DE69830570T2

DE69830570T2 - Immuntherapie der b-zell bösartige krankheiten mittels anti-cd22 antikörper

Info

Publication number: DE69830570T2
Application number: DE69830570T
Authority: DE
Inventors: M. David Goldenberg
Original assignee: Immunomedics Inc
Current assignee: Immunomedics Inc
Priority date: 1997-03-24
Filing date: 1998-03-17
Publication date: 2005-11-03
Anticipated expiration: 2018-03-18
Also published as: JP4584363B2; JP2010031032A; ATE297759T1; EP1431311B1; DE69830570D1; IN189313B; EP0969866B1; AU728325B2; ES2241129T5; WO1998042378A1; EP0969866B2; CA2284829A1; DK0969866T4; CA2284829C; US6183744B1; JP2001518930A; AU6761098A; DK0969866T3; EP1431311A1; ZA982438B

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
1. Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft immuntherapeutische Mittel für die Behandlung von B-Zell-Malignitäten. Insbesondere betrifft diese Erfindung die Behandlung von B-Zell-Malignitäten durch Verabreichung von vergleichsweise niedrigen Dosen an Antikörper, der an das CD22-Antigen bindet. Die vorliegende Erfindung ist auch auf multimodale Therapien gerichtet, bei denen die Anti-CD22-Therapie durch Chemotherapie oder mit therapeutischen Proteinen, wie z.B. Immunkonjugaten und Antikörper-Fusionsproteinen, ergänzt wird.
2. Hintergrund
B-Zell-Lymphome, wie z.B. der B-Zell-Subtyp des Non-Hodgkin-Lymphoms, tragen signifikant zur Krebssterblichkeit bei. Die Reaktion von B-Zell-Malignitäten auf die verschiedenen Behandlungsarten ist uneinheitlich. Zum Beispiel kann die Therapie mit Feldstrahlung in den Fällen, in denen eine geeignete klinische Stadiumeinteilung des Non-Hodgkin-Lymphoms möglich ist, eine zufriedenstellende Behandlung liefern. Dennoch sterben etwa die Hälfte der Patienten an der Krankheit. Devesa et al., J. Nat'l Cancer Inst. 79:701 (1987).
Die Mehrheit der chronischen lymphozytären Leukämien stammen von B-Zellinien. Freedman, Hematol. Oncol. Clin. North Am. 4:405 (1990). Dieser Typ B-Zell-Malignität ist die häufigste Leukämie in der westlichen Welt. Goodman et al., Leukemia and Lymphoma 22:1 (1996). Der Verlauf der chronischen lymphozytären Leukämie unterteilt sich in mehrere Phasen. In der frühen Phase ist die chronische lymphozytäre Leukämie eine sich langsam entwickelnde Krankheit, die durch die Anreicherung von kleinen, reifen, funktionell inkompetenten, bösartigen B-Zellen, die eine verlängerte Lebensdauer aufweisen, charakterisiert ist. Schließlich nimmt die Verdopplungszeit der bösartigen B-Zellen ab und die Patienten werden zunehmend symptomatisch. Obwohl die Behandlung zur Linderung der Symptome führen kann, wird die Gesamtlebenserwartung der Patienten nur minimal beeinflußt. Die späten Stadien der chronischen lymphozytären Leukämie sind durch signifikante Anämie und/oder Thrombocytopenie gekennzeichnet. In diesem Stadium beträgt die mittlere Lebenserwartung weniger als zwei Jahre. Foon et al., Annals Int. Medicine 113:525 (1990). Aufgrund der sehr niedrigen zellulären Proliferationsrate ist die chronische lymphozytäre Leukämie behandlungsresistent.
Die herkömmlichen Verfahren zur Behandlung von B-Zell-Malignitäten, einschließlich Chemotherapie und Radiotherapie, sind aufgrund der toxischen Nebenwirkungen beschränkt anwendbar. Die Verwendung von monoklonalen Antikörpern, zum Lenken von Radionukliden, Toxinen oder anderen therapeutischen Mitten ermöglicht, daß solche Mittel selektiv zu den Tumorstellen gebracht werden können, wodurch die toxische Wirkung gegenüber den normalen Geweben eingeschränkt ist.
Für die Therapie von B-Zell-Lymphomen wurden Antikörper gegen das CD20-Antigen untersucht. Zum Beispiel weist ein chimärer Anti-CD20-Antikörper, der als "IDEC-C2B8" bezeichnet wird, Aktivität gegen B-Zell-Lymphome auf, wenn er als unkonjugierter Antikörper bei wiederholten Injektionen von Dosen, die 500 mg pro Injektion überschreiten, verabreicht wird. Maloney et al., Blood 84:2457 (1994); Longo, Curr. Opin. Oncol. 8:353 (1996). Über 50% der Non-Hodgkin-Patienten, die die langsam wachsende Form niedrigen Grades hatten und die nach diesem Therapieplan behandelt wurden, zeigten Reaktionen. Auch bei Anwendung von ¹³¹I-markierten monoklonalen B1-Anti-CD-20-Maus-Antikörpern wurden therapeutische Antworten erzielt, wenn diese in wiederholten Dosen, die 600 mg pro Injektion überschritten, verabreicht wurden. Kaminski et al., N. Engl. J. Med. 329:459 (1993); Press et al., N. Engl. J. Med. 329:1219 (1993); Press of al., Lancet 346:336 (1995). Allerdings zeigten diese Antikörper, sei es, daß sie in der unkonjugierten Form oder in der radioaktiv markierten Form verabreicht wurden, keine objektiven Wirkungen bei Patienten mit der weiter verbreiteten und tödlichen Form des B-Zell-Lymphoms, dem fortgeschrittenen oder aggressiven Typ.
Daher besteht ein Bedarf an der Entwicklung einer Immuntherapie für B-Zell-Malignitäten, die die wiederholte Verabreichung von vergleichsweise niedrigen Dosen eines Antikörpers erlaubt und die nicht beschränkt ist durch die Notwendigkeit des Zusatzes eines toxischen Mittels, um eine therapeutische Wirkung von signifikanter Dauer zu erreichen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Dementsprechend ist es eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, die Verwendung von wenigstens einem vollständigen Anti-CD22-Antikörper, der nicht mit einem therapeutischen Mittel konjugiert ist, bei der Herstellung eines Arzneimittels für die Behandlung einer B-Zell-Malignität bereitzustellen.
Es ist eine weitere Aufgabe dieser Erfindung, die Verwendung bereitzustellen, bei der niedrige Dosen von Anti-CD22-Antikörpern durch die Verabreichung eines therapeutischen Proteins, wie z.B. eines Immunkonjugats oder Antikörper-Fusionsproteins, oder durch eine Chemotherapiebehandlung ergänzt werden.
Diese und andere Aufgaben werden in Übereinstimmung mit einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung durch die Bereitstellung eines Anti-CD22-Antikörpers und eines pharmazeutisch verträglichen Trägers gelöst.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG
1. Überblick
Wie oben diskutiert, waren Anti-CD20-Antikörper, sei es unkonjugiert oder mit einem therapeutischen Radionuklid markiert, nicht geeignet, um zu objektiven Wirkungen in Patienten mit fortgeschrittenen oder aggressiven Formen des B-Zell-Lymphoms zu führen. Überraschenderweise haben klinische Studien mit Patienten, die Non-Hodgkin-Lymphome (sowohl langsam wachsende als auch aggressive Formen) oder akute lymphatische Leukämie hatten, gezeigt, daß relativ niedrige Dosen (d.h. 20-100 mg Protein pro Dosis) an unkonjugiertem Maus- oder humanisiertem Anti-CD22-Antikörper, der entweder als "EPB-2" oder "LL2" bezeichnet wird, teilweise oder vollständige Remissionen induzieren können, die bis zu 24 Monate anhalten. Dies gilt, obwohl diese Patienten oft nach mehreren Durchgängen aggressiver Chemotherapie und sogar nach einer Knochenmarkstransplantation einen Rückfall erlitten haben. Die positiven Ergebnisse mit unkonjugiertem Anti-CD22-Antikörper sind insbesondere für fortgeschrittene Patienten mit der aggressiven (fortgeschrittenen) Form des Non-Hodgkin-Lymphoms und bei chronischer und akuter lymphatischer Leukämie überraschend, da unkonjugierte oder radioaktiv markierte Anti-CD20-Antikörper nicht dazu in der Lage waren, diese Wirkungen, insbesondere bei niedrigen Proteindosen, aufzuzeigen. Darüber hinaus sind die positiven Ergebnisse mit Anti-CD22-Antikörpern unerwartet im Hinblick auf die Stellungnahme von Freedman, Hematol. Oncol. Clin. North Am. 4:405 (1990), daß chronische lymphozytäre Leukämien des B-Zell-Typs üblicherweise nicht CD22 exprimieren.
2. Definitionen
In der folgenden Beschreibung wird eine Vielzahl von Fachbegriffen ausgiebig verwendet. Die folgenden Definitionen sind vorgesehen, um das Verständnis der Erfindung zu erleichtern.
Ein Strukturgen ist eine DNA-Sequenz, die in Boten-RNA (mRNA) transkribiert wird, welche dann in eine Sequenz von Aminosäuren translatiert wird, die für ein bestimmtes Polypeptid charakteristisch ist.
Ein Promotor ist eine DNA-Sequenz, die die Transkription eines Strukturgens steuert. Typischerweise ist ein Promotor in der 5'-Region eines Gens, proximal zum Startpunkt der Transkription des Strukturgens, angeordnet. Wenn ein Promotor ein induzierbarer Promotor ist, dann erhöht sich aufgrund einer Reaktion auf ein induzierendes Mittel die Transkriptionsrate. Im Gegensatz dazu wird die Transkriptionsrate nicht durch ein induzierendes Mittel reguliert, wenn der Promotor ein konstitutiver Promotor ist.
Ein isoliertes DNA-Molekül ist ein DNA-Fragment, das nicht in die genomische DNA eines Organismus integriert ist. Zum Beispiel ist ein kloniertes Antikörper-Gen ein DNA-Fragment, das aus der genomischen DNA einer Säugetierzelle herausgetrennt wurde. Ein weiteres Beispiel eines isolierten DNA-Moleküls ist ein chemisch synthetisiertes DNA-Molekül, das nicht in die genomische DNA eines Organismus integriert ist.
