WO2002041917A1 - Preparations ophtalmologiques - Google Patents

Description

明細書

眼科用 剤 技術分野

本発 明 は フ エ ニル ピ リ ダジ ノ ン誘導体 も し く はそ の塩 ま た はそ れ ら の水和 物 も し く はそ れ ら の溶媒和 物 に 代表 さ れ る 強心作用 を 有 す る 化合物 を 有効成分 と す る 眼科用 剤 に 存 し 、 詳 し く は 、 視神経疾患 ま た は網膜疾患 に対す る 予 防及 び ま た は治療剤 に 存す る 。 背..景.技.術 . 眼科領域 に お け る 神経細胞死 と 神経保護 に つ い て は、 視神経 · 網膜疾患 の 多 く で ア ポ ト ー シ ス に よ る 神経細胞 死が発生す る こ と が近年 の研究 に よ っ て 明 ら か に な っ て き た 。 視神経疾患で視神経細胞死 を 誘導す る メ カ ニ ズム は完全 に は解 明 さ れて い な い が、 網膜虚血 が一つ の 要 因 と 考 え ら れて い る 。 虚血 は組織血流循環 の 欠如 な い し 不 足 と 定義 さ れ、 眼圧上昇 に よ る 眼血流低下 に 伴 う 低酸素 血症 が視神経変性 に 重要 な役割 を 果 たす と 考 え ら れて い る 。 こ れ に 対応 し 、 現 時点で の緑 内 障 の 治療 に は、 眼圧 を 薬物療法や手術療法で下 げ る こ と が行 われて い る 。 そ の 有効性 は多 く の研究で 証明 さ れて い る が、 眼圧 を 十分 低下 さ せ る こ と がで き な い 例 も 少な く な く 、 ま た 、 眼圧 降下が無効 な も の も あ る 。 長期 的 に み る と 、 治療 を 行 つ て い て も 無視で き な い 確率で失 明 に 至 る 危険 が あ る 。 こ の よ う な 背 景 か ら 、 緑 内 障 の 治療 に お い て も 、 眼圧下降 効果 の みで は な く 、 血 流改善や細胞死抑制 の観点か ら 直 接的 な視神経保護 を 重視 し た 治療戦略 の確立 が望 ま れて レ ^ る （ E x p . E y e R e s . 6 9 , 3 3 1 - 3 4 2 1 9 9 9 等）。 ま た 、 網 J5莫 動脈 閉 塞 症 や 網 膜静脈 閉 塞 症 な ど に よ る 網 膜 の 循環 障 害 は 、重 篤 な 視 機 能 障 害 を 呈 し 適 切 な 治 療 手 段 が な い た め 、 そ の 良 好 な 治 療 剤 が希 求 さ れ て い る 。

一 方 、 フ エ ニ ル ピ リ ダ ジ ノ ン 誘 導 体 は 強 心剤 と し て 知 ら れ て い る 力 （ 特 開 昭 6 0 — 1 2 6 2 8 2 号 及 び特 開 昭 6 1 - 2 8 9 0 3 2 号 各 号 公 報 ）、 視 神 経 細 胞 死 抑 制 作 用 や 網 膜 変 性抑 制 作 用 に 関 す る 報 告 は も と よ り 、 そ の 眼 科用 途 に 関 す る 報告 で す ら 、 本 発 明 者 ら が 知 る 限 り こ れ ま で 全 く な さ れ て レゝ な い 。

本 発 明 は 、 強 心作 用 を 有 す る 化 合 物 の 新 た な 用 途 を 提 供-す る こ と を ..目 的 と し 、. さ ら こ 詳細 に は 、- 視 神 経 疾患 及 び網 膜疾 患 に 対 す る 新 た な 予 防 及 び Z ま た は 治 療剤 を 提 供 す る こ と を 目 的 と し て レゝ る 。 発 明 の 開 示

本発 明 者 ら は 、 視 神経 ， 網 膜神経 細 胞死 の メ カ ニ ズ ム を よ り 深 く 研 究 し 、 細 胞死 を 抑 制 す る よ う な 治 療 法 を 開 発す れ ば 、 こ れ ら の 難 治 性 疾 患 の 治 療 成 績 を 向 上 さ せ る こ と に つ な が る と 考 え 、 上 記 課 題 を 解 決 す べ く 鋭 意研究 を 実 施 し た 。 そ の 結 果 、 こ れ ま で 強 心 剤 と し て し か使 用 さ れ て い な か っ た 化 合 物 が 、 神経 節 細 胞 死 の 抑 制 作用 お よ び網 膜 変 性 の 抑 制 作 用 を 有 す る こ と を 見 出 し 、 そ の 結 果 、 眼 科 用 剤 と し て 使 用 可 能 な こ と を 見 出 し 、 本 発 明 を 完 成 す る に 至 っ た 。

す な わ ち 、 本 発 明 の 要 旨 は 、 強心 作 用 を 有 す る 化 合 物 を 有 効 成 分 と す る 眼 科 用 剤 に 存 す る 。

本 発 明 の 好 ま し い 態 様 と し て は 、 前 記 化 合 物 が 力 ル シ ゥ ム 感 受 性 増 強 作 用 を 有 す る こ と ； 前 記 化 合 物 が 下記一 般 式 （ 1 ) ま た は （ 2 )

