von Arthritis, zum Beispiel beim Menschen oder beim Pferd, als auch des therapeutisch aktiven Alkohols, dessen Wirkung auszunützen ist. So kann zum Beispiel die Dosierung eines Hyaluronsäureesters mit Cortison von dessen Gehalt an diesem Steroid und von dessen gewöhnlicher Dosierung bei bekannten pharmazeutischen Zubereitungen abgeleitet werden.
Eine besondere Form der pharmazeutischen Zubereitungen stellen die obenstehend erwähnten Medikamente dar, welche die Kombination eines Hyaluronsäureesters mit einer oder mehreren aktiven Substanzen enthalten. Diese können auch in fester Form, beispielsweise als gefriergetrocknete Pulver, die nur die zwei Bestandteile (1) und (12) zusammen oder einzeln enthalten, vorliegen. Diese galenische Form ist besonders für die örtliche Anwendung geeignet. Tatsächlich bilden diese festen Medikamente beim Kontakt mit den zu behandelnden Oberflächen, entsprechend der Natur des speziellen Epithels, mehr oder weniger konzentrierte Lösungen, die dieselben Charakteristika wie die zuvor in vitro hergestellten Lösungen aufweisen und einen weiteren, besonders wichtigen Aspekt der vorliegenden Erfindung darstellen. Solche Lösungen liegen bevorzugt in destilliertem Wasser oder steriler Salzlösung vor und enthalten außer dem Hyaluronsäureester oder einem seiner Salze vorzugsweise kein anderes pharmazeutisches Vehikel. Die Konzentrationen solcher Lösungen können auch innerhalb großer Grenzen variieren, zum Beispiel zwischen 0,01 und 75%, wobei sowohl jeder der zwei Bestandteile getrennt, als auch deren Gemische oder Salze betrachtet werden. Besonders bevorzugt sind Lösungen mit einem ausgesprochen viskoelastischen Charakter, zum Beispiel mit einem Gehalt an dem Medikament oder an jedem seiner Bestandteile, der von 10% bis 90% reicht.
Die Medikamente dieses Typs sind für die Verwendung in der Augenheilkunde von besonderer Bedeutung, und zwar sowohl in wasserfreier Form (als gefriergetrocknetes Pulver) als auch als Lösungen, die konzentriert oder in Wasser oder Salzlösung verdünnt sind, möglicherweise unter Zugabe von Zusatz- oder Hilfsstoffen, wie insbesondere z. B. von Desinfektionsmitteln oder als Puffer wirkenden Mineralsalzen oder anderen.
Von den Medikamenten der Erfindung sind gegebenenfalls solche besonders wichtig, die einen Aciditätsgrad aufweisen, der für die Umgebung geeignet ist, auf die sie angewandt werden sollen, das heißt, die einen physiologisch tolerierbaren pH-Wert aufweisen. Die Einstellung des pH-Werts kann beispielsweise bei den obenstehend erwähnten Salzen der Hyaluronsäureester mit einer basischen aktiven Substanz durch eine passende Regulierung der Mengen an Polysaccharid oder der Salze der basischen Substanz selbst erfolgen. Ist die Acidität eines Salzes eines Hyaluronsäureesters mit einer basischen Substanz zum Beispiel zu hoch, so wird der Überschuss an freien sauren Gruppen somit mit den obenstehend erwähnten, anorganischen Basen, beispielsweise mit Natrium-, Kalium- oder Ammoniumhydrat, neutralisiert.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Salze kann in einer per se bekannten Art und Weise erfolgen, indem wässrige oder organische Lösungen der zwei Bestandteile (1) und (2) und möglicherweise Basen oder basische Salze der obenstehend erwähnten Alkali- oder Erdalkalimetalle oder von Magnesium oder Aluminium in den richtigen Mengen in Kontaktlösungen gegeben werden und die Salze mittels bekannter Techniken in amorpher wasserfreier Form isoliert werden. Es ist beispielsweise möglich, zuerst wässrige Lösungen der zwei Bestandteile (1) und (2) herzustellen, indem diese Bestandteile mit geeigneten Ionenaustauschern aus wässrigen Lösungen ihrer Salze freigesetzt werden und die zwei Lösungen bei einer niedrigen, beispielsweise zwischen 0°C und 20°C, liegenden Temperatur gemischt werden. Ist das so erhaltene Salz leicht in Wasser löslich, kann es gefriergetrocknet werden, während die schwer löslichen Salze durch Zentrifugation, Filtration oder Dekantieren abgetrennt und hinterher möglicherweise getrocknet werden können.