Ein Enhancer ist ein regulatorisches Element der DNA, das die Effizienz der Transkription erhöhen kann, unabhängig von der Entfernung oder Orientierung des Enhancers bezogen auf die Startstelle der Transkription.
Komplementäre DNA (cDNA) ist ein Einzelstrang-DNA-Molekül, das ausgehend von einer mRNA-Matrize durch das Enzym Reverse Transkriptase gebildet wird. Üblicherweise wird für die Initiierung der reversen Transkription ein Primer eingesetzt, der zu Teilen der mRNA komplementär ist. Der Fachmann verwendet auch die Bezeichnung "cDNA", um auf ein doppelstrangiges DNA-Molekül Bezug zu nehmen, das aus einem solchen einstrangigen DNA-Molekül und dessen komplementärem DNA-Strang besteht.
Der Begriff Expression bezieht sich auf die Biosynthese eines Genprodukts. Im Falle eines Strukturgens umfaßt die Expression die Transkription des Strukturgens in mRNA und die Translation der mRNA in ein oder mehrere Polypeptide.
Ein Klonierungsvektor ist ein DNA-Molekül, das in der Lage ist, sich autonom in einer Wirtszelle zu replizieren, wie z.B. ein Plasmid, Cosmid oder Bakteriophage. Klonierungsvektoren enthalten typischerweise eine oder eine kleine Anzahl von Erkennungssequenzen für Restriktionsendonukleasen, an denen fremde DNA-Sequenzen in bestimmbarer Art und Weise ohne Verlust einer wesentlichen biologischen Funktion des Vektors eingefügt werden können, ebenso wie ein Markergen, das für die Verwendung zur Identifizierung und Selektionierung von mit dem Klonierungsvektor transformierten Zellen geeignet ist. Die Markergene umfaßen typischerweise Gene, die Tetracyclinresistenz oder Ampicillinresistenz verleihen.
Ein Expressionsvektor ist ein DNA-Molekül, das ein Gen enthält, das in einer Wirtszelle exprimiert wird. Üblicherweise wird die Genexpression unter die Kontrolle von bestimmten regulatorischen Elementen gestellt, einschließlich konstitutiver oder induzierbarer Promotoren, gewebespezifischer regulatorischer Elemente und Enhancern. Bei solch einem Gen spricht man davon, daß es "funktionsfähig mit" den regulatorischen Elementen "verbunden" ist.
Ein rekombinanter Wirt kann jede prokaryotische oder eukaryotische Zelle sein, die entweder einen Klonierungsvektor oder einen Expressionsvektor enthält. Diese Bezeichnung schließt auch solche prokaryotischen oder eukaryotischen Zellen ein, die gentechnisch so verändert wurden, daß sie das/die klonierte(n) Gen(e) im Chromosom oder Genom der Wirtszelle enthalten.
Ein Antikörperfragment ist ein Teil eines Antikörpers, wie z.B. F(ab')₂, F(ab)₂, Fab', Fab und dergleichen. Unabhängig von der Struktur bindet ein Antikörperfragment mit demselben Antigen, das von dem intakten Antikörper erkannt wird. Zum Beispiel bindet ein monoklonales Anti-CD22-Antikörperfragment mit einem Epitop von CD22.
Die Bezeichnung "Antikörperfragment" umfaßt auch jedes synthetische oder gentechnisch hergestellte Protein, das sich wie ein Antikörper verhält, indem es unter Ausbildung eines Komplexes an ein spezifisches Antigen bindet. Zum Beispiel umfassen Antikörperfragmente isolierte Fragmente, die aus der leichtkettigen variablen Region bestehen, "Fv"-Fragmente, die aus den variablen Regionen der schweren und leichten Ketten bestehen, rekombinante Einzelketten-Polypeptidmoleküle, bei denen leichte und schwere variable Regionen über einen Peptidlinker miteinander verbunden sind ("sFv-Proteine") und minimale Erkennungseinheiten, die aus den Aminosäureresten bestehen, die die hypervariable Region imitieren.
Ein chimärer Antikörper ist ein rekombinantes Protein, das aus einem Nagetier-Antikörper abgeleitete variable Domänen und komplementaritätsbestimmende Regionen enthält, während der Rest des Antikörpermoleküls von einem humanen Antikörper abgeleitet ist.
Humanisierte Antikörper sind rekombinante Proteine, bei denen die komplementaritätsbestimmenden Regionen eines monoklonalen Mausantikörpers aus den schweren und leichten variablen Ketten des Maus-Immunglobulins in eine humane variable Domäne transferiert wurden.
Ein therapeutisches Mittel, wie es hier verstanden wird, ist ein Molekül oder Atom, das mit einem Antikörperrest unter Ausbildung eines Konjugats, das für die Therapie nützlich ist, konjugiert ist. Beispiele für therapeutische Mittel umfaßen Arzneistoffe, Toxine, Immunmodulatoren, Chelatbildner, Borverbindungen, photoaktive Mittel oder Farbstoffe und Radioisotope.
Ein nackter Antikörper ist im Gegensatz zu einem Antikörperfragment ein vollständiger Antikörper, der nicht mit einem therapeutischen Mittel konjugiert ist. Nackte Antikörper umfaßen sowohl polyklonale als auch monoklonale Antikörper als auch bestimmte rekombinante Antikörper, wie z.B. chimäre und humanisierte Antikörper.
Der Begriff Antikörperkomponente, wie er hier verstanden wird, umfaßt sowohl einen vollständigen Antikörper als auch ein Antikörperfragment.
Ein Immunkonjugat ist ein Konjugat einer Antikörperkomponente mit einem therapeutischen Mittel.
Der Begriff Antikörper-Fusionsprotein, wie er hier verstanden wird, bezieht sich auf ein rekombinantes Molekül, das eine Antikörperkomponente und ein therapeutisches Mittel umfaßt. Die Beispiele für therapeutische Mittel, die für solche Fusionsproteine geeignet sind, umfaßen Immunmodulatoren ("Antikörper-Immunmodulator-Fusionsprotein") und Toxine ("Antikörper-Toxin-Fusionsprotein").
3. Herstellung von monoklonalen Anti-CD22-Antikörpern, humanisierten Antikörpern, Antikörpern von Primaten und humanen Antikörpern
Monoklonale Nagetier-Antikörper gegen CD22 können durch Verfahren, die dem Fachmann bekannt sind, erhalten werden. Siehe allgemein z.B. Kohler und Milstein, Nature 256:495 (1975) und Coligan et al. (Hrsg.), CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, Band 1, Seiten 2.5.1-2.6.7 (John Wiley & Sons 1991) ["Coligan"]. Kurz gesagt können monoklonale Antikörper erhalten werden, indem man Mäusen eine Zusammensetzung injiziert, die CD22 umfaßt, das Vorliegen einer Antikörperbildlung durch Entnahme einer Serumprobe verifiziert, die Milz entnimmt, um die B-Lymphozyten zu erhalten, die B-Lymphozyten zur Herstellung von Hybridomen mit Myelom-Zellen fusioniert, die Hybridome klont, die positiven Klone, welche Anti-CD22-Antikörper produzieren, selektioniert, die Klone, die Antikörper auf das Antigen produzieren, kultiviert und die Antikörper aus den Hybridom-Kulturen isoliert.
Die monoklonalen Antikörper können aus den Hybridom-Kulturen nach einer Vielzahl von gut etablierten Verfahren isoliert und aufgereinigt werden. Diese Isolierungsverfahren umfaßen die Affinitätschromatographie mit Protein-A-Sepharose, die Größenausschlußchromatographie und die Ionenaustauschchromatographie. Siehe beispielsweise Coligan auf den Seiten 2.7.1-2.7.12 und den Seiten 2.9.1-2.9.3. Siehe ebenso Baines of al., "Purification of Immunoglobulin G (IgG)" in METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Band 10, Seiten 79-104 (The Humana Press, Inc. 1992).
Geeignete Mengen des gut charakterisierten CD22-Antigens für die Herstellung von Antikörpern können durch den Einsatz von Standardverfahren erhalten werden. Beispielsweise kann CD22 aus B-Lymphozytprotein unter Verwendung der von Tedder et al., US-Patent Nr. 5,484,892 (1996) beschriebenen sedimentierten Antikörper immunpräzipitiert werden.
Alternativ kann das CD22-Protein aus transfizierten Kulturzellen erhalten werden, die CD22 überproduzieren. Unter Verwendung der veröffentlichten CD22-Nukleotidsequenzen können Expressionsvektoren konstruiert werden, die CD22-Proteine codierende DNA-Moleküle umfassen. Siehe beispielsweise Wilson et al., J. Exp. Med. 173:137 (1991); Wilson et al., J. Immunol. 150:5013 (1993). Zur Veranschaulichung können CD22 codierende DNA-Moleküle erhalten werden, indem man DNA-Moleküle unter Verwendung von wechselseitig als Primer funktionierenden Oligonukleotiden synthetisiert. Siehe beispielsweise Ausubel of al., (Hrsg.), CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Seiten 8.2.8 bis 8.2.13 (1990) ["Ausubel"]. Siehe auch Wosnick et al., Gene 60:115 (1987) und Ausubel et al. (Hrsg.), SHORT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, 3. Aufl., Seiten 8-8 bis 8-9 (John Wiley & Sons, Inc. 1995). Die etablierten Verfahren, die die Polymerase-Kettenreaktion einsetzen, ermöglichen es, Gene zu synthetisieren, die bis zu 1,8 Kilobasen lang sind. Adang et al., Plant Molec. Biol. 21:1131 (1993); Bambot et al., PCR Methods and Applications 2:266 (1993); Dillon et al., "Use of the Polymerase Chain Reaction for the Rapid Construction of Synthetic Genes", in METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Band 15: PCR PROTOCOLS: CURRENT METHODS AND APPLICATIONS, White (Hrsg.), Seiten 263-268 (Humana Press, Inc. 1993).
Bei einer Variation dieses Ansatzes können die monoklonalen Anti-CD22-Antikörper erhalten werden, indem man Myelomzellen mit Milzzellen aus Mäusen fusioniert, die mit einer stabil mit CD22-cDNA transfizierten Maus-prä-B-Zellinie immunisiert wurden. Siehe Tedder et al., US-Patent Nr. 5,484,892 (1996).