( 上記一般式 （ 1 ) 及 び （ 2 ) 中 、 及 び R ₂ はそれぞ れ独立 し て 、 水 素原子 、 ハ ロ ゲ ン原子、 ア ルキ ル基、 ァ ミ ノ 基、 力 ルポ キ シ ル基 、 ニ ト ロ 基 、 シ ァ ノ 基、 ト リ フ ル ォ ロ メ チル基 、 ァ シル ァ ミ ノ 基 ま た は ア ル コ キ シ基 を 表 し 、 R ₃ は水 素 原 子 、 ァ シ ル 基 ま た は ア ル キ ル 基 を 表 し 、 R ₄ は そ の 環 上 に 置 換基 を 有 し て い て も 良 い 5 員 環 ま た は 6 員環 の 複 素環 を 表す。）

で表 さ れ る フ エ ニ ル ピ リ ダジ ノ ン 誘 導体 も し く はそ の 塩 ま た はそ れ ら の 水 和 物 も し く はそ れ ら の 溶媒和 物 で あ る こ と ； 前記化合物 が 、 下記一般式 （ 3 )

( 上 記 式 中 、 A は 1 か ら 3 個 の 窒 素 原子 を 含 む 5 員 環 ま た は 6 員 環 の 複 素 環 基 を 表 し 、 そ の 環 上 に ア ル キ ル基 、 シ ァ ノ 基 、 水 酸 基 、 ア ル コ キ シ 基 、 ア ミ ノ 基 、 ア ル キ ル ア ミ ノ 基 、 ジ ア ル キ ル ア ミ ノ 基 、 ァ シ ル ァ ミ ノ 基 、 カ ル ボ キ シ ル基 、 ア ル コ キ シ 力 ル ポ ニ ル基及 びカ ルノ ' モ イ ル 基 か ら 選 ばれ る 少 な く と も 一 つ の 置 換基 を 有 し て い て も 良 い 。）

で 表 さ れ る フ エ 二 ル ビ リ ダ ジ ノ ン 誘 導体 も し く は そ の 塩 ま た は そ れ ら の 水 和 物 も し く は そ れ ら の 溶 媒和 物 で あ る こ と ； 前 記 化 合 物 が 、 上 記 一 般 式 （ 1 ) ま た は （ 2 ) に お い て 、 . Rい . . R ₂ 及..び . R ₃.がそ れぞ れ 独 立.し て 、 水 素 原 子 、 メ チ ル 基 ま た は ェ チ ル 基 で 表 さ れ 、 R ₄ が 2 — ピ リ ジ ル 基 、 4 ピ リ ジ ル 基 、 2 ピ リ ミ ジ リレ基 ま た は 4 キ ノ リ ル 基 で 表 さ れ る こ と ； 前 記化 合 物 が 、 上 記 一 般 式 （ 1 ) に お い て 、 、 及 び R ₃ が水 素 原子 を 表 し 、 R ₄ が 4 一 ピ リ ジ ル基 で あ る こ と が挙 げ ら れ る 。

本 発 明 の 第 二 の 要 旨 は 、 強心 作 用 を 有 す る 化 合 物 を 有 効 成 分 と す る 視 神 経 疾 患 ま た は網 膜 疾患 の た め の 医薬 組 成物 に 存 し 、 そ の 好 ま し い 態 様 と し て は 、 前 記化 合 物 が カ ル シ ウ ム 感 受 性 増 強 作用 を 有 す る こ と ； 視 神 経 疾 患 が 、 虚血 性視 神 経 症 及 び緑 内 障 か ら 選 ば れ る こ と ； 網 膜疾 患 が 、 網 膜 静脈 閉 塞 症 、 網 膜動 脈 閉 塞 症 及 び糖 尿 病 性網 膜 症 か ら 選 ばれ る こ と が挙 げ ら れ る 。

本 発 明 の 第 三 の 要 旨 は 、 強心 作 用 を 有 す る 化 合 物 を 有 効 成 分 と す る 視 神 経 疾 患 ま た は網 膜 疾 患 の 予 防 及 びノ ま た は 治 療 剤 に 存 し 、 そ の 好 ま し い 態 様 と し て は 、 前 記化 合 物 が カ ル シ ウ ム 感 受 性 増 強 作用 を 有 す る こ と ； 視神 経 疾 患 が 、 虚 血 性 視 神 経 症 及 び緑 内 障 か ら 選 ばれ る こ と ； 網 膜 疾 患 が 、 網 膜 静 脈 閉 塞症 、 網 膜 動脈 閉 塞症 及 び糖 尿 病性網膜症か ら 選 ばれ る こ と ； 経 口 剤 、 注射剤 、 点眼剤 、 軟膏剤 、 眼 瞼 内 放置徐放剤 、 眼 内 灌流液か ら 選 ばれ る こ と が挙 げ ら れ る 。

さ ら に 、 本発 明 の要 旨 と し て は、 強心作用 を 有す る 化 合物 を有効 成分 と す る 網膜神経節細 胞死抑制剤 ； 強心作 用 を 有す る 化合物 を 有効成分 と す る 網膜神経節細胞保護 剤 ； 強心作用 を 有 す る 化合物 を 用 い た網膜神経節細胞死 を抑 制す る 方法 ； 強心作用 を 有す る 化合物 を 用 い た網膜 神経 節細胞 を 保護す る 方法 ； 強心作用 を 有す る 化合物 を 有効成分 と す る 網膜変性抑制剤 ； 及 び、 強心作用 を有す る 化—合-物 を.用.い -た網 _膜.変 _性 .を抑 制..す る 方 法が挙 げ ら れ.る. な お 、 こ れ ら の う ち 、 ィヒ合物がカ ル シ ウ ム 感受性増強作 用 を 有す る こ と ； 網膜変性が、 網膜虚血 に よ り 惹起 さ れ る こ と が、 好 ま し い 態様 と し て挙 げ ら れ る 。 図面 の簡 単な 説 明