Auch für diese kombinierten Medikamente basiert die Dosierung auf jener der aktiven Grundbestandteile, die allein verwendet werden, und kann daher vom Fachmann leicht bestimmt werden, wobei die für die entsprechenden bekannten Arzneimittel empfohlenen Dosierungen in Betracht gezogen werden.
Bei den erfindungsgemäßen Kosmetikartikeln werden die Hyaluronsäureester und deren Salze mit den gewöhnlich auf diesem Gebiet verwendeten Arzneimittelvehikeln vermischt und sind beispielsweise jene, die hinsichtlich der pharmazeutischen Zubereitungen bereits obenstehend aufgelistet wurden. Am häufigsten werden Cremes, Salben und Lotionen zur örtlichen Anwendung eingesetzt, bei denen der Hyaluronsäureester oder eines seiner Salze den kosmetisch wirkenden Grundbestandteil darstellen kann, möglicherweise unter Zugabe anderer kosmetisch wirkender Grundbestandteile, wie beispielsweise von Steroiden, z. B. Pregnenolon, oder eines der obenstehend erwähnten Grundbestandteile. In solchen Zubereitungen ist der Hyaluronsäureester vorzugsweise ein Ester mit einem Alkohol ohne kosmetische Wirkung, wie z. B. einer von jenen, die bereits erwähnt wurden. Die Wirkung liegt, wie im Fall der freien Hyaluronsäure oder ihrer Salze, in den spezifischen kosmetischen Eigenschaften der Polysaccharidkomponente.
Die kosmetischen Artikel können jedoch auf Substanzen basieren, deren spezifische Wirkungen anders sind als jene der Hyaluronsäure, beispielsweise auf Desinfektionsmitteln, Sonnenschutzmitteln, wasserabweisenden oder regenerierenden oder faltenmindernden Substanzen oder Odorisierungsmitteln, besonders Parfümen. In diesem Fall kann der Hyaluronsäureester selbst der Wirkstoff sein und leitet sich von Alkoholen mit denselben Eigenschaften ab oder fungiert in erster Linie als Vehikel für Substanzen mit diesen, mit ihm assoziierten Eigenschaften.
Von besonderer Bedeutung sind daher kosmetische Zusammensetzungen, die den obenstehend beschriebenen Medikamenten ähnlich sind, bei denen der pharmazeutisch aktive Bestandteil (1) durch einen kosmetischen Faktor ersetzt ist, sowie die verwandten Salze.
Die Verwendung der obenstehend erwähnten Ester, die von in der Parfümindustrie verwendeten Alkoholen abgeleitet sind, stellt in der Technologie ein bedeutenden Schritt nach vorn dar, da sie eine langsame, konstante und zeitlich ausgedehnte Freisetzung der Geruchsbestandteile ermöglichen.
Eine wichtige Anwendung der vorliegenden Erfindung betrifft die obenstehend bereits beschriebenen hygienischen und chirurgischen Artikel, die Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung. Die Erfindung umfasst daher alle Artikel, die jenen ähnlich sind, die sich bereits auf dem Markt befinden und auf Hyaluronsäure basieren, die aber anstelle der freien Säure oder eines ihrer Salze einen Hyaluronsäureester oder eines seiner Salze enthalten, zum Beispiel Einlagen oder ophthalmische Linsen.