Ein Beispiel für einen geeigneten monoklonalen Anti-CD22-Maus-Antikörper ist der monoklonale LL2- (früher EPB-2-) Antikörper, der gegen humane Raji-Zellen, die aus einem Burkitt-Lymphom abgeleitet wurden, hergestellt wurde. Pawlak-Byczkowska et al., Cancer Res. 49:4568 (1989). Dieser monoklonale Antikörper weist einen IgG_2α-Isotyp auf, und der Antikörper wird schnell in Lymphomzellen internalisiert. Shih et al., Int. J. Cancer 56: 538 (1994). Immunfärbe- und in vivo-Radioimmundetektionsuntersuchungen haben die ausgezeichnete Empfindlichkeit von LL2 bei der Detektion von B-Zell-Lymphomen gezeigt. Pawlak-Byczkowska et al., Cancer Res. 49:4568 (1989); Murthy et al., Eur. J. Nucl. Med. 19:394 (1992). Darüber hinaus wurde für ^99mTc-markierte LL2-Fab'-Fragmente gezeigt, daß sie im Anschluß an die Hochstufung von B-Zell-Lymphomen nützlich sind, während ¹³¹I-markierte intakte LL2- und markierte LL2-F(ab')₂-Fragmente verwendet wurden, um auf Lymphomstellen zu zielen und um therapeutische Wirkungen zu induzieren. Murthy et al., Eur. J. Nucl. Med. 19:394 (1992); Mills et al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res. 34:479 (1993) [Abstract 2857]; Baum et al., Cancer 73 (Ergänzg. 3):896 (1994); Goldenberg et al., J. Clin. Oncol. 9:548 (1991). Darüber hinaus wurde für Fab'-LL2-Fragmente, die mit einem Derivat des Pseudomonas-Exotoxins konjugiert waren, gezeigt, daß sie die vollständige Remission bei meßbaren humanen Lymphom- Fremdeinpflanzungen, die in nackten Mäusen wuchsen, induzierten. Kreitman et al., Cancer Res. 53:819 (1993).
Bei einer weiteren Ausführungsform ist ein Antikörper der vorliegenden Erfindung ein chimärer Antikörper, bei dem die variablen Regionen eines humanen Antikörpers durch die variablen Regionen eines Anti-CD22-Nagetierantikörpers ersetzt wurden. Die Vorteile von chimären Antikörpern Umfassen eine verminderte Immunogenität und eine erhöhte in vivo-Stabilität.
Die Verfahren zur Herstellung von chimären Antikörpern sind dem Fachmann gut bekannt. Zum Beispiel beschreiben Leung et al., Hybridoma 13:469 (1994), wie sie eine LL2-Chimäre herstellten, indem sie DNA-Sequenzen, die die V_κ- und V_H-Domänen der monoklonalen LL2-Antikörper mit entsprechenden humanen κ- und IgG₁-Domänen der konstanten Region kombinierten. Diese Veröffentlichung liefert jeweils auch die Nukleotidsequenzen der leichten und schweren Ketten in den variablen Regionen von LL2, V_κ und V_H.
Bei einer weiteren Ausführungsform ist ein Antikörper der vorliegenden Erfindung ein Antikörper eines Primaten unterhalb des Menschen. Übliche Verfahren zur Kultivierung von therapeutisch verwendbaren Antikörpern in Pavianen können z.B. gefunden werden in Goldenberg et al., internationale Patentveröffentlichung Nr. WO 91/11465 (1991), und in Losman et al., Int. J. Cancer 46:310 (1990).
Bei einer anderen Ausführungsform ist ein Antikörper der vorliegenden Erfindung ein "humanisierter" monoklonaler Antikörper. Das heißt, die komplementaritätsbestimmenden Regionen einer Maus werden aus den schweren und leichten variablen Ketten des Maus-Immunglobulins in eine humane variable Domäne transferiert, gefolgt von dem Austauschen einiger humaner Reste in den Rahmenbereichen ihrer Gegenstücke in der Maus. Humanisierte monoklonale Antikörper gemäß dieser Erfindung sind geeignet für die Verwendung bei therapeutischen Verfahren. Übliche Verfahren zur Klonierung von variablen Domänen des Maus-Immunglobulins werden beispielsweise beschrieben in der Veröffentlichung von Orlandi et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:3833 (1989). Verfahren zur Herstellung von humanisierten monoklonalen Antikörpern sind beispielsweise beschrieben in Jones et al., Nature 321:522 (1986), Riechmann et al., Nature 332:323 (1988), Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988), Carter et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:4285 (1992), Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12:437 (1992), und Singer et al., J. Immun. 150:2844 (1993). Die Veröffentlichung von Leung et al., Mol. Immunol. 32:1413 (1995), beschreibt die Herstellung des humanisierten LL2-Antikörpers.
Bei einer weiteren Ausführungsform ist ein Antikörper der vorliegenden Erfindung ein humaner monoklonaler Antikörper. Solche Antikörper werden aus transgenen Mäusen erhalten, die "manipuliert" wurden, damit sie spezifische humane Antikörper als Antwort auf eine Antigenreizung produzieren. Bei diesem Verfahren werden Komponenten der Loci der human schweren und leichten Ketten in Stämme von Mäusen eingeführt, die aus embryonalen Stammzellinien abgeleitet wurden, die gezielte Störungen der endogenen Loci der schweren Ketten und der leichten Ketten enthalten. Die transgenen Mäuse können humane Antikörper produzieren, die spezifisch für humane Antigene sind, und die Mäuse können für die Herstellung von Antikörper segregierenden humanen Hybrid omen verwendet werden. Verfahren zum Erlangen von humanen Antikörpern aus transgenen Mäusen werden beschrieben von Green et al., Nature Genet. 7:13 (1994), Lonberg et al., Nature 368:856 (1994) und Taylor et al., Int. Immun. 6:579 (1994).
4. Herstellung von Antikörperfragmenten
Gemäß der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung von Fragmenten von Anti-CD22-Antikörpern oder anderen therapeutisch verwendbaren Antikörpern vorgesehen. Die Antikörperfragmente können durch proteolytische Hydrolyse eines Antikörpers oder durch die Expression der das Fragment codierenden DNA in E. coli hergestellt werden.
Die Antikörperfragmente können durch den Verdau von vollständigen Antikörpern mit Pepsin oder Papain nach herkömmlichen Verfahren erhalten werden. Beispielsweise können Antikörperfragmente zur Bereitstellung eines als F(ab')₂ bezeichneten 5S-Fragments durch die enzymatische Spaltung von Antikörpern mit Pepsin hergestellt werden. Dieses Fragment kann zur Herstellung eines monovalenten 3,5S-Fab'-Fragments weiter gespalten werden durch Verwendung eines thiolreduzierenden Mittels und wahlweise einer Schutzgruppe für die Sulfhydrylgruppen, die aus der Spaltung der Disulfidbindungen hervorgeht. Alternativ bringt die enzymatische Spaltung unter Verwendung von Pepsin unmittelbar zwei monovalente Fab-Fragmente und ein Fc-Fragment hervor. Diese Verfahren sind beispielsweise beschrieben bei Goldenberg, US-Patent Nr. 4,036,945 und 4,331,647 und den darin enthaltenen Bezugnahmen. Siehe auch Nisonoff et al., Arch Biochem. Biophys. 89:230 (1960); Porter, Biochem. J. 73:119 (1959); Edelman et al., in METHODS IN ENZYMOLOGY BAND 1, Seite 422 (Academic Press 1967) und Coligan auf Seiten 2.8.1-2.8.10 und 2.10.-2.10.4.
Weitere Verfahren zur Spaltung von Antikörpern, wie z.B. die Trennung von schweren Ketten zur Ausbildung von monovalenten, leichten-schweren Kettenfragmenten, die weitere Spaltung von Fragmenten oder andere enzymatische, chemische oder genetische Verfahren, können auch verwendet werden, solange die Fragmente an das Antigen, das durch den intakten Antikörper erkannt wird, binden.
Zum Beispiel umfassen die Fv-Fragmente eine Verbindung von V_H- und V_L-Ketten. Diese Verbindung kann nicht-kovalent sein, wie beschrieben in Inbar et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 69:2659 (1972). Andererseits können die variablen Ketten durch eine intermolekulare Disulfidbindung verbunden oder durch Chemikalien, wie z.B. Glutaraldehyd, quervernetzt sein. Siehe beispielsweise Sandhu, supra.
Vorzugsweise umfassen die Fv-Fragmente V_H- und V_L-Ketten, die über einen Peptidlinker verbunden sind. Diese antigenbindenden Einzelkettenproteine (sFv) werden hergestellt, indem man ein Strukturgen konstruiert, das DNA-Sequenzen umfaßt, die die V_H- und V_L-Domänen codieren, welche durch ein Oligonukleotid verbunden sind. Das Strukturgen wird in einen Expressionsvektor eingesetzt, welcher anschließend in eine Wirtszelle, wie z.B. E. coli, eingeführt wird. Die rekombinanten Wirtszellen synthetisieren eine einzelne Polypeptidkette mit einem Linkerpeptid, das die zwei V-Domänen überbrückt. Verfahren zur Herstellung von sFvs werden beispielsweise beschrieben von Whitlow et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 2:97 (1991). Siehe auch Bird et al., Science 242:423 (1988), Ladner et al., US-Patent Nr. 4,946,779, Pack et al., Bio/Technology 11:1271 (1993), und Sandhu, supra.
Eine andere Form eines Antikörperfragments ist ein Peptid, das eine einzelne komplementaritätsbestimmende Region (CDR) codiert. CDR-Peptide ("minimale Erkennungseinheiten") können erhalten werden, indem man Gene konstruiert, die die CDR eines Antikörpers von Interesse codieren. Solche Gene werden beispielsweise hergestellt, indem man die Polymerase-Kettenreaktion verwendet, um die variable Region aus RNA von antikörperproduzierenden Zellen zu synthetisieren. Siehe z.B. auch Larrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 2:106 (1991); Courtenay-Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies", in MONOCOLONAL ANTIBODIES: PRODUCTION, ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION, Ritter et al., (Hrsg.), Seiten 166-179 (Cambridge University Press 1995) und Ward et al., "Genetic Manipulation and Expression of Antibodies", in MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND APPLICATIONS, Birch of al., (Hrsg.), Seiten 137-185 (Wiley-Liss, Inc. 1995).