第 1 図 は、 実施例 1 の グル タ ミ ン 酸 に よ る 網膜神経 節 細胞死 に 対す る 抑 制効果 を 示す図 で あ る 。

第 2 図 は 、 実施例 2 の一過性網膜虚血 眼 で の網膜変性 に対す る 抑 制効果 を 示す図 で あ る 。 発 明 を 実 施す る た め の 最 良 の 形態

以下本発 明 を 詳細 に 説明す る 。

本発 明 に お い て 、 強心作用 を 有す る 化合 物 と は 、 以下 の参考例 に 示す よ う に 各種動物 の 摘 出 心筋標本 に お い て そ の 発 生張 力 を 増 加 さ せ る 作用 を 有 す る 化合物 で あ れ ば 特 に 制 限 は さ れ な い 。 すな わ ち 、 以 下 の 参考例 に 示す よ う な 方法 で各 種動 物 の 摘出 心筋標本 に お け る 発 生張 力 を 増加 さ せ る 作用 を 有す る か 否か を 調 べ、 発 生張 力 を 増 加 さ せ る 作 用 を 有 す る 場 合 に は 、 本 発 明 で 定 義す る 強 心 作 用 を 有 す る ィ匕 合 物 で あ る と 、判 断す る こ と が 可 能 で あ る 。

こ の よ う な 化 合 物 の 一 例 と し て は 、 前 述 の 一 般 式 （ 1 ) ま た は （ 2 ) で 表 さ れ る よ う な 化 合 物 が挙 げ ら れ る 。 す な わ ち 、 上 記 一 般 式 （ 1 ) 及 び （ 2 ) 中 、 R , 及 び R₂ は そ れぞれ独 立 し て 、 水 素 原子 、 八 ロ ゲ ン 原子 、 ア ル キ ル 基 、 ア ミ ノ 基 、 カ ル ボ キ シ ル基 、 ニ ト ロ 基 、 シ ァ ノ 基 、 ト リ フ ル ォ ロ メ チ ル基 、 ァ シ リレ ア ミ ノ 基 ま た は ア ル コ キ シ 基 を 表 し 、 R ₃ は 水 素 原 子 、 ァ シ ル 基 ま た は ア ル キ ル 基 を 表 し 、 R₄ は そ の 環 上 に 置 換 基 を 有 し て い て も 良 い 5 昊環..ま た は 6. 員 .環 の 複 素.環 を 表 す よ，う な _化 合 物 が挙 げ ら れ る 。 こ れ ら の う ち 、 好 ま し い 化 合 物 と し て は 、 上 記 一 般式 （ 3 ) で 表 さ れ る 化 合 物 や 、 上 記 一 般式 （ 1 ) ま た は （ 2 ) に お レゝ て 、 、 R₂ 及 び R₃ が そ れぞ れ 独 立 し て 、 水 素 原 子 、 メ チ ル 基 ま た は ェ チ ル 基 で 表 さ れ 、 R₄ が 2 — ピ リ ジ ル 基 、 4 — ピ リ ジ リレ基 、 2 — ピ リ ミ ジ リレ 基 ま た は 4 一 キ ノ リ ル基 で 表 さ れ る 化 合物 が挙 げ ら れ る 。 本 発 明 に お い て は 、 特 に 好 ま し い 化 合 物 と し て 、 前記 一 般 式 （ 3 ) に お い て 、 A が 4 一 ピ リ ジ ル基 で あ る 化 合 物 、 す な わ ち 、 6 — [ 4 - ( 4 一 ピ リ ジ ル ァ ミ ノ ） フ エ ニ リレ ] — 4 ， 5 — ジ ノ、 イ ド 口 _ 3 ( 2 H) ピ リ ダ ジ ノ ン （ 以 下 、 M C I - 1 5 4 と 称 す る こ と も あ る 。） も し く は そ の 塩 、 ま た は そ れ ら の 水 和 物 も し く は そ れ ら の 溶 媒和 物 が挙 げ ら れ る 。

M C I 一 1 5 4 の 強 心 作用 機序 に 関 し て は 、 J apanes e

Journal o f Pharmaco l ogy, 50, 4】 1 -419 (1989) に 言 3 載 さ れ て い る よ う に 、 心 筋 の 収 縮 フ ィ ラ メ ン ト の カ ル シ ウ ム 感 受 性 増 強 作用 に 基 づ く と い う 報 告 が あ る 。 従 っ て 、 本 発 明 に お い て は 、 カ ル シ ウ ム 感 受 性 増 強作 用 を 有 す る 化 合 物 を 本発 明 眼科用 剤 の 有効成分 と し て使用 す る こ と が可 能で あ る 。 前記文献 に は 、 モ ルモ ッ ト 左心室乳頭筋 を サ ポ ニ ン （ 250 g/m 1 ) に 3 0 分 間 浸 す こ と に よ り 作 成 し た ス キ ン ド フ ァ イ バ ー 標 本 に お い て 、 カ リレ シ ゥ ム (pCa5. 8)の添加 に よ り 発 生す る 張力 に及 ぼす M C I 一 1 5 4 、 サルマ ゾー ム 、 ア ジ ベ ン ダ ン及び ピ モ ベ ン ダ ン の 影響 が示 さ れて い る 。 す な わ ち 、 こ の よ う な 方 法 に よ つ て、 カ ル シ ウ ム 感受性 増強作用 を 調べ、 カ ル シ ウ ム 感受 性増 強作用 を 有す る と 判定 さ れた 場合 に は 、 本発 明 で定 義す る カ ル シ ウ ム 感受 性増強作用 を 有す る 化合物 で あ る と 判 断.す る.こ .と が可 能 で.あ る 。