Vollkommen neue erfindungsgemäße chirurgische und hygienische Artikel stellen die Hyaluronsäureester dar, die als solche aus geeigneten organischen Lösungen gewonnen werden, aus denen mittels geeigneter Verfahren dünne Schichten, dünne Blätter oder Fäden erhalten werden können, die in der Chirurgie bei schwerer Beschädigung der Haut, wie zum Beispiel in Folge von Verbrennungen, als Hilfsstoffe oder Ersatzstoffe für dieses Organ und als Nähfaden bei chirurgischen Operationen zu verwenden sind. Die Erfindung umfasst insbesondere diese Verwendungen und ein Verfahren zur Herstellung solcher Artikel, umfassend die Zubereitung einer Lösung eines Hyaluronsäureesters oder eines seiner Salze in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, wie z. B. einem Carbonsäureamid, besonders einem Dialkylamid einer aliphatischen Säure mit zwischen 1 und 5 Kohlenstoffatomen, das sich von Alkylgruppen mit zwischen 1 und 6 Kohlenstoffatomen ableitet, und vor allem von einem organischen Sulfoxid, das heißt, einem Dialkylsulfoxid, dessen Alkylgruppen maximal 6 Kohlenstoffatome aufweisen, speziell Dimethylsulfoxid oder Diethylsulfoxid, und von größter Bedeutung ist noch ein fluoriertes Lösungsmittel mit einem niedrigeren Siedepunkt, wie z. B. insbesondere Hexafluorisopropanol. Die Erfindung umfasst das Überführen solcher Lösungen in Schicht- oder Fadenform und das Entfernen des organischen Lösungsmittels durch Inkontaktbringen mit einem anderen organischen oder wässrigen Lösungsmittel, welches mit dem ersten Lösungsmittel mischbar ist und in welchem der Hyaluronsäureester nicht löslich ist, besonders mit einem niederaliphatischer Alkohol, zum Beispiel Ethanol (Nassspinnen), oder, sollte ein Lösungsmittel mit einem nicht zu hohen Siedepunkt zur Herstellung der Lösung des Hyaluronsäurederivats verwendet werden, das Entfernen eines solchen Lösungsmittels unter trockenen Bedingungen mit einem Gasstrom, besonders mit geeignet erhitztem Stickstoff (Trockenspinnen). Ausgezeichnete Ergebnisse können auch durch Trocken-Nass-Spinnen erzielt werden.
Die aus Hyaluronsäureestern erhaltenen Fäden können zur Herstellung von Mullverbänden für die medizinische Behandlung von Wunden und in der Chirurgie verwendet werden. Die Verwendung solcher Mullverbände hat den außergewöhnlichen Vorteil ihrer biologischen Abbaubarkeit im Organismus, was durch die Enzyme, die sie enthalten, möglich gemacht wird. Diese Enzyme spalten den Ester in Hyaluronsäure und den entsprechenden Alkohol und daher in eine Verbindung, die im Organismus bereits vorhanden ist, was durch die Enzyme, die sie enthalten, möglich gemacht wird. Sollte ein Hyaluronsäureester verwendet werden, der von einem therapeutisch akzeptablen Alkohol abgeleitet ist, spalten diese Enzyme den Ester in Hyaluronsäure und den entsprechenden Alkohol und daher in eine Verbindung, die im Organismus bereits vorhanden ist, und in eine harmlose Verbindung, wie z. B. einen Alkohol.
Diese Mullverbände und auch die obenstehend erwähnten Fäden können daher nach der chirurgischen Behandlung im Organismus gelassen werden, da sie dank der obenstehend erwähnten Zersetzung langsam absorbiert werden.
Bei der Herstellung der obenstehend beschriebenen hygienischen und chirurgischen Artikel können weichmachende Materialien zugesetzt werden, die deren mechanische Charakteristika verbessern, z. B. zwecks Verbesserung der Festigkeit beim Knoten im Fall von Fäden. Diese weichmachenden Materialien können zum Beispiel Alkalisalze von Fettsäuren, beispielsweise Natriumstearat oder Natriumpalmitat, die Ester organischer Säuren mit vielen Kohlenstoffatomen etc., sein.