5. Herstellung von Immunkonjugaten
Die vorliegende Erfindung sieht die Verwendung von "nackten" Anti-CD22-Antikörpern sowie die Verwendung von Immunkonjugaten vor, um die Behandlung von B-Zell-Malignitäten zu bewirken. Solche Immunkonjugate können hergestellt werden, indem man ein therapeutisches Mittel indirekt mit einer Antikörperkomponente konjugiert. Übliche Verfahren werden beschrieben in Shih et al., Int. J. Cancer 41:832-839 (1988); Shih et al., Int. J. Cancer 46:1101-1106 (1990) und Shih et al., US-Patent Nr. 5,057,313. Das übliche Verfahren umfaßt die Umsetzung einer Antikörperkomponente, die einen oxidierten Kohlenhydratanteil aufweist, mit einem Trägerpolymer, das wenigstens eine freie Aminfunktion aufweist und das mit einer Vielzahl von Arzneistoffen, Toxinen, Chelatbildnern, Borliganden oder anderen therapeutischen Mitteln beladen ist. Diese Reaktion bringt eine initiale Schiff-Basen- (Imin-)verbindung hervor, die durch Reduktion zu einem sekundären Amin stabilisiert werden kann, wodurch das fertige Konjugat ausgebildet wird.
Das Trägerpolymer ist vorzugsweise ein Aminodextran oder ein Polypeptid mit wenigstens 50 Aminosäureresten, wenngleich andere im wesentlichen äquivalente Polymerträger auch verwendet werden können. Vorzugsweise ist das fertige Immunkonjugat in einer wäßrigen Lösung, wie z.B. in Säugetierserum, löslich, um die Verabreichung und das wirksame Zielen bei der Verwendung in der Therapie zu erleichtern. Folglich werden löslichkeitsfördernde Funktionen am Trägerpolymer die Serumlöslichkeit des fertigen Immunkonjugats verbessern. Insbesondere wird ein Aminodextran bevorzugt.
Das Verfahren zur Herstellung eines Immunkonjugats mit einem Aminodextranträger beginnt üblicherweise mit einem Dextranpolymer, vorzugsweise einem Dextran mit einem mittleren Molekulargewicht von etwa 10.000-100.000. Das Dextran wird mit einem oxidierenden Mittel umgesetzt, um zur Erzeugung von Aldehydgruppen eine kontrollierte Oxidation eines Anteils von dessen Kohlenhydratringen zu bewirken. Zweckmäßigerweise wird die Oxidation in Übereinstimmung mit herkömmlichen Verfahren mit glykolytischen chemischen Mitteln, wie z.B. NaIO₄, bewirkt.
Das oxidierte Dextran wird dann mit einem Polyamin, vorzugsweise einem Diamin, und besonders bevorzugt einem Mono- oder Polyhydroxydiamin, umgesetzt. Die geeigneten Amine umfaßen Ethylendiamin, Propylendiamin oder andere derartige Polymethylendiamine, Diethylentriamin oder ähnliche Polyamine, 1,3-Diamino-2-hydroxypropan oder andere ähnliche hydroxylierte Diamine oder Polyamine und dergleichen. Bezogen auf die Aldehydgruppen des Dextrans wird ein Überschuß des Amins verwendet, um die im wesentlichen vollständige Umwandlung der Aldehydfunktionen zu Schiff-Base-Gruppen zu sichern.
Ein reduzierendes Mittel, wie z.B. NaBH₄, NaBH₃CN oder dergleichen, wird verwendet, um eine reduzierende Stabilisierung des sich ergebenden Schiff-Base-Zwischenprodukts zu bewirken. Das hieraus hervorgehende Addukt kann durch Passage über eine herkömmliche Größenausschlußsäule zum Entfernen von quervernetzten Dextranen aufgereinigt werden.
Es können auch andere konventionelle Verfahren der Derivatisierung eines Dextrans zur Einführung von Aminfunktionen verwendet werden, wie z.B. die Umsetzung mit cyanogenem Bromid, gefolgt von der Umsetzung mit einem Diamin.
Das Aminodextran wird dann umgesetzt mit einem aufzuladenden Derivat des jeweiligen Arzneistoffs, Toxins, Chelatbildners, Immunmodulators, Borliganden oder anderen therapeutischen Mittels in einer aktivierten Form, vorzugsweise mit einem carboxyl-aktivierten Derivat, das mit herkömmlichen Mitteln hergestellt wurde, z.B. unter Verwendung von Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) oder einer wasserlöslichen Variante davon zur Ausbildung eines intermediären Addukts.
Alternativ können Polypeptidtoxine, wie z.B. das Antivirusprotein der Kermesbeere oder die A-Kette des Ricins und dergleichen, mit dem Aminodextran durch Glutaraldehydkondensation oder durch Umsetzung der aktivierten Carboxylgruppen auf dem Protein mit Aminen auf dem Aminodextran verbunden werden.
Im Stand der Technik sind Chelatbildner für Radiometalle oder für Verstärker der magnetischen Resonanz gut bekannt. Üblich sind Derivate von Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) und Diethylentriaminpentaessigsäure (DTPA). Diese Chelatbildner haben üblicherweise Gruppen an der Seitenkette, über welche sich der Chelatbildner mit dem Träger verbinden kann. Solche Gruppen umfaßen beispielsweise Benzylisothiocyanat, über das die DTPA oder EDTA mit der Amingruppe eines Trägers gekoppelt werden kann. Alternativ können Carboxylgruppen oder Amingruppen auf einem Chelatbildner mit einem Träger durch Aktivierung oder vorherige Derivatisierung und anschließende Kopplung verbunden werden, all dies mit gut bekannten Mitteln.
Borliganden, wie z.B. Carborane, können mit Antikörperkomponenten nach herkömmlichen Verfahren verbunden werden. Zum Beispiel können Carborane mit Carboxylgruppen an den überstehenden Seitenketten hergestellt werden, wie es im Stand der Technik gut bekannt ist. Das Anheften solcher Carborane an einen Träger, z.B. Aminodextran, kann durch die Aktivierung der Carboxylgruppen der Carborane und die Kondensation mit den Aminen auf dem Träger erzielt werden, wodurch ein intermediäres Konjugat hergestellt wird. Solche intermediären Konjugate werden dann mit Antikörperkomponenten verbunden, wodurch therapeutisch geeignete Immunkonjugate erhalten werden, wie untenstehend beschrieben.
Anstelle des Aminodextrans kann ein Polypeptidträger verwendet werden, wobei der Polypeptidträger wenigstens 50 Aminosäurereste in der Kette aufweisen muß, vorzugsweise 100-5.000 Aminosäurereste. Wenigstens einige der Aminosäuren sollten Lysinreste oder Glutamat- oder Aspartatreste sein. Die überstehenden Amine der Lysinreste und die überstehenden Carboxylate des Glutamins und Aspartats sind geeignet für die Verbindung mit einem Arzneistoff, Toxin, Immunmodulator, Chelatbildner, Borligand oder einem anderen therapeutischen Mittel. Die Beispiele für geeignete Polypeptidträger umfassen Polylysin, Polyglutaminsäure, Polyasparaginsäure, Copolymere davon und gemischte Polymere aus diesen und anderen Aminosäuren, z.B. Serinen, um dem sich hieraus ergebenden beladenen Träger und Immunkonjugat die gewünschten Löslichkeitseigenschaften zu verleihen.
Die Konjugation des intermediären Konjugats mit der Antikörperkomponente wird bewirkt, indem man den Kohlenhydratanteil der Antikörperkomponente oxidiert und die hieraus hervorgehenden Aldehyd- (und Keto-) Carbonyle mit Amingruppen umsetzt, die auf dem Träger nach dem Beladen mit einem Arzneistoff, Toxin, Chelatbildner, Immunmodulator, Borligand oder einem anderen therapeutischen Mittel verbleiben. Alternativ kann ein intermediäres Konjugat mit einer oxidierten Antikörperkomponente über Amingruppen, die in das intermediäre Konjugat nach dem Beladen mit dem therapeutischen Mittel eingeführt wurden, verbunden werden. Die Oxidation wird geeigneterweise entweder chemisch, z.B. mit NaIO₄ oder anderen glykolytischen Mitteln, oder enzymatisch, z.B. mit Neuraminidase und Galaktoseoxidase, bewirkt. Im Falle eines Aminodextranträgers werden üblicherweise nicht alle der Amine des Aminodextrans zum Beladen mit einem therapeutischen Mittel gebraucht. Die verbleibenden Amine des Aminodextrans kondensieren mit der oxidierten Antikörperkomponente unter Ausbildung von Schiff-Base-Addukten, welche dann reduzierend stabilisiert werden, normalerweise mit einem Borhydrid-Reduktionsmittel.
Für die Herstellung anderer Immunkonjugate gemäß der Erfindung werden analoge Verfahren eingesetzt. Die beladenen Polypeptidträger weisen vorzugsweise freie Lysinreste auf, die für die Kondensation mit dem oxidierten Kohlenhydratanteil einer Antikörperkomponente verbleiben. Die Carboxyle auf dem Polypeptidträger können, falls erforderlich, in Amine umgewandelt werden, beispielsweise durch Aktivierung mit DCC und Umsetzung mit einem Überschuß an Diamin.
Das fertige Immunkonjugat wird unter Anwendung von herkömmlichen Verfahren, wie z.B. der Größenausschlußchromatographie auf Sephacryl S-300, aufgereinigt.
Alternativ können die Immunkonjugate unmittelbar durch Konjugieren einer Antikörperkomponente mit einem therapeutischen Mittel hergestellt werden. Das übliche Verfahren ist zu dem indirekten Verfahren der Konjugation analog, außer daß ein therapeutisches Mittel unmittelbar mit einer oxidierten Antikörperkomponente verbunden wird.
Es wird angenommen, daß andere therapeutische Mittel als Ersatz für die hierin beschriebenen Chelatbildner eingesetzt werden können. Ein Fachmann wird in der Lage sein, ohne übermäßiges Experimentieren Schemata für die Konjugation zu entwickeln.
Zur weiteren Erläuterung, ein therapeutisches Mittel kann unter Ausbildung einer Disulfidbindung auch in der Gelenkregion einer reduzierten Antikörperkomponente angelagert werden. Zum Beispiel können Tetanustoxoid-Peptide mit einem einzelnen Cysteinrest konstruiert werden, der verwendet wird, um das Peptid mit einer Antikörperkomponente zu verbinden. Alternativ können solche Peptide auch mit der Antikörperkomponente unter Verwendung eines heterobifunktionalen Quervernetzers, wie z.B. N-Succinyl-3-(2-pyridyldithio)-propionat (SPDP) verbunden werden. Yu et al., Int. J. Cancer 56:244 (1994). Die üblichen Verfahren für eine solche Konjugation sind im Stand der Technik gut bekannt. Siehe z.B. Wong, CHEMISTRY OF PROTEIN CONJUGATION AND CROSS-LINKING (CRC Press 1991); Upeslacis et al., "Modification of Antibodies by Chemical Methods", in MONOCLONAL ANTIBODIES: PRINCIPLES AND APPLICATIONS, Birch et al., (Hrsg.), Seiten 187-230 (Wiley-Liss, Inc. 1995); Price, "Production and Characterization of Synthetic Peptide-Derived Antibodies", in MONOCLONAL ANTIBODIES: PRODUCTION, ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION, Ritter et al., (Hrsg.), Seiten 60-84 (Cambridge University Press 1995).