な お 、 こ れ ら の化合 物 は 、 特 開 昭 5 8 — 8 0 1 5 号 、 5 8 — 8 0 1 6 号 、 5 8 — 1 4 0 0 7 6 号及 び 6 0 — 1 2 6 2 8 2 号 各 号 公 報 や 、 Journa l o f Med i c i na l Chemi s t ry, 1987, vo l . 30, No. 7, 1157-1161 に 記 載 の ィ匕合物 で あ り 、 こ れ ら の 公報等 に記載 の方法 、 ま た はそ れ ら に 準 じ て製造す る こ と がで き る 。

こ れ ら の塩 と し て は薬剤 と し て許容 さ れ る 塩で あ れ ば 特 に 制 限 は さ れず、 塩酸 、 リ ン酸等 の鉱酸 と の 塩お よ び 乳酸 、 酢酸等 の 有機酸 と の塩等 が挙 げ ら れ る 。

ま た 、本発 明 に お い て は 上記 で挙 げた 化合物 の 水和 物 、 あ る レゝ は 、 溶媒和 物 と し て も 用 レゝ る こ と がで き 、 溶媒和 物 と し て は、 薬剤 と し て許容 さ れ る 溶媒で あ れ ば特 に 制 限 は さ れな い 。

以下 、 M C I — 1 5 4 を 用 い た場合 を 一例 と し て 、 本 発 明 に つ い て 説 明 す る が、 他 の化合物 を 有効成分 と し て 用 い る 場合で も 、 下記 を 参考 に し て 、 適宜調 製 し て使用 す る こ と がで き る 。

本 発 明 薬剤 の 有効成分 を 臨床 に 適用 す る に 際 し て は 、 M C I 一 1 5 4 ま た は薬剤 と し て 許容 さ れ る そ の 塩 を そ の ま ま 、 あ る い は薬剤 と し て許容 さ れ る 担体 を 配合 し て 医薬組成物 と し て使用 す る 。 点 眼剤 と し て用 い る 場合 に は 、 上 記化 合物 0 . 1 〜 1 0 O m g / m l を ：！ 〜 2 滴 、 1 日 1 〜 数 回 点 眼す る の が好 ま し く 、 経 口 的 に 用 い る 場 合 に は 、 上記化合物 0 . 0 1 〜 ： L O O m g Z k g を 1 日 1 〜 3 回 投 与す る の が好 ま し く 、静脈内 注射 の 場合 に は 、 上記化 合 物 0 . 0 1 ~ 2 0 0 m g を 1 日 2 〜 5 回投与 ま た は こ れ ら の 用 量 を 点滴持続注入す る の が好 ま し い 。 ま た 直 腸 内 投 与 の 場合 に は、 上記化合 物 0 . 0 1 〜 ： L 0 0 m一 g ·/ k ..g .—を. - 1. 日 ュ 〜 3,回 投与す る の 好 ま しい 。 .ま た 上記化 合物 は 眼 内 灌流液 中 に 添加 し て使用 す る こ と も で き る 。 以 上 の投与量 は 、 年齢 、 病 態 、 性別 、 症 状等 に よ り 適宜増減 し て使用 さ れ る 。

点 眼剤 に お い て は 、 水性点 眼剤 、 非水性点 眼剤 、 懸濁 性点 眼剤 、 乳濁性点 眼剤 、 眼軟膏等 を含む 。 点 眼剤 の 製 造 は 、 滅菌精製水 、 生理 食塩水等 の 水性溶剤 、 ま た は綿 実油 、 大 豆油 、 ゴマ 油 、 落花 生油等 の 植物 油等 の 非水性 溶剤 を 用 い 、 こ れ ら に M C I - 1 5 4 ま た は薬剤 と し て 許容 さ れ る そ の塩 を 溶解 ま た は懸濁す る こ と に よ り 行 わ れ る 。 こ の と き 、 薬剤 と し て 許容 さ れ得 る 等張化剤 、 P H 調 節 剤 、 粘調剤 、 懸濁化剤 、 乳化剤 、 保存剤等 を 必要 に 応 じ て 適宜加 え て も よ い 。

そ の 他 の 製剤化 に 際 し て は 、 M C I - 1 5 4 ま た は薬 剤 と し て 許容 さ れ る そ の 塩 を 通常用 い ら れ る 製剤 用 担体 す な わ ち 賦形剤そ の他 の 添加剤 を含 む組成物 と し て使用 で き る 。 か か る 担体 は 固 体 で も 液体で も よ い 。

固 体担体 を 用 い る 場合 は 、 錠剤 、 散剤 、 顆粒剤 、 硬 ゼ ラ チ ン カ プセ ル剤 、 坐剤 、 ト ロ ー チ剤 な ど の剤 型 を と る こ と が で き る 。 こ の と き の 固 体 担体 の 量 は任 意 で 構 わ な い が 、 好 ま し く は約 1 m g 〜 約 1 g 程 度 と な る よ う に す る 。