Eine weitere Anwendung der neuen Ester, unter Ausnutzung des Vorteils ihrer biologischen Abbaubarkeit durch die im Organismus vorhandenen Esterasen, besteht in der Herstellung von Kapseln für die subkutane Implantierung von Medikamenten oder von Mikrokapseln zur Injizierung beispielsweise auf subkutanem oder intramuskulärem Weg. Um eine langsame Freisetzung und deshalb eine „verzögerte" Wirkung zu erhalten, sind für die Anwendungen subkutaner Medikamente bisher meistens Kapseln aus Siliconmaterialien verwendet worden, mit dem Nachteil, dass die Kapsel dazu neigt, sich im Organismus umherzubewegen, und es nicht möglich ist, sie wiederzugewinnen. Offensichtlich existiert diese Gefahr bei den neuen Hyaluronsäureestern nicht mehr.
Auch die Herstellung von aus Hyaluronsäureestern bestehenden Mikrokapseln ist von großer Bedeutung, wobei die Probleme bezüglich ihrer Verwendung, die bisher aus denselben Gründen, wie sie obenstehend erwähnt wurden, eingeschränkt war, beseitigt werden und ein weites Anwendungsgebiet eröffnet wird, bei dem nach einer „verzögerten" Wirkung gesucht wird, die auf dem Wege der Injektion erreicht werden kann.
Eine weitere Anwendung der neuen Ester im Bereich der Medizin und Chirurgie betrifft die Herstellung einer großen Vielfalt von festen Einlagen, wie z. B. von Platten, Scheiben, Schichten etc., die solche, welche eine Metallform aufweisen oder aus Kunststoffmaterialien bestehen und bereits in Verwendung sind, ersetzen, im Falle von Einlagen jene, die nach einer bestimmten Zeitdauer entfernt werden sollen. Präparate, die aus tierischem Pollagen mit Proteinnatur bestehen, rufen oft unerwünschte Nebenwirkungen hervor, wie z. B. eine Entzündung oder Abstoßung. Im Falle einer tierischen und nicht menschlichen Hyaluronsäure besteht diese Gefahr nicht, da es keine Unverträglichkeit zwischen den Polysacchariden unterschiedlicher Tierarten gibt.
Eine weitere Anwendung betrifft die Verwendung zum Aufbau und zur Korrektur von Weichteildefekten. Der Bedarf an einem sicheren und wirksamen Biomaterial als Ersatz für fehlende oder beschädigte Weichteile ist vor langer Zeit erkannt worden. Mehrere alloplastische Materialien, einschließlich Paraffin, Teflonpaste, Silicon und Borincollagen, wurden als Ersatz für verlorengegangene Weichteile verwendet. Diese Materialien wurden jedoch mit permanenten unerwünschten Gewebeveränderungen der Haut, einer Migration von der Implantierungsstelle und widrigen Behandlungsreaktionen in Verbindung gebracht. Somit besteht in der Medizin weiterhin ein Bedarf an einem vielseitigen Biomaterial. Die Hyaluronsäureester können sicher und wirksam zum Aufbau und zur Korrektur solcher Weichteildefekte, wie z. B. von Akne-Narben, einer Atrophie nach chirurgischen Unregelmäßigkeiten, einer Mohs-Chemochirurgie, von Hasenscharten-Narben und altersbedingten Falten, eingesetzt werden.
Einen Teil der Anwendungen der neuen erfindungsgemäßen Ester im Bereich der Medizin und Chirurgie stellen expansive Materialien, insbesondere in Form von Schwämmen, zur medizinischen Behandlung von Wunden und verschiedenen Läsionen dar.