Wie oben beschrieben, können Kohlenhydratanteile in der Fc-Region eines Antikörpers verwendet werden, um ein therapeutisches Mittel zu konjugieren. Allerdings ist die Fc-Region nicht vorhanden, wenn ein Antikörperfragment als die Antikörperkomponente des Immunkonjugats verwendet wird. Trotzdem ist es möglich, einen Kohlenhydratanteil in die leichte Kette der variablen Region eines Antikörpers oder Antikörperfragments einzubringen. Siehe z.B. Leung et al., J. Immunol. 154:5919 (1995); Hansen et al., US-Patent Nr. 5,443,953 (1995). Der konstruierte Kohlenhydratanteil wird dann zum Anlagern eines therapeutischen Mittels verwendet.
Darüber hinaus wird der Fachmann eine Vielzahl von möglichen Variationen der Konjugationsverfahren kennen. Beispielsweise kann der Kohlenhydratanteil zum Anlagern von Polyethylenglycol verwendet werden, um die Halbwertszeit eines intakten Antikörpers oder eines antigenbindenden Fragments davon im Blut, in der Lymphe oder anderen extrazellulären Flüssigkeiten zu verlängern. Des weiteren ist es möglich, ein "divalentes Immunkonjugat" zu konstruieren, indem therapeutische Mittel mit einem Kohlenhydratanteil und einer freien Sulfhydrylgruppe verbunden werden. Eine solche freie Sulfhydrylgruppe kann in der Gelenkregion der Antikörperkomponente angeordnet sein.
6. Therapeutische Anwendung von Anti-CD22-Antikörpern in einfachen und multimodalen Therapien
Die vorliegende Erfindung sieht die Verwendung von nackten Anti-CD22-Antikörpern als primäre therapeutische Zusammensetzung zur Behandlung von B-Zell-Malignitäten vor. Eine solche Zusammensetzung kann polyklonale Anti-CD22-Antikörper oder monoklonale Anti-CD22-Antikörper enthalten.
Zudem kann eine therapeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung ein Gemisch von monoklonalen Anti-CD22-Antikörpern enthalten, die gegen verschiedene, nicht blockierende CD22-Epitope gerichtet sind. Durch Untersuchungen der Kreuzhemmung von monoklonalem Antikörper wurden fünf Epitope auf CD22 identifiziert, die als Epitope A-E bezeichnet werden. Siehe z.B. Schwartz-Albiez et al., "The Carbohydrate Moiety of the CE22 Antigen Can be Modulated by Inhibitors of the Glycosylation Pathway", in LEUKOCYTE TYPING IV. WHITE CELL DIFFERENTIATION ANTIGENS, Knapp et al., (Hrsg.), S. 65 (Oxford University Press 1989). Zur Erläuterung, der LL2-Antikörper bindet an das Epitop B. Stein et al., Cancer Immunol. Immunother. 37:293 (1993). Die vorliegende Erfindung sieht entsprechend therapeutische Zusammensetzungen vor, die ein Gemisch aus monoklonalen Anti-CD22-Antikörpern umfassen, die wenigstens zwei CD22-Epitope binden. Beispielsweise kann ein solches Gemisch monoklonale Antikörper enthalten, die wenigstens zwei CD22-Epitopen binden, die aus der Gruppe ausgewählt sind, die Epitop A, Epitop B, Epitop C, Epitop D und Epitop E umfaßt.
Die Verfahren zur Bestimmung der Bindungsspezifität eines Anti-CD22-Antikörpers sind dem Fachmann gut bekannt. Die üblichen Verfahren werden beispielsweise von Mole, "Epitope Mapping", in METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, BAND 10: IMMUNOCHEMICAL PROTOCOLS, Manson (Hrsg.), Seiten 105-116 (The Humana Press, Inc. 1992) angegeben. Insbesondere werden kompetitive Blockierungstests zur Bestimmung der CD22-Epitop-Spezifität beschrieben von Stein et al., Cancer Immunol. Immunother. 37:293 (1993) und von Tedder et al., US-Patent Nr. 5,484,892 (1996).
Das Tedder-Patent beschreibt auch die Herstellung von CD22-Mutanten, denen eine oder mehrere Immunglobulin-ähnliche Domänen fehlen. Diese mutanten Proteine wurden verwendet, um zu ermitteln, daß die Immunglobulin-ähnlichen Domänen 1, 2, 3 und 4 jeweils den Epitopen A, D, B und C entsprechen. Folglich kann die CD22-Epitopspezifität auch dadurch identifiziert werden, daß ein Test-Antikörper mit einer Gruppe von CD22-Proteinen, denen einzelne Immunglobulin-ähnliche Domänen fehlen, gebunden wird.
Obwohl nackte Anti-CD22-Antikörper die primäre therapeutische Zusammensetzung zur Behandlung von B-Zell-Malignitäten sind, kann die Wirksamkeit einer solchen Anti-CD22-Antikörpertherapie verbessert werden, indem die nackten Antikörper mit Immunkonjugaten und durch andere hier beschriebene Formen der unterstützenden Therapie ergänzt werden. Bei solchen multimodalen Therapien können die ergänzenden therapeutischen Zusammensetzungen vor, gleichzeitig mit oder nach der Verabreichung von nackten Anti-CD22-Antikörpern verabreicht werden.
Bevorzugten Immunkonjugate umfassen radioaktiv markierte Antikörperkomponenten und Konjugate einer Anti-CD22-Antikörperkomponente und eines Immunmodulators. Die hier beschriebenen therapeutischen Zusammensetzungen sind insbesondere zur Behandlung der langsam wachsenden Formen von B-Zell-Lymphomen, aggressiven Formen von B-Zell-Lymphomen, chronischen lymphatischen Leukämien und akuten lymphatischen Leukämien geeignet. Beispielsweise können Anti-CD22-Antikörperkomponenten und Immunkonjugate verwendet werden, um sowohl die langsam wachsenden als auch die aggressiven Formen des Non-Hodgkin-Lymphoms zu behandeln.
Ein radioaktiv markiertes Immunkonjugat kann ein α-emittierendes Radioisotop, ein β-emittierendes Radioisotop, ein γ-emittierendes Radioisotop, einen Auger-Elektronenstrahler, ein Neutronen fangendes Mittel, das α-Partikel emittiert, oder ein Radioisotop, das durch Elektroneneinfang zerfällt, umfassen. Die geeigneten Radioisotope umfassen ¹⁹⁸Au, ³²P, ¹²⁵I,¹³¹I ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁶⁷Cu, ²¹¹At und dergleichen.
Wie zuvor diskutiert, kann ein Radioisotop unmittelbar oder indirekt über ein chelatbildendes Mittel mit einer Antikörperkomponente verbunden werden. Beispielsweise kann ⁶⁷Cu, das aufgrund seiner Halbwertszeit von 61,5 Stunden und dadurch, daß es reichlich Beta-Partikel und Gammastrahlen bereitstellt, als eines der vielversprechenden Radioisotope für die Radioimmuntherapie angesehen wird, unter Verwendung des chelatbildenden Mittels, p-Bromacetamid-benzyl-tetraethylamintetraessigsäure (TETA) mit einer Antikörperkomponente konjugiert werden. Chase, "Medical Applications of Radioisotopes", in REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18. Aufl., Gennaro et al., (Hrsg.), Seiten 624-652 (Mack Publishing Co. 1990). Alternativ kann ⁹⁰Y, das ein energiereiches Beta-Partikel emittiert, mit einer Antikörperkomponente unter Verwendung von Diethylentriaminpentaessigsäure (DTPA) verbunden werden. Darüber hinaus wird ein Verfahren zur unmittelbaren radioaktiven Markierung der Antikörperkomponente mit ¹³¹I beschrieben von Stein et al., Antibody Immunoconj. Radiopharm. 4:703 (1991).
Alternativ können Borliganden, wie z.B. Carborane, mit den Antikörperkomponenten wie zuvor diskutiert verbunden werden.
Außerdem können die therapeutischen Immunkonjugate einen Immunmodulatoranteil enthalten. Die Bezeichnung "Immunmodulator" umfaßt hier Cytokine, Stammzell-Wachstumsfaktoren, Lymphotoxine, wie z.B. den Tumornekrosefaktor (TNF), und hematopoietische Faktoren, wie z.B. Interleukine (z.B. Interleukin-1 (IL-1), IL-2, IL-3, IL-6, IL-10 und IL-12), koloniestimulierende Faktoren (z.B. granulozytenkoloniestimulierender Faktor (G-CSF) und granulozytenmakrophagenkoloniestimulierender Faktor (GM-CSF)), Interferone (z.B. Interferon-α, -β und -γ), den als "S1-Faktor" bezeichneten Stammzellwachstumsfaktor, Erythropoietin und Thrombopoietin. Die Beispiele für geeignete Immunmodulatoranteile umfassen IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, Interferon-γ, TNF-α und dergleichen.
Eine dem therapeutischen Protein ähnliche Form ist ein Fusionsprotein, das einen Antikörperanteil und einen Immunmodulatoranteil umfaßt. Die geeigneten Antikörperanteile umfassen Antikörperkomponenten, die CD19, CD20 oder CD22 binden.
Dem Fachmann sind die Verfahren zur Herstellung von Antikörper-Immunmodulator-Fusionsproteinen bekannt. Zum Beispiel werden Antikörper-Fusionsproteine, die einen Interleukin-2-Anteilumfassen, beschrieben von Boleti et al., Ann. Oncol. 6:945 (1995); Nicolet et al., Cancer Gene Ther. 2:161 (1995), Becker et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 93:7826 (1996), Hank et al., Clin. Cancer Res. 2:1951 (1996), und Hu et al., Cancer Res. 56:4998 (1996). Außerdem beschreiben Yang et al., Hum. Antibodies Hybridomas 6:129 (1995), ein Fusionsprotein, das ein F(ab')₂-Fragment und einen Tumornekrosefaktor-alpha-Anteil umfaßt. Darüber hinaus wird die therapeutische Anwendung eines hLL2-IL-2-Fusionsproteins in Beispiel 3 der vorliegenden Anmeldung beschrieben.