液 状 の 担 体 を 用 い る 場 合 は 、 シ ロ ッ プ 、 乳液 、 軟ゼ ラ チ ン カ プセ ル 、 更 に は ア ン プル 入 り の よ う な 滅菌注 射 液 ま た は 水 性 、 非 水 性 の 懸濁 液 と す る こ と がで き る 。

ま た 本 発 明 の 製剤 ィ匕 に 際 し て は 、 M C I _ 1 5 4 ま た は 薬 剤 と し て 許 容 さ れ る そ の 塩 を サ イ ク ロ デ キ ス ト リ ン 包 接 体 や リ ボ ソ ー ム 中 に 入 れ る 等 の 操作 を し て 徐 放化 す る こ と も 好 ま し い 。

-か く し て 得 ら.れ る本発 明.の.服.科 用，剤，は 、 以 下 の 実施 例 で 示 す よ う に 、 網 膜 神経 節 細 胞 死 を 抑 制 Z保 護 し 、 網 膜 変 性 、 特 に 網 膜 虚血 に よ り 惹 起 さ れ る 網 膜変 性 を 抑 制 す る た め 、 視 神 経 疾患 ま た は網 膜 疾 患 等 を 予 防 ま た は 治 療 す る 薬 剤 と し て 使用 さ れ る 。 本 発 明 に お い て 、 視 神経 疾 患 と は 、 網 膜神 経 節 細 胞死 に 起 因 す る 疾 患 で あ れ ば特 に 限 定 は さ れ ず 、 例 え ば、 虚血 性 視 神経 症 や緑 内 障 が挙 げ ら れ る 。 ま た 、 本 発 明 に お い て 、 網 膜疾 患 と は 、 網 膜変 性 に 起 因 す る 疾 患 で あ れ ば特 に 限 定 は さ れず 、 例 え ば 、 網膜 静 脈 閉 塞 症 、 網 膜動 脈 閉 塞 症 、 糖 尿病 性網 膜症 等 が 挙 げ ら れ る 。 実 施 例

以 下 、実 施 例 に よ り 本 発 明 を さ ら に 詳 細 に 説 明 す る が 、 本 発 明 は そ の 要 旨 を 超 え な い 限 り 、 以 下 の 実 施例 に 限 定 さ れ な い 。 な お 、 以 下 の 実施 例 で 用 い た M C I — 1 5 4 は 、 特 開 昭 6 0 — 1 2 6 2 8 2 号公 報 に 記載 の 実 施例 1 に 記 載 の 方 法 に 準 じ て 製 造 し た も の を 用 い た 。

実 施 例 1 ダ ル タ ミ ン 酸 に よ る 網 膜神 経 節 細 胞死 に 対す る 抑 制 効 果 ( 試 験 方 法 ）

Ot or i ら の 方 法 ( I nves t i ga t ive Oph tha lmo l ogy & Vi sua l Sc i ence, Vo l . 39, No. 6, 1998) に 準 じ て 、 6 日 齢 の ウ ィ ス タ ー 系 ラ ッ ト よ り 、網 膜神 経 節 細 胞 を 分 離 し 、 24 穴 の 培 養 プ レ ー ト 中 に 挿.入 し た ポ リ - L -リ ジ ン お よ び ラ ミ ニ ン コ ー テ ィ ン グ を 施 し た 直 径 I 2miii の カ ノ 一 ダ ラ ス 上 に 細 胞数 約 300 個 と な る よ う に 播種 し て 24 時 間 培 養 し た 。 こ れ ら を 2 穴 づつ 、 無処 置 群 、 対 照 群 、 薬剤 群 に 分 け 、 無処 置 お よ び対 照 群 に は基 本培 養液 を 、 薬 剤群 に は 種 々 濃度.の... M C I 一. 1 .5 4 を 添力!] し 4 時 間 培 養 後 、 無 処 置群 を 除 く 全 て の 群 に 250 M グル タ ミ ン 酸 を 添加 し 、 さ ら に 48 時 間 培 養 し た 。 48 時 間 培養 し た 後 、 1 M の 力 ソレ セ イ ン -ァ セ ト キ シ メ チ ル エ ス テ ル で 染 色 し 、 蛍 光 顕微 鏡下 、 細 胞径 の 2 倍 以 上 の 長 さ の neur i tes を 伸 ばす 細 胞 を 生 存 細 胞 と し て 、 細 胞 数 を 数 え た 。 2 穴 の 平 均 値 を 1 例 と し 、 3 例 の 試験 を 行 っ た 。

薬 剤 群 ： 10—⁷M、 10—⁶M、 10"⁵ M C I - 1 5 4

基本 培 養液 ： Neurobas a l (Gi bco, Grand I s l and, NY) に l mM グ リレ 夕 ミ ン 、 10 /z g/ml ゲ ン タ マ イ シ ン 、 40ng/m l BDGF、 CNTF お よ び b-FGF を 添加 し た 培 養液

( 試 験 結 果）

結 果 を 第 1 図 に 示 す 。 第 1 図 は 、 無処 置群 の 生 存 細 胞 数 に 対 す る 各 群 の 生 存 細 胞 数 の 百分 率 を 示 し た 図 で あ る ， 値 は 各 群 の 平 均 値 （ ％ ) を 示 し 、 バ ー は 標 準誤 差 を 示 し 、 例 数 は 各 群 と も 3 例 で あ る 。 第 1 図 中 、 * 、 * * 及 び * * * は そ れぞ れ 対 照 群 と の 有 意差 （ p〈 0. 05 )、 （ pく 0. 01 ) 及 び （ pく 0. 001 ) を 示 す 。