Die folgenden erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zubereitungen sind besonders beispielhaft:
Formulierung 1 – cortisonhaltiges Collirium, von dem 100 ml Folgendes enthalten:

– einen partiellen Ester von Hyaluronsäure mit Cortison (Ex. 10), 0,200 g
– Ethyl-p.-Hydroxybenzoat, 0,010 g
– Methyl-p.-Hydroxybenzoat, 0,050 g
– Natriumchlorid, 0,900 g
– Wasser für injizierbare Präparate/q.b.a., 100 ml

Formulierung 2 – hydrocortisonhaltige injizierbare Lösung, von der 100 ml Folgendes enthalten:

– einen partiellen Ester von Hyaluronsäure mit Hydrocortison (Ex. 11), 0,1 g
– Natriumchlorid, 0,9 g
– Wasser für injizierbare Präparate/q.b.a., 100 ml

Nach dieser Beschreibung der Erfindung wird offensichtlich, dass sie auf vielerlei Arten variiert werden kann. Solche Variationen sind nicht als Abkehr vom Geist und Umfang der Erfindung anzusehen, und all jene Modifikationen, die dem Fachman klar wären, sind dazu bestimmt, im Umfang der nachfolgenden Ansprüche enthalten zu sein.

Claims

Vollständiger oder partieller Ester von Hyaluronsäure mit einem Alkohol der cycloaliphatischen, aliphatisch-cycloaliphatischen oder heterocyclischen Reihe oder ein Salz eines solchen partiellen Esters mit anorganischen oder organischen Basen.
Ester von Hyaluronsäure gemäß Anspruch 1, bei dem sich der Alkohol der cycloaliphatischen oder aliphatisch-cycloaliphatischen Reihe von einem mono- oder polycyclischen Kohlenwasserstoff mit einer Höchstanzahl von 34 Kohlenstoffatomen ableitet.
Ester von Hyaluronsäure gemäß Anspruch 2, bei dem der polycyclische Alkohol ein Sterin, eine Cholsäure, ein Steroidalkohol, eine Gruppe der Estran- und Pregnanreihe und deren ungesättigter Derivate, ist.
Ester von Hyaluronsäure gemäß Anspruch 3, bei dem der Alkohol ausgewählt ist aus der Gruppe, gebildet aus Cortison, Hydrocortison, Prednison, Prednisolon, Fluorocortison, Dexamethason, Betamethason, Corticosteron, Desoxycorticosteron, Paramethason, Flumethason, Fluocinolon, Flucinolonacetonid, Fluprednyliden, Clobetasol und Beclomethason.
Ester eines Hyaluronesters gemäß einem der Ansprüche 1–4 in Form eines Salzes mit einem Alkali- oder Erdallcalimetall, Magnesium oder Aluminium.
Salz eines Hyaluronesters gemäß Anspruch 5, welches ein Natrium- oder Ammoniumsalz ist.
Salz eines partiellen Esters gemäß einem der Ansprüche 1–8 mit einer therapeutisch akzeptablen Ammoniumbase, einer aliphatischen, araliphatischen, cycloaliphatischen oder heterocyclischen Base.