Solche Immunkonjugate und Antikörper-Immunmodulator-Fusionsproteine sind ein Mittel, um einen Immunmodulator zu einer Zielzelle zu bringen, und sind insbesondere gegen Tumorzellen geeignet. Die zytotoxischen Wirkungen der Immunmodulatoren sind dem Fachmann gut bekannt. Siehe z.B. Klegerman et al., "Lymphokines and Monokines", in BIOTECHNOLOGY AND PHARMACY, Pessuto et al., (Hrsg.), Seiten 53-70 (Chapman & Hall 1993). Beispielsweise können Interferone die Proliferation der Zelle hemmen, indem sie die erhöhte Expression der Klasse-I-Histokompatibilitätsantigene auf der Oberfläche verschiedener Zellen induzieren und auf diese Weise das Ausmaß der Zerstörung von Zellen durch zytotoxische T-Lymphozyten erhöhen. Darüber hinaus wird von Tumomekrosefaktoren, wie z.B. TNF-α, angenommen, daß sie zu zytotoxischen Wirkungen führen, indem sie die DNA-Fragmentierung induzieren.
Darüber hinaus können therapeutisch geeignete Immunkonjugate hergestellt werden, bei denen eine Antikörperkomponente mit einem Toxin oder einem chemotherapeutischen Arzneistoff konjugiert ist. Beispielhaft für Toxine, die bei der Herstellung solcher Konjugate geeignet eingesetzt werden können, sind Ricin, Abrin, Ribonuklease, DNase I, Staphylococcus-Enterotoxin-A, Antivirusprotein der Kermesbeere, Gelonin, Diphtherintoxin, Pseudomonas-Exotoxin und Pseudomonas-Endotoxin. Siehe beispielsweise Pastan et al., Cell 47:641 (1986), und Goldenberg, CA – A Cancer Journal for Clinicians 44:43 (1994). Dem Fachmann sind weitere geeignete Toxine bekannt.
Ein alternativer Ansatz zum Einbringen der Kombination von therapeutischem Antikörper und Toxin ist in Form eines Antikörper-Toxin-Fusionsproteins vorgesehen. Ein Antikörper-Toxin-Fusionsprotein ist ein Fusionsprotein, das einen Antikörperanteil und einen Toxinanteil umfaßt. Die geeigneten Antikörperanteile umfaßen Antikörperkomponenten, die mit CD19, CD20 oder CD22 binden. Die Verfahren zur Herstellung von Antikörper-Toxin-Fusionsproteinen sind dem Fachmann bekannt. Beispielsweise wurden Antikörper-Pseudomonas-Exotoxin-A-Fusionsproteine beschrieben von Chaudhary et. al., Nature 339:394 (1989), Brinkmann et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 88:8616 (1991), Batra et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 89:5867 (1992), Friedman et al., J. Immunol. 150:3054 (1993), Wels et al., Int. J. Can. 60:137 (1995), Fominaya et al., J. Biol. Chem. 271:10560 (1996), Kuan et al., Biochemistry 35:2872 (1996), und Schmidt et al., Int. J. Can. 65:538 (1996). Antikörper-Toxin-Fusionsproteine, die einen Diphtherie-Toxinanteil enthalten, wurden beschrieben von Kreitman et al., Leukemia 7:553 (1993), Nicholls et al., J. Biol. Chem. 268:530, (1993). Thompson et al., J. Biol. Chem. 270:28037 (1995), und Vallera et al., Blood 88:2342 (1996). Deonarain et al., Tumor Targeting 1:177 (1995), haben ein Antikörper-Toxin-Fusionsprotein beschrieben, das einen RNase-Anteil aufweist, während Linardou et al., Cell Biophys. 24-25:243 (1994), ein Antikörper-Toxin-Fusionsprotein herstellten, das eine DNase-1-Komponente umfaßt. In dem Antikörper-Toxin-Fusionsprotein von Wang et al., Abstracts of the 209th ACS National Meeting, Anaheim, CA, 2.-6. April 1995, Teil 1, BIOT005 wurde Gelonin als Toxinanteil verwendet. Dohlsten et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 91:8945 (1994) berichteten als weiteres Beispiel ein Antikörper-Toxin-Fusionsprotein, das Staphylococcus-Enterotoxin-A umfaßt.
Die für die herstellung von Immunkonjugaten geeigneten chemotherapeutischen Arzneistoffe gegen Krebs umfassen Stickstoffloste, Alkylsulfonate, Nitrosoharnstoffe, Triazene, Folsäure-Analoga, Pyrimidin-Analoga, Purin-Analoga, Antibiotika, Epipodophyllotoxine, Platinkoordinationskomplexe, Hormone und dergleichen. Geeignete chemotherapeutische Mittel werden beschrieben in REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 19. Aufl. (Mack Publishing Co. 1995) und in GOODMAN AND GILMAN'S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, 7. Aufl. (MacMillan Publishing Co. 1985). Weitere geeignete chemotherapeutische Mittel, wie z.B. experimentelle Arzneistoffe, sind dem Fachmann bekannt.
Darüber hinaus können therapeutisch geeignete Immunkonjugate erhalten werden, indem photoaktive Mittel oder Farbstoffe mit einer Antikörperzusammensetzung konjugiert werden. Fluoreszierende Mittel und andere Chromogene oder Farbstoffe, wie z.B. auf sichtbares Licht leicht reagierende Porphyrine, wurden verwendet, um Läsionen aufzuspüren und zu behandeln, indem das geeignete Licht auf die Läsion ausgerichtet wird. In der Therapie wird dies als Photobestrahlung, Phototherapie oder photodynamische Therapie bezeichnet (Jori et al., (Hrsg.), PHOTODYNAMIC THERAPY OF TUMORS AND OTHER DISEASES (Libreria Progetto 1985); van den Bergh, Chem. Britain 22:430 (1986)). Darüber hinaus wurden für die Phototherapie monoklonale Antikörper mit photoaktivierten Farbstoffen gekoppelt. Mew et al., J. Immunol. 130:1473 (1983); idem., Cancer Res. 45:4380 (1985); Oseroff et al., Proc.Natl. Acad. Sci. USA 83:8744 (1986); idem., Photochem. Photobiol. 46:83 (1987); Hasan et al., Prog. Clin. Biol. Res. 288:471 (1989); Tatsuta et al., Lasers Surg. Med. 9:422 (1989); Pelegrin et al., Cancer 67:2529 (1991). Allerdings umfaßten diese früheren Untersuchungen nicht die Verwendung von endoskopischen Therapieanwendungen, insbesondere nicht bei Verwendung von Antikörperfragmenten oder -subfragmenten. Daher sieht die vorliegende Erfindung die therapeutische Verwendung von Immunkonjugaten vor, die photoaktive Mittel oder Farbstoffe umfassen.
Die multimodalen Therapien der vorliegenden Erfindung umfassen des weiteren die Immuntherapie mit nackten Anti-CD22-Antikörpern, die durch Verabreichung von Anti-CD19- oder Anti-CD20-Antikörpern in Form von nackten Antikörpern oder als Immunkonjugate ergänzt werden. Anti-CD19- und Anti-CD20-Antikörper sind dem Fachmann bekannt. Siehe z.B. Ghetie et al., Cancer Res. 48:2610 (1988); Hekman et al., Cancer Immunol. Immunother. 32:364 (1991); Kaminski et al., N. Engl. J. Med. 329:459 (1993); Press et al., N. Engl. J. Med. 329:1219 (1993); Maloney et al., Blood 84:2457 (1994); Press et al., Lancet 346:336 (1995); Longo, Curr. Opin. Oncol. 8:353 (1996).
Bei einer anderen Form der multimodalen Therapie erhalten die Patienten nackte Anti-CD22-Antikörper und eine Standardchemotherapie gegen Krebs. Zum Beispiel ist "CVB" (1,5 g/m² Cyclophosphamid, 200-400 mg/m² Etoposid und 150-200 mg/m² Carmustin) eine Therapie, die angewandt wird, um das Non-Hodgkin-Lymphom zu behandeln. Patti et al., Eur. J. Haematol. 51:18 (1993). Andere geeignete chemotherapeutische Kombinationstherapien sind dem Fachmann gut bekannt. Siehe z.B. Freedman et al., "Non-Hodgkin's Lymphomas", in CANCER MEDICINE, BAND 2, 3. Aufl., Holland et al., (Hrsg.), Seiten 2028-2068 (Lea & Febiger 1993). Zur Veranschaulichung umfaßt die erste Generation der chemotherapeutischen Therapien zur Behandlung des Non-Hodgkin-Lymphoms fortgeschrittenen Grades C-MOPP (Cyclophosphamid, Vincristin, Procarbazin und Prednison) und CHOP (Cyclophosphamid, Doxorubicin, Vincristin und Prednison). Eine geeignete chemotherapeutische Therapie der zweiten Generation ist m-BACOD (Methotrexat, Bleomycin, Doxorubicin, Cyclophosphamid, Vincristin, Dexamethason und Leucovorin), während eine geeignete Therapie der dritten Generation MACOP-B ist (Methotrexat, Doxorubicin, Cyclophosphamid, Vincri stin, Prednison, Bleomycin und Leucovorin). Die weiterhin geeigneten Arzneistoffe umfassen Phenylbutyrat und Bryostatin-1.
Im allgemeinen wird die Dosierung der verabreichten Anti-CD22-Antikörper, Anti-CD22-Antikörperkomponenten, Immunkonjugate und Fusionsproteine in Abhängigkeit von solchen Faktoren wie dem Alter, dem Gewicht, der Größe, dem Geschlecht, dem allgemeinen gesundheitlichen Zustand und der medizinischen Vorgeschichte des Patienten variieren. Üblicherweise ist es gewünscht, den Empfänger mit einer Dosierung an Antikörperkomponente, Immunkonjugat oder Fusionsprotein zu versorgen, die in dem Bereich von etwa 1 pg/kg bis 10 mg/kg (Menge an Mittel/Körpergewicht des Patienten) liegt, obwohl auch eine höhere oder eine niedrigere Dosierung verabreicht werden kann, wenn dies die Umstände erfordern.