こ の 結 果 よ り 、 M C I ― 1 5 4 は グリレ タ ミ ン 酸 に よ り 惹起 さ れ る 網 膜神経 節 細胞死 を 有意 に 抑 制す る こ と が わ か る 。

実施例 2

一過性網 膜虚血 眼で の網膜変性 に 対す る 抑 制効果

(試験方法）

体重約 2 0 0 g の ウ ィ ス タ ー 系雄性 ラ ッ ト を 用 い た 。 麻酔下 に 保温 プ レ ー ト を 用 い て 充分 な 保温処置 を 施 し 、 定位装置 を 用 い て 頭部 を 固 定 し た 。 赤池 の 方法 （ 日 本 薬 理学雑誌 H I 巻 、 97-104 頁、 1998 年） に 準 じ て 、 眼球 の 上方 1 7 4 c mの 高 さ に保持 し た ボ ト ル よ り 輸液チ ュ ー ブお.よ び 3.0 G の 注，射.針 を.用.い て 眼.内 灌流液 を 経角.膜 的 に 前房 内 に 注 入す る こ と に よ っ て 、 眼圧 を 1 3 O m m H g に 5 0 分 間 保持 （ 高 眼圧処 置） し 、 一過性 の網膜虚 血 を 惹起 し た 。 高 眼圧処置 は右 眼 に の み施 し 、 左眼 は無 処置 と し た 。 高 眼圧処 置 の 直前 お よ び直後 に 生理食塩液 あ る い は 0 . l m g Z k g 用 量 の M C I - 1 5 4 を 尾 静 脈注射 し た 。 高 眼圧処置 7 日 後 に 動物 を 麻酔致死 さ せ 、 眼球 を 摘 出 し 、 網膜 の水平切片 に つ い て の光顕標本 を 作 製 し た 。 顕微鏡下、 マ イ ク ロ メ 一 タ ー を 用 い て網膜の 厚 さ （ 内 網 状層 〜 外網 状層 の 厚 さ ） を 測定 し た 。

( 試験結果）

結 果 を 第 2 図 に 示す 。 第 2 図 は、 高 眼圧処置 7 日 後 の 個体 ご と の 無処 置 眼 と 高 眼圧処 置 眼 の網膜厚 の 比 （高 眼 圧処置 眼 の網 膜厚 無処置 眼 の 網膜厚 、 網膜厚 ； 内網 状 層 〜 外網 状層 の 合 計 の厚 さ ） を 示 し た 図 で あ る 。 値 は 各 群 の 平均値 を 示 し 、 バー は標準誤差 を 示 し 、 例数 は各 群 と も 10 例 で あ る 。 第 2 図 中 、 * * は対照群 と の有意差 ( P<0. 01 ) を 示す 。

こ の 結果 よ り 、 M C I 一 1 5 4 は一過 性 の網膜虚血 に よ り 惹 起 さ れ る 網 膜変 性 を 有 意 に 抑 制 す る こ と が わ か る 参考 例

ィ ヌ 摘 出 乳 頭 筋 交叉 漂 流標 本 を 用 い る 方 法

ィ ヌ 摘 出 乳 頭 筋 交 叉 漂 流 標 本 は 、 遠 藤 と 橋 本 の 方 法 ( Amer i can J . Phys i o l , 218, 1459 - 1463, 1970 ) に 従 レ 作 製 し た 。 溶 媒 に 溶解 し た 化 合 物 を 、 標 本 に 近 接 動 中 し 、 乳 頭 筋 の 収 縮 力 に 対 す る 作 用 を 記 録 し た 。 乳 頭 筋 収 縮 力 の 増 加 率 を 以 下 の 表 に 示 す 。

2 . モ ル モ ッ 卜 摘 出 左 心房 を 用 い る 方法

体 重 2 0 0 〜 3 0 0 g の 雄 性 モ ル モ ッ ト の 後 頭 部 を 殴 打 し 、 た だ ち に 左 心房 を 摘 出 し た 。 左房 室 口 の 部 分 を 、

3 5 °C に 保 温 し た ク レ ブス 一 ヘ ン ス ラ イ ト 液 3 0 m L を 満 /こ し た 臓器 浴 の 底部 に 固 定 し た 。 臓器 浴 中 の ク レ プ ス 一 ヘ ン ス ラ イ ト 液 に は 9 5 % の 酸 素 と 5 % の 二 酸 化 炭 素 か ら な る 混 合 ガ ス を 通 気 し た 。 左 心 房 の 心 耳 に 糸 を と り つ け 、 そ の 糸 の 他 端 を 卜 ラ ン ス ト' ユ ー ザ — に つ な ぎ等 尺 性 張 力 を 測 定 し た 。 標 本 に は 0 . 5 g の 静 止 張 力 を か け た 。 標 本 を 2 本 の 白 金 電極 を 介 し て 持続 1 ミ U 秒 、 閾 値 の 1 . 5 倍 の 電圧 の 矩 形 波 に よ り 1 秒 間 に 2 回 の 割 合 で 電 気 的 に 駆 動 し た 。 標 本作 製 後 3 0 分 間 安 定 さ せ た 後 、 溶 媒 に 溶 解 し た 化 合 物 を 臓 器 浴 中 に 力 D え 、 反 応 を 記 録 し た 。 左 心 房 収 縮 力 の 増 加 率 を 以 下 の 表 に 示 す 。 表 2