Verbindung gemäß Anspruch 1, ausgewählt aus der Gruppe, gebildet aus: dem partiellen Cortisonester von Hyaluronsäure, wobei 20% der Carboxygruppen verestert und 80% der Carboxygruppen als Natriumsalz ausgebildet sind; dem partiellen Hydrocortisonester von Hyaluronsäure, wobei 20% der Carboxygruppen verestert und 80% der Carboxygruppen als Natriumsalz ausgebildet sind; dem partiellen Fluorocortisonester von Hyaluronsäure, wobei 20% der Carboxygruppen verestert und 80% der Carboxygruppen als Natriumsalz ausgebildet sind; dem Desoxycorticosteronester von Hyaluronsäure, wobei 20% der Carboxygruppen verestert und 80% der Carboxygruppen als Natriumsalz ausgebildet sind; einem gemischten Ethanol- und Cortisonester von Hyaluronsäure, wobei 80% der Carboxygruppen mit Ethanol verestert und 20% der Carboxygruppen mit Cortison verestert sind; dem gemischten Ethanol-Hydrocortisonester von Hyaluronsäure, wobei 80% der Carboxygruppen mit Ethanol verestert und 20% der Carboxygruppen mit Hydrocortison verestert sind; dem gemischten Ethanol-Fluorocortisonester von Hyaluronsäure, wobei 80% der Carboxygruppen mit Ethanol verestert und 20% der Carboxygruppen mit Fluorocortison verestert sind; dem gemischten Ethanol-Desoxycorticosteronester von Hyaluronsäure, wobei 80% der Carboxygruppen mit Ethanol verestert und 20% der Carboxygruppen mit Desoxycorticosteron verestert sind; dem partiellen und gemischten Ethanol- und Desoxycorticosteronester von Hyaluronsäure, wobei 40% der Carboxygruppen mit Ethanol verestert, 20% der Carboxygruppen mit Desoxycorticosteron verestert und die restlichen 40% der Carboxygruppen als Natriumsalz ausgebildet sind; dem partiellen und gemischten Ethanol- und Cortisonester von Hyaluronsäure, wobei 40% der Carboxygruppen mit Ethanol verestert, 20% der Carboxygruppen mit Cortison verestert und die restlichen 40% der Carboxygruppen als Natriumsalz ausgebildet sind; dem partiellen und gemischten Ethanol-Hydrocortisonester von Hyaluronsäure, wobei 40% der Carboxygruppen mit Ethanol verestert, 20% der Carboxygruppen mit Hydrocortison verestert und die restlichen 40% der Carboxygruppen als Natriumsalz ausgebildet sind; dem partiellen und gemischten Ethanol-Fluorocortisonester von Hyaluronsäure, wobei 40% der Carboxygruppen mit Ethanol verestert, 20% der Carboxygruppen mit Fluorocortison verestert und die restlichen 40% der Carboxygruppen als Natriumsalz ausgebildet sind;
Pharmazeutische Zubereitung, die als Wirkstoff einen Ester oder eines seiner Salze, die in Anspruch 1 definiert sind, zusammen mit einem pharmazeutisch akzeptablen Arzneimittelvehikel oder Träger enthält.
Pharmazeutische Zubereitung, die als Wirkstoff einen Hyaluronsäureester gemäß einem der Ansprüche 1–8 zusammen mit einem pharmazeutisch akzeptablen Arzneimittelvehikel oder Träger enthält.
Medikament, umfassend: a) eine oder mehrere pharmakologisch aktive Substanzen und b) ein Trägervehikel, zusammengesetzt aus einem vollständigen oder partiellen Ester von Hyaluronsäure mit einem Alkohol der cycloaliphatischen, aliphatisch cycloaliphatischen oder heterocyclischen Reihe oder einem Salz eines solchen partiellen Esters mit einer anorganischen oder organischen Base, und gegebenenfalls c) gebräuchliche Arzneimittelvehikel für pharmazeutische Zubereitungen.
Medikament gemäß Anspruch 11, bei dem das Trägervehikel b) einen Ester von Hyaluronsäure mit einem pharmakologisch inaktiven Alkohol enthält.
Medikament gemäß Anspruch 11, bei dem das Trägervehikel b) einen Ester von Hyaluronsäure mit einem pharmakologisch aktiven Alkohol enthält.
Medikament gemäß Anspruch 11, bei dem die getragene Substanz von basischer Natur ist und partiellen Hyaluronester enthält, dessen unveresterte Gruppen als Salz mit der pharmakologisch aktiven Substanz ausgebildet sind.
Medikament gemäß einem der Ansprüche 11–14, bei dem die pharmakologisch aktive Substanz ausgewählt ist aus der Gruppe, gebildet aus einem Anästhetikum, einem Analgetikum, einem entzündungshemmenden Mittel, einem Vasokonstriktor, einem antibakteriellen Antibiotikum, einem Antivirenmittel.
Medikament gemäß einem der Ansprüche 11–14, bei dem die aktive Substanz 1) örtlich aktiv ist.