Die Verabreichung von Antikörperkomponenten, Immunkonjugaten oder Fusionsproteinen an einen Patienten kann intravenös, intraarteriell, intraperitoneal, intramuskulär, subkutan, intrapleural, intrathecal, durch Perfusion durch einen örtlichen Katheter oder durch direkte, in die Läsion einführende Injektion erfolgen. Wenn die therapeutischen Proteine durch Injektion verabreicht werden, kann die Verabreichung durch kontinuierliche Infusion oder durch einen einzelnen oder mehrere Boli erfolgen.
Dem Fachmann ist bewußt, daß die intravenöse Injektion aufgrund der schnellen Verteilung der Antikörper durch die vollständige Blutzirkulation eine geeignete Methode ist. Allerdings unterliegt die intravenöse Verabreichung einer Beschränkung durch die Gefäßbarriere, die die Endothelzellen der Blutgefäße und die Matrix des Subendothels umfaßt. Allerdings ist die Gefäßbarriere ein noch beträchtlicheres Problem für die Aufnahme von therapeutischen Antikörpern durch solide Tumore. Lymphome weisen relativ hohe Blutflußraten auf, was zu der wirksamen Antikörperzuführung beiträgt. Die intralymphatischen Verabreichungswege, wie z.B. die subkutane oder intramuskuläre Injektion oder die Katheterisierung von Lymphgefäßen, stellen auch ein geeignetes Mittel für die Behandlung von Lymphomen dar.
Vorzugsweise sind nackte Anti-CD22-Antikörper in niedrigen Proteindosen verabreichbar, wie z.B. 20 bis 100 mg Protein pro Dosis, einmal oder wiederholt parenteral verabreicht. Alternativ werden nackte Anti-CD22-Antikörper in Dosen von 30 bis 90 mg Protein pro Dosis oder 40 bis 80 mg Protein pro Dosis oder 50 bis 70 mg Protein pro Dosis verabreicht.
Wie oben beschrieben, sieht die vorliegende Erfindung auch Therapien vor, bei denen nackte Anti-CD22-Antikörperkomponenten mit Immunkonjugat oder Fusionsprotein für die Verabreichung ergänzt werden. Bei einer Variation sind nackte Anti-CD22-Antikörper mit niedrig dosierten radioaktiv markierten Anti-CD22-Antikörpern oder -Fragmenten verabreichbar. Als zweite Alternative sind nackte Anti-CD22-Antikörper mit niedrig dosierten radioaktiv markierten Anti-CD22-Cytokinimmunkonjugaten verabreichbar. Als dritte Alternative werden nackte Anti-CD22-Antikörper mit Anti-CD22-Cytokinimmunkonjugaten, die nicht radioaktiv markiert sind, verabreicht. Hinsichtlich der "niedrigen Dosis" von ¹³¹I-markierten Immunkonjugaten liegt eine bevorzugte Dosierung in dem Bereich von 15 bis 40 mCi, während der am meisten bevorzugte Bereich 20 bis 30 mCi ist. Im Gegensatz dazu ist die bevorzugte Dosierung von ⁹⁰Y-markierten Immunkonjugaten in dem Bereich von 10 bis 30 mCi, während der am meisten bevorzugte Bereich 10 bis 20 mCi ist. Die bevorzugten Antikörperkomponenten umfaßen Antikörper und Fragmente, die von LL2-Antikörpern abgeleitet wurden, einschließlich monoklonale LL2-Maus-Antikörper, chimäre LL2-Antikörper und humanisierte LL2-Antikörper.
Immunkonjugate, die einen mit Borligand beladenen Träger für die thermische Neutronenaktivierungstherapie aufweisen, werden normalerweise in vergleichbarer Weise eingesetzt. Allerdings ist es vorteilhaft, zu warfen, bis nicht-gezieltes Immunkonjugat verschwindet, bevor die Neutronenbestrahlung durchgeführt wird. Die Entfernung kann durch Verwendung eines Antikörpers, der an das Immunkonjugat bindet, beschleunigt werden. Siehe US-Patent Nr. 4,624,846 für eine Beschreibung dieses allgemeinen Prinzips.
Die Anti-CD22-Antikörperkomponenten, Immunkonjugate und Fusionsproteine der vorliegenden Erfindung können nach den bekannten Verfahren zum Herstellen von pharmazeutisch geeigneten Zusammensetzungen formuliert werden, wobei die therapeutischen Proteine in einem Gemisch mit einem pharmazeutisch geeigneten Träger kombiniert werden. Eine Zusammensetzung wird als "pharmazeutisch geeigneter Träger" bezeichnet, wenn dessen Verabreichung vom empfangenden Patienten vertragen werden kann. Ein Beispiel für einen pharmazeutisch verträglichen Träger ist sterile phosphatgepufferte Salzlösung. Andere geeignete Träger sind dem Fachmann gut bekannt. Siehe z.B. REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 19. Ed. (1995).
Zum Zwecke der Therapie sollen Antikörperkomponenten (oder Immunkonjugate/Fusionsproteine) und ein pharmazeutisch verträglicher Träger einem Patienten in einer therapeutisch wirksamen Menge verabreicht werden. Man spricht davon, daß eine Kombination einer Antikörperkomponente, wahlweise mit einem Immunkonjugat/Fusionsprotein und einem pharmazeutisch geeigneten Träger in einer "therapeutisch wirksamen Menge" verabreicht wurde, wenn die verabreichte Menge physiologisch signifikant ist. Ein Mittel ist physiologisch signifikant, wenn dessen Vorliegen zu einer nachweisbaren Veränderung in der Physiologie des empfangenden Patienten führt. Im vorliegenden Zusammenhang ist ein Mittel physiologisch signifikant, wenn dessen Vorliegen zur Hemmung des Wachstums der Zieltumorzellen führt.
Weitere pharmazeutische Verfahren können für die Kontrolle der Dauer der Aktivität einer Antikörperkomponente, eines Immunkonjugats oder Fusionsproteins bei einer therapeutischen Anwendung angewandt werden. Zubereitungen für die kontrollierte Freisetzung durch Verwendung von Polymeren zur Komplexierung oder Adsorbierung von Antikörperkomponente, Immunkonjugat oder Fusionsprotein können hergestellt werden. Beispielsweise umfassen biokompatible Polymere die Matrizes von Poly-(ethylen-co-vinylacetat) und Matrizes von einem Polyanhydrid-Copolymer eines Stearinsäuredimers und einer Sebacinsäure. Sherwood et al., Bio/Technology 10:1446 (1992). Die Freisetzungsrate einer Antikörperkomponente (oder eines Immunkonjugats) aus einer solchen Matrix hängt von dem Molekulargewicht des Proteins, der Menge der Antikörperkomponente/Immunkonjugat/Fusionsprotein in der Matrix und der Größe der dispergierten Partikel ab. Saltzman et al., Biophys. J. 55:163 (1989); Sherwood et al., supra. Weitere Dosierungen in fester Form werden beschrieben in REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 19. Aufl. (1995).
Die vorliegende Erfindung sieht auch eine Verwendung vor, bei der Immunmodulatoren verabreicht werden sollen, um der strahlungsinduzierten oder arzneistoffinduzierten Toxizität gegenüber normalen Zellen und insbesondere gegenüber hematopoietischen Zellen vorzubeugen, diese zu lindern oder rückgängig zu machen. Die ergänzende immunmodulatortherapie ermöglicht aufgrund der erhöhten Toleranz des empfangenden Säugetiers die Verabreichung von höheren Dosen an zytotoxischen Mitteln. Darüber hinaus kann die zusätzliche Immunmodulatortherapie der dosisbeschränkenden Knochenmarkstoxizität vorbeugen, sie lindern oder rückgängig machen. Beispiele für geeignete Immunmodulatoren für die zusätzliche Therapie umfassen G-CSF, GM-CSF, Thrombopoietin, IL-1, IL-3, IL-12 und dergleichen. Das Verfahren der zusätzlichen Immunmodulatortherapie ist offenbart bei Goldenberg, US-Patent 5,120,525.
Beispielsweise kann rekombinantes IL-2 intravenös in einem Bolus mit 6 × 10⁵ IU/kg oder durch kontinuierliche Infusion in einer Dosis von 18 × 10⁶ IU/m²/d verabreicht werden. Weiss et al., J. Clin. Oncol. 10:275 (1992). Alternativ kann rekombinantes IL-2 subkutan in einer Dosis von 12 × 10⁸ IU verabreicht werden. Vogelzang et al., J. Clin. Oncol. 11:1809 (1993). Darüber hinaus kann INF-γ subkutan in einer Dosis von 1,5 × 10⁶ U verabreicht werden. Lienard et al., J. Clin. Oncol. 10:52 (1992). Nadeau et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 274:78 (1995), haben darüber hinaus gezeigt, daß eine einzelne intravenöse Dosis an rekombinantem IL-12 (42,5 μg/kg) die IFN-γ-Spiegel in Rhesusaffen erhöhten.
Geeignete IL-2-Formulierungen umfaßen PROLEUKIN (Chiron Corp./Cetus Oncology Corp.; Emeryville, CA) und TECELEUKIN (Hoffmann-La Roche, Inc.; Nutley, NJ). ACTIMMUNE (Genentechn, Inc.; Süd-San Francisco, CA) ist eine geeignete INF-γ-Zubereitung.
Die auf diese Weise allgemein beschriebene vorliegende Erfindung wird unter Hinweis auf die folgenden Beispiele, die zum Zwecke der Erläuterung vorgesehen sind und die vorliegende Erfindung nicht beschränken sollen, noch besser verstanden werden.
BEISPIEL 1
Behandlung eines Patienten mit erneut aufgetretenem Non-Hodgkin-Lymphom fortgeschrittenen Grades
Bei einem Patienten mit dem Non-Hodgkin-Lymphom fortgeschrittenen Grades ist eine vorherige aggressive Chemotherapie fehlgeschlagen, die aus CHOP × 6 bestand, was zu einer vollständigen Remission für fünf Monate führte, einem weiteren Durchlauf CHOP × 6, was zu einer Progression führte, D-MOPP × 2, was zu einer Stabilisierung der Erkrankung für sechs Monate führte, und CVB mit peripherer Stammzellentransplantation, was zu einer teilweisen Remission für vier Monate führte. Der Patient präsentiert sich mit einem wiedergekehrten Lymphom im Brustkorb und in einem Nackenlymphknoten, beide jeweils meßbar durch Computertomographie und durch Austastung.