麻酔 し た ィ ヌ を 用 い る 方法

体 8 1 5 k g の 雌雄雑ィ ヌ を 用 い た。 ィ ヌ は 3 0 m g y k g (静注） の ペ ン ト ノ リレ ビ 夕 一 ル ナ ト リ ウ ム で 麻酔 し 、 人 ェ呼 吸 を 行 っ た 。 左第 四 及 び第五肋 間 を 開 胸 し 、 第 五肋 骨 は切 除 し た 。 心 の う 膜 を 切 開 し 、 心臓 を 露 出 し た. 上行大動脈 に 電磁血 量 計 の プ 口 ブ を と り つ け 大動脈血 流量 を測定 し 、 それ を 心拍 出 量 （ C 〇 ） の 指数 の概略 と し て使用 し た 。 左 心室 に ポ リ エ チ レ ン カ ニ ュ ー レ を 挿入 し 、 左心室 内 圧 を 測 定 し 、 それ よ り 電気的 に 左 心室 内 圧 の変化率 （ d P Z d t ) を 求 め た。 右 心室壁 に 歪測 定 ゲ ー ジ を と り つ け 、 右心室筋 の 収縮力 ( C o n t ) を測定 し た 。 全 身血圧 は左大腿動脈か ら 測定 し た 。 心拍 数 は心電 図 (第 I I 誘 導） よ り 測定 し た 。 溶媒 に溶解 し た化合 物 は左大腿静脈 よ り 静脈 内 投与 し た。 麻酔犬 の d P X d t m a x , C o n t 及 び C O の 増加率 を 以下 の 表 に 示 す 。

表 3

産業 上 の 利 用 可能性

本 発 明 に よ れ ば、 強心作用 を 有す る 化合物 の 新 た な 用 途 を 提供 す る こ と がで き 、 さ ら に 詳細 に は、 視神経疾患 及 び網膜疾患 に 対す る 新た な 予 防及 び Zま た は治療剤 を 提供す る こ と 可能で あ る 。 な お 、 本 出願 は 、 日 本特許 出願 特願 2 0 0 0 — 3 5 6 7 9 8 号 を 優先権主張 し て 出願 さ れた も の で あ る 。

Claims

請 求 の 範 囲

1 . 強 心 作用 を 有 す る 化 合 物 を 有効 成 分 と す る 眼科 用 剤 。

2 . 化 合 物 が 、 カ ル シ ウ ム 感 受 性増 強作 用 を 有す る 化 合 物 で あ る 請求 項 1 記 載 の 眼 科用 剤 。

3 . ィ匕 合 物 が 、 下 記 一 般 式 （ 1 ) ま た は （ 2 )

H

( 上 記 一 般 式 （ 1 ) 及 び （ 2 ) 中 、 及 び R ₂ は そ れ ぞ れ独 立 し て 、 水 素 原子 、 ハ ロ ゲ ン 原 子 、 ア ル キ ル 基 、 ァ ミ ノ 基 、 カ ル ボ キ シ ル 基 、 ニ ト ロ 基 、 シ ァ ノ 基 、 ト リ フ ル ォ ロ メ チ ル基 、 ァ シ ル ァ ミ ノ 基 ま た は ァ リレ コ キ シ 基 を 表 し 、 R ₃ は 水 素 原 子 、 ァ シ ル 基 ま た は ア ル キ ル 基 を 表 し 、 R ₄ は そ の 環 上 に 置 換 基 を 有 し て い て も 良 い 5 員 環 ま た は 6 員 環 の 複 素 環 を 表 す 。）

で 表 さ れ る フ エ ニ ル ピ リ ダ ジ ノ ン 誘 導体 も し く は そ の 塩 ま た は そ れ ら の 水 和 物 も し く はそ れ ら の 溶 媒和 物 で あ る 求 項 1 ま た は 2 に 記 載 の 眼科用 剤 。

A記子キのジ 67

1 6

4 . 化 合 物 が 、 下 記 一 般 式 （ 3 )

( 上 記 式 中 、 A は 1 か ら 3 個 の 窒 素 原子 を 含 む 5 員環 ま た は 6 員 環 の 複 素 環 基 を 表 し 、 そ の 環 上 に ァ リレ キ ル基 、 シ ァ ノ 基 、 水 酸 基 、 ア ル コ キ シ基 、 ア ミ ノ 基 、 ア ルキ ル ア ミ ノ 基 、 ジ ァ リレ キ ル ア ミ ノ 基 、 ァ シ ル ア ミ ノ 基 、 カ ル ボ キ シ ル-基 、 7 ル コ キ シ カ にボー二 ル.基 +及 び 力.ル バ モ ィ ル 基 か ら 選 ばれ る 少 な く と も 一 つ の 置 換基 を 有 し て い て も 良 い 。）

で 表 さ れ る フ ェ ニ ル ピ リ ダ ジ ノ ン 誘 導体 も し く は そ の 塩 ま た は そ れ ら の 水 和 物 も し く はそ れ ら の 溶 媒和 物 で あ る 言青 求 項 1 力 ら 3 の い ず れ か に 記載 の 眼科 用 剤 。

5 . ィヒ 合 物 が , 請求項 3 に 記 載 の 一般式 （ 1 ) ま た は （ 2 ) に お い て 、 R , 、 R， 及 び R ₃ が そ れ ぞれ独 立 し て 、 水 素 原

、 メ チ ル基 ま た は ェ チ ル 基 で 表 さ れ 、 R ₄ が 2 — ピ リ ル 基 、 4 一 ピ リ ジ ル 基 、 2 — ピ リ ミ ジ ル基 ま た は 4 - ノ リ ル 基 で 表 さ れ る 請 求 項 1 か ら 3 の い ずれ か に 記 載 眼 科用 剤 。