Verwendung eines Esters von Hyaluronsäure oder eines seiner Salze gemäß Anspruch 1 für die Herstellung eines Medikaments zur Anwendung in der Augenheilkunde.
Verwendung eines Esters von Hyaluronsäure oder eines seiner Salze gemäß Anspruch 1 für die Herstellung eines Medikaments zur Anwendung in der Dermatologie, Otorhinolaryngologie, Zahnheilkunde, Angiologie, Frauenheilkunde, Neurologie oder jedweder Art von interner medizinischer Pathologie.
Kosmetikartikel, umfassend einen Hyaluronester oder eines seiner Salze gemäß einem der Ansprüche 1–9.
Hygiene- und Chirurgieartikel, umfassend einen Hyaluronesters oder eines seiner Salze gemäß einem der Ansprüche 1–9 oder den Methylester von Hyaluronsäure.
Hygiene- und Chirurgieartikel gemäß Anspruch 20 in Form von dünnen Schichten und Fäden.
Dünne Schichten und Fäden gemäß Anspruch 20 oder 21 in Form von künstlicher Haut zur Verwendung bei der chirurgischen Dermatologie und in dieser Hinsicht als Wundnahtfäden bei chirurgischen Eingriffen.
Aus Fäden hergestellte Mullverbände gemäß einem der Ansprüche 20–22 für die medizinische Behandlung von Wunden und in der Chirurgie.
Vorgang zur Herstellung von dünnen Schichten oder Fäden aus Hyaluronestern gemäß einem der Ansprüche 20–23, bei dem der Hyaluronester in einem organischen Lösungsmittel aufgelöst, die Lösung in eine Schicht- bzw. Fadenform gebracht und das organische Lösungsmittel danach durch Behandlung mit einem anderen geeigneten organischen oder wässrigen Lösungsmittel, das im ersten Lösungsmittel löslich ist, eliminiert wird.
Vorgang zur Herstellung von dünnen Schichten oder Fäden aus Hyaluronestern gemäß einem der Ansprüche 20–23, bei dem der Hyaluronester in einem organischen Lösungsmittel aufgelöst, die Lösung in eine Schicht- bzw. Fadenform gebracht und das organische Lösungsmittel danach durch Behandlung mit einem Strom von geeignet erhitzem Inertgas eliminiert wird.
Hygiene- und Chirurgieartikel gemäß Anspruch 20 in Form von Kapseln für die subkutane Implantierung von Medikamenten; in Form von Mikrokapseln für die subkutane, intramuskuläre oder intravenöse Injizierung; in Form von festen Einlagen, die nach einer gewissen Zeitdauer zu entfernen sind; oder in Form von Schwämmen für die medizinische Behandlung von Wunden und verschiedenen Läsionen.
Ester gemäß einem der Ansprüche 1–8, bei dem sich der Hyaluronester von einer Hyaluronsäure mit einer Molekülmasse von zwischen 8 und 13 Millionen ableitet.
Ester gemäß einem der Ansprüche 1–8, bei dem sich der Hyaluronester von einer Hyaluronsäurefraktion mit einer Molekülmasse von zwischen etwa 90–80% und 0,23% der Molekülmasse einer vollständigen Hyaluronsäure mit einer Molekülmasse von 13 Millionen ableitet.
Ester gemäß einem der Ansprüche 1–8, bei dem sich der Hyaluronester von einer Hyaluronsäuremolekülfraktion ableitet, die eine Molekülmasse von zwischen etwa 50.000 und 100.000 besitzt und im Wesentlichen frei ist von Hyaluronsäure mit einer Molekülmasse von weniger als 30.000.
Ester gemäß einem der Ansprüche 1–8, bei dem sich der Hyaluronester von einer Hyaluronsäuremolekülfraktion ableitet, die eine Molekülmasse von zwischen etwa 500.000 und 730.000 besitzt und im Wesentlichen frei ist von Hyaluronsäure mit einer Molekülmasse von weniger als 30.000.