Der Patient wird mit 50 mg an humanisiertem monoklonalem LL2-Antikörper an den Tagen 2, 5, 9, 12 zweier aufeinanderfolgender Wochen infundiert, wobei keine nachteiligen Wirkungen festgestellt wurden. Drei Wochen später zeigt die Austastung der Nackenknotenvergrößerung eine meßbare Abnahme um etwa 60%, während eine wiederholte Computertomographieabtastung des Brustkorbs eine merkliche Abnahme des Tumors von 70% anzeigt. Nachfolgende Messungen, die zehn Wochen nach der Therapie vorgenommen wurden, weisen keine Anzeichen der Erkrankung im Nacken oder dem Brustkorb auf. Der Patient gilt als in vollständiger Remission befindlich, da an keiner Stelle eine neue Erkrankung nachgewiesen wird. Die alle 10-12 Wochen nachfolgenden Untersuchungen bestätigen eine vollständige Remission für wenigstens 16 Monate nach der Therapie.
BEISPIEL 2
Behandlung eines Patienten mit verstreutem, aggressivem Großzellen-Lymphom mit CHOP und hLL2
Ein Patient präsentiert sich mit verstreutem, aggressivem Großzellen-Lymphom und es wurde diagnostiziert, daß er eine schlechte Prognose hat mit massiger Erkrankung im Abdomen, mehreren anderen Stellen extranodaler Erkrankung und erhöhter Lactatdehydrogenase (LDH) im Serum. Der Patient wird auf CHOP gesetzt, und nach drei Therapiezyklen wird eine teilweise Wirkung beobachtet mit der Auflösung von mehreren Stellen der extranodalen Erkrankung außerhalb des Abdomens. Die massige Erkrankung im Abdomen vergrößert sich allerdings weiterhin in Bezug auf das Volumen, und die LDH im Serum bleibt erhöht.
Mit dem Beginn des dritten Zyklus CHOP wird der Patient mit 50 mg an humanisiertem monoklonalem LL2-Antikörper an den Tagen 2, 5, 9 und 12 infundiert. Diese therapeutische Verabreichung von hLL2 wird gleichzeitig mit vier weiteren Zyklen an CHOP wiederholt. Während der Therapie fällt der LDH-Spiegel im Serum in den normalen Bereich. Einen Monat nach dem dritten Zyklus an CHOP und hLL2 zeigt eine Computertomographieabtastung des massigen Tumors im Abdomen eine Verminderung der Masse um über 90%. Nachfolgende Untersuchungen alle 10-12 Wochen bestätigen eine vollständige Remission für über neun Monate nach der Therapie.
BEISPIEL 3
Behandlung eines Patienten mit wiedergekehrtem, aggressivem Großzellen-Lymphom mit hLL2 und hLL2-IL2
Ein Patient mit verstreutem aggressivem Großzellen-Lymphom sprach auf eine erste Serie (CHOP) und eine zweite Serie (m-BACOD) der Chemotherapie an, die dritte Chemotherapieserie (MACOP-B) schlägt jedoch fehl. Nach Abschluß der dritten Chemotherapieserie weist der Patient verstreute Erkrankung im Knochenmark, massive Splenomegalie und mehrere Stellen mit vergrößerten Lymphknoten, die ertastet werden konnten, auf. Der Patient wurde dann mit 50 mg an humanisiertem LL2 an den Tagen 2, 5, 9 und 12 infundiert. Diese Therapie wird jede weitere Woche über vier Wochen wiederholt. Die Knochenmarkserkrankung spricht zunehmend auf die hLL2- Behandlung an und die Größe der Knoten nimmt ebenfalls ab. Allerdings können viele Knoten noch ertastet werden, und es wird wenig Abnahme der Milzgröße beobachtet.
Während die Therapie mit hLL2 alle zwei Wochen fortgesetzt wird, erhält der Patient auch 10 mg an hLL2-IL2-Fusionsprotein. Nach der ersten Behandlung erfolgt eine tiefgreifende Abnahme der Größe der Milz, und nach der zweiten Behandlung mit hLL2/hLL2-IL2 sind die Knoten nicht tastbar, und die Milz hat weiter an Größe abgenommen. Für über sechs Monate wird keine Progression der Erkrankung beobachtet.

Claims

Verwendung von wenigstens einem vollständigen Anti-CD22-Antikörper, der nicht mit einem therapeutischen Mittel konjugiert ist, bei der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung einer B-Zell-Malignität.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Anti-CD22-Antikörper parenteral in einer Dosierung von 20 bis 100 Milligramm Protein pro Dosis zu verabreichen ist.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Anti-CD22-Antikörper in wiederholten parenteralen Dosierungen von 20 bis 100 Milligramm Protein pro Dosis zu verabreichen ist.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Anti-CD22-Antikörper aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus einem Antikörper eines Primaten unterhalb des Menschen, monoklonalem Maus-Antikörper, chimärem Antikörper und humanisiertem Antikörper.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Anti-CD22-Antikörper der LL2-Antikörper ist.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei die B-Zell-Malignität aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus langsam wachsenden Formen von B-Zell-Lymphomen, aggressiven Formen von B-Zell-Lymphomen, chronischen lymphatischen Leukämien und akuten lymphatischen Leukämien.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei die B-Zell-Malignität ein Non-Hodgkin-Lymphom ist.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das Medikament wenigstens zwei monoklonale Antikörper umfaßt, die unterschiedliche CD22-Epitope binden, wobei die CD22-Epitope aus der Gruppe ausgewählt sind, bestehend aus Epitop A, Epitop B, Epitop C, Epitop D und Epitop E.
Verwendung nach Anspruch 1, welche weiterhin die Verwendung eines therapeutischen Proteins oder einer chemotherapeutischen Behandlung bei der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung einer B-Zell-Malignität umfaßt, wobei das therapeutische Protein aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus Antikörper, Immunkonjugat, Antikörper-Immunmodulator-Fusionsprotein und Antikörper-Toxin-Fusionsprotein.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei das therapeutische Protein entweder ein Anti-CD19-Antikörper oder ein CD20-Antikörper ist.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei das therapeutische Protein eine Kombination von wenigstens einem Anti-CD19-Antikörper und wenigstens einem Anti-CD20-Antikörper ist.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei das therapeutische Protein entweder ein vollständiger Anti-CD19-Antikörper, der nicht mit einem therapeutischen Mittel konjugiert ist, oder ein vollständiger Anti-CD20-Antikörper, der nicht mit einem therapeutischen Mittel konjugiert ist, ist.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei das therapeutische Protein ein Immunkonjugat oder ein Fusionsprotein ist, wobei das Immunkonjugat oder Fusionsprotein einen Immunmodulatorrest umfaßt, der aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus Interleukin-1 (IL-1), IL-2, IL-3, IL-6 und IL-10, IL-12, Interferon-α, Interferon-β, Interferon-γ, granulozytenkoloniestimulierender Faktor, granulozytenmakrophagenkoloniestimulierender Faktor und Lymphotoxin.
Verwendung nach Anspruch 13, wobei das Immunkonjugat oder das Antikörper-Immunmodulator-Fusionsprotein ein Antigen bindet, das aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus CD19, CD20 und CD22.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei das Immunkonjugat einen koloniestimulierenden Faktor umfaßt, der aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus granulozytenkoloniestimulierendem Faktor (G-CSF) und granulozytenmakrophagenkoloniestimulierendem Faktor (GM-CSF).
Verwendung nach Anspruch 9, wobei das therapeutische Protein ein radioaktiv markiertes Immunkonjugat ist.
Verwendung nach Anspruch 16, wobei das radioaktiv markierte Immunkonjugat ein Radionuklid umfaßt, das aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus ¹⁹⁸Au, ³²P, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁹⁰Y, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁶⁷Cu und ²¹¹At.
Verwendung nach Anspruch 16 oder Anspruch 17, wobei das radioaktiv markierte Immunkonjugat einen Antikörper oder ein Antikörperfragment umfaßt, der/das ein Antigen bindet, das aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus CD19, CD20 und CD22.
Verwendung nach Anspruch 18, wobei das radioaktiv markierte Immunkonjugat ein radioaktiv markiertes Anti-CD22-Immunkonjugat ist.
Verwendung nach Anspruch 19, wobei das radioaktiv markierte Anti-CD22-Immunkonjugat weiterhin einen Zytokinrest umfaßt, wobei der Zytokinrest aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus Interleukin 1 (IL-1), IL-2, IL-3, IL-6, IL-10, IL-12, Interferon-α, Interferon-β und Interferon-γ.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei das therapeutische Protein ein Immunkonjugat oder ein Antikörper-Toxin-Fusionsprotein ist, welches ein Toxin umfaßt, das aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus Ricin, Abrin, Ribonuklease, DNase I, Staphylococcus-Enterotoxin-A, Antivirusprotein der Kermesbeere, Gelonin, Diphtherintoxin, Pseudomonas-Exotoxin und Pseudomonas-Endotoxin.
Verwendung nach Anspruch 21, wobei das Immunkonjugat oder das Antikörper-Toxin-Fusionsprotein einen Antikörper oder ein Antikörperfragment umfaßt, der/das ein Antigen bindet, das aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus CD19, CD20 und CD22.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das Medikament eine Kombination von wenigstens einem vollständigen Anti-CD22-Antikörper, der nicht mit einem therapeutischen Mittel konjugiert ist, und einem Anti-CD19-Antikörper oder eine Kombination von wenigstens einem vollständigen Anti-CD22-Antikörper, der nicht mit einem therapeutischen Mittel konjugiert ist, und einem Anti-CD20-Antikörper umfaßt.
Verwendung nach Anspruch 23, wobei der Anti-CD19-Antikörper ein vollständiger Anti-CD19-Antikörper, der nicht mit einem therapeutischen Mittel konjugiert ist, ist.
Verwendung nach Anspruch 23, wobei der Anti-CD20-Antikörper ein vollständiger Anti-CD20-Antikörper, der nicht mit einem therapeutischen Mittel konjugiert ist, ist.
Verwendung nach Anspruch 9, wobei die chemotherapeutische Behandlung aus der Verabreichung von wenigstens einem Arzneimittel besteht, das aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus Cyclophosphamid, Etoposid, Vincristin, Procarbazin, Prednison, Carmustin, Doxorubicin, Methotrexat, Bleomycin, Dexamethason, Phenylbutyrat, Bryostatin-1 und Leucovorin.