. ィヒ 合 物 が 、 請 求 項 4 に 記 載 の 一 般 式 ( 3 ) に お い て 、 が 4 一 ピ リ ジル基 で あ る 請求項 1 力 ら 5 の い ず れか に 載 の 眼科 用 剤 。

. 強 心 作用 を 有 す る 化 合 物 を 有 効 成分 と す る 視神経 疾 ま た は 網 膜疾 患 の た め の 医 薬 組成 物 。

8 . 化 合 物 が 、 カ ル シ ウ ム 感受 性 増 強作用 を 有 す る 請 求 7 記 載 の 医 薬 組 成 物 。

9 . 視 神 経 疾 患 が 、 虚 血性 視 神 経症 及 び緑 内 障 か ら 選 ば れ る 請 求 項 7 ま た は 8 に 記 載 の 医 薬 組 成 物 。

1 0 . 網 膜 疾 患 が 、 網 膜 静脈 閉 塞 症 、 網 膜 動 脈 閉 塞症 及 び糖 尿 病 性 網 膜 症 か ら 選 ばれ る 請 求 項 7 ま た は 8 に 記 載 の 医 薬 組 成 物 。

1 1 . 強 心作 用 を 有 す る 化 合 物 を 有 効 成 分 と す る 視神 経 疾 患 ま た は 網 膜 疾 患 の 予 防 及 び / ま た は 治 療 剤 。

1 2 . 化 合 物 が 、 カ ル シ ウ ム 感 受 性 増 強 作 用 を 有す る 請 求 項 1 1 記 載 の 予 防 及 び / 治 療 剤 。

1 3 . 視 神 経疾 患 が 、 虚 血性 視 神 経 症 及 び緑 内 障 か ら 選 ば,れる -請 求 項 1 1 ま た は 1 2 .に 記.-載.の 予 P方.及 び ま た は. 治 療 剤 。

1 4 . 網 膜 疾 患 が 、 網 膜 静脈 閉 塞 症 、 網 膜 動脈 閉 塞 症 及 び糖 尿病 性 網 膜 症 か ら 選 ばれ る 請 求 項 1 1 ま た は 1 2 に 記 載 の 予 防 及 び Z ま た は治 療 剤 。

1 5 . 経 口 剤 、 注 射 剤 、 点 眼 剤 、 軟 膏 剤 、 眼 瞼 内 放 置 徐 放剤 及 び 眼 内 灌 流 液 か ら 選 ばれ る 請 求 項 1 1 か ら 1 4 の い ずれ か に 記 載 の 予 防 及 び / ま た は 治 療 剤 。

1 6 . 強 心作 用 を 有 す る 化 合 物 を 有 効 成 分 と す る 網 膜 神 経 節 細 胞 死 抑 制 剤 。

1 7 . 化 合 物 が 、 カ ル シ ウ ム 感 受性 増 強 作 用 を 有 す る 請 求 項 1 6 記 載 の 網 膜 神 経 節 細 胞 死抑 制 剤 。

1 8 . 強 心作 用 を 有 す る 化 合 物 を 有 効 成 分 と す る 網 膜 神 経 節 細 胞 保 護 剤 。

1 9 . 化 合 物 が 、 カ ル シ ウ ム 感 受 性 増 強 作 用 を 有 す る 請 求 項 1 8 記 載 の 網 膜神 経 節 細 胞 保護 剤 。

2 0 . 強 心 作 用 を 有 す る 化 合 物 を 用 い た 網 膜 神 経 節 細 胞 死 を 抑 制 す る 方 法 。

2 1 . 化 合 物 が 、 カ ル シ ウ ム 感 受 性 増 強 作 用 を 有 す る 請 求 項 2 0 記 載 の 網 膜 神 経 節 細 胞 死 を 抑 制 す る 方 法 。

2 2 . 強 心作 用 を 有 す る 化 合 物 を 用 い た 網 膜 神 経 節 細 胞 を 保 護す る 方 法 。

2 3 . 化 合 物 が 、 カ ル シ ウ ム 感 受 性 増 強 作 用 を 有 す る 請 求 項 2 2 記 載 の 網 膜神 経 節 細 胞 を 保 護 す る 方 法 。

2 4 . 強 心作 用 を 有 す る 化 合 物 を 有 効 成 分 と す る 網 膜 変 性 抑 制 剤 。

2 5 . 網 膜変 性 が 、 網 膜虚 血 に よ り 惹 起 さ れ る 請 求 項 2 4 に 記 載 の 網 膜 変 性 抑 制 剤 。

2 6 . 化 合 物 が 、 カ ル シ ウ ム 感 受性 増 強 作 用 を 有 す る 請 求 項 2 4 ま た は 2 5 に 記 載-の 網-膜ノ変 性 抑 制 剤 。

2 7 . 強 心作 用 を 有 す る 化 合 物 を 用 い た 網 膜 変 性 を 抑 制 す る 方 法 。

2 8 . 網 膜変 性 が 、 網 膜虚 血 に よ り 惹 起 さ れ る 請 求 項 2 7 に 記 載 の 網 膜 変 性 を 抑 制 す る 方 法 。

2 9 . 化 合 物 が 、 カ ル シ ウ ム 感 受 性 増 強 作 用 を 有 す る 請 求 項 2 7 ま た は 2 8 に 記 載 の 網 膜 変 性 を 抑 制 す る 方 法 。